CD34^＋细胞与骨髓增生异常综合征患者生存率的关系

目的 探讨CD34^ 细胞与骨髓增生异常综合征（MDS）患者生存率的相关性。方法 应用免疫组化SAP法对56例MDS患者骨髓细胞CD34抗原进行检测,并随访3－5年,同时定期门诊复诊及住院治疗。结果 56例中,CD34^-33例,CD34^ 23例,随访3－5年后,阴性组10例（30．3％）转为急性白血病（AL）,阳性组14例（60．9％）转为AL,差异有显著性（P＜0．01）。17例RAEB患者中,CD34^-中数生存期47月,CD34^ 者16月,3年生存率前者69％,后者21．1％。12例CD34^ 高表达RAEB－T患者中,转化成AL时间明显缩短。结论 CD34^ 患者具有高危转为AL,CD34^ 高表达RAEB－T短期内转化为AL,提示预后不佳。     

骨髓增生异常综合征患者EPO水平的测定及其受体的表达

目的 研究骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓促红细胞生成素受体(EPOR)的表达以及血清促红细胞生成素(sEPO)水平与临床的关系,为MDS患者贫血采用EPO治疗提供理论依据.方法 对45例MDS患者采用RT-PCR法检测EPOR的表达,以夹心酶联免疫法(ELISA)测定sEPO含量,按照WHO分类诊断标准分类,其中...     

骨髓增生异常综合征患者骨髓造血细胞分化抗原表达及其意义

目的 了解骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓成熟粒系和红系细胞分化抗原表达特点并分析其与IPSS、WPSS评分的相关性.方法 采用流式细胞术检测34例(12例低危、22例高危)MDS患者及31名正常骨髓粒系CD11b、CD13、CD16、HLA-DR以及红系CD71和血型糖蛋白A(GlyA)抗原的序贯表达比例和模式.结果 选择CD13/CD11b、CD13/CD16及CD11b/CD16组合来分析粒细胞分化抗原表达模式,对照组骨髓粒系细胞组合模式分别为"对钩"、"镰刀"或"反7"状,MDS患者骨髓粒系细胞发育分化中的抗原表达模式出现不同程度的改变.高危组CD11b-/CD11b+比值(0.39±0.34)明显高于低危组(0.10±0.09)和对照组(0.07±0.05)(P<0.01);高危组CD16-/CD16+比值(1.33±0.77)明显高于对照组(0.39 ±0.31)(P<0.05);低危和高危组骨髓粒细胞CD13的平均荧光强度(MFI)高于对照组,侧向角散射光信号(SSC)的MFI低于对照组,但差异无统计学意义.高危组CD11b-HLA-DR+3.88%±3.07%、CD11b-HLA-DR-16.23%±15.59%、CD16-HLA-DR-41.12%±24.53%、CD11b+CD16-33.53%±17.26%及CD13+CD16-44.51%±21.99%细胞占粒细胞比例明显高于低危组和对照组(P<0.05),其他组间比较差异无统计学意义.应用CD71和GlyA的组合来分析红系细胞的分化,对照组两种抗原的组合模式均为双阳性表达,部分MDS患者可见CD71和GlyA表达不同步现象.低危组和高危组CD71+和GIyA+双阳性细胞分别占CD45-细胞和GIyA+细胞的比例均显著低于对照组.MDS患者粒、红系抗原表达的比例和模式异常数目与IPSS积分(r=0.690,P=0.000)、WPSS积分(r=0.651,P=0.000)均呈正相关.结论 MDS患者造血细胞分化抗原表达异常,异常程度与预后相关.这提示分化抗原检测可能有助于MDS患者的诊断和预后判断.     

骨髓增生异常综合征CD7抗原的表达

目的 ＣＤ７的测定在骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）的诊断及预后判断中的意义。方法 应用单克隆抗体采用间接免疫荧光法对３０例ＭＤＳ患者骨髓单个核细胞（ＭＮＣ）进行ＣＤ７的检测。结果 ＭＤＳ患者ＣＤ７抗原表达增高,而且随ＭＤＳ恶化,即由ＲＡ／ＲＡＳ向ＲＡＥＢ／ＲＡＥＢ－Ｔ转化,ＣＤ７抗原表达增高,易于转化为白血病。结论 ＭＤＳ患者ＭＮＣ表面ＣＤ７的检测有助于ＭＤＳ的诊断,也可协助预后判断。     

骨髓增生异常综合征中骨髓CD34~+、CD34~-细胞凋亡和增殖的实验研究

目的:分析骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓CD34+细胞和CD34-细胞凋亡和增殖情况,从该角度探讨MDS的发病机制。方法:流式细胞术分析20例高危MDS、20例低危MDS患者及10例正常对照者骨髓CD34+细胞的比例,CD34+细胞和CD34-细胞凋亡、增殖的百分率,计算各组中的凋亡/增殖(A/P)比。结果:(1)MDS患者CD34+细胞的比例明显高于对照组,其中高危组CD34+细胞的比例明显高于低危组(P<0.05),而低危组与对照组比较无显著差异;(2)CD34+,CD34-细胞的凋亡率在MDS低危组中均为最高,明显高于MDS高危组和对照组,在低危组中,CD34-细胞的凋亡率(80.36±1.82)%明显高于CD34+细胞(54.75±2.18)%(P<0.05),而在高危组中,CD34+,CD34-细胞的凋亡率无显著差异;(3)CD34+细胞的增殖率在MDS高危组中最高,明显高于低危组和对照组,而CD34-细胞的增殖率在MDS高危和低危组间无显著差异,在高危组中,CD34+细胞的增殖率(50.67±3.37)%明显高于CD34-细胞的(30.99±1.96)%(P<0.05);(4)无论CD34+,CD34-细胞的A/P值在MDS低危组中均明显高于高危组和正常对照组,而在MDS各亚组中,CD34-细胞的A/P值明显高于CD34+的A/P值(P<0.05)。结论:CD34+细胞百分率随MDS危险度增加而逐渐增加,在低危组中以CD34-细胞的凋亡占主导,随着病情进展,在高危组中则以CD34+细胞的增殖占主导,提示异常的凋亡和增殖在MDS的发生和发展中起重要作用。     

骨髓增生异常综合征患者Fas抗原的表达及临床意义

目的:探讨Fas(CD95)在骨髓增生异常综合征(MDS)发病机制中的作用及临床意义。方法:用酶联免疫夹心法检测25例MDS患者血浆可溶性Fas(sFas),用流式细胞术检测骨髓(BM)CD34+细胞、CD34-细胞、外周血单个核细胞(PBMNCs)Fas抗原的表达。结果:MDS难治性贫血伴有原始细胞增多(RAEB)/转变中的RAEB(RAEB-t)组患者骨髓CD34+细胞百分率显著高于对照组及难治性贫血(RA)组(均为P<0.01);RA组及RAEB/RAEB-t组骨髓CD34+细胞Fas表达显著高于对照组(分别为P<0.01,P<0.05),其中RA组高于RAEB/RAEB-t组,有统计学意义(P<0.05);RA组患者骨髓CD34-细胞Fas表达高于对照组及RAEB/RAEB-t组患者(均为P<0.05)。两患者组血浆sFas显著低于正常对照(均为P<0.01),sFas水平与患者血红蛋白(Hb)浓度呈正相关(r=0.67,P<0.01)。结论:MDS患者骨髓、外周血细胞Fas抗原广泛表达,Fas表达异常与MDS的发生、发展密切相关。     

骨髓增生异常综合征和急性白血病患者外周血中CD34+水平的研究

目的:探讨正常健康人?再生障碍性贫血(AA)?骨髓增生异常综合征(MDS)?急性白血病(AL)患者外周血循环CD34+的水平及意义?方法:用流式细胞仪测定16例正常健康人,9例AA,17例MDS,24例AL患者的外周血CD34+百分比,CD34+绝对数值及单个核细胞数目,结合临床资料进行Kruskal-Waillis检验?结果:AA患者的CD34+的百分比和绝对数值与正常健康人水平类似(P > 0.05),单个核细胞数较正常健康人低(P < 0.01)?MDS?AL的CD34+百分比和绝对数值均高于正常健康人水平(P < 0.01,P < 0.05),单个核细胞数与正常健康人无差异(P > 0.05)?MDS高危组的CD34+百分比和绝对数值高于低危组(P < 0.01),单个核细胞数两组类似(P > 0.05);AL的CD34+百分比和绝对数值及单个核细胞数目高于MDS组(P < 0.05)?17例中短期随访内3例MDS发生演变,患者CD34+细胞百分比和绝对数值进行性增高,余疾病相对稳定者未见显著改变?结论:MDS和AL患者的外周血中存在CD34+细胞水平异常增高现象,并与疾病状态密切相关,CD34+水平的检测有助MDS类型演变和预后的观察?     

应用重组人GM－CSF和EPO联合治疗骨髓增生异常综合征

联合应用粒－单核细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）与促红细胞生成素（ＥＰＯ）试验治疗４例骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）患者，结果表明：４例病人粒系均有明显改善，２例红系改善，输血间隔均延长，联合应用的副作用均能耐受，我们认为此联合疗法是ＭＤＳ患者减少输血、预防感染、争取临床缓解的有效措施。     

骨髓基质细胞衍生因子1及其受体在骨髓增生异常综合征患者中的表达

目的 探讨基质细胞衍生因子1(SDF-1)与其受体趋化因子受体CXCR4在骨髓增生异常综合征(MDS)发病中的可能作用,为MDS的治疗寻找有意义的靶点.方法 收集2006年10月至2010年6月59例MDS病例,根据国际预后积分系统(IPSS)分为低危和高危两组,分别为33例和26例,以10份正常的骨髓标本作为对照.采集骨髓标本,检测骨髓血浆中SDF-1的含量、CD34+细胞CXCR4的表达率、CD34+细胞的凋亡率及血管内皮生长因子(VEGF)在骨髓血浆中的表达.结果 SDF-1在低危组和高危组患者骨髓血浆中的含量[(2301±413)、(1173 ±501)ng/L]显著高于对照组[(689±190)ng/L,P＜0.05],低危组显著高于高危组(P＜0.05).CD34+细胞CXCR4的表达在高危组(68.1％±18.8％)显著高于低危组(21.0％±9.7％)和对照组(19.4％±5.3％)(P＜0.05),在后两组的表达率差异无统计学意义(P＞0.05).CD34+细胞的凋亡率在低危组、高危组和对照组分别为54.8％±10.2％,24.3％±7.9％,l8.5％±8.7％,前组显著高于后两组(P＜0.05).骨髓血浆中VEGF的含量在低危组、高危组、对照组分别为(286±97)、(407±168)、(157±46)ng/L,差异有统计学意义(P＜0.05).相关分析显示:低危组CD34+细胞的凋亡率与骨髓血浆SDF-1的含量呈正相关(r =0.805,P＜0.05);高危组血浆VEGF的含量与CD34+细胞CXCR4的表达呈正相关(r=0.683,P＜0.05).结论 SDF-1/CXCR4在MDS中存在异常表达,且与骨髓细胞的凋亡和血管新成具有相关性,针对该生物轴的干预可为该病的治疗提供新的靶点.     

CD34阳性骨髓干细胞归巢兔栓塞肺组织

目的 观察骨髓干细胞(BMSCs)动员后向栓塞肺组织归巢的情况,初步探讨BMSCs归巢栓塞肺组织的可能机制.方法 选取30只健康的中国大耳白兔,雌雄不拘,随机分成2组:肺血栓栓塞症(PTE)组(模型组)、PTE+粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员组(实验组),每组15只.经股静脉穿刺置管注入自体血栓,建立兔急性PTE模型.其中,模型组仅建立PTE模型;实验组在建立模型前4d每天及建立模型后即刻按10 μg/(kg·d)皮下注射G-CSF,共5d.两组均于建立模型后24 h处死动物,观察大体标本,行HE染色进行病理检查,用免疫组化法检测肺组织栓塞区、边缘区、正常区CD34及SDF-1的表达,使用医用图像处理系统对肺组织CD34和SDF-1的免疫组化染色切片进行图像分析,计算其相对含量.结果 (1)大体标本观察:两组兔肺组织均存在损伤性改变,表现为片状出血灶、局部肺组织苍白区、肺组织膨胀不全等.(2)光镜下病理观察:两组兔肺组织栓塞区均表现为肺间质水肿充血、肺泡腔出血渗出,其中实验组栓塞区肺间质中可见较多体积较大的单个核细胞浸润.(3)肺组织CD34免疫组化染色与图像分析结果:CD34主要表达在栓塞区,边缘区少量表达,正常区很少表达.实验组栓塞区CD34的表达高于模型组(P＜0.01),且实验组栓塞区内浸润的CD34阳性单个核细胞较多,而模型组少见.(4)肺组织SDF-1免疫组化染色与图像分析结果:SDF-1主要表达在栓塞区,边缘区、正常区均无表达.实验组栓塞区SDF-1的表达高于模型组(P＜0.01).结论 PTE发生后存在CD34阳性BMSCs向栓塞肺组织归巢现象;PTE发生后肺组织栓塞区SDF-1表达加强可能是吸引CD34阳性BMSCs归巢栓塞肺组织的机制之一;使用G-CSF动员后能加强PTE后肺组织栓塞区SDF-1的表达,从而吸引更多的CD34阳性BMSCs归巢到栓塞肺组织.     

小剂量G-CSF联合GM-CSF动员外周血CD34+细胞

目的 探讨小剂量粒单巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)联合粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员外周血干细胞的效率。方法 20例成人恶性血液病按统计学配对方法等分为2组。非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)患者化疗方案为环磷酰胺2.0 g/d,静脉滴注,第1~2天,足叶乙甙0.2 g/d,静脉滴注,第1~3天;急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者用阿糖胞苷2.0 g/d,静脉滴注,第1~3天,足叶乙甙用法同NHL。当白细胞低于1.0×10⁹/L时研究组10例应用GM-CSF 2.5 μg/d·kg·b.w.联合G-CSF 2.5 μg/d·kg·b.w.;对照组单用G-CSF 5 μg/d·kg·b.w.,全部皮下注射5~6 d。白细胞5.0×10⁹/L以上时应用CS-3000 pluse分离外周血单个核细胞,流式细胞术计数CD34⁺细胞。结果 产品细胞分类计数单个核细胞占95%~99%,在研究组CD34⁺细胞平均采集9.4(8.4~10.2)×10⁶/kg·b.w.,CFU-GM 42.4(21.9~72.8)×10⁴/kg·b.w.,对照组平均采集CD34⁺细胞4.8(4.1~8.3)×10⁶/kg·b.w.,CFU-GM 28.1(7.1~60.2)×10⁴/kg·b.w.,2组差异显著(P<0.05)。副作用2组相似。结论 恶性血液病患者化疗后应用G-CSF联合GM-CSF动员CD34⁺细胞的效果优于单用G-CSF。     

Expression and function of c-kit receptor in bone marrow mononuclear cells of patients with myelodysplastic syndromes

目的　了解骨髓增生异常综合征 (MDS)骨髓单个核细胞c kit受体的表达与功能。方法　采用免疫荧光方法测定c kit受体蛋白 (CD117)的表达 ;逆转录 聚合酶链反应方法测定c kitmRNA的表达 ;细胞培养检测c kit受体的功能。结果　CD117表达率正常人为 3 0 4 %± 1 4 9% ,MDS患者为 8 58%± 5 2 8% ,两者差异有显著性 (P <0 0 5) ;RA患者为 5 12 %± 2 13% ) ,RAEB RAEB t患者为 10 0 1%± 5 0 7% ,两者差异有显著性 (P <0 0 5) ;MDS继发白血病患者为 32 4 3%± 18 16 %。MDS患者c kit基因mRNA表达与CD117表达相一致。正常骨髓单个核细胞体外半固体培养 ,在加入造血干细胞因子、白细胞介素 3、红细胞生成素 (SCF IL 3 Epo)后形成的粒 巨噬细胞集落 (CFU GM)较仅加入IL 3 Epo显著增多 (P <0 0 5) ,红系爆式集落 (BFU E)数量极显著增多 ,且BFU E体积显著增大(P <0 0 1)。MDS患者在上述相同条件下CFU GM数量无明显变化 (P >0 0 5) ,与正常对照比较 ,CFU GM和BFU E数量均显著减少 (P <0 0 5)。结论　MDS患者骨髓单个核细胞CD117表达明显高于正常对照 ,且与病情进展相关 ;c kitmRNA表达与CD117表达相一致 ;MDS患者骨髓单个核细胞体外培养时 ,SCF协同IL 3、Epo促进造血干 祖细胞增殖分化能力较正常对照明     

粒细胞集落刺激因子对CD34+骨髓干细胞在心肌内归巢的影响

目的:观察粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对CD34+骨髓干细胞(BMSC)在心肌内归巢的影响. 方法:成龄杂种犬17只,随机分4组. A组5只:接受10 μg/(kg·d),5 d皮下注射和实验性心梗;B组4只:接受10 μg/(kg·d),5 d皮下注射和假手术;C组4只:接受10 μg/(kg·d),5 d生理盐水皮下注射和实验性心梗;D组4只:接受10 μg/(kg·d),5 d生理盐水皮下注射和假手术,对每只动物股动脉插管至主动脉根部,左颈浅静脉插管至冠状静脉窦,分别于造型前后抽血5 mL(抽复管),裂解红细胞,分离单个核细胞,流式细胞仪测定CD34+细胞数,数据分析用SPSS 10.0统计软件包. 结果:4个实验组CD34+ BMSC心肌内归巢数分别为:(183.0±9.2)×104个/L,(71.1±9.2)×104个/L,(82.3±9.5)×103个/L和(78.5±9.8)×103/L,除C,D组之间差别无统计学意义(P=0.912)外,其余各组间均有统计学意义(均为P=0.000). 结论:G-CSF不仅能动员BMSC大量释放入外周血,同时还能增加CD34+ BMSC在心肌内的归巢.     

Expression of CD123 and CD114 on the bone marrow cells of patients with myelodysplastic syndrome

Background Recent studies have shown that interleukin-3 receptor α （CD123） is highly expressed on leukemia stem cells of patients with acute myeloid leukemia, and is correlated with tumor load and poor prognosis.The expression of CD123 may also be high in patients with myelodysplastic syndrome （MDS）.In this study, the expression and clinical significance of CD123 and granulocyte colony stimulating factor （G-CSF） receptor （CD114） on the bone marrow cells of patients with MDS were investigated to explore the molecular marker of the malignant clone of MDS.Methods Forty-two patients with MDS, who were diagnosed in the Hematological Department of General Hospital of Tianjin Medical University from 2008 to 2009, and twelve normal controls were enrolled in this study.Fluorescence activiated cell sorter （FACS） was used to measure the expression of CD123 on CD34＋CD38- cells and CD114 on CD34＋cells of the bone marrow of these patients and controls and the clinical significance was analyzed.The expression of CD114 on CD123＋CD34＋CD38- cells was further measured to explore the molecular marker of the malignant clone in MDS.Results MDS patients displayed significantly higher proportion of CD34＋CD38-/CD34＋ （（14.03±5.27）%） than normal controls （（7.70±4.36）%, P 〈0.05）.The expression rate of CD123＋CD34＋CD38-/CD34＋CD38- was significantly higher in MDS patients （（48.39±28.15）%） than that in normal controls （（8.75±11.71）%, P 〈0.01）.The expression level of CD123 was significantly correlated with the proportion of bone marrow blasts （r=0.457, P 〈0.05）.The expression rate of CD114＋CD34＋/CD34＋ was lower in MDS patients （（33.05±21.71）%） than that in normal controls （（38.99±19.07）%） but was not statistically significant （P 〉0.05）.The expression of CD114 on CD123＋CD34＋CD38- cells （（34.82±29.58）%） was significantly lower than that on CD123-CD34＋CD38- cells （（53.48±27.41）%） of M DS patients （P 〈0.05）.Conclusions MDS patients displayed higher proportion of CD34＋CD38-/CD34＋ than normal controls.CD123 was highly expressed in the bone marrow of the patients with MDS, significantly correlated with the proportion of bone marrow blasts, and thus might be the marker of MDS malignant clone.CD123＋CD34＋CD38- cells exhibited lower expression of G-CSF receptors, which might partly explain why MDS clone responds worse to G-CSF in vitro and in vivo.     

Negative association of donor age with CD34+ cell dose in mixture allografts of G-CSF-primed bone marrow and G-CSF-mobilized peripheral blood harvests

Background The effects of donor characteristics on CD34＋ cell dose remain controversial. Recently, we developed a novel haploidentical transplant protocol, in which mixture allografts of granulocyte colony-stimulating factor （G-CSF）- primed bone marrow （G-BM） and G-CSF-mobilized peripheral blood （G-PB） were used. The aim of this study was to investigate the effects of donor characteristics on CD34＋ cell dose in mixture allografts of G-BM and G-PB. Methods A total of 162 healthy adult donors, who underwent bone marrow harvest and peripheral blood collection between January 2009 and November 2010 in Peking University People＇s Hospital, were prospectively investigated. G-CSF was administered subcutaneously at a dose of 5 pg/kg once a day for 5-6 consecutive days. Bone marrow and peripheral blood stem cells were harvested on the fourth day and fifth day, respectively. A final total CD34＋ cell dose less than 2× 106 cells/kg recipient body weight was considered a poor mobilization. Results Of the 162 donors, 31 （19.1%） did not attain this threshold. The obtained median CD34＋ cell doses in bone marrow, peripheral blood, and mixture allografts were 0.83×106/kg, 2.40×106/kg, and 3.47×106/kg, respectively. Multiple regression analysis showed that donor age had a significant negative effect on CD34＋ cell dose in either G-BM, or G-PB, or mixture allografts of G-BM and G-PB. And a 1-year increase in age was associated with a 5.6% decrease in the odds of achieving mobilization cutoff. No significant correlation was found for donor gender, body mass index （BMI）, and weight. Conclusion Donor age is the only factor among the four parameters, including age, gender, weight, and BMI, that influence CD34＋ cell dose in mixture allografts of G-BM and G-PB, and younger donors should be chosen to obtain sufficient CD34＋ cells for transplantation.     

霉酚酸酯对哮喘小鼠骨髓CD34+造血细胞的干预作用

目的：研究新型免疫抑制剂霉酚酸酯对哮喘小鼠骨髓CD34^＋造血细胞生物活性的影响。并与糖皮质激素比较．探讨其潜在的治疗哮喘的机制及可能性。方法：以卵白蛋白（OVA）致敏并激发BALB／c小鼠建立哮喘模型。连续激发2周期间分为3组，每组6只，分别给予生理盐水（对照，A组）、泼尼松（B组）及霉酚酸酯（C组）灌胃．末次激发后24h分别取支气管肺泡灌洗液（BALF）、外周血及骨髓，测定BALF、外周血中有核细胞的分类计数及骨髓中有核细胞总数：ELISA方法测定外周血中IL-5水平；流式细胞仪测定外周血及骨髓中CD34^＋造血细胞、CD4^＋T淋巴细胞占有核细胞的比例：免疫组化结合原位杂交法检测骨髓内表达白细胞介素5（IL-5）受体α链mRNA的CD34^＋造血细胞（CD34^＋IL-5Rα mRNA^＋细胞）计数。结果：B、C组哮喘小鼠BALF中细胞总数、EOS计数，外周血中CD34^＋造血细胞计数及外周血中IL-5水平均低于A组相应指标．且差异有显著性（均P〈0．05）；C组BALF及外周血巾EOS计数、骨髓中CD34^＋造血细胞计数及CD34^＋IL-5RαmRNA＋细胞计数与B组相应指标比较，差异有显著性（均P〈0．05）。结论：霉酚酯酸（MMF）可能抑制嗜酸粒细胞（EOS）、T淋巴细胞的肺内浸润，抑制CD34^＋造血细胞从骨髓迁移至外周血，它可能主要通过抑制淋巴细胞增殖，减少IL-5的产生．来影响骨髓EOS祖细胞的分化。