HL60/VCR白血病细胞多药耐药机制的初步探讨

目的探讨白血病细胞产生耐药的机制,以及VEGF在白血病细胞产生耐药过程中的作用。方法采用反复暴露并逐渐提高诱导药物浓度的方法建立HL60/VCR多药耐药细胞系,MTT法检测细胞的耐药性及交叉耐药性;RT-PCR检测诱导前后mdr1、MRP、TopoⅡα、GSTπ和VEGF mRNA的表达情况。结果诱导后的HL60/VCR耐药细胞不仅对VCR高度耐药,对其他类化疗药物亦具有交叉耐药性;与HL60相比,HL60/VCR的mdr1、TopoⅡα和VEGF mRNA的表达明显增强,GSTπmRNA的表达无明显变化;HL60和HL60/VCR均不表达MRP mRNA。结论耐药基因mdr1和TopoⅡα以及VEGF共同参与HL60/VCR多药耐药的形成。     

异搏定逆转HL—60／ADR细胞株耐药机理的初步探讨

深入了解异搏定对鬼臼乙叉甙耐药逆转作用的机制。方法：以多药耐药相关蛋白高表达的耐阿霉素人急性髓性白血病细胞株ＨＬ－６０／ＡＤＲ为研究对象,应用ＤＮＡ电泳、流式细胞仪观测细胞凋亡现象,用Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔｔｉｎｇ方法测定凋亡相关蛋白ＢＣＬ－２表达水平。     

急性白血病Pgp、Bcl—2、CD34表达与临床多药耐药

目的：检测Pgp、Bcl-2及CD34抗原在急性白血病细胞的表达，探讨其与多药耐药及预后的关系。方法：用直接免疫荧光法，检测41例急性白血病患骨髓白血病细胞的Pgp、Bcl-2、CD34抗原表达。结果：Pgp、Bcl-2、CD34在急性白血病临床耐药组表达明显升高，且Pgp、Bcl-2阳性表达CR率降低，与阴性表达比较，判别显；而CD34阳性表达与CR率无明显相关性；Pgp、Bcl-2单独或联合检测均可用于评价多药耐药；Pgp与CD34、Pgp与Bcl-2有相关性，而Bcl-2与CD34无相关性。结论：Pgp、Bcl-2、CD34高表达均与多药耐药的发生相关，而Pgp、Bcl-2联合高表达可作为急性白血病多药耐药及预后不良的指标，更具有临床意义。     

Bcl—2、Bcl—XL、Bax、Bak在急性白血病细胞中的表达及其临床意义

目的观察凋亡调节蛋白的表达与急性白血病化疗效果的关系。方法用免疫细胞化学法对36例急 性白血病患者(初治敏感组11例,复发难治组25例)白血病细胞中凋亡词节蛋白Bcl-2、Bcl-XL、Bax、Bak的表达 进行分析。结果抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-XL的平均阳性细胞率复发难治组为(41.68±14.39)％和(35.96± 9.95)％,初治敏感组为(15.64±8.51)％和(12.91±8.63)％,两组间差异有显著性意义(P＜0.01)。促凋亡蛋 白Bax、Bak的平均阳性细胞率复发难治组为(25.28±15.49)％和(15.53±10.64)％,初治敏感组为(21.55± 12.58)％和(13.23±8.36)％,两组间差异无显著性意义(P＞0.05)。Bcl-2、Bcl-XL、Bax、Bck对36例急性白血病 缓解率影响的Logistic回归分析表明,Bcl-XL是其中降低急性白血病缓解率的最重要因素。结论Bc1-2、Bcl-xL 在急性白血病MDR发生中起调节作用,并且Bcl-XL可能比Bcl-2更为更要。     

阿霉素在人白血病敏感细胞株HL-60和多药耐药细胞株HL-60／ADR的分布和积聚变化

目的 了解化疗药物阿霉素(ADR)在人白血病敏感细胞株HL-60和多药耐药细胞株HL-60／ADR细胞内的分布和积聚变化及其与耐药的关系。方法 应用共聚焦激光扫描显微镜和流式细胞术研究ADR在细胞内的分布和积聚，以及维拉帕米、BSO、布雷菲尔得菌素、氯喹对细胞内ADR异常分布的影响。以3种特异染色线粒体、高尔基体和溶酶体的荧光物质Rhodaminel23、NBD-ceramide和中性红作为探针，鉴定分隔储留ADR的细胞器。结果 与ADR在HL-60细胞核、胞浆均匀分布不同，在HL60／ADR，ADR呈点棘状分布于细胞浆，核内ADR荧光很少。这种分布方式与NBD-ceramide荧光在该细胞的分布极为相似。BSO和布雷菲尔得菌素可逆转ADR在HL-60／ADR的异常分布和积聚，而维拉帕米和氯喹无此作用。结论 ADR在耐药细胞的异常分布和积聚与肿瘤细胞耐药的形成有关。     

肝细胞癌组织凋亡基因Bcl—XL,Bcl—2的表达及意义

目的 探讨凋亡抑制基因Ｂｃｌ－ＸＬ、Ｂｃｌ－２在肝细胞癌组织中的表达及相互关系。方法 用免疫组化ＳＰ法检测５７例肝细胞癌组织中Ｂｃｌ－ＸＬ、Ｂｃｌ－２的表达。结果 ５７例肝细胞癌组织中的Ｂｃｌ－ＸＬ、Ｂｃｌ－２阳性表达分别为３６例（６３．２％）、２３例（４０．４％）。两者表达阳性率差异有显著性（Ｐ〈０．０５）。Ｂｃｌ－２－ＸＬ、Ｂｃｌ－２各组表达水平及组织学分级表达差异无显著性。低分化组１７例中,Ｂｃｌ－ＸＬ、Ｂｃｌ－２阳性表达分别为１０例（５５．８％）、４例（２３．５％）。两组表达阳性率差异有显著性（Ｐ〈０．０５）。５７例肝细胞癌中,Ｂｃｌ－ＸＬ、Ｂｃｌ－２同时阳性１７例,同时阴性１５例,单独阳性各为１９例、６例。结论 凋亡抑制基因Ｂｃｌ－ＸＬ、Ｂｃｌ－２在肝细胞癌组织中既可同时发挥抑制细胞凋亡作用,也可单独     

雄黄对HL—60／ADR作用的初步研究

目的：探讨中药雄黄对HL－60／ADR耐药细胞在抑制生长、逆转耐药、诱导凋亡方面的作用和影响。方法：（１）MTT比色法观察对细胞的换制;（2）用免疫组化法检测细胞Pgp的变化;（3）流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：（1）雄黄抑制HL－60／ADR耐药细胞的生长,药物浓度与HL－60／ADR细胞生长抑制率之间呈指数关系;（2）随着药物浓度的增加和时间的推移,HL－60／ADR细胞中MDR基因的表达产物Pgp阳性率逐步降低;（3）随着药物浓度的增加,HL－60／ADR细胞凋亡率增加。结论：雄黄可抑制HL－60／ADR 细胞生长,逆转其耐药,促进细胞凋亡,与剂量呈依赖性,其机制可能与Pgp表达下降有关。     

凝集素活性在HL—60细胞内的表达

应用小鼠脾淋巴细胞凝集试验，测定了ＨＬ－６０细胞提取液内源性凝集素活性，结果表明，ＨＬ－６０细胞含有很高的内源性凝集素活性。经胰蛋白酶和半乳糖抑制试验表明，该内源性凝集素为一类糖结合蛋白，具有半乳糖特性，进一步试验结果表明，这种含内源性凝集素活性的ＨＬ－６０细胞提取液，能刺激淋巴细胞增殖，转化。这一作用可能与肿瘤免疫有关。     

HSP90β在ATRA诱导的白血病细胞株HL60耐药中的作用研究

目的:通过检测HSP90β基因在白血病细胞株HL60及其耐药株HL60/ATRA中的表达差异,探讨HSP90β基因在ATRA相关多药耐药性发生中的作用.方法:采用ATRA浓度递增及间歇诱导法建立HL60/ATRA耐药细胞株;用MTT法和流式细胞检测技术(Flow cytometry,FCM),分别检测HL60和HL60/ATRA细胞的增殖及细胞周期;RT-PCR、Western blot法检测HSP90 β基因在HL60及HL60/ATRA细胞中的表达;通过MTT法检测HL60和HL60/ATRA细胞对常用化疗药物(VCR、CTX、VP-16、ADM)敏感性.结果:成功构建了白血病细胞耐药株HL60/ATRA;在mRNA和蛋白两个水平,均检测到HSP90β在耐药株HL60/ATRA中的表达较HL60明显增高(P＜0.01);药敏结果显示HL60/ATRA细胞对VCR、CTX、ADM、VP-16的耐药倍数分别为10.74、5.51、4.01、3.24.结论:ATRA能够诱导HL60细胞中HSP90 β高表达,经ATRA诱导后的HL60/ATRA细胞对抗癌药物的敏感性显著降低、耐药性增高,这提示HSP90 β可能在ATRA相关多药耐药性的发生过程中发挥着重要作用.     

干扰素—α与蟾蜍灵、槲皮素、砷剂联合逆转HL—60／ADR耐药的初步研究

目的：探讨用干扰素－α（TNF-α、IFN）分别与蟾蜍灵（Bufalin,Buf),槲皮素（Quercetin,Que)、砷剂（Arsenic Trioxide,As2O3)联合或单独孵育耐药细胞株HL－60／ADR对ADR有无增敏及逆转耐药作用。方法：用MTT法检测IFN与Buf,Que,As2O3孵育后增敏作用。结果：IFN,Buf单独应用无增敏作用,但两者联合有增敏作用。Que,As2O3单独应用有增敏作用,但分别与IFN联用后增敏作用不增强。结论：Que,As2O3能增加HL－60／ADR对阿霉素的敏感性、逆转其耐药,IFN与Buf联合亦能增敏及逆转耐药。     

阿霉素纳米粒对人白血病多药耐药细胞株HL-60／ADR多药耐药性的逆转作用

目的 研究阿霉素纳米粒对人白血病多药耐药细胞系HL-60／ADR耐药性的逆转作用。方法 采用MTT法测定药物的体外杀伤作用，应用流式细胞术测定细胞内药物浓度。结果 阿霉素纳米粒和阿霉素对HL-60细胞细胞毒作用相似，HL-60／ADR对阿霉素纳米粒较阿霉素敏感2．63倍，细胞内阿霉素浓度显著增加可能是关键因素。结论 阿霉素纳米粒通过增加耐药细胞内阿霉素浓度有效逆转多药耐药。     

凋亡调节蛋白的表达与K562／VCR多药耐药性的关系

目的探讨K562/VCR细胞中凋亡调节蛋白表达的变化与其多药耐药性(MDR)的关系。方法通过免疫细胞化学法和免疫印迹法(westernblot)对凋亡调节蛋白Bcl-2、Bcl-X     

白血病细胞株HL60和HL60/DNR的多药耐药性

目的研究白血病细胞的多药耐药性（ＭＤＲ）。方法用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ＨＬ６０，ＨＬ６０／ＤＮＲＭＤＲ１的ｍＲＮＡ表达，用流式细胞仪分析单抗ＵＩＣ２标记的细胞株Ｐ糖蛋白（Ｐｇｐ）的表达，了解它们摄取和滞留荧光素Ｒ１２３的功能。结果ＨＬ６０／ＤＮＲ在ｍＲＮＡ水平高度表达ＭＤＲＩ，在蛋白质水平高度表达Ｐｇｐ，功能性试验中细胞内Ｒ１２３最终浓度ＨＬ６０为ＨＬ６０／ＤＮＲ的５０倍。结论ＨＬ６０／ＤＮＲ为典型的表达ＭＤＲ１的细胞株     

蟾酥注射液逆转HL60/阿霉素细胞多药耐药的机制

目的探讨蟾酥注射液(CHS)对人类白细胞多药耐药细胞系HL60/阿霉素细胞的逆转作用机制。方法 MTT法测定CHS预作用后HL60/阿霉素细胞对阿霉素的敏感性;流式细胞术考察CHS对HL60/阿霉素细胞周期的影响;免疫组化考察CHS对HL60/阿霉素细胞NF-κB、MRP、GST-π、iNOS蛋白表达的调节作用。结果 CHS可将阿霉素对HL60/阿霉素细胞的IC50值由34.1971μmol/L降至17.4393μmol/L,逆转倍数为1.9609倍;FCM显示CHS作用后HL60/阿霉素阻滞于G0/G1期、G2/M期,降低进入S期比例,并出现凋亡峰;免疫组化结果显示,CHS能下调HL60/阿霉素细胞中MRP、GST-π表达,上调NF-κB、iNOS的表达。结论蟾蜍注射液逆转HL60/阿霉素细胞的多药耐药性可能是通过下调MRP、GST-π的表达,上调NF-κB、iNOS的表达,促进HL60/阿霉素细胞凋亡,从而增加HL60/阿霉素细胞对药物的敏感性。     

多药耐药相关蛋白-2在白血病耐药细胞株K562/A02的表达

目的:研究多药耐药相关蛋白-2（MRP-2）与白血病细胞耐药的关系,并探讨其在白血病多药耐药中的意义。方法：应用RT-PCR方法检测白血病细胞株K562与耐药细胞株K562/A02中MRP-2 mRNA的差异表达,然后将MRP-2反义及正义寡核苷酸片段分别用脂质体转染至耐药细胞株K562/A02,采用MTT法、流式细胞术及RT-PCR法检测转染后细胞内阿霉素的荧光强度、耐药指数及MRP-2 mRNA的表达情况。结果：耐药细胞株K562/A02中MRP-2 mRNA表达水平明显高于白血病细胞株K562（P<0.05）。MRP-2反义寡核苷酸片段转染后耐药细胞株K562/A02细胞内的阿霉素浓度升高,耐药指数较未转染细胞明显降低（P<0.05）;转染后耐药细胞株K562/A02细胞MRP-2 mRNA表达水平较未转染细胞下降了67.5%,两者比较差异具有显著性（P<0.05）。结论：MRP-2的高表达导致白血病耐药细胞内化疗药物浓度降低,可能是其导致白血病多药耐药的机制之一。     

羟基磷灰石微晶体对人白血病HL—60细胞株的生长抑制作用

采用体外细胞培养和ＭＴＴ测定等方法，研究羟基磷灰石微晶体（ＨＡＰ－Ｓｏｌ）对人白血病细胞株（ＨＬ－６０）的生长抑制作用。将不同浓度的ＨＡＰ－Ｓｏｌ（０．００１－０．０２ｍｇ／ｍｌ）分别加入ＨＬ－６０细胞（１０＾４／孔），置３７℃，５％ＣＯ２培养４８小时。结果显示：①不同浓度ＨＡＰ－Ｓｏｌ对ＨＬ－６０细胞集落形成可产生影响：在倒置显微镜下，可见全部测定孔细胞集落形成均较对照孔低下，且呈剂量依赖关系，     

铁树叶提取液对白血病细胞株K562、HL—60增殖抑制作用的实验研究

目的观察铁树叶在白血病细胞株K562及HL-60中的作用.方法细胞培养液中分别加入铁树叶(实验组1和实验组2)及P.B.S(对照组1和对照组2),观察集落细胞数、死活细胞计数及细胞蛋白质含量.实验组和对照组比较,死活细胞计数和细胞蛋白含量P值均＜0.05,集落细胞计数实验组抑制率50%.结果实验组和对照组比较,死活细胞计数和细胞蛋白含量P值均＜0.05,集落细胞计数实验组抑制率＞50%.结论铁树叶提取液对白血病细胞株K562及HL-60细胞的增殖有明显抑制作用.