The Sonic hedgehog signaling pathway involved in the expression of RACK1 in the pulmonary microvascular endothelial cells induced by lipopolysaccharide北大核心CSCD

Objective To explore the effect of expression of protein kinase C receptor l(RACKl) induced by lipopolysaccharide (LPS) on Sonic hedgehog(SHH) signaling pathway in rat puhnonary microvascular endothelial cells (RPMVEC). Methods The healthy male SPF grade SD rat with 100-120 g body weight were gotten from the laboratory animal center of Annui province. Using immunocytochemistry method, the expression of RACK 1 protein in RPMVECs was detected, cultured RPMVECs were randomly divided into different groups as LPS dose-dependent group, SAG(smoothened Agonist, a SHH signaling pathway specific agonist) dose-dependent group, LPS time-dependent group, SAG time-dependent group and LPS+SAG group. In LPS dose-dependent groups, RPMVECs were cultured with 0.1, 1, 10 mg/L LPS for 8 h. In LPS time-dependent groups, RPMVECs were cultured with 10 mg/L LPS for 0, 2, 4, 8, 12, 24 h. In SAG dose-dependent groups, RPMVECs were cultured with 0.1, 1, 10 u, mol/L for 8 h. In SAG time-dependent groups, RPMVECs were cultured with 1 u, mol/L SAG for 0, 2, 4, 8, 12, 24 h. In LPS+SAG group, RPMVECs were cultured with 1 u. mol/L SAG 8 h after 10 mg/L LPS treatment for 1 h. In addition, blank group, LPS group and SAG group were set for control. Western blot were used to detect the level of RACK1 and RT-PCR were used to detect the expression of GLI-1 mRNA after intervention. Results Immunocytochemistry revealed that RACK1 were present in RPMVEC. 1. In LPS dose-dependent groups (0, 0.1, 1, 10 mg/L), the level of RACK 1 elevated as LPS dose increased correspondingly with inter-group difference (P<0.05); the relative expression levels of GLI-1 mRNA were (1.109 ± 0.063), (1.039 ± 0.135), (0.813 ± 0.066), (0.770 ± 0.105), (1 mg/L vs. 10 mg/L, P>0.05; the rest P<0.05). In LPS time-dependent groups, the relative expression level of RACK1 at 2 h (0.370 ± 0.010) was higher than that at 0 h (0.329 ± 0.008), peaked at 12 h (1.296 ± 0.048), and compared with 0 h, there was significant differences (F=l 272.204, P<0.05). The relative expression level of GLI-1 mRNA was decreased at 2 h (0.929 ± 0.007), and compared with 0 h(1.089 ± 0.042), there was significant differences (F=306.609, /><0.05). 2. In SAG dose-dependent groups, there was no significant difference in level of RACK1 between groups(all P>0.05). The relative expression levels of GLI-1 mRNA were (1.109 ± 0.063), (1.169±0.052), (3.468 ±0.128), (3.434±0.054), (0 μ.mol/L vs. 0.1 μ.mol/L and l μmol/L vs. 10 μ.mol/L, P>0.05, the rest P<0.05). Among SAG time-dependent groups, there was no significant difference in levels of RACK1 protein(P>0.05). The relative expression level of GLI-1 mRNA increased at 2 h (3.027 ± 0.065), and compared with 0 h (2.651 ± 0.123), there was significant differences (F= 132.841, P<0.05). 3. In LPS+SAG intervention groups, the expression of RACK1 was lower than that in LPS group (0.831 ± 0.040 vs. 1.189 ± 0.149, P<0.05), and the expression of GLI-1 mRNA was higher than that in LPS group (2.720 ± 0.130 vs. 0.796 ± 0.082, P<0.05). Conclusions The LPS up-regulates the expression of RACK 1 in RPMVECs, and the activated SHH signaling pathway can down-regulate the expression of RACK 1 induced by LPS in RPMVECs. © 2018 Chinese Medical Association. All rights reserved.     

谷氨酰胺抑制内毒素诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞TNF-α释放

目的 研究谷氨酰胺(Gin)调节内毒素(LPs)诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)肿瘤坏死因子(TNF)-α分泌及谷胱甘肽(GSH)在其中的作用.方法 原代培养成年雄性SD大鼠AECⅡ细胞,原代培养24 h后,分为空白对照、10.0 mmol/L Gin,1 μg/mL LPS、LPS+(0.5、2.0和10.0 mmol/L)Gln六组,每组3个孔.LPS刺激24 h,Gln在LPS刺激前8 h加入;另一组实验分为l μg/mL LPS,LPS+10.0 mmol/L Gln,LPS+100 μmol/L丁硫氨酸哑砜胺(BSO)、LPS+Gln+(1、10和100 μmol/L)BSO六组,每组3个孔.LPS刺激24 h,BSO和Gln在LPS刺激前8 h加入.以二硫双硝基苯甲酸(DTNB)法测定细胞内GSH浓度,酶联免疫(ELISA)法测定细胞上清TNF-α水平.统计学方法用方差分析(LDS-t检验)比较各组间差异.结果 谷氨酰胺可以提高LPS诱导大鼠AECⅡ细胞的GSH浓度,降低TNF-α的水平,其作用随浓度的增加而增加,在10 mmol/L浓度最为显著,GSH水平从(50.69±3.04)pmol/mgcell上升到(126.74±7.13)pmol/mg cell(P<0.01),TNF-α水平从(1104.5±48.8)pg/mL下降到(329.67±48.27)pg/mL(P<0.01);同时,谷氨酰胺的作用可以被10 μmol/L以上浓度BSO显著阻断(P<0.01).结论 谷氨酰胺可以抑制LPS诱导的大鼠AECⅡ细胞TNF-α的释放,其作用可能是通过促进GSH的合成而实现的.     

盐酸戊乙奎醚对脂多糖诱导的内皮细胞损伤的保护作用

目的 探讨盐酸戊乙奎醚(PHC)对脂多糖(LPS)诱导的内皮细胞损伤的影响及其作用机制.方法 用RPMI 1640培养基将人脐静脉内皮细胞在5%CO2、37℃培养箱中培养,并分为对照组,LPS组及PHC组.检测细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)、细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮(NO)水平.提取细胞核蛋白,Western blot分析细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)磷酸化蛋白的表达.采用SPSS 13.0统计软件进行分析,组间比较采用单因素方差分析,以P<0.05为差异具有统计学意义.结果 与对照组比较.LPS组LDH含量[(1 642±367)U/L vs.(169±33)U/L]、MDA含量[(13.2±1.2)nmol/L vs.(7.2±0.8)nmoL/mL]及NO水平[(143.2±10.3)μmol/L vs.(85.5 4.4.1)μmol/L]明显增多,SOD活性明显下降[(41.2 ±2.7)U/mL vs.(61.1±2.8)U/mL],ERK1/2和JNK磷酸化表达明显增高.PHC可显著降低LDH含量[(392 4.90)U/L],降低MDA[(8.6±1.3)nmol/mL]和NO水平[(92.1 ±6.6)μmol/L],提高SOD活性[(58.0±3.0)U/mL],减弱ERK1/2磷酸化蛋白表达.结论 盐酸戊乙奎醚对脂多糖诱导的内皮细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制ERK1/2磷酸化表达减少过氧化物的产生有关.

Abstract：

Objective To investigate the effects of penehyclidine hydrochloride ( PHC) on lipopolysaccharide (LPS) -induced endothelial cells injury and its mechanism. Methods ECV-304 was cultured in RPMI1640 in a 5% humidified CO2 atmosphere at 37 ℃. Then cultured cells were used to assess the following treatments: control group, LPS group (1 μg/mL) and PHC group(2 μg/mL). At the end of the experiments, supernatant was collected for determination of lactate dehydrogenase ( LDH), and cells were collected for determination of malondialdehyde (MDA), superoxide dismutase (SOD), and nitric oxide (NO) levels. And extracellular regulated kinasel/2( ERKl/2)and JNK MAPK (mitogen-activated protein kinases, MAPK) protein expressions were determined using Western blot technique. Analysis of variance (ANOVA) was used for statistical analysis to compare values among all groups. A significant difference was presumed for a probability value < 0.05. Results Compared with control group, LDH leakage [(1642 ± 367) U/L vs (169±33)U/L], the contents of MDA[(13. 2 ± 1. 2) nmol/L vs (7. 2 ±0. 8)nmol/mL] and NO levels [(143.2 ± 10.3) μmol/L vs(85.5 ±4.1) μmol/L], expressions of ERK1/2 and JNK were remarkably increased and SOD activities[(41.2 ±2.7) U/mL vs (61. 1 ±2.8) U/mL] were obviously decreased in LPS group. PHC markedly decreased LDH leakage [(392 ±90) U/L], MDA contents [(8. 6 ± 1. 3) nmol/ mL] and NO levels [(92.1 ±6.6) μmol/L], ERK1/2 activation and enhanced SOD activities [(58.0± 3.0) U/mL]. Conclusions PHC could protect endothelial cells against LPS-induced cell injury. The effect of PHC is likely mediated through inhibition of ERK1/2 MAPK activation.     

波动性高糖对人视网膜色素上皮细胞氧化应激的影响

目的 对比研究波动性高糖与恒定高糖对人视网膜色素上皮（HRPE）细胞氧化应激的影响.方法 培养HRPE细胞株,根据培养条件不同分为4组：（1）正常对照组：5.5 mmol/L葡萄糖;（2）恒定高糖组：33.0 mmol/L葡萄糖;（3）波动性高糖组：5.5 mmol/L和33.0 mmol/L葡萄糖波动组,日间每3小时高糖、2小时低糖交替3次,高糖过夜;（4）渗透压控制组：33.0 mmol/L甘露醇.每组均设6个复孔,置于37℃、5％ CO2孵箱中,分别于培养24、48、72 h收集细胞培养上清液用于过氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）、丙二醛检测.结果 （1）培养24 h,波动性高糖组SOD为（12.1 ±3.0） U/ml,GSH为（68.5±3.8） mg/L,丙二醛为（17.5±3.0） μmol/L;恒定高糖组SOD为（21.8±1.6） U/ml,GSH为（90.8±4.8） mg/L,丙二醛为（12.9±1.2） μmol/L;正常对照组SOD为（31.1±4.7） U/ml,GSH为（143.4±8.3） mg/L,丙二醛为（3.1±1.1） μmol/L;渗透压控制组SOD为（32.4±2.8） U/ml,GSH为（143.3±12.8）mg/L,丙二醛为（2.8±1.2） μmol/L.（2）培养48 h,波动性高糖组SOD为（9.6±1.8） U/ml,GSH为（72.5±4.3）mg/L,丙二醛为（19.1 ±1.7） μmol/L;恒定高糖组SOD为（21.0±2.5） U/ml,GSH为（93.4±4.6） mg/L,丙二醛为（11.6±2.2）μmol/L;正常对照组SOD为（31.0±2.5） U/ml,GSH为（145.5±6.6） mg/L,丙二醛为（3.9±1.0） μmol/L;渗透压控制组SOD为（28.4±0.8） U/ml,GSH为（142.0 ±4.9）mg/L,丙二醛为（2.9±0.8）μmol/L.（3）培养72 h,波动性高糖组SOD为（10.9±1.7）U/ml,GSH为（70.9±7.3） mg/L,丙二醛为（19.5±0.5）μmol/L;恒定高糖组SOD为（20.4±1.7）U/ml,GSH为（91.6±7.2） mg/L,丙二醛为（11.2±3.3） μmol/L;正常对照组SOD为（32.4±4.4）U/ml,GSH为（143.0±23.2） mg/L,丙二醛为（3.0±1.0）μmol/L;渗透压控制组SOD为（29.5±2.6）U/ml,GSH为（134.5±11.1） mg/L,丙二醛为（2.8±0.8）μmol/L.（4）培养24、48、72 h波动性高糖组、恒定高糖组与正常对照组相比,差异均有统计学意义（P均＜0.01）,波动性高糖组与恒定高糖组相比,差异均有统计学意义（P均＜0.01）,渗透压控制组与正常对照组相比差异均无统计学意义（P均＞0.05）,与恒定高糖组、波动性高糖组相比,差异均有统计学意义（P均＜0.01）.结论 波动性高糖较恒定高糖对HRPE细胞有更强的氧化应激损伤.     

外源性一氧化碳释放分子2对脂多糖刺激人中性粒细胞杀菌功能的调控作用及其机制

目的探讨外源性一氧化碳释放分子2（CORM-2）对脂多糖（LPS）刺激人中性粒细胞杀菌功能的调控作用及其机制。 方法采集1名健康成年志愿者的静脉血,分离出中性粒细胞后,按随机数字表法分为正常对照组、LPS组、LPS＋10 μmol/L CORM-2组、LPS＋50 μmol/L CORM-2组、LPS＋无活性CORM-2（iCORM-2）组。正常对照组不进行任何处理;LPS组采用1 μg/ml的LPS刺激;LPS＋10 μmol/L CORM-2组、LPS＋50 μmol/L CORM-2组、LPS＋iCORM-2组在采用上述相同剂量LPS刺激的同时,分别采用10 μmol/L CORM-2、50 μmol/L CORM-2、50 μmol/L iCORM-2进行干预,常规培养1 h后检测相关指标。用琼脂糖趋化模型检测中性粒细胞的趋化功能,流式细胞仪检测细胞颗粒释放及吞噬功能,酶联免疫吸附试验（ELISA）监测中性粒细胞颗粒释放功能的改变,蛋白质印迹法检测磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路蛋白Akt磷酸化的表达水平。以上指标均重复测定3次,对数据行单因素方差分析、SNK检验。 结果正常对照组、LPS组、LPS＋10 μmol/L CORM-2组、LPS＋50 μmol/L CORM-2组、LPS＋iCORM-2组细胞的趋化距离分别为（2241.33±67.30）、（919.00±55.02）、（1784.33±17.79）、（2202.33±91.69）、（1000.00±55.02）μm,LPS组细胞趋化距离较正常对照组明显降低（P<0.01）;LPS组和LPS＋iCORM-2组细胞的迁移距离较正常对照组明显降低（P<0.05）;LPS＋10 μmol/L CORM-2组和LPS＋50 μmol/L CORM-2组细胞迁移距离较LPS组明显增加（P<0.01）;LPS＋iCORM-2组细胞细胞迁移距离与LPS组相近（P>0.05）。对于中性粒细胞四级颗粒的释放研究,LPS刺激后中性粒细胞的颗粒释放均发生了明显的增加,而使用10 μmol/L与50 μmol/L CORM-2干预后,中性粒细胞的颗粒释放均得到明显抑制（P<0.01）;使用50 μmol/L iCORM-2干预后中性粒细胞颗粒释放与LPS组相近（P>0.05）。用LPS刺激后中性粒细胞Phagocytosis平均荧光强度较正常对照组升高（P<0.05）;而使用10 μmol/L与50 μmol/L CORM-2干预后中性粒细胞Phagocytosis平均荧光强度较LPS组明显增高（P<0.01）;使用50 μmol/L iCORM-2干预后中性粒细胞Phagocytosis平均荧光强度为与LPS组相近（P>0.05）。LPS刺激后中性粒细胞蛋白Akt磷酸化与总Akt比值灰度扫描值比值与正常对照组相近（P>0.05）;而使用10 μmol/L与50 μmol/L CORM-2干预后中性粒细胞蛋白Akt磷酸化与总Akt比值灰度扫描值比值较正常对照组、LPS组明显增高（P<0.05）;使用50 μmol/L iCORM-2干预后中性粒细胞蛋白Akt磷酸化与总Akt比值灰度扫描值比值与LPS组相近（P>0.05）。 结论CORM-2干预可以明显增加LPS刺激后中性粒细胞的早期凋亡,恢复中性粒细胞的趋化功能,并促进中性粒细胞的吞噬功能。CORM-2调控LPS刺激后中性粒细胞凋亡与吞噬功能,其机制可能与CORM-2促进磷酸化Akt有关。     

脂多糖诱导大鼠主动脉内皮细胞表达血管性血友病因子裂解酶的研究

目的 从剂量-效应和时间-效应关系探讨脂多糖(LPS)对大鼠主动脉内皮细胞(RAECs)血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS-13)mRNA和蛋白表达的影响.方法 采用组织贴块法培养Wistar大鼠的RAECs,1周后按1∶3传代至第4～5代,将细胞分为空白对照组和0.01、0.1、1、5 μg/ml LPS刺激组,分别于12、24、48、72 h用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定内皮细胞ADAMTS-13 mRNA表达;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清液内ADAMTS-13蛋白水平.结果 空白对照组有一定量的ADAMTS-13mRNA和蛋白表达.随着LPS刺激浓度增加和刺激时间延长,ADAMTS-13 mRNA和蛋白表达逐渐下降.与空白对照组(25.22±1.41)比较,0.01μg/ml LPS刺激48 h时ADAMTS-13 mRNA表达(18.78±0.86)即明显下降(P＜0.01);0.1μg/ml和1μg/ml LPS刺激24 h时ADAMTS-13 mRNA表达(23.43±0.63、22.41±0.76)即明显下降(P＜0.05和P＜0.01);5μg/ml LPS刺激12 h时ADAMTS-13 mRNA表达(20.01±2.47)即明显下降(P＜0.01).与空白对照组[(115.76±2.36)ng/ml]比较,0.01 μg/ml LPS刺激12 h时ADAMTS-13蛋白表达[(113.43±1.07)ng/ml]即明显下降(P＜0.05);至5 μg/ml LPS刺激72 h时ADAMTS-13蛋白表达[(7.63±2.64)ng/ml]降至最低(P＜0.01).结论 RAECs有一定量的ADAMTS-13mRNA和蛋白表达;不同浓度LPS刺激内皮细胞不同时间后ADAMTS-13 mRNA和蛋白表达降低,具有剂量依赖性和时间依赖性.     

间充质干细胞对巨噬细胞活化及其功能影响的实验研究

目的 探讨骨髓间充质干细胞(MSC)对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞活化的影响.方法 采用贴壁筛选法分离、纯化小鼠骨髓MSC,巯基乙酸钠腹腔注射刺激后收集小鼠腹腔巨噬细胞(MPM).实验分为四组(A组:MPM;B组:MPM+LPS;C组:MPM+LPS+MSC;D组:MPM+LPS+MSC上清),建立共培养体系.在LPS(终浓度1 μg/ml)刺激巨噬细胞18 h后收集细胞培养上清,检测TNF-α、TGF-β和一氧化氮(NO)等细胞因子分泌量的变化,同时在体系中加入大肠杆菌标准菌株ATCC25922,共孵育24 h后瑞特染色检查巨噬细胞吞噬功能的变化.结果 巨噬细胞活化后培养上清中TNF-α和NO的含量明显上升[分别为(147.4±37.1)pg/ml,(59.9±8.7)μmol/L];而MSC存在时,TNF-α显著减少[(97.6±30.3)pg/ml,P=0.032],NO降到(50.9±29.5)μmol/L(P＞0.05);当有MSC上清存在时,TNF-α和NO进一步减少为(58.3±31.5)pg/ml,(-3.4±2.3)μmol/L(P＜0.01).MSC对巨噬细胞活化后的吞噬率及吞噬指数没有影响.结论 MSC可抑制LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞的活化,而对其吞噬功能没有影响.     

硝普钠对内毒素诱导的U937细胞CD14表达的影响

目的 研究硝普钠(SNP)对内毒素(LPS)诱导的人单核巨噬细胞株U937表达CD14的影响.方法 佛波脂(PMA)诱导U937成熟后分为四组,即对照组(不给任何药物),LPS组(10ng/mL LPS 100 ng/mL rhLBP),低剂量SNP组(LPS rhLBP 50 μmol/L SNP),高剂量SNP组(LPS rhLBP 500 mol/L SNP).用RT-PCR和Western blot测定CD14 mRNA和蛋白表达.硝酸还原酶法测定上清液中一氧化氮(NO)浓度.结果 低、高剂量SNP组CD14的mRNA的0D值分别为0.268±0.058、0.098±0.036,较LPS组(0.292±0.089)低,较对照组(0.025±0.007)高.低、高剂量SNP组CD14蛋白的0D值分别为4.02±1.03、2.56±0.09,较LPS组(5.01±1.09)低,较对照组(1.02±0.08)高.低、高剂量SNP组N0浓度(单位:μmol/L)分别为46.7±0.58、163±0.07,较LPS组(292±0.89)低,但仍高于对照组(182±0.25).结论 SNP抑制了LPS诱导的U937细胞CD14的表达,表明SNP对急性肺损伤或脓毒血症可能具有预防和早期治疗作用.     

ERK抑制剂U0126对氧糖剥夺再灌注致神经母细胞瘤细胞损伤的影响

目的:探究ERK抑制剂U0126对氧糖剥夺再灌注致神经母细胞瘤(SH?SY5Y)细胞损伤的影响.方法:将生长状态良好的SH?SY5Y细胞随机分为正常对照组(Control组)、模型组(OGD/R组)、溶剂组(DMSO组)、U012610μmol/L组(U0126?L组)、U012620μmol/L组(U0126?M组)...     

脂多糖增强芬太尼诱导离体兔肺动脉舒张反应

目的 探讨阿片受体激动剂芬太尼对正常及内毒素休克时肺动脉血管反应性的影响,从而指导临床用药.方法 应用血管环张力检测技术,观察芬太尼对正常及脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)孵育的肺动脉血管环反应性的影响.结果 在正常肺动脉组,芬太尼终浓度(0.1、1、10、100 μmol/L)使去氧肾上腺素(Phenylephedrine,PE)预收缩的肺动脉舒张(EC50=1.699);在LPS孵育的肺动脉组,芬太尼终浓度(1、10、100 μmol/L)使PE预收缩的肺动脉舒张(EC50=2.496),芬太尼终浓度(0.1 μmol/L)对肺动脉并没有影响;LPS组与正常组对照比较,LPS组芬太尼使肺动脉舒张反应Emax增加,在小剂量芬太尼终浓度(0.1、1 μmol/L)时肺动脉的敏感度下降,在大剂量浓度(10、100 μmol/L)时却使其敏感度增加.结论 LPS可以增强芬太尼对肺动脉的最大舒张反应;并且LPS可使小剂量的芬太尼对肺动脉的敏感度下降,大剂量的芬太尼敏感度增加;LPS还可使芬太尼对肺动脉舒张反应的EC50增大.     

p38丝裂原活化蛋白激酶/胞浆型磷脂酶A2途径介导炎症细胞模型中白细胞介素的生成

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）对白细胞介索-1β（IL-1β）、IL-6的调节作用，进一步明确可能涉及的下游信号分子。方法以脂多糖（LPS）诱导的HeLa细胞为炎症模型，分别利用p38 MAPK、胞浆型磷脂酶A2（cPLA2）及环氧化酶-2（COX-2）特异性抑制剂SB203580、AACOCF3和NS-398以及cPLA2反义寡核苷酸（SK7111），通过检测HeLa细胞中LPS诱导的磷酸化p38MAPK、cPLA2及COX-2活性或表达的改变，观察其与上清液中IL-1β、IL-6含量变化的关系。结果SB203580可以明显抑制p38 MAPK、cPLA2的活性以及IL-1β、IL-6的产生；AACOCF3也可下调cPLA2活性以及IL-1β和IL-6的生成，且呈剂量依赖关系；而在HeLa细胞中几乎检测不到cPLA2下游信号分子COX-2的表达，也未观察到NS-398对IL-1β、IL-6表达的作用。结论在HeLa细胞中，p38MAPK／cPLA2途径介导LPS诿导细诱导细胞因子IL-1β和IL-6，而作为cPLA2下游酶之一的COX-2并没有参与此调节过程。     

白细胞介素-1β对小鼠气道成纤维细胞前列腺素E_2表达的影响

目的 研究白细胞介素-1β(IL-1β)对小鼠气道成纤维细胞前列腺素E_2(PGE_2)表达的影响,以探讨其在吸入性损伤修复中的作用.方法 分离雄性昆明种小鼠的气道成纤维细胞并进行体外培养,分别收集不同浓度的IL-1β作用后不同时间点IL-1β的培养上清液及细胞;采用酶联免疫吸附试验法和West-ern blot技术测定PGE_2水平,环氧化酶-2(COX-2)、膜相关前列腺素E_2合成酶1(mPGES1)蛋白表达.结果 ①经IL-1β 1.0μg/L处理后不同时间点气道成纤维细胞培养上清液PGE_2水平在8 h[(148.2±28.3)ng/L]、16 h[(267.6±45.4)ng/L]、24 h[(210.5±38.6)ng/L]、48 h[(198.7±36.5)ng/L]均高于各对照组[分别为(57.8±15.3)、(58.2±15.7)、(57.9±15.8)、(58.1±16.1)ng/L],差异均有统计学意义(P均<0.01),其中16 h时间点水平最高;气道成纤维细胞COX-2表达在8 h[(0.478±0.029)COX-2/β-actin、16 h(0.672±0.047)COX-2/β-actin、24 h(0.617±0.036)COX-2/β-actin、48 h(0.593±0.034)COX-2/β-actin]均高于对照组[(0.309±0.019)COX-2/β-actin、(0.311±0.019)COX-2/β-actin、(0.309±0.019)COX-2/β-ac-tin、(0.310±0.018)COX-2/β-actin],差异有统计学意义(P均<0.01),其中16 h时间点表述水平最高;气道成纤维细胞mPGES1的表达在8 h(0.300±0.018)mPGES1/β-actin、16 h(0.549±0.034)mPGES1/β-actin、24h(0.497±0.030)mPGES1/β-actin、48 h(0.443±0.026)mPGES1/β-actin均高于各对照组[(0.199±0.012)、(0.201±0.013)、(0.200±0.013)和(0.200±0.022)mPGES1/β-actin],差异有统计学意义(P均<0.01),其中16 h时间点表达水平最高.②不同浓度IL-1β处理气道成纤维细胞后,气道成纤维细胞培养上清液PGE_2水平在IL-1β 0.1 μg/L组[(242.9±22.3)ng/L]、1.0μg/L组[(267.6±45.4)ng/L和10.0μg/L组[(587.3±106.9)ng/L]均高于对照组[(58.5±16.0)ng/L],差异有统计学意义(P均<0.01),并且这3组之间比较差异也有统计学意义(P均<0.01);气道成纤维细胞COX-2表达在IL-1β 0.1μg/L组(0.525±0.032)ng/L、1.0μg/L组(0.672±0.047)ng/L和10.0μg/L组(1.022±0.064)ng/L均高于对照组(0.309±0.019)ng/L,差异有统计学意义(P均<0.01),并且这3组之间比较差异也有统计学意义(P均<0.02);气道成纤维细胞mPGES1表达在IL-1β 0.1μg/L组(0.380±0.021)ng/L、1.0μg/L组(0.549±0.034)ng/L和10.0μg/L组(0.879±0.045)ng/L均高于对照组(0.199±0.022)ng/L,差异有统计学意义(P均<0.01),并且这3组之间比较差异也有统计学意义(P均<0.01).结论 炎症递质IL-1β可上调气道成纤维细胞PGE_2水平、COX-2和mPGES1表达,这表明IL-1β可能是通过COX-2和mPGES1的表达来影响PGE_2合成,从而参与气道吸入性损伤修复过程.气道成纤维细胞可能是损伤修复过程中炎症递质的主要来源细胞之一.     

中电导钙激活性钾通道在多发性骨髓瘤细胞增殖、迁移、侵袭和IgE分泌中的作用

本研究旨在探讨中电导钙激活性钾通道（IKCal）在多发性骨髓瘤细胞增殖、迁移、侵袭及单克隆免疫球蛋白分泌中的作用。应用台盼蓝拒染法检测IKCal阻滞剂克霉唑（clotrimazole,CLO）对MM细胞株U266生存能力的影响;应用Transwell迁移及Matrigel侵袭实验检测CLO对U266细胞迁移及侵袭能力影响;应用双抗夹心法（ELISA法）检测CLO对U266细胞单克隆免疫球蛋白IgE分泌的影响。结果表明,小剂量CLO（≤1．0μmol／L）对U266细胞活力无明显影响。Transwell迁移实验及Matrigel侵袭实验显示,小剂量CLO（≤1．0μmol／L）作用后,u266迁移及侵袭能力明显降低（P〈0．05）。1．00μmol／LCLO作用24h与48h后,细胞上清液IgE浓度分别为（4．98±0．39）、（4．38±0．32）ng／ml,24h与48h对照组IgE浓度分别为（15．41±1．88）、（21．73±2．01）ng／ml,提示1．00μmol／L组与对照组比较具有显著差异（P〈0．05）。结论：CLO通过阻滞IKCal而抑制MM细胞迁移和侵袭及M蛋白分泌,这为MM靶向治疗提供新思路。     

N-乙酰半胱氨酸对急性呼吸窘迫综合征肺纤维化的抑制作用

目的 从细胞水平观察N-乙酰半胱氨酸(NAC)对脂多糖(LPS)诱导氧自由基损伤致急性呼吸窘迫综合征(ARDS)肺纤维化形成的影响.方法 体外培养人胚肺成纤维细胞,分为空白对照组、LPS刺激组、NAC处理组、地塞米松(DEX)处理对照组4组,分别加入不含处理因素的培养液及含有LPS(1μg/ml)、NAC(1 mmol/L) +LPS(1μg/ml)、DEX(1μmol/L)+LPS(1 μg/ml)的培养液.培养24 h后测定细胞内胶原蛋白和还原型谷胱甘肽(GSH)的含量,以评价各因素对肺纤维化的影响.结果 与空白对照组比较,LPS刺激组肺成纤维细胞中胶原蛋白含量(μg/mg)显著增加(78.97±1.79比72.90±1.70,P＜0.05),GSH含量(μg／mg)显著减少(23.27土0.92比26.34±0.83,P＜0.05);NAC与DEX均可明显抑制LPS的作用(胶原蛋白含量:72.23±1.35、73.64±1.89比78.97±1.79;GSH含量:26.52±0.62、25.85±0.60比23.27±0.92,P＜0.05或P＜0.01);NAC与DEX的作用无差异.结论 NAC可抑制氧自由基损伤及ARDS肺纤维化.     

硫化氢对脂多糖诱导大鼠肺动脉反应性和损伤的影响

目的 观察硫化氢(H2S)对脂多糖(LPS)所致肺动脉反应性紊乱和肺动脉损伤的影响.方法 72只SD大鼠按随机数字表法分为对照组、LPS组、H2S供体硫氢化钠(NaHS)+LPS组和NaHS+生理盐水(NS)组,每组18只.采用气管内滴注0.8 ml/kg LPS(200 μg/200 μl)染毒.滴注LPS之前10 min和之后2 h分别经腹腔注射0.5 ml NaHS(28 μmol/kg).实验12 h处死大鼠,取颈动脉血,检测血清H2S含量;制备肺动脉环(PARs),采用离体血管环张力测定技术检测血管反应性变化;检测肺动脉丙二醛(MDA)含量,并观察肺动脉形态学改变.结果 与对照组相比,滴注LPS后,PARs对苯肾上腺素(PE,10-6 mol/L)的收缩反应(g/mg)明显升高(0.86±0.20比0.56±0.13),对乙酰胆碱(ACh,10-6 mol/L)的舒张反应明显降低[(65.18±7.05)%比(84.13±8.84)%],肺动脉组织MDA含量(mmol/L)升高(32.03±7.81比5.82±0.92),血清中H2S含量(μmol/L)降低(175.23±27.36比238.12±16.38),差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);组织形态学观察显示,肺动脉内皮细胞和组织结构严重受损.给予NaHS后可明显改善LPS引起的上述变化,血管收缩反应下降[(0.61±0.17) g/mg],血管舒张反应升高[(82.92±9.71)%],肺动脉组织MDA含量下降[(16.88±3.54) mmol/L],血清H2S含量升高[(242.70±38.80) μmol/L],差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);肺动脉内皮细胞和组织结构损伤也得到明显改善.NaHS+NS组除H2S含量显著高于对照组外,余指标与对照组比较差异无统计学意义.结论 外源性应用H2S不仅可逆转LPS引起的肺动脉反应性紊乱,还可减轻LPS引起的肺动脉组织损伤.