磁式RT—PCR检测肾综合征出血热病毒方法的建立及应用

针对汉坦病毒中国代表株（Ａ９、Ｒ２２）Ｍ基因片段设计分型引物（Ⅰ、Ⅱ型），采用改进的异太氰酸胍酚一步法（胍酚法）提取汉坦病毒ＲＮＡ，套式ＲＴ－ＰＣＲ检测稀释病毒上清模拟病人血清和２０例急性期血清样本。结果：能检测到模拟血清中少至几个ＰＦＵ病毒ＲＮＡ，敏感性５－１０ｆｇ。检测过程可在５ｈ内完成。２０例急性患者血清检测阳性率为１００％，并能进行临床分型。扩增产物经打点杂交产其特异性。而正常及非ＨＦＲＳ     

HFRS患者血清中HV-RNA的PCR检测及扩增产物的测序分析

目的 探讨ＲＴ－ＰＣＲ用于ＨＦＲＳ临床标本中病毒基因检测的若干影响因素及西安地区近年主要浒汉坦病毒（ＨＶ）毒株的分子流行病学特点。方法 设计合成了两套分别互补于ＨＶ Ｍ基因片段和Ｓ基因片段的引物,建立了检测ＨＦＲＳ患临床血清标本中ＨＶ基因的ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲ方法,并对扩增的部分ＨＶ靶基因进行了测序分析和比较,结果 １１９份ＨＦＲＳ患轿清（经临床和ＩＦＡ确诊）经用Ｓ基因片段引物的ＲＴ－ｎ     

RT－PCR，ELISA和IFA技术应用于汉坦病毒检测的比较

作者报道反转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ），双单克隆抗体（ＭｃＡｂ）夹心法酶联免疫吸附试验（ＳａｎｄｗｉｃｈＥＬＩＳＡ）和间接免疫荧光技术（ＩＦＡ）三种方法对汉坦病毒７６～１１８株细胞培养物中病毒ＲＮＡ及抗原的检测情况，并比较了三种方法的敏感性．结果表明：ＲＴ－ＰＣＲ敏感性最高，种毒后２４ｈ内即可检出病毒ＲＮＡ；其次为夹心法ＥＬＩＳＡ，种毒后４８ｈ可检出冻融细胞上清内的病毒抗原；ＩＦＡ检出感染细胞内病毒抗原的最短时间为７２ｈ．作者对设计引物与提高ＲＴ－ＰＣＲ的敏感性进行了讨论。     

应用巢氏PCR-RFLP直接检测结核病临床标本中结核分支杆菌链霉素耐药基因型

目的：了解结核分支杆菌链霉素耐药基因突变情况,建立快速检测耐药突变株的方法。方法：通过ＰＣＲ－ＳＳＣＰ、ＰＣＲ－ＲＦＬＰ和巢氏ＰＣＲ－ＲＦＬＰ分析４０株结核分支杆菌临床分离株和１５例临床标本的ｒｐｓＬ基因突变的部位和性质。结果：１０株药物敏感株的ｒｐｓＬ双链泳动正常、并可被ＭｂｏⅡ消化;３０株耐ＳＭ分离株中,２５株双链泳动异常,２４株不被消化;１５例临床标本中,常规ＰＣＲ扩增７例ｒｐｓＬ阳性,巢氏ＰＣＲ１５例均阳性,４例ｒｐｓＬ双链泳动异常、并不被ＭｂｏⅡ消化。结论：通过常规ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＰＣＲ－ＲＦＬＰ可快速检测结核分支杆菌耐ＳＭ分离株４３位密码子点突变,而通过巢氏ＰＣＲ－ＲＦＬＰ可直接检测大多数临床标本中结核分支杆菌ＳＭ耐药基因型。     

反转录—聚合酶链反应在呼吸道合胞病毒感染检测的应用

为呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）感染的临床诊断寻求敏感，特异的检测方法，采用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增毒培养液和急性呼吸道感染患者鼻咽分泌物中的ＲＳＶ基因，并应用地高辛标记ｃＤＮＡ探针对扩增产物进行鉴定。结果成功地提取了ＲＳＶｍＲＮＡ，反转录合成ｃＤＮＡ，经扩增得到４７１ｂｐ左右ｃＤＮＡ区带。流感病毒Ｂ，副流感病毒２型，腺病毒７对照无扩增带，ＲＳＶ培养液１０倍连续稀释至１：１０００，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增仍可见４     

RT—PCR,ELISA和IFA技术应用于汉坦病毒检测的比较

作报道反转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ），双单克隆抗体（ＭｃＡｂ）夹心法酶联免疫吸附试验（Ｓａｎｄｗｉｃｈ ＥＬＩＳＡ）和间接免疫荧光技术（ＩＦＡ）三种方法对汉坦病毒７６￣１１８株细胞培养物中病毒ＲＮＡ及抗原的检测情况，并比较了三种方法的敏感性。结果表明：ＲＴ－ＰＣＲ敏感性最高，种毒后２４ｈ内即可检出病毒ＲＮＡ；其次为夹心法ＥＬＩＳＡ，种毒后４８ｈ可检出冻融细胞上清内的病毒抗原；ＩＦＡ检出感染     

应用巢氏PCR—RFLP直接检测结核病临床标本中结核分支杆菌链霉？…

目的：了解结核分支杆菌链霉素耐药基因突变情况,建立快速检测耐药突变株的方法。方法：通过ＰＣＲ－ＳＳＣＰ、ＰＣＲ－ＲＦＬＰ和巢氏ＰＣＲ－ＲＦＬＰ分析４０株结核分支杆菌临床分离株和１５例临床标本的ｒｐｓＬ基因突变的部位和性质。结果：１０株药物敏感株的ｒｐｓＬ双链泳动正常、并可被ＭｂｏⅡ消化;３０株耐ＳＭ分离株中,２５株双链泳动异常,２４株不被消失;１５例临床标本中,常规ＰＣＲ扩增７例ｒｐｓＬ阳性,巢氏     

聚合酶链反应检测汉坦病毒感染的实验研究

目的 早期诊断汉坦病毒感染。方法 根据国际标准株（７６－１１８,３９）Ｍ基因Ｇ１区设计两对公有引物和一条探针,按异硫酸氰胍－酚一步法提取汉坦病毒ＲＮＡ,采用ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲ检测病毒细胞培养上清原液及稀释液、１６份对照组血清、４０份ＨＦＲＳ急性期（１～５天）血清标本中的汉坦病毒ＲＡＮ,所有扩增产物采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ或Ｄｏｔ ｂｌｏｔ证实其特异性。结果 汉坦病毒细胞培养液和４０份     

肠道病毒RNA RT-PCR检测在病毒性心肌炎诊断中的应用

目的 探讨ＲＴ－ＰＣＲ方法在肠道病毒感染诊断中的应用。方法 根据肠道病毒５’非编码区和ＶＰ２基因区共同序列设计一对引物,建立了检测各型肠道病毒的ＲＴ－ＰＣＲ方法。用该方法扩增已知病毒,并用于临床标本检测。结果 所检测１１种已知病毒中,只对肠道病毒的９个型别扩增,１８６例心肌炎患者血清标本中,５２例（２７．９５％）阳性,１５例脑炎患者脑脊液标本中,４例（２６．６７％）,阳性。结论 该ＲＴ－ＰＣＲ方法     

应用RT-PCR快速检测病毒性心肌炎患者血清中CVB-RNA

目的：探讨ＲＴ－ＰＣＲ在病毒性心肌炎中的诊断价值。方法：选用柯萨奇Ｂ组病毒（ＣＶＢ）保守区５′－非编码区的组特异性引物,对４２例临床拟诊为病毒性心肌炎的患者血清行ＲＴ－ＰＣＲ,以检测ＣＶＢ－ＲＮＡ,同时采用间接ＥＬＩＳＡ检测血清中ＣＶＢ－ＩｇＭ。结果：心肌炎患者血清中ＣＶＢ－ＲＮＡ的检出率为６６７％（２８／４２）,而ＩｇＭ的检出率为５２４％（２２／４２）。结论：ＲＴ－ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ都是特异、敏感的诊断方法,并且ＲＴ－ＰＣＲ比ＥＬＩＳＡ敏感（Ｐ＜００５）