雌激素对海水淹溺型肺损伤大鼠肺组织水通道蛋白表达影响的研究

目的 观察雌激素对海水淹溺型肺损伤大鼠肺组织水通道蛋白表达的影响.方法 90只健康雄性SD大鼠随机分为三组,即对照组、海水淹溺组及雌激素治疗组.海水淹溺组用气管吸入海水法建立模型;对照组除不吸入海水外,其他处理同海水淹溺组;雌激素治疗组在海水吸入后30 min给予腹腔注射17β-雌二醇5 mg/kg.分别于海水致肺损伤后1、2、4 h时间点取大鼠颈动脉血做血气分析观察动脉血氧分压(PaO2)的变化,测肺组织湿重/干重(W/D)比值,光镜下观察肺组织病理变化情况,采用RT - PCR方法检测AQPs mRNA的表达.结果 成功复制了大鼠海水淹溺型肺损伤模型:海水淹溺组在吸入海水后PaO2显著下降,各时间点PaO2显著低于对照组.雌激素治疗组PaO2显著上升,各时间点均高于海水淹溺组.海水淹溺组W/D比值显著高于正常对照组及雌激素治疗组.光镜下可见海水淹溺组肺组织有灶性出血,肺泡腔内渗出增多、少量中性粒细胞浸润和肺泡间质稍有增厚;对照组未见明显病理变化;雌激素治疗组肺组织充血、水肿有所减轻.海水淹溺组肺组织AQP1 mRNA及AQP5 mRNA表达高于对照组,AQP3 mRNA及AQP4 mRNA无明显变化;雌激素治疗组AQP1 mRNA及AQP5 mRNA表达减少.结论 吸入海水可引起大鼠肺组织AQP1 mRNA及AQP5 mRNA表达增加,但对AQP3 mRNA及AQP4 mRNA表达无明显影响.雌激素通过抑制海水吸入引起的大鼠肺组织AQP1 mRNA及AQP5 mRNA表达上调,影响大鼠海水淹溺型肺损伤时肺组织水的转运.     

脂氧素A4对脂多糖攻击的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞水通道蛋白5的影响

目的 探讨脂氧素A4(LipoxinA4,LXA4)对脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)攻击的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar type Ⅱ penumonoeyte,ATⅡ)水通道蛋白(aquaporin,AQP)5的影响.方法 对大鼠ATⅡ细胞进行分离、纯化,以1 μg/mL的LPS刺激ATⅡ 4 h建立LPS攻击ATⅡ细胞模型.将ATⅡ随机分为:空白对照(无血清的培养基不含任何药物)组;溶剂对照(乙醇,0.7μL/mL)组;LPS(1μg/mL)组;LXA4(1×107mol/mL)组;LPS+LXA4组.用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测大鼠ATⅡ中AQP5的信使核糖核酸(mRNA)的变化,免疫组织化学方法(IHC)检测ATⅡ中AQP5蛋白表达.结果 1μg/mL的LPs刺激ATⅡ4 h后,ATⅡ中AQP5的mRNA和蛋白表达较空白组明显减低(P<0.01),而LPS+LXA4组ATⅡ中AQP5的mRNA和蛋白表达较LPS组明显增高(P<0.01),且LXA4组ATⅡ中AQP5的mRNA和蛋白表达较空白组也明显增高(P<0.01).结论 大鼠ATⅡ上表达有AQP5,LXA4能促进AQP5 mRNA和蛋白表达上调,提示LXA4可能通过上调AQP5的表达起到促进肺泡水肿液清除作用.     

脂氧素A4对肺泡Ⅱ型上皮细胞水通道蛋白1,3,5的影响

目的 探讨脂氧素A4(LipoxirA4,LxA4)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)攻击的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(typeⅡpenumonocyte,AT Ⅱ)水通道蛋白(aquaporin,AQP)1,3,5的影响.方法 每次取SPF级健康SD雄性大鼠,体质量200～250 g一只,对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞进行分离、纯化,鉴定,得到纯度为≥90%的肺泡Ⅱ型上皮细胞,将细胞随机分为:①溶剂对照(乙醇,0.7μL/mL)组;②空白组(无血清的培养基不含任何药物);③LXA4(1×10-7moL/mL)组;④LPS(1μg/mL)组;⑤LPS+LXA4(1μg/mL LPS+1×10-7moL/mL LXA4)组.药物刺激4 h后用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞上AQP1,AQP3和AQP5的mRNA的表达,免疫组织化学方法(IHC)检测肺泡Ⅱ型上皮细胞上AQP1,AQP3和AQP5蛋白的表达.试验重复6次.采用方差分析进行统计学处理.结果 RT-PCR和免疫组织化学法结果显示,用1 μg/mL的LPS刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞4 h后ATⅡ上AQP1,AOP3和AQP5的mRNA和蛋白表达较空白组明显减低(P＜0.01),而LPS+LXA4组中ATⅡ上AQP1,AQP3和AQP5的mRNA和蛋白表达较LPS模型组有明显增高(LPS+LXA4,AQP1:0.647±0.132,AQP3:0.900±0.856,AQP5:0.879±0.058;LPS.AQP1:0.297±0.133,AQP3:0.512±0.113,AQP5:0.647±0.110;P＜0.01),且LXA4组中ATⅡ上AQP1,AQP3和AQP5的mRNA和蛋白表达较空白组也有明显增高(LXA4,AQP1:0.539±0.142,AQP3:0.818±0.176,AQP5:0.841±0.066;Blank Control,AQP1:0.518±0.139;AQP3:0.138±0.136,AQP5:0.766±0.066;P＜0.01).结论 大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞上表达有AQP1,AQP3和AQP5,LXA4能促进脂多糖攻击的肺泡Ⅱ型上皮细胞上AQP1,AQP3和AQP5mRNA和蛋白表达上调.     

丹参酮ⅡA对脓毒症肺损伤大鼠氧化应激的影响

目的 探讨丹参酮ⅡA对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用。方法 采用盲肠结扎穿孔法(CLP),随机将50只健康成年雄性SD大鼠分为假手术组、模型组、低剂量治疗组(丹参酮ⅡA 5 mg/kg)、中剂量治疗组(丹参酮ⅡA 10 mg/kg)、高剂量组(丹参酮ⅡA 20 mg/kg),每组各10只。假手术组：麻醉,开腹翻动肠道,关腹,2 h后腹腔注射0.9%氯化钠溶液(20 mL/kg),24 h后麻醉并腹主动脉采血,直至大鼠缺血而死。模型组及3个不同剂量的治疗组造模成功后2 h腹腔注射0.9%氯化钠溶液(20 mL/kg)或丹参酮ⅡA(5、10、20 mg/kg),24 h后,大鼠麻醉成功后,采集腹主动脉动脉血,行血气分析,计算PaO₂/FiO₂及ELISA法检测各组大鼠左肺下叶肺组织匀浆中XO、GSH-Px、MDA、SOD含量。结果 与模型组相比,三种剂量的丹参酮ⅡA均可以改善动脉血气中PaO₂/FiO₂比值,促进SOD和GSH-Px水平升高,同时降低了XO、MDA的水平。但是只有高剂量组的丹参酮ⅡA对MDA...     

丹参酮ⅡA磺酸钠治疗肺心病60例

目的观察丹参酮ⅡA磺酸钠注射液治疗肺心病的疗效。方法120例肺心病急性加重期患者随机分为治疗组62例和对照组60例,两组均采用抗感染、平喘化痰、适当强心利尿及吸氧等常规治疗。治疗组在常规综合治疗的基础上加用丹参酮ⅡA磺酸钠注射液80mg加5％葡萄糖注射液250ml,静脉滴注,每日1次;对照组仅给予常规治疗,两组疗程均为2周。结果治疗组治疗后高切粘度、低切粘度、血浆粘度、红细胞聚集指数、红细胞比容、血小板聚集率与用药前比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。与对照组比较,以上各指标差异均有统计学意义（P〈0．05）。治疗组临床总有效率及显效率分别88．3％及55．0％,对照组分别为70．0％及25．0％。治疗组疗效明显优于对照组（P〈0．05）。治疗期间未见丹参酮ⅡA磺酸钠注射液引起的严重不良反应。结论丹参酮ⅡA磺酸钠注射液能显著改善慢性肺心病急性加重期患者的血液流变特性,故为辅助治疗肺心病的一种安全有效的药物。     

肺水通道蛋白与肺疾病

水是生物机体细胞的主要成分,细胞摄取和排出水分是生命最基本地的活动之一。长期以来,人们普遍认为细胞内外的水分子是以简单的跨膜扩散方式来通过脂质双层膜,但某些细胞如红细胞、肾近曲小管上皮细胞对渗透压引起的水通透性很高,很难单纯以弥散来解释。Agre(1991年)及其同事完成了第一个水通道蛋白的cDNA的分子克隆和功能鉴定,证实了在哺乳动物的细胞膜上存在特异转运水的通道-水通道蛋白(Aquaporin),近年来逐渐鉴别了有关AQP家族,从而使水代谢的研究进入了一个新的阶段。目前已鉴定出6种肺水通道蛋白,其中AQP1、AQP3、AQP4、AQP5…     

特布他林影响水通道蛋白4在大鼠急性肺损伤肺水代谢的作用

目的 油酸造成急性肺损伤(ALI) 初期,特布他林气管滴入治疗,根据肺损伤程度及测定血管外肺水的大小,评估病理状态下特布他林对肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡ) 水通道蛋白4(AQP-4 )转运水能力的影响.方法 血气分析、肺组织病理学评分、透射电镜检测肺损伤程度;重力法测定血管外肺水(EVLW)含量;免疫组化法分析肺组织AQP-4的表达,急性分离纯化ATⅡ细胞,电子显微镜观察超微结构;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 检测肺泡Ⅱ型上皮细胞AQP-4的mRNA 表达.结果 血气分析、光镜下肺损伤评分说明油酸致大鼠急性肺损伤,显微镜下ATⅡ细胞的数量较对照组无明显减少,但电镜下细胞的超微结构如板层小体排空,线粒体损伤等改变;特布他林治疗后血气分析、病理评分、电镜下细胞等损伤明显减轻(P<0.05);EVLW三组间有显著性差异(P<0.05),治疗组肺水下降明显;肺组织免疫组化观察到损伤后肺泡上皮细胞AQP-4表达增强,呈阳性,特布他林组表达呈强阳性;ATⅡ细胞AQP-4的mRNA 表达治疗组、油酸组较对照组有显著性差异(P<0.05),两者之间无显著性差异(P＞0.05).结论 特布他林可能通过上调肺泡上皮细胞和Ⅱ型细胞上AQP-4的表达,介导水转运减轻肺损伤时肺泡腔水肿.     

丹参酮ⅡA磺酸钠对冠心病心绞痛临床疗效探讨

目的探讨丹参酮ⅡA磺酸钠注射液治疗冠心病心绞痛的疗效。方法将108例冠心病心绞痛患者随机分为治疗组（55例）和对照组（53例）。对照组常规予以硝酸酯类,钙离子拮抗剂、β-受体阻滞剂和阿司匹林等治疗。治疗组在前者的基础上加用丹参酮ⅡA磺酸钠注射液50mg／d,共2周。记录每例患者心绞痛发作的频率、发作时间及硝酸甘油用量及治疗前后心电图（ECG）变化。结果治疗组临床症状改善优于治疗组（P〈0．05）,发作频率、发作时间、及硝酸甘油用量下降明显,ECG指标的疗效优于对照组,差异具有显著性（P〈0．05）。结论丹参酮ⅡA磺酸钠有效改善心肌供血减少心绞痛发作,是临床治疗冠心病改善心肌缺血的一种有效药物。     

丹参酮ⅡA磺酸钠注射液对冠心病左心功能的影响

笔者选择了2005年5月～2006年12月在我科住院的67例冠心病合并左心功能不全的患者，并采用丹参酮ⅡA磺酸钠注射液治疗，取得满意疗效，现报告如下。     

水通道蛋白5在高氧肺损伤中的表达及调节机制

目的探讨水通道蛋白5(AQP5)在高氧肺损伤中的表达及其地塞米松对AQP5的调节作用。方法2周左右Wistar大鼠64只,按随机数字表法分为空气对照组、高氧暴露3、7、14d组和相应的地塞米松干预组。高氧暴露组置于常压氧仓中(O2体积分数≥95%);空气对照组置于同室常压空气中(O2体积分数为21%);各地塞米松干预组在暴露于空气或高氧的同时,经腹腔注射地塞米松5mg·kg-1·d-1,连续3d。采用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)和免疫组化方法观察AQP5的mRNA表达和分布变化,并与地塞米松干预后进行比较分析。结果AQP5主要表达在肺泡型上皮细胞及气道分泌上皮顶质膜;与空气对照组相比,高氧暴露不同时间后,AQP5特异性表达部位保持不变,但随暴露时间延长,AQP5表达呈逐渐减弱趋势,高氧暴露3、7和14d,AQP5mRNA较空气对照组均降低(P均<0.05)。与同期高氧暴露组比较,地塞米松干预后不同时间点AQP5mRNA表达均无明显变化(P均>0.05)。结论高氧肺损伤时AQP5表达降低,可能是高氧肺损伤肺水肿形成的原因之一;而未见地塞米松对高氧肺损伤AQP5的表达有调节作用。     

高氧对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响及降钙素基因相关肽的保护作用

目的 观察高氧对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)的影响以及降钙素基因相关肽(CGRP)对AECⅡ的保护作用.方法 将原代分离培养的孕19 d早产鼠AECⅡ接种至6孔培养板,实验随机分为空气组、高氧组、高氧CGRP组、高氧CGRP受体拮抗剂组.空气组和高氧组分别置于体积分数为21%的空气和60%的氧气中暴露24 h;高氧CGRP组在暴露前加入CGRP;高氧CGRP受体拮抗剂组在高氧CGRP组基础上加入CGRP受体拮抗剂(CGRP 8-37).培养24 h后,用分光光度计测定各组丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(TAOC)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;用流式细胞仪检测活性氧(ROS)和细胞凋亡率;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定表面活性蛋白C(SPC)的mRNA表达.结果 与空气组比较,高氧组ROS、MDA水平及细胞凋亡率均显著增高,TAOC、SOD水平及SPC mRNA表达均显著降低(P均<0.01).与高氧组比较,高氧CGRP组细胞MDA、ROS水平及细胞凋亡率均显著下降;而TAOC、SOD水平及SPC mRNA表达均明显增高(P均<0.01).高氧CGRP受体拮抗剂组与高氧组各指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05).结论 暴露于60%氧24 h可导致早产鼠AECⅡ发生氧化损伤,诱导细胞凋亡及SPC mRNA表达下降;而CGRP可部分减轻AECⅡ的氧化损伤,减少凋亡,促进SPC mRNA表达,对高氧损伤的AECⅡ起保护作用.     

罗格列酮对人腹膜间皮细胞和脐静脉内皮细胞水孔蛋白-1的影响

目的探讨体外条件下核受体Peroxisome proliferator-activated receptor gamma（PPAR-gamma）激动剂罗格列酮（RosiglitazoneRGZ）对人腹膜间皮细胞（human peritoneal mesothelial cells HPMCs）、人脐静脉内皮细胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells HUVECs）水孔蛋白-1（aquaporin 1 AQP1）增殖以及基因水平的影响。方法以HPMCs和HUVECs为研究对象,将实验分成四组：对照组、RGZ组（10uMRGZ）、GW9662组（peroxisome proliferator-activated receptor gamma antagonist 20uMGW9662）以及GW9662＋R组（20uMGW9662提前作用1H后加入10uMRGZ）。应用比色法（CCK-8）观察RGZ等对HPMCs和HUVECs增殖的影响。应用Realtime-PCR方法检测罗格列酮等对水孔蛋白-1基因水平表达的影响。结果①GW9662＋R组与对照组相比,可以明显抑制HPMCs增殖（P〈0.01）,其他组对HPMCs增殖没有明显影响（P〉0.05）。而对HUVECs,RGZ组、GW9662组以及GW9662＋R组都可以促进其增殖（P〈0.01）;②罗格列酮上调这两种细胞AQP1基因水平的表达。结论在体外,罗格列酮可影响HPMCs和HUVECs水孔蛋白质1基因水平的表达。其作用机制可能是通过激活PPAR-gamma从而影响上述两种细胞的AQP1的表达。     

角化细胞生长因子对骨髓间充质干细胞体外诱导分化为肺泡上皮细胞的实验研究

目的观察角化细胞生长因子(KGF)对体外小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向肺泡上皮细胞诱导分化的影响。方法建立体外非接触共培养诱导小鼠MSCs向肺泡上皮细胞分化的实验模型,并在培养液中加入KGF(10μl/ml),小鼠分4组(6只/组),实验组A:MSCs(1×105)单独培养组+KGF;实验组B:MSCs+正常肺组织悬液(1×105)+KGF;实验组C:MSCs+损伤肺组织悬液+KGF;实验组D:MSCs+损伤肺组织悬液(1×105)。共同培养8 d,应用激光共聚焦显微镜和RT-PCR检测共培养体系下室MSCs中的SP-C和AQP5的表达情况。结果实验组C于共培养的d 8,较其它实验组的AQP5 mRNA的表达量明显增多(5550.00±244.39vs1650.17±184.02,1600.83±193.00,2890.00±179.09,P均<0.05);于共培养的d 5,与实验组A相比差异也有统计学意义(1743.17±228.41vs1482.00±156.11,P<0.05)。只有实验组C和D表达SP-C,且实验组C各培养时间点的SP-C的mRNA的表达量均较实验组D明显增多(2632.50±231.11vs1599.00±158.95;3976.67±221.81vs2066.83±101.31;5388.33±347.96vs3893.17±178.61,P均<0.01)。结论KGF可以进一步促进体外小鼠MSCs诱导分化为肺泡上皮细胞。     

机械拉伸对γ-干扰素诱导肺泡上皮细胞人β-防御素-3表达的影响

目的 研究机械拉伸对γ-干扰素(IFN-γ)诱导肺泡上皮细胞(A549细胞)人β-防御素-3(HBD-3)表达的影响并探讨HBD-3在呼吸机相关性肺炎(VAP)发病机制中的作用.方法 体外培养A549细胞,分别给予机械拉伸(S组),10 ng/ml IFN-γ(I组)和10.ng/ml IFN-γ+机械拉伸(IS组)3种处理,未处理的细胞为对照组(C组),处理的时间为2 h、4 h和6 h.拉伸由细胞FlexerceH-4000TM拉伸系统提供,拉伸的幅度为20%,速率为30次/min.处理后实时定量逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测HBD-3 mRNA的表达;处理6 h的细胞继续培养至24 h,激光扫描共聚焦显微镜检测HBD-3的表达.采用单因素方差分析和q检验对实验数据进行统计学分析.结果 单独的机械拉伸不能使HBD-3mRNA的表达发生显著变化.10 ng/ml IFN-γ处理2 h、4 h和6 h后,HBD-3 mRNA表达量较之C组分别增加了(2.63±0.60),(8.02±1.63)和(12.21±2.35)倍.10 rig/ml IFN-γ+机械拉伸处理2 h、4 h和6 h后,HBD-3 mRNA表达量较之C组分别增加了(1.54±0.16),(4.37±0.87)和(6.99 4-1.32)倍,但均显著低于I组(P<0.01).6 h机械拉伸后,IS组HBD-3的表达显著少于I组(P<0.01),同C组差异无统计学意义.结论 机械拉伸能显著抑制IFN-γ诱导肺泡上皮细胞HBD-3表达的上调,这可能是机械通气(MV)的患者易于发生VAP的原因之一.     

Effect of ulinastatin on paraquat-induced-oxidative stress in human type II alveolar epithelial cells

BACKGROUND:

Ulinastatin (UTI) is a urinary trypsin inhibitor extracted and purified from urine of males. This study aimed to explore the effects of UTI on paraquat-induced-oxidative stress in human type II alveolar epithelial cells.

METHODS:

The human type II alveolar epithelial cells, A549 cells, were cultured in vitro. The A549 cells were treated with different concentrations of paraquat (200, 400, 600, 800, 1 000, 1 200 µmol/L) and ulinastatin(0, 2 000, 4 000, 6 000, 8 000 U/mL) for 24 hours, the cell viability was measured by cell counting kit-8 and the median lethal concentration was selected. In order to establish an in vitro model of paraquat intoxication and to determine the safe dose of ulinastatin, we calculated LD50 using cell counting kit-8 to determine the survival rate of the cells. A549 cells were divided into normal control group, paraquat group and paraquat+ulinastatin group. The levels of malondialdehyde (MDA) and myeloperoxidase (MPO) were detected by biochemistry colorimetry, while the level of reactive oxygen spies (ROS) was detected by DCFH-DA assay.

RESULTS:

The survival rate of A549 cells treated with different concentrations of paraquat decreased in a concentration-dependent manner. Whereas there was no decrease in the survival rate of cells treated with 0–4 000 U/mL ulinastatin. The levels of MDA, MPO, and ROS were significantly higher in the paraquat group than in the normal control group after 24-hour-exposure. And the survival rate of the paraquat+ulinastatin group was higher than that of the paraquat group, but lower than that of the normal control group. The levels of MDA, MPO, and ROS were lower than those of the paraquat group.

CONCLUSION:

Ulinastatin can alleviate the paraquat-induced A549 cell damage by reducing oxidative stress.KEY WORDS: Ulinastatin, Paraquat, Oxidative stress, A549 cell     

8-羟基-脱氧鸟苷在肺癌发生和人支气管上皮细胞癌变过程中的作用

目的　探讨 8 羟基 脱氧鸟苷 (8 OH dG)在肺癌发生中的作用及其分子机制。方法　使用鼠抗人 8 OH dG单克隆抗体 ,检测 15 0例肺癌、12 0例癌旁肺组织、4 0例肺良性病变和 4 0例正常肺组织中 8 OH dG的含量 ;同时检测相应肺组织中P5 3、C MYC、K RAS、BCL 2等癌变相关基因的表达 ,分析 8 OH dG与上述癌变相关基因表达的关系 ;并利用苯并 (a)芘代谢产物B(a)P 二醇 环氧化物 (BPDE)和结晶型硫化镍 (NiS)诱导的体外人支气管上皮细胞转化癌变模型 ,检测癌变进程中 8 OH dG的变化。结果　肺癌组织、癌旁肺组织、肺良性病变和正常肺组织中氧化损伤标志物 8 OH dG的阳性率分别为 92 .7% (139/ 15 0 )、17.5 % (2 1/ 12 0 )、10 .0 % (4 / 4 0 )和 5 .0 % (2 / 4 0 ) ,肺癌组织中 8 OH dG水平高于其它肺组织 (P <0 .0 1)。将肺癌病例按性别、年龄、细胞类型和吸烟史分层分析 ,结果显示它们与 8 OH dG均无关联。分析 8 OH dG与癌变相关基因的关系 ,发现肺癌组织K RAS、Bcl 2基因的过度表达与 8 OH dG含量高有关 ,而P5 3和C MYC基因的表达与 8 OH dG的含量无关联。在体外用BPDE和NiS作用于人支气管上皮细胞系诱导其转化和癌变过程中 ,8 OH dG出现于细胞转化之前 ,其含量的增加与细胞癌变进程相一致。结论　 8 羟基     

羟基红花黄色素A对人肾小管上皮细胞冷缺氧/复氧凋亡的影响

目的:探讨羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)预处理组对人肾小管上皮细胞(HK2细胞)冷缺氧/复氧(冷H/R)损伤导致的细胞凋亡的影响。方法:HK2细胞株消化传代后采用计算机随机方法分为sham组(对照组)、冷缺氧/复氧组(冷H/R组,细胞冷缺氧4 h,复氧4 h)、HSYA预处...     

波动性高糖对人视网膜色素上皮细胞氧化应激的影响

目的 对比研究波动性高糖与恒定高糖对人视网膜色素上皮（HRPE）细胞氧化应激的影响.方法 培养HRPE细胞株,根据培养条件不同分为4组：（1）正常对照组：5.5 mmol/L葡萄糖;（2）恒定高糖组：33.0 mmol/L葡萄糖;（3）波动性高糖组：5.5 mmol/L和33.0 mmol/L葡萄糖波动组,日间每3小时高糖、2小时低糖交替3次,高糖过夜;（4）渗透压控制组：33.0 mmol/L甘露醇.每组均设6个复孔,置于37℃、5％ CO2孵箱中,分别于培养24、48、72 h收集细胞培养上清液用于过氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）、丙二醛检测.结果 （1）培养24 h,波动性高糖组SOD为（12.1 ±3.0） U/ml,GSH为（68.5±3.8） mg/L,丙二醛为（17.5±3.0） μmol/L;恒定高糖组SOD为（21.8±1.6） U/ml,GSH为（90.8±4.8） mg/L,丙二醛为（12.9±1.2） μmol/L;正常对照组SOD为（31.1±4.7） U/ml,GSH为（143.4±8.3） mg/L,丙二醛为（3.1±1.1） μmol/L;渗透压控制组SOD为（32.4±2.8） U/ml,GSH为（143.3±12.8）mg/L,丙二醛为（2.8±1.2） μmol/L.（2）培养48 h,波动性高糖组SOD为（9.6±1.8） U/ml,GSH为（72.5±4.3）mg/L,丙二醛为（19.1 ±1.7） μmol/L;恒定高糖组SOD为（21.0±2.5） U/ml,GSH为（93.4±4.6） mg/L,丙二醛为（11.6±2.2）μmol/L;正常对照组SOD为（31.0±2.5） U/ml,GSH为（145.5±6.6） mg/L,丙二醛为（3.9±1.0） μmol/L;渗透压控制组SOD为（28.4±0.8） U/ml,GSH为（142.0 ±4.9）mg/L,丙二醛为（2.9±0.8）μmol/L.（3）培养72 h,波动性高糖组SOD为（10.9±1.7）U/ml,GSH为（70.9±7.3） mg/L,丙二醛为（19.5±0.5）μmol/L;恒定高糖组SOD为（20.4±1.7）U/ml,GSH为（91.6±7.2） mg/L,丙二醛为（11.2±3.3） μmol/L;正常对照组SOD为（32.4±4.4）U/ml,GSH为（143.0±23.2） mg/L,丙二醛为（3.0±1.0）μmol/L;渗透压控制组SOD为（29.5±2.6）U/ml,GSH为（134.5±11.1） mg/L,丙二醛为（2.8±0.8）μmol/L.（4）培养24、48、72 h波动性高糖组、恒定高糖组与正常对照组相比,差异均有统计学意义（P均＜0.01）,波动性高糖组与恒定高糖组相比,差异均有统计学意义（P均＜0.01）,渗透压控制组与正常对照组相比差异均无统计学意义（P均＞0.05）,与恒定高糖组、波动性高糖组相比,差异均有统计学意义（P均＜0.01）.结论 波动性高糖较恒定高糖对HRPE细胞有更强的氧化应激损伤.     

miR-21在脂多糖诱导的人鼻黏膜上皮细胞中表达变化及作用机制

目的探讨微RNA-21(miR-21)在脂多糖诱导的人鼻黏膜上皮细胞(HNEpC)中表达变化及可能的作用机制。方法应用脂多糖诱导建立HNEpC炎症反应细胞模型,分别应用荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法检测炎症细胞模型建立前后miR-21和磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)蛋白的表达水平变化。取脂多糖诱导的HNEpC细胞,分为miR-21抑制物组和阴性对照组,应用脂质体转染法分别将miR-21抑制物和阴性对照物转染入2组HNEpC细胞,比较转染后2组细胞中miR-21和PTEN蛋白的表达、细胞增殖活性和凋亡率以及细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10的水平。结果脂多糖诱导的HNEpC细胞中miR-21表达水平增高(P <0.05),PTEN蛋白的表达水平降低(P <0.05)。miR-21抑制物组细胞中miR-21表达水平低于阴性对照组(P <0.05),转染后24、48、72 h后的吸光度值均低于阴性对照组(P均<0.05),凋亡率高于阴性对照组(P <0.05),并且细胞上清液中TNF-α、IL-1β及IL-6水平均低于...     

丙氨酰谷氨酰胺对体外培养人颊黏膜上皮细胞生物活性的影响

目的研究丙氨酰谷氨酰胺(Ala-Gln)对体外培养的人颊黏膜上皮细胞的生长、蛋白合成和碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。方法将体外培养的人颊黏膜上皮细胞根据加入Ala-Gln或谷氨酰胺(Gln)情况分为N组(对照组)、A组(加入Ala-Gln组)和G组(加入Gln组),再对A组和G组根据其推荐的基础浓度进行梯度浓度设立8、4、2、1、1/2、1/4和1/8各7个组,在培养至12、24、36、48、60和72h之时,流式细胞仪计数细胞并绘制细胞生长曲线,另外再检测对应时段各自ALP浓度;72h时检测各组细胞总蛋白水平。结果 N组细胞在72h内细胞数并未明显变化,ALP水平随着时间推移有所增加,但差值均低于加药的两组差异有统计学意义(P0.05)。在整个72h内,A1/2、A1/4和G1/2、G1/4细胞数目和ALP水平都能保持持续增长的状态,但是无论是A或者G组别,1/4浓度组以及其他浓度组都低于1/2浓度组;A和G组别对应浓度组之间,细胞生长情况和ALP水平差异无统计学意义(P0.05);各药物浓度组细胞蛋白水平均高于N组,A和G组细胞蛋白水平最高;而各对应药物浓度的A和G组别的细胞蛋白水平差异无统计学意义(P0.05)。结论 Ala-Gln和Gln都能促进颊黏膜上皮细胞生长,浓度过高或过低均不利于细胞的持续生长,但1/2推荐浓度的Ala-Gln即16.5mg/mL的Ala-Gln更为合理。