绿原酸对过氧化氢诱导内皮细胞凋亡的保护作用

目的探讨绿原酸对体外过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及机制。方法体外培养的人脐静脉内皮细胞株传代后进行实验,分为(A)正常对照组、(B)绿原酸组(30μmol.L-1)、(C)H2O2损伤组、(D)绿原酸+H2O2组。检测细胞线粒体膜电位;Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡;RT-PCR检测不同组内皮细胞Caspase-3和Bcl-2基因的表达。结果与正常对照组比较,过氧化氢(400μmol.L-1)能明显的造成内皮细胞的凋亡(P<0.05),绿原酸(30μmol.L-1)可降低过氧化氢引起的内皮细胞凋亡,表现为细胞凋亡率减少(P<0.05),线粒体膜电位增加,Bcl-2的表达增强,Caspase-3的表达减弱。结论绿原酸可抑制过氧化氢引起的内皮细胞凋亡,其作用机制可能与保护线粒体膜电位,促进凋亡抑制基因Bcl-2的表达及抑制Caspase-3的表达有关。     

他克莫司对缺血缺氧损伤脑星形胶质细胞凋亡的影响

目的 研究他克莫司(FK506)对缺血缺氧损伤星形胶质细胞(Ast)凋亡的影响及其可能作用机制.方法 将Ast分为缺血缺氧(A组)、缺血缺氧+0.01μM FK506(B1组)、缺血缺氧+0.1 μM FK506(B2组)、缺血缺氧+1μM FK506(B3组)及正常对照(C组)五组.细胞计数试剂盒8(CCK-8)和Hoechst 33342分别检测Ast活力和凋亡;Western blot检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-白血病2(Bcl-2)、Bcl相关X蛋白(Bax)蛋白表达.结果 与C组相比,A组Ast存活率下降(P<0.01),凋亡率及Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达均增加(P<0.01);而与A组相比,B3组Ast存活率提高(P<0.05),凋亡率及Caspase-3、Bax蛋白表达下降(P<0.01),Bcl-2蛋白表达增加(P<0.01).结论 FK506通过增加Bcl-2表达和降低Bax、Caspase-3表达水平,从而抑制缺血缺氧损伤Ast凋亡.     

枸杞多糖对小鼠海马神经元细胞系缺糖缺氧损伤保护作用及机制研究

目的探讨枸杞多糖(LBP)对小鼠海马神经元细胞系HT22细胞缺糖缺氧损伤保护作用的机制。方法采用含1 mmol/L连二亚硫酸钠的无糖DMEM培养基建立HT22细胞缺糖缺氧损伤模型,设对照组、模型组和LBP高、中、低剂量(100、50、25 mg/L)组,以CCK8法检测细胞活性,流式细胞术检测检测细胞凋亡情况;Western blotting检测Bcl-2、Bax蛋白表达情况;利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测TNF-α、NF-κB、I-κBα、Caspase-9基因转录活性。结果与对照组比较,模型组HT22细胞存活率显著降低、凋亡率显著增加(P<0.05);TNF-α、NF-κB、Caspase-9基因转录活性显著上调,I-κBα基因转录活性显著下调(P<0.05);Bax蛋白表达水平显著升高,Bcl-2的蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与模型组比较,LBP各剂量组细胞存活率显著上升、凋亡率显著下降(P<0.05);TNF-α、NF-κB、Caspase-9基因转录活性显著下调,I-κBα基因转录活性显著上调(P<0.05);Bax蛋白表达水平显著降低,Bcl-2的蛋白表达水平显著增高(P<0.05)。结论 LBP可能是通过下调TNF-α、NF-κB、Caspase-9基因转录活性以及Bax蛋白表达,增强I-κBα基因转录活性及Bcl-2的蛋白表达,抑制缺糖缺氧损伤诱导神经细胞凋亡的发生。     

N-乙酰半胱氨酸对过氧化氢诱导的骨髓间充质干细胞凋亡的保护及作用机制研究

目的研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)对过氧化氢(H2O2)诱导的骨髓间充质干细胞(BMSCs)凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法采用全骨髓贴壁培养法培养SD大鼠BMSCs,随机分成5组:正常对照组、H2O2处理组、NAC组、NAC+H2O2组和LY294002干预组。流式细胞术检测各组的细胞凋亡率及细胞内活性氧水平;RT-PCR检测各组rBMSCs中FOXO1、FOXO3、FOXO4基因水平的表达;Western blot检测各组rBMSCs中Akt、p-Akt、Bcl-2的表达。结果与正常组相比,H2O2组诱导的rBMSCs凋亡数明显增高,细胞内ROS含量明显增高,FOXO1、FOXO3、FOXO4基因水平的表达量明显下降;NAC明显抑制了rBMSCs凋亡和ROS产生,上调了FOXO1、FOXO3、FOXO4基因水平的表达,增加了细胞内p-Akt和Bcl-2的表达,但LY294002抑制剂明显抑制了NAC对氧化应激后rBMSCs的上述功能。结论 N-乙酰半胱氨酸可通过激活PI3K-Akt信号途径抑制细胞内活性氧的产生、上调FOXO1、FOXO3、FOXO4基因水平及抗凋亡Bcl-2的表达来保护BMSCs免受氧化应激引起的凋亡。     

丙泊酚对缺氧复氧的肠上皮细胞ROS/TXNIP/NLRP3通路及凋亡的影响

摘要：目的:探讨丙泊酚处理对缺氧复氧的肠上皮细胞活性氧（ROS）/硫氧还蛋白相互作用蛋白（TXNIP）/核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族吡啉结构域蛋白3（NLRP3）通路及凋亡的影响。方法:对人肠上皮HIEC细胞进行培养,并进行缺氧复氧处理;通过不同浓度(25,50,100μmol·L-1)丙泊酚对缺氧复氧HIEC细胞进行处理,细胞计数盒8（CCK-8）法检测细胞活力;流式细胞术检测HIEC细胞凋亡;2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）法检测HIEC细胞ROS水平;蛋白免疫印迹（WB）法检测凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl2）、Bcl-2相关基因（Bax）、及TXNIP、NLRP3、白介素-1β（IL-1β）表达情况。结果:与对照组比较,缺氧复氧组HIEC细胞活力、蛋白Bcl2表达水平显著降低,HIEC细胞凋亡率、细胞内ROS含量、蛋白Bax、Caspase-3、TXNIP、NLRP3、IL-1β表达水平显著升高（P<0.05）;与缺氧复氧组比较,不同浓度丙泊酚处理组HIEC细胞活力、蛋白Bcl2表达水平显著升高,细胞凋亡率、细胞内ROS含量、蛋白Bax、Caspase-3、TXNIP、NLRP3、IL-1β表达水平显著降低（P<0.05）。结论:丙泊酚处理能够抑制缺氧复氧HIEC细胞ROS/TXNIP/NLRP3通路及细胞的凋亡,可能对肠上皮细胞缺血再灌注损伤（I/R）有一定的保护作用。     

神经妥乐平对H2O2致PC12细胞损伤的保护作用

目的 探索神经妥乐平对H2O2诱导的PC12细胞氧化应激损伤的影响及其潜在机制.方法 用CCK-8法检测细胞存活率,以流式细胞术检测细胞氧化损伤的发生、细胞内活性氧的生成及线粒体膜电位的变化,荧光显微镜观察细胞内活性氧的产生,qRT-PCR测定Caspase-3、Bax和Bcl-2 mRNA的表达.结果 PC12细胞存活率随H2O2浓度的增加而逐渐下降.其中,450μM H2O2处理细胞24 h后细胞存活率、凋亡率、坏死率明显降低;细胞内活性氧水平表达明显升高;线粒体膜电位JC-1红/绿荧光比值下降;Bax和Caspase-3的mRNA表达升高,而Bcl-2的mRNA表达下降,以上指标与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).而预先给予0.01UN/ml的NTP处理细胞12h可明显提高细胞存活率,降低细胞凋亡率和坏死率,减少细胞内活性氧生成并提高线粒体膜电位,抑制Bax和Caspase-3的mRNA表达,促进Bcl-2 mRNA的表达,以上指标与H2O2组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 NTP能抑制H2O2诱导的PC12细胞损伤,其神经细胞保护作用可能与其降低细胞内活性氧水平、维持线粒体膜电位的高能状态和抑制促凋亡基因表达、促进抗凋亡基因表达有关.     

姜黄素对急性肺栓塞大鼠细胞凋亡的影响

目的观察姜黄素对急性肺栓塞(PTE)后细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法健康雄性SD大鼠40只,随机分为5组(n=8):假手术组、模型组及姜黄素低剂组、中剂组、高剂组(腹腔注射50、100、150mg/kg)。采用颈总静脉注射自体血栓的方法制备大鼠PTE模型。取肺组织,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR和Western blot方法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9 mRNA及蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型组细胞凋亡率及Bax、Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白表达明显上升,Bcl-2表达明显下降(P<0.01);与模型组比较,姜黄素能明显降低细胞凋亡率及Bax、Caspase-3、Caspase-9表达,升高Bcl-2表达(P<0.05和P<0.01)。结论姜黄素能抑制PTE大鼠的肺组织细胞凋亡,与下调Bax、Caspase-3、Caspase-9表达,上调Bcl-2表达有关。     

麝香保心丸对缺氧复氧心肌细胞的保护作用及凋亡的影响

目的 探究麝香保心丸(SBP)对缺氧复氧心肌细胞是否具有保护作用及对调亡的影响。方法 建立心肌细胞缺氧-复氧模型。用水提法提取SBP的活性成分。将缺氧复氧心肌细胞随机分为对照组、模型组、0.5 g/L SBP组、1 g/L SBP组、2 g/L SBP组和5 g/L SBP组。用CCK-8检测各组细胞存活率，SBP干预组选择存活率最高的组别进行后续实验。采用Anexxin-V FITC/PI双染色法检测各组细胞凋亡率。采用Western blot检测各组细胞B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白相对表达水平。结果 与模型组比较，0.5 g/L、1 g/L、2 g/L、5 g/L SBP组的心肌细胞存活率均有升高(P<0.01)，且2 g/L SBP组心肌细胞存活率最高。与对照组比较，模型组和2 g/L SBP组凋亡率及Bax、Caspase-3相对表达水平升高(P<0.05)，而Bcl-2差异无统计学意义；与模型组比较，2 g/L SBP组凋亡率及Bax、Caspase-3相对表达水平下降(P<0.0...     

Tenuifoliside A基于ERK通路保护皮质酮损伤C6细胞作用研究

目的探讨远志寡糖酯成分Tenuifoliside A(TFSA)对皮质酮诱导大鼠神经胶质瘤细胞(C6)损伤的保护作用及其分子机制。方法建立以0.8 mmol.L-1的皮质酮作用于C6细胞48h的损伤模型;用皮质酮预处理C6细胞30 min后加入30、10和3μmol.L-1的TFSA,共同作用48 h,CCK试剂盒检测TFSA对皮质酮诱导C6细胞损伤的存活率;荧光显微镜观察C6细胞Hoechst 33258染核后凋亡形态变化;Western blot检测C6细胞内ERK及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达;Caspase检测试剂盒检测C6细胞内Caspase激酶活力的变化。结果与正常对照组比,0.8 mmol.L-1的皮质酮对C6细胞有明显的损伤作用,其细胞存活率降低至69.58%(与正常组相比,P<0.01);细胞核形态改变,出现凋亡小体;胞内ERK蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2表达量明显降低(与正常组相比,P<0.01),Caspase-3激酶的活力增加(P<0.01)。与模型组相比,各剂量组的TFSA均有不同程度对抗皮质酮损伤的作用,细胞存活率明显提高至84.48%(与模型组相比,P<0.01),同时细胞核形态有明显改善;细胞内的ERK蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2表达量明显增加(P<0.01);Caspase-3激酶活力明显降低。结论 TFSA对皮质酮诱导损伤的C6细胞具有保护作用,其机制可能与TFSA能激活C6细胞内ERK通路,提高抗凋亡蛋白Bcl-2表达,降低Caspase-3激酶活性有关。     

蕨麻多酚抗缺氧诱导的大鼠心肌细胞凋亡作用研究

摘要：目的:探究蕨麻多酚在缺氧条件下对心肌细胞的抗凋亡作用。方法:取新生1～3 d SD大鼠心肌细胞进行原代培养,随机分成5组:正常对照组、缺氧损伤模型组、蕨麻多酚低(0.11 mg·ml-1)、中(0.22 mg·ml-1)、高(0.44 mg·ml-1)浓度组。细胞在5%CO2-95%N2环境下37℃培养6 h,建立缺氧损伤模型;流式细胞术检测细胞凋亡率; Hoechst-PI荧光染色法观察缺氧损伤后心肌细胞凋亡情况;逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测各组细胞p53、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax） mRNA的表达水平;蛋白质印迹法（Western Blotting）检测各组细胞p53、Bcl-2、Bax蛋白的表达水平。结果:与正常对照组相比,缺氧损伤模型组细胞凋亡率显著升高（P<0.01）,Hoechst-PI染色可见呈亮蓝色荧光的早期凋亡细胞及大量亮红色荧光的晚期凋亡或死亡细胞; p53、Bax mRNA及蛋白表达显著升高（P<0.01）,Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著下降（P<0.01）;蕨麻多酚干预后细胞较缺氧损伤模型组凋亡率显著降低（P<0.01）,Hoechst-PI染色亮红色荧光的晚期凋亡或死亡细胞数量减少。蕨麻多酚各浓度组p53、Bax mRNA及蛋白表达均显著降低（P<0.01）,Bcl-2 mRNA及蛋白表达均显著升高（P<0.01）。结论:缺氧时蕨麻多酚能够通过下调心肌细胞p53和Bax水平,上调Bcl-2表达,抑制心肌细胞凋亡,从而减轻缺氧导致的心肌损伤。     

Chlorogenic acid protects MSCs against oxidative stress by altering FOXO family genes and activating intrinsic pathway

Chlorogenic acid as an antioxidant exists widely in edible and medicinal plants, and can protect cell against apoptosis induced by oxidative stress. However, its molecular mechanisms remain largely unknown. Here, we showed that Chlorogenic acid suppressed reactive oxygen species increase by activation of Akt phosphorylation,and increased FOXO family genes and anti-apoptotic protein Bcl-2 expression in MSCs culturing under oxidative stress. In addition, PI-3Kinase Inhibitor (2-(4-Morpholinyl)-8-phenyl-4H-1-benzopyran-4-one, LY294002) could suppress the Chlorogenic acid-induced: (1) the cellular protective role, (2) the increase of the FOXO family genes expression, (3) increased expression of Bcl-2. These results suggested that Chlorogenic acid protected MSCs against apoptosis via PI3K/AKT signal and FOXO family genes.     

重组人白细胞介素-1受体拮抗剂对兔实验性骨关节炎软骨中Caspase-3、Bcl-2表达影响的研究

目的：探讨重组人白细胞介素-1受体拮抗剂（Recombinant human interleukin 1 receptor antagonist,RhIL-1ra）对骨关节炎软骨细胞凋亡的影响,并研究其对骨关节炎（osteoarthritis,OA）软骨中Caspase-3和Bcl-2表达的影响。方法：首先采用改良Hulth法建立实验性OA模型,术后4周经关节腔注射给予RhIL-1ra治疗,治疗结束后,首先对膝关节进行解剖观察以及HE染色进行评分,采用Tunel染色法检测两组兔软骨细胞凋亡情况,采用Western-blot以及RT-PCR检测凋亡因子Caspases-3和凋亡抑制因子Bcl-2的蛋白和基因的表达。结果：大体形态学和HE染色结果表明,正常组大体形态学评分较低,模型组较高,RhIL-1ra治疗组较模型组相比降低（P<0.01）;RhIL-1ra可降低软骨细胞的凋亡率,与模型组相比差异具有统计学意义（P<0.01）;Western-blot以及RT-PCR结果表明,RhIL-1ra可通过下调caspase-3以及上调bcl-2蛋白和基因的表达抑制细胞凋亡。结论： RhIL-1ra对Hulth诱导的实验性OA具有一定的疗效,且可调控Caspase-3和Bcl-2的表达抑制OA中软骨细胞凋亡。     

芒柄花素对体外培养成骨细胞缺氧损伤的保护作用

目的研究芒柄花素在缺氧培养条件下对成骨细胞增殖、细胞周期、凋亡和成骨分化等的影响。方法采用酶消化法分离培养SD大鼠颅骨成骨细胞,并用三气培养箱建立缺氧模型。将细胞分为常氧对照组、缺氧对照组和缺氧加药组,其中缺氧加药组进一步分为10-6、10-5和10-4 mol·L-1组,分别加入10-6、10-5和10-4 mol·L-1芒柄花素。于缺氧处理36 h后分析各组的细胞存活率、LDH漏出率、细胞凋亡、细胞周期等,并用RT-PCR法检测缺氧诱导因子-1α、Bcl-2及Caspase-3的基因表达情况。缺氧处理48 h后检测ALP活性、钙化结节面积等成骨分化指标。结果与缺氧对照组比较,芒柄花素可提高细胞存活率,降低LDH漏出率,减少细胞凋亡并提高G1期细胞百分比,提高HIF-1α和Bcl-2mRNA的表达水平,抑制Caspase-3 mRNA的表达水平,对ALP活性和钙化结节面积等也有提高作用,且均呈现出剂量依赖性特点。结论芒柄花素对成骨细胞缺氧损伤具有明显保护作用。     

葛根素对缺氧复氧心脏微血管内皮细胞的保护作用

目的:探讨葛根素在心脏微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cell,CMEC)缺氧复氧损伤中的作用。方法:将CMEC随机分为空白组、模型组、葛根素低、中、高剂量(25,50,100 mg·L^-1)共3组。四甲基偶氮唑(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,比色法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,Western blot法检测Caspase-3和Bcl-2蛋白表达。结果:葛根素预处理后,缺氧复氧CMEC细胞活力增强,细胞凋亡率、LDH活性及MDA含量降低,SOD活性增强,Caspase-3蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达增加。结论:葛根素可拮抗缺氧复氧所致的CMEC损伤,可能与其抗氧化及抗凋亡活性相关。     

氮氧自由基对高原缺氧小鼠脑组织中缺氧和凋亡蛋白的影响

目的:研究氮氧自由基HPN对高原缺氧小鼠脑组织中缺氧和凋亡蛋白的影响。方法:将60只小鼠随机分为正常对照组、缺氧模型组、乙酰唑胺组和HPN组,单次腹腔注射给药后,在模拟海拔8000 m环境停留12 h,检测脑组织中乳酸脱氢酶(LD)含量和乳酸脱氢酶(LDH)活性的变化,HE染色观察脑组织病理学改变,蛋白印迹法检测HIF-1α、VEGF、Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白的表达情况。结果:与正常对照组相比,缺氧模型组中LD含量显著增加,LDH活性显著减低,HIF-1α、VEGF、Caspase-3和Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax比值降低。经HPN预处理后能够显著降低高原缺氧小鼠脑组织中LD含量,提高LDH活性,改善脑组织学变化,降低HIF-1α、VEGF、Caspase-3和Bax蛋白表达,提高Bcl-2的蛋白表达和Bc1-2/Bax比值。结论:HPN能够减轻高原缺氧脑组织损伤,作用机制可能与改善能量代谢,降低机体氧化应激,抑制某些凋亡相关蛋白表达有关。     

白介素-15对过氧化氢诱导大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡的影响

目的观察白介素-15(IL-15)对H2O2诱导的大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡的影响及探讨其机制。方法体外培养大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(RLE-6TN),分为:(A)正常对照组;(B)IL-15预处理组;(C)H2O2损伤组;(D)IL-15预处理后H2O2损伤组。采用DAPI荧光染色及Annexin V-FITC/PI检测各组细胞凋亡,JC-1染色观察各组线粒体膜电位;RT-PCR检测各组细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达。结果与正常对照组比较,H2O2损伤能明显诱导RLE-6TN凋亡,IL-15预处理可明显降低H2O2诱导的细胞凋亡率,使细胞线粒体膜电位下降,Bcl-2 mRNA表达增加,Bax、Caspase-3mRNA表达降低(P<0.05)。结论 IL-15能抑制H2O2诱导的大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡,其作用机制可能为稳定细胞线粒体膜电位,增强抗凋亡基因Bcl-2,同时,抑制促凋亡基因Bax表达,下调Caspase-3表达。     

线粒体融合素2通过Ras-PI3K-Akt信号途径抑制缺血再灌注诱导的乳鼠心肌细胞凋亡

目的：研究线粒体融合素2（Mfn2）基因对缺血再灌注诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的影响及其相关的信号通路。方法：乳鼠心肌细胞经缺氧/复氧（H/Re）处理模拟心肌缺血再灌注损伤。用Mfn2基因的重组腺病毒（Adv-Mfn2）感染经缺氧复氧处理的乳鼠心肌细胞。采用TUNEL染色、ELISA、流式细胞术等方法检测Mfn2对缺血再灌注诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的影响。Western blot分析线粒体凋亡路径中Bcl-2蛋白、Bax蛋白、Caspase-9以及磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）的表达变化。结果：TUNEL染色发现Adv-Mfn2感染乳鼠心肌细胞后,细胞凋亡较H/Re组和Adv-LacZ组显著减少。ELISA和流式细胞仪检测结果表明,Adv-Mfn2组心肌细胞凋亡较H/Re组及Adv-LacZ组明显减少,且这一作用呈时间依赖性。Western blot结果显示,Adv-Mfn2组中Bcl-2蛋白表达较H/Re组和Adv-LacZ感染组上升,Bax蛋白表达下降,各组中Caspase-9的表达变化与Bax相同,Adv-Mfn2组的p-Akt蛋白表达水平则较H/Re组和Adv-LacZ感染组明显上升。结论：Mfn2基因主要通过正向调控RasPI3K-Akt信号通路,促进Akt的磷酸化水平,使Bcl-2蛋白表达量增加,Bax蛋白表达量降低,抑制Caspase-9活化,从而抑制缺血再灌注诱导的乳鼠心肌细胞凋亡。     

川芎嗪对小鼠颅脑损伤后大脑组织细胞凋亡相关因子的影响

目的:研究川芎嗪对小鼠颅脑损伤(CI)后的细胞凋亡通路中相关蛋白及其mRNA的影响,揭示川芎嗪治疗颅脑损伤的可能作用机制。方法:将50只昆明种小鼠,随机分成假手术组、模型组、川芎嗪治疗组(40,80,160 mg·kg^-1)五组,采用改良的Feeney自由落体损伤装置建立小鼠CI模型。造模3 d后开始灌胃治疗,每日1次,其他各组给予等量生理盐水,连续用药20 d;蛋白免疫印迹和RT-PCR技术分别检测小鼠大脑组织中凋亡相关蛋白及其mRNA(Bax、Bcl-2、Caspase-9和Caspase-3)的表达量。结果:与假手术组相比,模型组小鼠大脑的凋亡蛋白Bax、Caspase-3和Caspase-9及其mRNA表达增加,差异极显著(P<0.01,P<0.01,P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2及其mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);与模型组相比,治疗组大脑凋亡蛋白Bax、Caspase-3和Caspase-9及其mRNA表达降低,差异极显著(P<0.01,P<0.01,P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2及其mRNA表达增加,差异极显著(P<0.01)。结论:川芎嗪可能通过上调Bcl-2蛋白及其mRNA的表达,抑制Bax、Caspase-3和Caspase-9蛋白及其mRNA的表达,减少大脑组织细胞凋亡,保护大脑组织。     

miR-15b基因干扰在脑缺血再灌注损伤中的作用及机制研究

目的 探讨微小核糖核酸-15b(miR-15b)基因干扰对脑缺血再灌注损伤的影响及其作用机制。方法 取新生24 h内Wistar乳鼠的大脑皮层星形胶质细胞传代培养并鉴定,氧糖剥夺/再恢复法处理模拟体内脑缺血再灌注损伤（模型组）;无特殊处理的大脑皮层星形胶质细胞为对照组。构建miR-15b干扰腺病毒载体及阴性对照载体,分别转染上述模型组细胞,记为过表达组、沉默组、过表达对照组、沉默对照组,另设置空白组。24 h后,倒置相差显微镜观察各组细胞形态学改变;氮兰四唑盐（MTS）法检测细胞存活率,乳酸脱氢酶（LDH）漏出率实验检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;实时荧光定量聚合酶链反应检测各组细胞miR-15b以及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、Caspase-9 mRNA表达;Western blot检测各组细胞Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达;荧光素酶报告基因实验验证miR-15b是否靶向调控Bcl-2。结果 与对照组比,空白组、过表达对照组和沉默对照组贴壁细胞减少,细胞缩小变圆,分布松散,细胞存活率和Bcl-2 mRNA及...