小鼠睾丸膜联蛋白A1的克隆、表达及定位

目的:克隆、表达小鼠睾丸膜联蛋白A1,并研究其在睾丸中的定位。方法:利用RT-PCR技术从小鼠睾丸组织中扩增膜联蛋白A1的cDNA序列,将该基因插入GST融合表达载体pGEX-5T。以亲和层析法纯化蛋白免疫家兔制备多抗,并做睾丸切片免疫组织化学检测。结果:重组质粒测序结果表明,插入片段与小鼠膜联蛋白A1的序列完全一致。K802重组菌高效表达出相对分子质量为63 000的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的30%。多抗效价达1∶102 400,可特异识别重组蛋白。免疫组织化学显示膜联蛋白A1主要分布于精原细胞核、精子细胞顶体帽及精子胞质残余体内。结论:成功克隆、表达了小鼠膜联蛋白A1基因;膜联蛋白A1在睾丸生精细胞中的不同分布预示其可能与生精过程有关。     

膜联蛋白A1与恶性肿瘤的关系

膜联蛋白A1(annexin A1,ANXA1)是Ca2+依赖的磷脂结合蛋白,参与多种细胞病理生理过程.研究发现ANXA1与多种恶性肿瘤关系密切,其可能参与肿瘤的发生、发展,并与肿瘤的分化、增殖、侵袭、转移及肿瘤预后关系密切.ANXA1与恶性肿瘤的关系研究将为肿瘤的诊断、治疗、预防开拓新的思路和方向.     

脑胶质瘤中膜联蛋白A2的表达及意义

目的:研究膜联蛋白A2在人脑胶质瘤中的表达及其与病理分级的相关性,探讨其成为胶质瘤诊断标志物的可能性。方法:分别使用RT-PCR和免疫组化法检测胶质瘤和瘤周组织中膜联蛋白A2的mRNA及蛋白表达水平。结果:RT-PCR法显示胶质瘤中膜联蛋白A2mRNA的表达率和表达量远远高于瘤旁脑组织(P0.05),免疫组化的结果也显示胶质瘤中膜联蛋白A2的表达高于瘤旁组织(P0.05)。结论:胶质瘤中膜联蛋白A2表达明显高于瘤周脑组织,且和胶质瘤病理分级呈正相关,可作为胶质瘤诊断辅助指标之一。     

胆囊癌组织蛋白质组研究及膜联蛋白A3表达的临床病理意义

目的 通过分离并鉴定胆囊癌和胆囊良性组织的差异表达蛋白质,以发现可能用于早期诊断或治疗的胆囊癌肿瘤标志物.方法 提取人胆囊癌和胆囊良性组织(各6例)的总蛋白质,用双向电泳分离蛋白并进行比较.选择在胆囊癌组织中明显差异表达的蛋白点,行质谱分析.采用免疫组织化学EliVision法,对50例原发性胆囊癌38例慢性胆囊炎组织中膜联蛋白A3表达进行检测,分析胆囊癌中膜联蛋白A3的表达状况及其与胆囊癌临床病理指标和预后的关系.结果 获得了分辨率和重复性均很好的凝胶蛋白图谱.对筛选出的在胆囊癌组织中明显差异表达的46个蛋白点,共有17种蛋白质被成功鉴定,其中在胆囊癌组织中高表达9个,低表达8个.膜联蛋白A3在胆囊癌组织中表达的阳性率明显高于慢性胆囊炎组织,差异有统计学意义(74.0%:21.1%,P<0.01),其表达水平与胆囊癌患者年龄、性别及组织学类型等因素均无明显关系(P>0.05),但高表达与胆囊癌的低分级(40.0%:82.5%,P<0.05)、淋巴结或远处转移(40.9%:100.0%,P<0.05)以及术后生存时间减少(50.0%:93.8%,P<0.05)有明显关系.结论 胆囊癌组织蛋白与胆囊良性组织存在明显的差异.膜联蛋白A3可能对胆囊癌的发生、发展有作用.     

胆囊癌组织蛋白质组研究及膜联蛋白A3表达的临床病理意义

目的 通过分离并鉴定胆囊癌和胆囊良性组织的差异表达蛋白质,以发现可能用于早期诊断或治疗的胆囊癌肿瘤标志物.方法 提取人胆囊癌和胆囊良性组织(各6例)的总蛋白质,用双向电泳分离蛋白并进行比较.选择在胆囊癌组织中明显差异表达的蛋白点,行质谱分析.采用免疫组织化学EliVision法,对50例原发性胆囊癌38例慢性胆囊炎组织中膜联蛋白A3表达进行检测,分析胆囊癌中膜联蛋白A3的表达状况及其与胆囊癌临床病理指标和预后的关系.结果 获得了分辨率和重复性均很好的凝胶蛋白图谱.对筛选出的在胆囊癌组织中明显差异表达的46个蛋白点,共有17种蛋白质被成功鉴定,其中在胆囊癌组织中高表达9个,低表达8个.膜联蛋白A3在胆囊癌组织中表达的阳性率明显高于慢性胆囊炎组织,差异有统计学意义(74.0%:21.1%,P<0.01),其表达水平与胆囊癌患者年龄、性别及组织学类型等因素均无明显关系(P>0.05),但高表达与胆囊癌的低分级(40.0%:82.5%,P<0.05)、淋巴结或远处转移(40.9%:100.0%,P<0.05)以及术后生存时间减少(50.0%:93.8%,P<0.05)有明显关系.结论 胆囊癌组织蛋白与胆囊良性组织存在明显的差异.膜联蛋白A3可能对胆囊癌的发生、发展有作用.     

胆囊癌组织蛋白质组研究及膜联蛋白A3表达的临床病理意义

目的 通过分离并鉴定胆囊癌和胆囊良性组织的差异表达蛋白质,以发现可能用于早期诊断或治疗的胆囊癌肿瘤标志物.方法 提取人胆囊癌和胆囊良性组织(各6例)的总蛋白质,用双向电泳分离蛋白并进行比较.选择在胆囊癌组织中明显差异表达的蛋白点,行质谱分析.采用免疫组织化学EliVision法,对50例原发性胆囊癌38例慢性胆囊炎组织中膜联蛋白A3表达进行检测,分析胆囊癌中膜联蛋白A3的表达状况及其与胆囊癌临床病理指标和预后的关系.结果 获得了分辨率和重复性均很好的凝胶蛋白图谱.对筛选出的在胆囊癌组织中明显差异表达的46个蛋白点,共有17种蛋白质被成功鉴定,其中在胆囊癌组织中高表达9个,低表达8个.膜联蛋白A3在胆囊癌组织中表达的阳性率明显高于慢性胆囊炎组织,差异有统计学意义(74.0%:21.1%,P<0.01),其表达水平与胆囊癌患者年龄、性别及组织学类型等因素均无明显关系(P>0.05),但高表达与胆囊癌的低分级(40.0%:82.5%,P<0.05)、淋巴结或远处转移(40.9%:100.0%,P<0.05)以及术后生存时间减少(50.0%:93.8%,P<0.05)有明显关系.结论 胆囊癌组织蛋白与胆囊良性组织存在明显的差异.膜联蛋白A3可能对胆囊癌的发生、发展有作用.     

β—连接素和膜联蛋白—1与肿瘤

β-连接素在结肠癌等多种肿瘤中高表达;膜联蛋白-1在不同的肿瘤中表达水平不同,二者有希望成为新的检测和研究肿瘤发生发展的肿瘤标志物.     

膜联蛋白A7在人宫颈鳞癌和正常组织中的表达

目的 探讨膜联蛋白A7在人宫颈鳞癌和正常组织中的表达情况. 方法 应用免疫组织化学SP法,检测人宫颈鳞癌和正常宫颈组织蜡块各25例中膜联蛋白A7的表达差异;Western .blotting和半定量RT-PCR法检测人宫颈鳞癌和正常组织新鲜标本各25例中膜联蛋白A7的表达差异. 结果 膜联蛋白A7在组织中蛋白和mRNA水平表达一致,均为宫颈鳞癌组织表达高于正常宫颈组织,差异有统计学意义. 结论 膜联蛋白A7在人宫颈鳞癌表达上调, 可能成为宫颈癌诊断的一个新的指示靶点.     

膜联蛋白A1在兔骨髓间充质干细胞体外诱导成骨和成脂早期的表达

背景：骨髓间充质干细胞分化过程中膜联蛋白A1表达变化的研究报道各有不同看法。 目的：分析兔骨髓间充质干细胞在体外诱导成骨和成脂过程中膜联蛋白 A1基因的表达变化。 方法：应用全骨髓贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞,分别加入含成骨诱导剂、成脂诱导剂及不添加任何诱导剂的培养基进行培养。 结果与结论：膜联蛋白A1基因在成骨诱导过程中与未诱导细胞相比有明显下调趋势,差异有显著性意义(P < 0.01),而在成脂诱导剂中则为上升(P < 0.01)。成骨诱导剂对细胞生长存在抑制作用并增加细胞凋亡(P < 0.01),而成脂诱导剂对细胞生长与凋亡作用较小(P > 0.05)。因此排除了诱导剂对细胞的作用之后,推测膜联蛋白A1基因可能与骨髓间充质干细胞体外向脂肪细胞分化存在一定关系,但尚不能肯定其在成骨分化中的作用。     

兔膜联蛋白A1基因短发夹RNA慢病毒载体构建与RNA干扰效率的鉴定*

背景：膜联蛋白A1参与细胞凋亡的调控。 目的：针对兔膜联蛋白A1基因构建短发夹RNA慢病毒载体,并检测其对成骨细胞的沉默效率。 方法：针对兔膜联蛋白A1基因设计RNA干扰靶序列,合成Oligo DNA,退火形成双链DNA,与BamHI和EcoRI 双酶切后的pGLV/H1/GFP载体连接成pGLV-shANXA1,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。pGLV-shANXA1和pGLV/helper-1、pGLV/helper-2、pGLV/helper-3共转染293FT细胞包装产生慢病毒颗粒LV-shANXA1,并测定其滴度,随后将LV-shANXA1感染兔成骨细胞。 结果与结论：经PCR和测序证实构建片段大小及DNA序列与目标序列一致,shANXA1片段完全正确插入慢病毒载体pGLV/H1/GFP中。包装浓缩慢病毒颗粒LV-shANXA1的滴度为3.8×108 TU/L。经嘌呤霉素筛选后,感染复数为50时,LV-shANXA1对成骨细胞感染效率为80%;感染复数为100时,感染效率为95%。Real-time PCR 和Western blot检测显示,LV-shANXA1-901对膜联蛋白A1基因的沉默效率最高,在感染复数为50时,沉默效率可达71.2%。表明实验成功构建的兔膜联蛋白A1基因短发夹RNA慢病毒载体能够在细胞水平有效沉默靶基因。     

膜联蛋白A3与肿瘤相关性研究进展

膜联蛋白A3(annexin A3,Anxa3)在肿瘤的发生、发展、转移及抗药性等过程中发挥着重要的作用。近年来研究表明,Anxa3的异常表达与卵巢癌、肺腺癌、前列腺癌、肝癌、肾癌、结直肠癌、胰腺癌有密切关系;Anxa3异常表达有望成为肿瘤的发生、浸润、转移及病人预后的重要标志物。     

胃癌中TGF-β1、HIF-1α、VEGF的表达及临床意义

目的观察转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在胃癌组织及癌旁组织中的表达,探讨其与胃癌恶性生物学行为间的相关性。方法采用免疫组化SABC法检测手术切除胃癌组织中的TGF-β1、HIF-1α及VEGF的表达,分析其与胃癌患者的病理分级、组织学类型、淋巴结转移及TNM分期等临床病理参数的关系,探讨其作为判断胃癌患者预后指标的可能性。结果 TGF-β1、HIF-1α、VEGF在150例胃癌组织中,阳性率分别为62.7%、59.3%和63.3%;在癌旁组织中阳性率分别为10.7%、22%和13.3%,三者在胃癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.05)。TGF-β1的表达与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移及TNM分期密切相关(P<0.05);TGF-β1阳性的患者比其阴性的患者更易发生淋巴结和远处转移;HIF-1α、VEGF的表达与肿瘤的组织学类型、淋巴结转移及TNM分期有相关性(P<0.05)。结论胃癌组织中TGF-β1、HIF-1α、VEGF表达与肿瘤的生物学特征密切相关,可能是肿瘤侵袭转移的机制之一;检测TGF-β1、HIF-1α、VEGF对预测肿瘤侵袭转移及判断预后具有一定价值。     

膜联蛋白A家族成员在乳腺癌中作用机制的研究进展

膜联蛋白(ANX)家族广泛存在于细胞膜、细胞质或细胞外基质中。作为肿瘤的关键调控分子,膜联蛋白A(ANX A)家族可以通过影响细胞膜和细胞骨架的形成及参与信号通路,促进或抑制乳腺癌细胞的侵袭与转移。在细胞凋亡方面,ANX A家族通过参与促凋亡蛋白质和细胞周期独立激酶(CDKs)及相关通路的调节,在乳腺癌细胞凋亡中发挥作用。此外,ANX A家族还可以促进大量药物的治疗耐药。例如,ANX A1通过诱导上皮细胞-间质转化增强三阴性乳腺癌耐药,ANX A4通过形成ANX A4-Fhit复合物产生耐药性,含有ANX A6的外泌体的分泌以YAP1依赖的方式促进乳腺癌细胞的紫杉醇耐药。ANX A家族可能成为乳腺癌治疗的新靶点。     

胃癌组织中LRG1与E-cadherin的表达及临床意义

目的探讨胃癌中富含亮氨酸的α-2-糖蛋白1(leucine-richα2 glycoprotein 1,LRG1)的表达及临床意义。方法采用免疫组化法检测74例胃癌组织及相应癌旁组织中LRG1、E-cadherin的表达;探讨胃癌组织及癌旁组织中LRG1、E-cadherin的表达,并分析LRG1表达与E-cadherin表达的相关性及与临床病理特征、患者生存时间的关系。结果LRG1蛋白在胃癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P0.01),E-cadherin蛋白在胃癌组织中的表达明显低于癌旁组织(P0.01),LRG1表达与E-cadherin表达呈负相关。进一步分析显示,胃癌中LRG1的表达与肿瘤分化程度及淋巴结转移相关(P0.01),与患者年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期等无关(P0.05)。Kaplan-Meier单因素统计分析结果显示LRG1高表达组患者术后生存时间明显低于LRG1低表达组(P0.05)。结论 LRG1在胃癌组织中高表达,其表达水平与胃癌分化程度及淋巴结转移相关,其高表达抑制Ecadherin的表达,促进肿瘤细胞迁移,且有助于判断肿瘤的恶性生物学行为及预后评估。     

AnnexinA7及其共相关蛋白研究进展

膜联蛋白(annexin A7)是一种能促进膜融合的钙依赖性磷脂结合蛋白,近来研究表明其在多种肿瘤的发生、发展、转归中起重要作用。Annexin A7可与多种蛋白(如半乳糖凝集素3,抗药蛋白,凋亡相关基因2,死亡结构域沉默子等)相互作用。Annexin A7及其共相关蛋白的研究有助于阐明Annexin A7在肿瘤细胞发生、发展机制中的作用,有利于发现新的肿瘤治疗靶点。     

胃癌组织中SIRT1、Noxa的表达及其临床意义

目的探讨SIRT1与Noxa在胃癌组织中的表达水平相关性,分析两者表达与患者临床病理学特征及预后的关系。方法应用实时荧光定量PCR法和免疫组化EnVision两步法检测106例胃癌及癌周正常组织中SIRT1及Noxa的mRNA和蛋白表达,分析两者相关性及其与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、浸润深度及转移等临床病理特征的关系。结果实时荧光定量PCR结果显示,胃癌组织中SIRT1 mRNA表达较高,Noxa mRNA表达较低。免疫组化结果显示,SIRT1在胃癌组织中的阳性率高于正常胃组织(79.2%vs 41.5%),Noxa在胃癌组织中的阳性率低于正常胃组织(43.3%vs 71.6%),差异有统计学意义(P0.05)。SIRT1表达与肿瘤分化程度、肿瘤直径、浸润深度、淋巴结和远隔器官转移情况相关(P均0.05),Noxa表达与肿瘤直径、浸润深度、淋巴结和远隔器官转移情况相关(P均0.05)。胃癌组织中SIRT1与Noxa表达呈负相关。SIRT1阳性、Noxa阴性的患者2年生存率较低,其是预后较差的独立危险因素。结论 SIRT1和Noxa在胃癌的发生、发展中可能具有协同作用,联合检测两者的表达有助于判断患者的临床表现和预后。     

膜联蛋白A5过表达对宫颈癌细胞系SiHa细胞凋亡的影响

目的:构建膜联蛋白A5的重组表达质粒,转染宫颈癌细胞使其过表达后检测宫颈癌细胞的凋亡情况.方法:PcR法从pJLA503膜联蛋白A5中获得膜联蛋白A5基因;磷酸钙共沉淀法转染宫颈癌细胞系SiHa细胞,免疫印迹法和免疫组织化学ABC法检测了细胞中膜联蛋白A5蛋白的过表达;对过表达膜联蛋白A5的细胞采用免疫荧光法检测其细胞凋亡情况.结果:重组质粒中膜联蛋白A5基因序列正确;转染重组质粒后的SiHa细胞过表达膜联蛋白A5蛋白;过表达膜联蛋白A5的SiHa细胞凋亡显著增多.结论:膜联蛋白A5可促进宫颈癌细胞系SiHa细胞的凋亡.     

TGF-β1在卵巢癌患者血浆和肿瘤组织中的表达及临床意义

探讨TGF-β1在卵巢癌患者血浆和肿瘤组织中的表达及临床意义。采用ELISA方法定量检测79例卵巢癌、31例卵巢良性肿瘤和24例健康对照者的血浆TGF-β1浓度,79例卵巢癌患者中有31例收集到术后血浆,ELISA法检测TGF-β1在卵巢癌患者术前术后表达水平的差异;免疫组化法定性检测41例卵巢癌组织、20例卵巢交界性肿瘤组织和20例卵巢良性肿瘤组织中TGF-β1的表达情况,分析TGF-β1表达水平与临床病理指标间的关系。结果显示,与卵巢良性肿瘤及健康对照组相比,卵巢癌患者血浆中TGF-β1表达水平明显增高(P0.01);III/IV期卵巢癌患者血浆TGF-β1的表达水平明显高于I/II期患者(P0.05);与术前相比,术后卵巢癌患者血浆TGF-β1表达水平下降(P0.01);卵巢癌患者肿瘤组织中TGF-β1表达水平明显高于卵巢交界肿瘤组织及卵巢良性肿瘤组织,差异有统计学意义(P0.001),且肿瘤组织TGF-β1的表达水平与肿瘤临床分期及淋巴结转移有关(P0.05);而TGF-β1在卵巢交界肿瘤组织及卵巢良性肿瘤组织表达水平无差异(P0.05)。综上所述,TGF-β1在卵巢癌患者血浆及肿瘤组织中均呈高表达,且与肿瘤临床分期及淋巴结转移密切相关,提示卵巢癌患者机体及癌灶局部呈现免疫抑制状态。TGF-β1可为卵巢癌的临床诊断、病情监测提供重要的参考价值。     

肝细胞肝癌中转录辅抑制因子CtBP1与其靶基因E-cadherin的表达

目的探讨转录辅抑制因子CtBP1在肝细胞肝癌中的表达状况及对其靶基因E-cadherin表达的影响。方法采用免疫组化方法检测肝细胞肝癌组织芯片中CtBP1及E-cadherin的表达。结果 CtBP1在肝细胞肝癌组织中表达阳性率为79.69%(204/256),其表达与分化程度相关(P=0.049);E-cadherin在肝细胞肝癌组织表达率为20.31%(52/256),与肿瘤分级相关(P=0.027);CtBP1在肝细胞肝癌组织中表达与E-cadherin呈负相关(P=0.036)。结论在肝细胞肝癌组织中,CtBP1和E-cadherin可以作为肿瘤诊断的分子标记;同时转录辅抑制因子CtBP1对其靶基因E-cadherin的表达有抑制作用。     

OY-TES-1在肿瘤组织中的表达及生物信息学分析

目的:了解OY-TES-1mRNA及其蛋白在肿瘤组织中的表达情况,初步探讨其结构与功能.方法:利用定量PCR和免疫组织化学技术检测肿瘤组织中OY-TES-1的表达,结合生物信息学技术分析其结构和功能.结果:肿瘤与瘤旁组织中目的基因mRNA的表达频率分别为61.95%和59.57%,其中肝细胞癌72.97%、脑膜瘤55.56%、胶质瘤57.50%,肿瘤组织中该基因mRNA的表达量明显高于瘤旁组织.目的蛋白在胃癌的阳性率为25.00%,肝细胞癌40.00%,结肠癌46.67%,而瘤旁组织与肺癌均为阴性反应.生物信息学分析提示目的蛋白富含螺旋结构,具有一个信号肽、多种修饰位点及sp32结构域,存在较多T、 B细胞表位且主要位于目的蛋白的羧基端.结论:OY-TES-1mRNA及其蛋白均可在肿瘤组织中表达,生物信息学分析结果提示该蛋白功能的多样性.