聚合酶链反应检测汉坦病毒感染的实验研究

目的 早期诊断汉坦病毒感染。方法 根据国际标准株（７６－１１８,３９）Ｍ基因Ｇ１区设计两对公有引物和一条探针,按异硫酸氰胍－酚一步法提取汉坦病毒ＲＮＡ,采用ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲ检测病毒细胞培养上清原液及稀释液、１６份对照组血清、４０份ＨＦＲＳ急性期（１～５天）血清标本中的汉坦病毒ＲＡＮ,所有扩增产物采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ或Ｄｏｔ ｂｌｏｔ证实其特异性。结果 汉坦病毒细胞培养液和４０份     

肾综合征出血热患者血清样本中汉坦病毒RNA检测及其临床意义

目的 观察病毒血症在病程各期的变化。方法 根据汉坦病毒血清Ⅰ型７６－１１８株及血清Ⅱ型８０－３９株Ｍ基因Ｇ１区设计两对公有引物及一条探针,应用ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ方法对５７例９６份肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）患者血清中ＨＶ－ＲＮＡ检测,所有ＰＣＲ产物用ＤＯＴ－Ｂｌｏｔ证实。结果 ９６份样本中６８份阳性,阳性率７８．８％;在病程第１、２、３周,ＨＶ－ＲＮＡ检测率分别为９４．７％、４７．５％、２５％     

汉坦病毒逆转录与PCR单管法研究及初步应用

聚合酶链反应(PCR)是汉坦病毒特异、敏感、快速的基因检测方法,已逐步应用于临床,对流行性出血热的早期诊断意义较大.但在应用过程中,也逐步暴露出许多不完善之处,诸如容易污染、操作流程繁琐等.国内外许多学者都在积极从各个环节进行方法的优化和改进.我们尝试着将逆转录与半套式PCR第一次扩增在单管中进行,并用于临床标本检测,现报告如下:     

聚合酶链反应技术对汉坦病毒检测分型与中西医结合治疗的研究

为探讨ＨＦＲＳ的病毒检测和分型及其治疗。分别应用ＲＴ－ＰＣＲ法及ＥＬＩＳＡ法检测９５例ＨＦＲＳ病人血清中的ＨＦＲＳＶ基因及ＳＩＬ－２Ｒ的含量。结果显示：ＨＦＲＳＶ基因检出率为３５．７９％,越早期阳性率越高,以汉坦型为主,并与血凝抑制试验检测结果相符。ＳＩＬ－２Ｒ的含量在发病中皆明显升高,其程度随病期进展而改变,与病型的轻重呈正比。１６８例患者分别应用强力宁注射液、干扰素与基础液体治疗,结果表明强力     

肾综合征出血热患者血清样本中汉坦病毒RNA检测及其临床意义

目的观察病毒血症在病程各期的变化。方法根据汉坦病毒血清Ⅰ型76-118株及血清Ⅱ型80-39株M基因G1区设计两对公有引物及一条探针,应用RT-nestedPCR方法对57例96份肾综合征出血热(HFRS)患者血清中HV-RNA检测,所有PCR产物用DOT-Blot证实。结果96份样本中68份阳性,阳性率70.8%;在病程第1、2、3周,HV-RNA检测率分别为94.7%、47.5%、25%,P<0.05;重型病人持续2周HV?RNA阳性检测率100%,而轻、中型分别为12.5%及42.8%,P<0.05。结论在HFRS病程中,病毒血症是一个急性过程,与发热期相平行,病毒血症持续时间与病情轻重密切相关。     

聚合酶链反应技术用于汉坦病毒的基因分型

应用反转录ＰＣＲ技术对国内外分离的１８株汉坦病毒基因进行了检测，结果１０株血清Ⅰ型病毒仅能用Ⅰ型引物扩增，８株血清Ⅱ型引物扩增，与既往空斑减少中和试验的分型结果完全一致。     

逆转录聚合酶链反应检测流感病毒的临床应用

流感病毒（Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓ）是小儿呼吸道感染的重要病原之一。由于流感病毒能经常不断地发生基因变异和抗原漂移来逃避人体免疫系统的监视和清除,并使本来有效的流感病毒疫苗很快失效,从而不断地在人群中造成暴发流行。因此,快速诊断对疫情监测和及时治...     

HFRS患者血清中HV-RNA的PCR检测及扩增产物的测序分析

目的 探讨ＲＴ－ＰＣＲ用于ＨＦＲＳ临床标本中病毒基因检测的若干影响因素及西安地区近年主要浒汉坦病毒（ＨＶ）毒株的分子流行病学特点。方法 设计合成了两套分别互补于ＨＶ Ｍ基因片段和Ｓ基因片段的引物,建立了检测ＨＦＲＳ患临床血清标本中ＨＶ基因的ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲ方法,并对扩增的部分ＨＶ靶基因进行了测序分析和比较,结果 １１９份ＨＦＲＳ患轿清（经临床和ＩＦＡ确诊）经用Ｓ基因片段引物的ＲＴ－ｎ     

聚合酶链反应检测HGV RNA方法的建立及应用

了解我国不同人群中庚型肝炎病毒感染的状况。方法；以ＮＢ５区序列分析为基础设计引物，建立了聚合酶链反应方法，并对我国几个地区，不同疾病状况的２６８例患者进行庚型肝炎病毒核酸的检测。结果；有输血史的健康人群，ＨＢＶ和ＨＣＶ感染者及慢性非乙非丙型肝炎患者的ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ ＲＮＡ阳性率均高于自然人群，分别为１３．３％，１８．４％，１９．８％，８．９％，其中有明显血液暴露史者的检出率达２０．１％。     

聚合酶链反应技术对汉坦病毒检测分型与中西医结合治疗的研究

为探讨HFRS的病毒检测和分型及其治疗,分别应用RT-PCR法及ELISA法检测95例HFRS病人血清中的HFRSV基因及SIL-2R的含量。结果显示:HFRSV基因检出率为35.79％,越早期阳性率越高,以汉坦型为主,并与血凝抑制试验检测结果相符。SIL-2R的含量在发病过程中皆明显升高,其程度随病期进展而改变,与病型的轻重呈正比。168例患者分别应用强力宁注射液、干扰素与基础液体治疗,结果表明强力宁组疗效优于后两组,干扰素组与基础液体组无差别。     

PCR-SSCP法分析汉坦病毒在乳鼠中的基因变异

目的：研究汉坦病毒在感染乳鼠体内有无基因变异．方法：用陈株病毒感染Ｖｅｒｏ－Ｅ６细胞并继之感染３ｄ龄乳鼠，提取病毒ＲＮＡ并反转录成ｃＤＮＡ，以ＰＣＲ分别从感染细胞和乳鼠中克隆出病毒的部分Ｇ２编码区序列，继而用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对之进行单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析．结果：从感染细胞和乳鼠中克隆出的此位置和大小完全相同的ｃＤＮＡ片段单链电泳构像明显不同，从感染乳鼠中克隆的基因片段单链电泳速率明显快于从感染细胞中克隆的相应基因片段．结论：汉坦病毒的基因序列可因寄生宿主的不同而发生变异．     

应用PCR和RT-PCR检测猪内源性逆转录病毒及其意义

目的 观察猪内源性逆转录病毒（Porcine endogenous retrovirus,PERV)在中国实验小型猪的感染情况。方法 针对PREV gag区的序列，选用特异性引物，采用PCR方法检测猪肝脏、皮肤前病毒序列；以及RT－PCR方法检测血清中PERV－RNA序列。结果 该法在猪肝脏组织中可检测出PERV前病毒序列；此外，在猪血清标本亦检测出病毒序列，而其它2份HBV、HCV阳性血清及2份其它动物血清（大鼠、兔）检测结果均为阴性，说明该方法特异性较高。结论 中国实验小型猪均携带该病毒，并可以释放到血清中；采用该法具有特异、简便的特点，为进一步研究PERV感染及生物安全性奠定了基础。     

丁型肝炎病毒RNA巢式逆转录PCR检测

为了提高丁型肝炎病毒的实验室诊断水平，建立一个高敏感性和特异性的丁型肝炎病毒的检测方法。根据ＧＥＮＢＡＮＫ中ＨＤＶ的核酸序列设计出巢式引物，采用逆转录巢式ＰＣＲ方法对４０例肝炎患者进行检测。结果：２０例丁型肝炎病毒抗原阳性的ＨＤＶＲＮＡ均为阳性，１０例丁型肝炎病毒抗体阳性中ＨＤＶＲＮＡ阳性６例，１０例单纯ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和抗ＨＢｃ阳性的均未检出ＨＤＶＲＮＡ。结论：巢式逆转录ＰＣＲ可以作为丁型肝炎病毒临床检测的一种方法     

套式聚合酶链反应扩增尿素酶A基因检测幽门螺杆菌

应用互补于幽门螺杆菌(HP)尿素酶A基因片段的两对引物进行套式聚合酶链反应(N-PCR),外引物的扩增片段为552bp,内引物扩增片段为310bp,用该方法检测1株HP标准菌株(N-CTC14126)和20个HP临床分离株均阳性,而其他12种肠道菌均为阴性,特异性100％,敏感性可检测到0.1fg细菌DNA的水平,优于目前国外的报道。取胃粘膜活检标本30例,用细菌培养、尿素酶试验、组织学染色作为参照方法检测,20例为阳性,10例阴性,N-PCR检测结果与之完全一致。     

巢式多聚酶链反应快速检测胎儿性别

为建立一种非侵入性的对Ｘ性连锁遗传性疾病胎儿的早期产前性别鉴定方法,我们采用了巢式ＰＣＲ方法来扩增孕妇外周血中男性胎儿的Ｙ染色体特异序列,并与新生儿出生性别相对照。４４例孕妇中２２例分娩男性婴儿．其中１９例扩增出Ｙ特异片段,阳性检出率为８６．４％（１９／２２）．其余２２例分娩女性婴儿,其中无一例出现Ｙ特异扩增带,结果提示用巢式ＰＣＲ方法可快速判断胎儿性别,使临床上无伤性产前检查Ｘ性连锁遗传性疾病的胎儿性别成为可能。     

巢式RT-PCR检测外周血中前列腺特异膜抗原mRNA

目的：应用巢式逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）检测外周血中前列腺特异膜抗原mRNA（PSM－mRNA)并探讨其临床意义。方法：取40例不同分期前列腺癌患者及对照组30例（15例良性前列腺增生患者，15例健康青年男性）周围静脉血各10ml，用巢式RT－PCR检测PSM－mRNA，并培养LNCaP细胞进行阳性对照。结果：共有24例前列腺癌血标本检测出PSM－mRNA(60.0%)，前列腺增生及健康对照组中无1例阳性，19例伴有远处骨转移的前列腺癌患者中16例检测到PSM-mRNA(84.2%)，未发现远处转移的21例中8例阳性（38．1％）。在10ml正常血液中加入10个LNCaP细胞，可检出PSM－mRNA。结论：PSM－mRNA可作为前列腺癌的辅助诊断指标，PSM－mRNA的检出率与前列腺癌分期（ABCD）、转移与否、血清PSA水平有相关性。     

新型隐球菌聚合酶链反应的检测方法

目的：从基因角度为新型隐球菌性脑膜炎的快速诊断提供一种新方法．方法：应用聚合酶链反应技术检测和鉴定脑脊液中的新型隐球菌特异性基因．结果：对引物的特异性试验证明具有较高的特异；对引物的敏感性试验可扩增出１０个菌细胞；用墨汁复染、分离培养、ＰＣＲ技术，对１５例脑膜炎患者的脑脊液同时进行检测，结果分别为：６６．６％、８６．６％、９３．３％．结论：以新型隐球菌特异性基因片段进行体外扩增，对新型隐球菌性脑膜炎的早期诊断具有重要的临床意义．     

Detection and Identification of Enteroviruses RNA by Using Polymerase Chain Reaction

Theenteroviruses(EV)areamongthemostcommonandimportantviralpathogensofhumansll'2].Atleast70serotypeswhichinfecthumanshavebeenidentified,includingthepolioviruses(PV),coxsackievirusesgroupAandB(CVAandCVB),andechoviruses(EchoV).Sinceitsinceptionmorethan40yearsago,EVisolationincellculturehasbeenthemainstayofenteroviraldiagnosis.ReportedmeanisolationtimeforEVfromcerebrospinalfluid(CSF)rangedfrom3.7to8.2days.However,asmanyas25%to35%oftheEVserotypes,particularlytheCVAgroup,donotgrowincellcu…