蟾毒灵抑制人前列腺癌PC3细胞迁移侵袭的机制研究

本研究主要探讨了蟾毒灵(bufalin)对人前列腺癌PC3细胞的体外增殖、迁移和侵袭的抑制能力,初步探讨蟾毒灵抑制上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transformation, EMT)过程的分子机制。采用MTT法评价PC3细胞活力;划痕和Transwell实验用于检测细胞的迁移和侵袭能力;采用Western blot实验检测EMT和整合素家族蛋白的表达情况。结果显示,蟾毒灵对人前列腺癌PC3细胞的半数抑制浓度值为0.26±0.03μmol·L-1,蟾毒灵处理后, PC3细胞的迁移速度变慢(P <0.05),穿过微孔滤膜的PC3细胞数量减少(P <0.05),这表明蟾毒灵能够浓度依赖性地抑制PC3细胞的增殖、迁移与侵袭能力。本研究发现蟾毒灵可以影响EMT相关蛋白的表达,包括E-钙黏附素(E-cadherin)的上调以及N-钙黏附素(N-cadherin)、β-连环蛋白(β-catenin)、基质金属蛋白酶9 (MMP9)、基质金属蛋白酶2 (MMP2)、癌基因c-myc、锌指转录因子Snail的下调;蟾毒灵还可以抑制整合素家族蛋白的表达,包括...     

酯蟾毒配基抑制人肝癌细胞体外增殖和迁移侵袭研究

本文旨在探讨酯蟾毒配基对人肝癌细胞增殖和迁移侵袭的影响及其相关机制。采用MTT比色法测定酯蟾毒配基对4种肝癌细胞的体外生长抑制作用,划痕实验和Transwell实验用来评估酯蟾毒配基对MHCC-97H细胞的迁移和侵袭能力,采用Western blot实验检测经不同浓度酯蟾毒配基处理后, MHCC-97H细胞内迁移侵袭相关蛋白的表达。结果表明,酯蟾毒配基能明显抑制肝癌细胞的体外增殖能力,其对MHCC-97H、HepG2、SK-Hep-1、Huh-7细胞的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration, IC₅₀)值分别为0.55±0.06、2.83±0.24、5.25±0.49、14.89±2.28μmol·L^-1;酯蟾毒配基还能显著抑制MHCC-97H细胞的迁移和侵袭能力,且具有显著的浓度依赖性。MHCC-97H细胞中的整合素α2 (integrin α2)、整合素α6 (integrin α6)、整合素β1 (integrin β1)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、基质金属蛋白酶2 (mat...     

青藤碱通过COX-2/VEGF通路抑制胃癌MGC803细胞迁移和侵袭的研究

摘要：目的:探讨青藤碱对胃癌MGC803细胞迁移和侵袭的影响及机制。方法:将胃癌MGC803细胞随机分成4组:对照组、青藤碱300,600,1 200 mg·L-1组,采用划痕愈合实验检测细胞迁移率,Transwell实验检测迁移细胞数和侵袭细胞数,qRTPCR检测环氧合酶2（COX-2）、血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶9（MMP9）、基质金属蛋白酶2（MMP2） mRNA表达,Western blot检测COX-2、VEGF、MMP9、MMP2蛋白表达。结果:青藤碱300,600,1 200mg·L-1组胃癌MGC803细胞迁移率、迁移细胞数、侵袭细胞数、COX-2、VEGF、MMP9、MMP2 mRNA和蛋白表达显著低于对照组（P<0.05或P<0.01）。结论:青藤碱抑制胃癌MGC803细胞迁移和侵袭,其机制与下调COX-2、VEGF、MMP9、MMP2表达有关。     

β-榄香烯对人肝癌细胞侵袭转移及相关机制的实验研究

目的研究β-榄香烯对人肝癌细胞侵袭转移能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法应用不同浓度的β-榄香烯作用于人肝癌细胞株HepG2 24h,以MTT法检测细胞黏附能力,采用Matrigel试剂、Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot法检测细胞基质金属蛋白酶MMP-2及MMP-9蛋白的表达。结果随β-榄香烯浓度增大细胞黏附能力降低,同时侵袭及迁移细胞数目明显减少;β-榄香烯可以浓度依赖性地减少MMP-2及MMP-9蛋白表达。结论β-榄香烯可有效抑制人肝癌细胞侵袭转移能力,这主要是通过减少MMP-2及MMP-9蛋白的表达途径来实现。     

人参皂甙Rh_2抗乳腺癌细胞细胞侵袭和转移的实验研究

目的观察人参皂甙Rh2对人乳腺癌MCF7/Adr细胞侵袭和迁移的作用及其机制。方法用MTT比色法,检测人参皂甙Rh2(Rh2)对MCF7/Adr细胞的活力;Transwell小室测定其侵袭力和迁移力;Western blot法检测细胞基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9和核转录因子KappaB(NF-KB)蛋白水平的变化。结果用人参皂甙Rh2处理后,MCF7/Adr细胞生长受到抑制,且作用呈时效-量效依赖关系;同时细胞侵袭和迁移能力明显降低;MMP2、MMP9和NF-kB蛋白的表达均明显减弱。结论人参皂甙Rh2能够减弱MCF7/Adr细胞侵袭和转移,其机制可能与降低MMP2、MMP9和NF-kB蛋白表达有关。     

低浓度Celecoxib对卵巢癌细胞SKOV3侵袭的抑制作用的研究

目的探讨低浓度环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂Celecoxib对人卵巢癌细胞系SKOV3侵袭的影响及其相关机制。方法10μmol/L Celecoxib作用SKOV3细胞24h后,细胞外基质黏附试验检测细胞黏附能力,Transwell侵袭小室测定细胞的侵袭力,划痕试验检测细胞的迁移能力,明胶酶谱法(Zymography)检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9活性,Western blot检测MMP-2、MMP-9和E-cadherin的表达;同时利用RNAi技术特异性沉默SKOV3细胞中COX-2的表达,观察上述指标的变化情况。结果10μmol/L Celecoxib作用SKOV3细胞24h后,细胞外基质黏附试验结果表明:SKOV3细胞黏附于matrigel的细胞数明显增加(P<0.05);Transwell侵袭小室实验结果表明:SKOV3细胞穿膜数明显减少(P<0.05),划痕试验结果表明:SKOV3细胞迁移到损伤区的细胞数明显减少(P<0.05)。进一步探讨机制,Zymography结果显示Celecoxib作用SKOV3细胞后,MMP-2、MMP-9的活性降低,Western blot结果显示MMP-2、MMP-9的表达量降低,而E-cadherin的表达量增强。而经特异性沉默COX-2表达的SKOV3/COX-2i细胞未出现上述分子的变化。结论10μmol/L Celecoxib能够增强SKOV3的黏附力,抑制其侵袭和转移能力,其机制可能与增加E-cadherin的表达,抑制MMP-2、MMP-9的活性和表达有关,而这一过程可能是COX-2非依赖的。     

Effects of β-elemene inhibition of tumor invasion and metastasis properties of human hepatocarcinoma cells and its possible mechanism

目的 研究β-榄香烯对人肝癌细胞侵袭转移能力的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 应用不同浓度的β-榄香烯作用于人肝癌细胞株HepG2 24 h,以MTT法检测细胞黏附能力,采用Matrigel试剂、Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot法检测细胞基质金属蛋白酶MMP-2及MMP-9蛋白的表达.结果 随β-榄香烯浓度增大细胞黏附能力降低,同时侵袭及迁移细胞数目明显减少;β-榄香烯可以浓度依赖性地减少MMP-2及MMP-9蛋白表达.结论 β-榄香烯可有效抑制人肝癌细胞侵袭转移能力,这主要是通过减少MMP-2及MMP-9蛋白的表达途径来实现.     

黄芩素抑制人乳腺癌细胞侵袭和迁移的实验研究

目的探讨黄芩素(baicalein)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭和迁移的作用及其机制。方法 MTT法检测Baicalein对细胞活力的影响;Transwell小室测定其侵袭力和迁移力;细胞划痕实验测定细胞运动能力;Western blot检测细胞MMP2、MMP9和uPA的表达。结果与对照组相比,50、100μmol·L-1的baicalein明显抑制了MDA-MB-231细胞的侵袭(P<0.01)和迁移(P<0.01)。其中,baicalein对细胞侵袭抑制率分别为15%和44%,对细胞迁移的抑制率分别为50%和77%。50μmol·L-1的baicalein抑制了MMP2的表达水平,100μmol·L-1的baicalein分别抑制了MMP9和uPA的表达水平。结论 baicalein能够抑制MDA-MB-231细胞侵袭和迁移,其机制可能与直接抑制细胞侵袭和迁移能力,抑制MMP2、MMP9和uPA的表达有关。     

麦冬皂苷B对A549细胞株体外黏附、侵袭及迁移的抑制作用及机制研究

目的探究麦冬皂苷B(ophiopogonin-B,OP-B)抑制非小细胞肺癌细胞株A549黏附、侵袭、迁移的作用及其机制。方法细胞黏附实验、Transwell小室实验分别检测细胞黏附、迁移和侵袭能力。通过荧光实时定量反转录PCR(qRT-PCR)检测OP-B对A549细胞中MMP-2/9 mRNA表达水平的调控,Western blot法检测细胞中MMP-2/9蛋白及其上游调控蛋白Akt及其磷酸化水平的变化。结果 10μmol·L-1浓度的OP-B能明显抑制A549细胞黏附、侵袭和迁移,同时能抑制其MMP-2/9 mRNA及蛋白水平的表达,并抑制其上游p-Akt的表达。结论 OP-B有效抑制A549细胞黏附、侵袭和迁移,其作用与下调MMP-2/9 mRNA和蛋白水平的表达及抑制其上游Akt的磷酸化有关。     

小檗碱通过TGF-β/Smad通路抑制TGF-β1诱导的人肝癌HepG2细胞上皮间质转化的研究

目的探讨小檗碱(berberine)对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人肝癌HepG2细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的作用及其机制。方法MTT法检测小檗碱对HepG2细胞增殖活性;采用10 ng·L-1 TGF-β1诱导HepG2细胞EMT模型形成,并加入小檗碱处理;克隆形成实验、细胞划痕和Transwell小室实验分别检测HepG2细胞的克隆形成能力、迁移和侵袭能力;免疫荧光法检测EMT间质标志物Vimentin的表达;Western blot法检测EMT标志物蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Snail)、基质金属蛋白酶(MMP-2)、TGF-β/Smad通路蛋白(Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3)的表达。结果小檗碱呈浓度时间依赖性抑制HepG2细胞活性;与TGF-β1组比较,小檗碱可以明显抑制HepG2细胞的克隆形成能力、迁移和侵袭能力;并且小檗碱可以抑制TGF-β1上调的E-cadherin蛋白表达,和TGF-β1下调的N-cadherin、Vimentin、Snail、MMP-2、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达。结论小檗碱可能通过抑制TGF-β/Smad信号通路,干预TGF-β1诱导HepG2细胞的EMT进程,抑制HepG2细胞的迁移和侵袭能力。     

亚低温促进大鼠颅脑创伤后海马新生 神经元长期存活及成熟

目的 探讨亚低温（MHT）对大鼠颅脑创伤（TBI）后海马齿状回区（DG）新生神经元长期存活及成熟的影 响。方法 59只健康成年SD大鼠随机分为假手术（sham）组、TBI组及TBI+MHT组,sham组15只,其余两组各22只。 TBI大鼠模型借助液压冲击脑损伤仪建立,打击压力设置为2.0 atm（1 atm=101.325 kPa）。TBI+MHT组大鼠在损伤后 立即接受MHT,降温后直肠目标温度为33.5 ℃,维持4 h,并于1.5 h内缓慢复温至37 ℃。在不同时间点应用Morris水 迷宫试验,mNSS评分比较大鼠神经功能恢复情况,免疫荧光染色等方法检测各组海马新生神经元长期存活及成熟 情况。结果 与TBI组比较,TBI+MHT组大鼠伤后4周的逃避潜伏期明显缩短,平台穿越次数及目标象限停留时间 均显著增加（P＜0.05）。损伤后1、2、4周TBI+MHT组大鼠较TBI组mNSS评分均降低（P＜0.01）。与sham组比较,损 伤后1、4、8周TBI组和TBI+MHT组大鼠损伤侧海马DG区BrdU阳性细胞数及BrdU/NeuN双阳性细胞数均增加（P＜ 0.05）,且TBI+MHT组较TBI组增加更明显（P＜0.05）。此外,与损伤后1周相比,损伤后4周及8周TBI组BrdU/NeuN 双阳性细胞数减少,而TBI+MHT组进一步增加（P＜0.05）。结论 MHT可促进TBI后新生神经元的长期存活及成 熟,促进TBI后神经功能恢复。     

Bufalin‐inhibited migration and invasion in human osteosarcoma U‐2 OS cells is carried out by suppression of the matrix metalloproteinase‐2, ERK,and JNK signaling pathways

Bufalin has been shown to exhibit multiple pharmacological activities, including induction of apoptosis in many types of cancer cell lines. Osteosarcoma is a type of cancer which is difficult to treat and the purpose of this study was to investigate the effects of bufalin on the migration and invasion of human osteosarcoma U‐2 OS cells. The wound healing assay and Boyden chamber transwell assay were used for examining the migration of U‐2 OS cells. Western blotting and gelatin zymography assays were used for theexpression and activities of metalloproteinase (MMP)‐2, MMP‐7 or MMP‐9 levels. Western blotting analysis also was used for measuring the levels of growth factor receptor‐bound protein 2 (GRB2), son of sevenless homolog 1 (SOS1), c‐Jun N‐terminal kinases 1/2 (JNK1/2), extracellular signal‐regulated kinase 1/2 (ERK1/2), and p38 in bufalin‐treated U‐2 OS cells. Bufalin inhibited the cell migration and invasion of U‐2 OS cells in vitro. Moreover, bufalin reduced MMP‐2 and MMP‐9 enzyme activities of U‐2 OS cells. Bufalin also suppressed the protein level of MMP‐2 and reduced the levels of mitogen‐activated protein kinases (MAPKs) such as JNK1/2 and ERK1/2 signals in U‐2 OS cells. Our results suggest that signaling pathways for bufalin‐inhibited migration and invasion of U‐2 OS cells might be mediated through blocking MAPK signaling and resulting in the inhibition of MMP‐2. Bufalin could be a useful agent to develop as a novel antitumor agent by virtue of its ability to inhibit tumor cell migration and invasion. © 2011 Wiley Periodicals, Inc. Environ Toxicol 29: 21–29, 2014.     

羽扇豆醇调控miR-100-5p对非小细胞肺癌NCI-H1299细胞生物学行为的影响

目的 探讨羽扇豆醇调控miR-100-5p对非小细胞肺癌（NSCLC）NCI-H1299细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 将体外培养的NCI-H1299细胞分为正常对照（NC）组（未处理）、低剂量组（12.5μmol/L羽扇豆醇）、中剂量组（25μmol/L羽扇豆醇）、高剂量组（50μmol/L羽扇豆醇）、miR-NC组（转染miR-NC）、miR-100-5p组（转染miR-100-5p）、anti-miR-NC+高剂量组（转染anti-miR-NC后用50μmol/L羽扇豆醇处理）、anti-miR-100-5p+高剂量组（转染anti-miR-100-5p后用50μmol/L羽扇豆醇处理）。CCK-8和克隆形成实验检测NCI-H1299细胞增殖;Transwell法检测NCI-H1299细胞迁移和侵袭。荧光定量PCR(q PCR)检测miR-100-5p表达;Western blot检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶（MMP）2和MMP9蛋白的表达。结果 与NC组比较,低、中、高剂量组NCI-H1299细胞活力、细胞克隆数、迁移数、侵袭数、CyclinD1、...     

蝎毒多肽提取物体外抑制胰腺癌细胞侵袭转移及相关机制

目的研究蝎毒多肽提取物PESV对人高转移胰腺癌细胞MIA-PaCa2-3转移相关能力的影响及其作用的机制。为PESV在临床上治疗胰腺肿瘤提供理论根据。方法以高转移的人胰腺癌细胞系MIA-PaCa2-3为研究对象,通过细胞增殖实验(MTT法)观察在PESV影响下肿瘤细胞活性及增殖情况,通过细胞黏附实验、细胞划痕实验及Transwell体外侵袭实验检测PESV干预后细胞的黏附、侵袭及运动能力变化。免疫细胞化学实验及Western blot检测胰腺癌细胞的E-钙粘蛋白、纤粘蛋白和基质金属蛋白酶-9的表达。结果细胞增殖实验结果显示,PESV对胰腺癌细胞呈明显剂量及时间效应关系的增殖抑制作用,与对照组比较细胞增殖抑制作用明显(P<0.05);黏附实验表明PESV可降低胰腺癌细胞的黏附力,侵袭实验及划痕实验的结果表明PESV可以使细胞的侵袭力和运动能力下降,PESV(40mg.L-1)干预8h后,黏附力、侵袭力和运动能力的抑制率分别为(30.3±4.7)%、(42.1±3.7)%、(47.6±3.3)%,与对照组比较差异均有显著性(P<0.05);免疫细胞化学及Western blot实验检测均显示,PESV干预后,胰腺癌细胞E-钙粘蛋白阳性表达细胞数量上升,灰度值明显上调(P<0.05),FN及MMP-9蛋白阳性表达数量减少,灰度值明显下调(P<0.05)。结论PESV能够明显抑制胰腺癌细胞的增殖、黏附力、侵袭及运动能力,其机制可能是通过提高E-cad表达、降低FN和MMP-9表达而实现的。     

EGCG 对HepG2 肝癌细胞跨内皮迁移的影响及机制研究

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对体外培养的人肝癌细胞系HepG2细胞跨内皮迁移的影响及其机制。方法采用癌细胞与内皮细胞的单层粘附实验检测HepG2细胞与内皮细胞的粘附;利用Transwell小室法分析HepG2细胞的跨内皮迁移;运用real time PCR检测LOX-1mRNA水平,Western Blot分析LOX-1蛋白的表达。结果 EGCG(5,10,20μM)能够浓度依赖性地抑制TNF-α(50ng·mL-1)所诱导的HepG2细胞与内皮细胞的粘附、HepG2细胞的跨内皮迁移以及LOX-1mRNA和蛋白表达的上调。LOX-1中和抗体TS20(10ng·mL-1)也能抑制TNF-α对HepG2细胞的这些效应。结论 EGCG通过减少LOX-1的表达能明显抑制TNF-α诱导的肝癌细胞与内皮细胞的粘附及跨内皮迁移。LOX-1可能作为一种粘附分子,参与介导肝癌细胞与内皮细胞的相互作用。