ndr2基因在肺腺癌细胞GLC-82中的诱导表达

目的 构建蜕皮素诱导的抑癌基因ndr2哺乳动物真核表达载体（pIND-ndr2)，转染肺腺癌细胞GLC－82，观察ndr2基因表达，为进一步研究ndr2的生物学功能打下基础。方法 以RT－PCR方法确定正常人肺组织和肺腺癌GLC－82细胞ndr2的表达高低。PCR方法扩增ndr2，以BamHI EcoRI双酶切连接入pUC19载体中，测序正确后，插入到蜕皮素诱导的真核表达载体pIND中。连有ndr2基因的载体（pIND-ndr2)用指质体方法转染到培养的肺腺癌细胞GLC－82中。经G418和zeocin双抗生素筛选后，挑取单克隆进行培养，用蜕皮素诱导ndr2表达，用RT－PCR，western印迹和免疫组织化学方法验证获得表达的细胞株。结果 PCR的方法扩增获得大小约1200bp的片段，连接入预先插入HA－tag的pUC19载体的ndr2基因经HindⅢ EcoRI酶切后，构建到真核表达载体pIND中，酶切鉴定后证明连接片段正确。通过双载体转染和双抗生素筛选后，培养的细胞经诱导后检测到实验组ndr2的高表达，而对照组和未诱导的实验组ndr2表达均较低。结论 ndr2基因成功转染培养的肺腺癌GLC－82细胞，建立了ndr2的可诱导表达的细胞系。     

p53和mdm2基因

衰老是不可抗拒的自然规律，癌症却并非必然发生，两者似有它们各自独立的发生发展机制；但是衰老和癌症两者毕竟还是有联系的，如随着年龄的增长，患癌症的几率会大大增加。一项流行病学调查显示；年龄的增长使p53表达显著减少，癌症发病率显著升高，其中机制是因为p53调节的DNA损伤，增加了基因的不稳定性所致。有史以来，延缓衰老和防治癌症一直是人类健康的重大课题和难题，也是几个世纪以来，生命科学中最具挑战性、意义巨大、较难突破的课题之一。4年前，美国科学家培育出一种不带抑癌基因的实验鼠，并且发现这种实验鼠很容易得癌症，甚至幼年鼠也不能幸免于难。另一组实验资料显示：在对实验鼠的抑癌基因进行修正，使其过度活跃，结果这些实验鼠及其后代很少出现癌症，但它们的衰老加速，寿命却大大缩短。上述发现提示：抑癌基因不仅与癌症发生有关，而且与衰老进程有关。     

放射对人肺腺癌GLC及GLC／IL—2细胞在软琼脂集落形成的影响

通过软琼脂集落形成率观察＾６０Ｃｏγ射线照射后２种细胞集落存活娄量与９个放射剂量的效应结果。结果表明，ＧＬＣ／ＩＬ－２对放射较为敏感，集落形成率较差，大部分细胞分裂１－３次后而死亡。因此，提示为确保人ＩＬ－２基因转染后的瘤细胞作为瘤苗再次输入给病后无恶性反应，不至于在体现人恶性生长，给予少量的放射很有必要。     

mdm2和p53基因在大肠癌中的相关性分析

目的研究mdm2和p53基因表达与大肠癌发生及胃癌生物学行为的关系。方法采用免疫组织化学技术（sP法）对经病理证实的43例大肠癌和13例正常对照组结肠标本分别进行mdm2、p53基因蛋白检测,并进行对比分析。结果大肠癌的发生与mdm2高表达、p53低表达有关,mdm2与大肠癌局部发展、浸润、转移有明显相关性,p53起负调控作用。结论mdm2、p53基因异常表达与大肠癌的发生、淋巴转移有明显相关性。mdm2、p53联合检测对评估大肠癌预后有重要的临床价值。     

人肺腺癌细胞系GLC-82中p21WAF1和p53基因的过表达

目的 探讨p21^WAF1和p53基因过表达对人肺腺癌细胞生长和细胞凋亡的影响。方法 用带有p21cDNA的真核表达载体pCEP和带有p53的腺病毒表达载体pAdCMV,分别通过基因转染和腺病毒感染,使其在人肺腺癌细胞系(GLC—82)中过表达;通过流式细胞仪、透射电镜和原位末端分析(TUNEL)观察细胞的生长和凋亡情况。结果 p21过表达的细胞系G1期细胞增加,细胞生长抑制,克隆形成率下降,电镜下未见特征性凋亡小体,原位细胞凋亡分析未见凋亡信号;p53腺病毒感染的肿瘤细胞增殖明显抑制并出现死亡,原值细胞凋亡检测到凋亡信号。结论 P21和p53基因的过表达能够抑制人肺腺癌细胞的生长,其中p53能够诱发细胞凋亡,因此这两种基因在肿瘤基因治疗上有着广泛的应用前景。     

mdm2与p53在骨骼肌恶性肿瘤中的改变及其临床意义

目的：探讨ｍｄｍ２与Ｐ５３基因在骨骼肌恶性肿瘤中的改变及其临床意义。方法采用ＲＮＡ打点杂交技术分析２０例骨骼肌恶性肿瘤中的ｍｄｍ２与Ｐ５３基因的表达水平,采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术分析Ｐ５３基因的突变情况,结合随访结果,分析其临床意义,结果①ＲＮＡ打点杂交结果：ｍｄｍ２基因在１０例恶性肿瘤标本中呈高表达,在８例肿瘤标本与２０例瘤旁标本中呈低表达,ｍｄｍ２的表达在骨骼肌恶性肿瘤中显示高于瘤旁组织（Ｐ     

mdm2、p53在云南个旧肺癌及其它地区肺癌中的比较研究(摘要)

目的：研究mdm2、p53在个旧地区矿工肺癌及其它地区非矿工肺癌中的表达，探讨两者及其相互作用与个旧矿工肺癌的关系。方法：收集个旧矿工肺癌44例，其它地区非矿工肺癌42例，正常肺组织15例，应用免疫组化方法及分子原位杂交方法检则mdm2基因的表达，并将其中15例个旧矿工肺癌组织的前期p53检测结果与此次MDM2蛋白的免疫组化结果进行比较分析。     

肺腺癌高、低转移细胞系Anip973、AGZY83-a中野生型p53基因过表达研究

目的探讨野生型ｐ５３基因及其表达产物ｐ５３蛋白在恶性肿瘤基因治疗中的作用。方法应用腺病毒为载体将野生型ｐ５３基因转入高、低转移的肺癌细胞系Ａｎｉｐ９７３、ＡＧＺＹ８３－ａ,并且对各组转染细胞进行生长曲线、原位末端标记、Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ等技术检测分析。结果野生型ｐ５３蛋白的过表达对上述肺腺癌细胞系均呈现出较强的生长抑制作用,野生型ｐ５３蛋白的过表达对高转移肺癌细胞系Ａｎｉｐ９７３的抑制作用明显高于低转移细胞系ＡＧＺＹ８３－ａ。结论外源性野生型ｐ５３基因的过表达,可以有效抑制上述肿瘤细胞的增殖,同时对高转移肺腺癌细胞系的抑制作用更加显著。     

P53,c—erbB—2癌基因产物在胆囊腺癌中的表达

用Ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因蛋白产物，通过免疫组化Ｓ－Ｐ法检测４２例胆囊腺癌、８例胆囊腺瘤性息肉。结果显示：胆囊腺癌中Ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２的阳性率分别为４７．６％，４５．２％。胆囊腺瘤及癌旁正常粘生率均为０％。胆囊低分化腺癌中阳性表达率均明显高于高分化腺癌（Ｐ〈０．０５）。     

p53、mdm2蛋白在睾丸肿瘤中的表达及意义

目的　探讨 p53、mdm2蛋白在睾丸肿瘤中的表达及其临床价值。 方法　应用免疫组化技术法检测 42例睾丸肿瘤 p53、mdm2蛋白阳性表达水平。结果　发现 p53、mdm2蛋白表达阳性率分别为 45 .2 % (1 9/ 4 2 )和 61 .9% (2 6/ 4 2 ) ,其阳性率与肿瘤病理分级和临床分期呈显著正相关 (P <0 .0 1 ) ,p53蛋白阳性表达与mdm2蛋白阳性表达呈高度正相关 (P <0 .0 1 )。结论　p53、mdm2蛋白检测有助于判断睾丸肿瘤的恶性程度及预测患者的预后。     

肺鳞癌、肺腺癌Ki-ras和p53基因序列分析

目的 :研究肺鳞癌、腺癌与Ki-ras基因外显子 1,2及p5 3基因外显子 7,8突变谱并观察肺鳞癌、腺癌预后同Ki-ras和 p5 3基因突变的关系。方法 :用PCR和测序方法分析 33例肺鳞癌和 2 7例肺腺癌Ki-ras基因外显子 1,2和 p5 3基因外显子 7,8错义突变。并追踪观察突变者和非突变者的二年存活率。结果 :肺鳞癌中发现 5例 (15 .16 % )Ki-ras基因突变和 12例 (36 .37% )p5 3基因突变 ;肺腺癌中发现 2例 (7.4 1% )Ki-ras基因突变和 7例 (2 5 .93% ) p5 3基因突变 ,两型肺癌间Ki-ras和p5 3基因突变阳性率差异均无统计学意义 (P>0 .0 5 ) ;肺鳞癌、腺癌中 p5 3基因突变总阳性率为 31.6 7% ,Ki-ras基因突变总阳性率仅 11.6 7% ,p5 3基因突变率高于Ki-ras基因突变率 (P <0 .0 5 )。p5 3基因突变谱与一般报道相似。Ki-ras基因突变情况与一般报道有所不同 ,未发现一般文献报道较多的第 12位等密码子突变 ,发现有第 6位密码子纯合性突变和第 31位和第 79位密码子杂合性突变。预后追踪显示 :无突变的病例 2年生存率为 4 0 % ,存在突变的病例 2年生存率仅 12 %。结论 :肺鳞癌、腺癌的Ki-ras和 p5 3基因突变谱较广 ,肺鳞癌和腺癌的预后均与这两个基因突变有关。     

p14^ARF、mdm2、p53在鼻咽癌中的表达及其临床意义

目的研究p14^ARF、mdm2、p53在鼻咽癌组织中的表达与临床分期、淋巴结转移、预后等因素的关系。方法应用免疫化法检测58例鼻咽癌组织和20例慢性鼻咽炎症组织中p14^ARF、mdm2、p53表达情况。结果（1）p14^ARF、mdm2、p53在鼻咽癌组织和慢性鼻咽炎症组织中的阳性表达率分别为31．0％、41．4％、65．5％和100％、0、0,差异有统计学意义（P〈0．05）;（2）Spearman相关分析表明,鼻咽癌组织中p14^ARF、mdm2、p53三者表达之间均无相关性;（3）p14^ARF、mdm2、p53表达与鼻咽癌淋巴结转移、分期、性别、年龄无关;（4）Kaplan—Meier分析方法显示鼻咽癌组织中mdm2表达与生存时间相关（P〈0．05）;p14^ARF、p53表达与生存时间无关。结论p14^ARF、mdm2、p53可能参与了鼻咽癌的发生;mdm2表达可作为预测鼻咽癌放疗预后的一项参考指标。     

p73基因在肺腺癌组织中的表达

目的：p73基因在肺腺癌与癌旁正常组织中表达情况及突变的研究。方法：采用竞争性定量RT－PCR和PCR－SSCP方法检测62例肺腺癌及其癌旁非癌组织中p73基因突变情况。结果：（1）通过定量PCR分析，肺腺癌组织中p73的表达量与正常对照组表达量存在显差异（P＜0．01）。（2）在21例中高分化标本中检出9例呈中高表达，在41例低分化标本中检出32例呈中高表达，两之间存在显差异（P＜0．01）；（3）p73基因表达程度在29例Ⅰ-Ⅱ期标本中检出14例呈中高表达，33例Ⅲ-Ⅳ期标本中检出18例呈中高表达，两之间无显差异（P＞0．05）。（4）PCR－SSCP未检测出基因突变。结论：p73基因mRNA的表达可能与肺腺癌发生，发展和分化程度有关，与临床分期无关。     

肺腺癌高,低转移细胞系Anip973,AGZY83—a中野生 …

目的 探讨野生型ｐ５３基因及其表达产物ｐ５３蛋白在恶生肿瘤基因治疗中的作用。方法 应用腺病毒为载体将野生型ｐ５３基因转入高、低转移的肺癌细胞系Ａｎｉｐ９７３、ＡＧＺＹ８３－ａ，并且对各组转染细胞进行生长曲线、原位ｅｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ等技术检测分析。结果 野生型ｐ５３蛋白的过表达对上述肺腺癌细胞系均呈现出较强的生长抑制作用，野生型ｐ５３蛋白的过表达对高转移肺癌细胞系Ａｎｉｐ９７３的抑制作用明显     

p53抑癌基因与口腔癌变

基因在发生突变、缺失或灭活时可引起细胞恶性转化而导致肿瘤的发生，这类基因称为抑癌基因(tunlor suppressor gene)。任何基因，凡其产物直接或间接地抑制细胞增生、癌变或转移等都可被认为是一种肿瘤抑制基因。p53抑癌基因是细胞抑癌基因中研究最广泛和深入的基因之一。经过多年的研究，对p53基因的结构已有明确的认识，对p53基因的功能研究也取得重要的进展。     

bcl—2及p53癌基因在子宫内膜癌中的表达及意义

目的 探讨 子宫内膜癌及其癌前病变ｂｃｌ－２及ｐ５３基因的表达及与凋亡的关系。方法 利用微波免疫组化ＡＢＣ方法检测肿瘤组织内ｂｃｌ－２蛋白及ｐ５３蛋白的分布情况。结果 正常和单纯性增生子宫内膜ｂｃｌ－２蛋白和ｐ５３蛋白均为阴性反应。     

肺腺癌bcl-2及p53表达意义探讨

目的：探讨肺腺癌原发灶及其淋巴结转移灶中凋亡相关基因bcl-2及p53的表达意义,为进行肺腺癌的分子生物学研究提供理论依据。方法：采用免疫组化S-P法,用抗bcl-2单克隆抗体及抗p53单克隆抗体分别对63例发生淋巴结转移的肺腺癌组织及其相应淋巴结进行标记分析,且按性别、年龄、分化程度、TNM分期等进行分组比较。结果：bcl-2与肺腺癌淋巴结转移、患者性别、年龄、分化程度无关（P〉0．05）,TNM分期Ⅰ～Ⅱ期肺腺癌bcl-2阳性率大于Ⅲ～Ⅳ期肺腺癌,差异具有显著性（P〈0．05）;p53与肺腺癌淋巴结转移、患者性别、年龄无关（P〉0．05）,与分化程度有关（P〈0．05）,TNM分期肺腺癌p53阳性率Ⅲ～Ⅳ期高于Ⅰ～Ⅱ期肺腺癌,差异具有显著性（P〈0．05）。结论：bcl-2及p53在肺腺癌发生发展过程中可能起一定作用．可作为评估肺腺癌预后的生物学指标。     

肝癌组织中p53基因及其下游基因的研究进展

80年代Knudson首先提出肿瘤抑癌基因的概念 ,与此同时 ,p5 3被发现。大量研究表明 :p5 3基因在许多肿瘤中都有很高的突变率 ,是迄今为止发现的突变率最高、涉及范围最广的抑癌基因之一。抗癌基因主要有以下功能[1,2 ] :诱导终末分化 ;维持基因稳定 ;触发衰老 ,诱导细胞程序性死亡 ;调节细胞生长 ;抑制蛋白酶活性 ;改变DNA甲基化酶活性 ;调节组织蛋白酶活性 ;调节血管形成 ;促进细胞间联系。癌基因受内外多种因子等的激活 ,使细胞生长分化失控 ,增强了细胞瘤性转化的可能性 ,当抗癌基因失活时 ,进一步加剧了细胞瘤性转化 ,最终导致了细胞癌…     

肺肿瘤癌基因与抑癌基因表达的研究

目的探讨癌基因与抑癌基因的表达与肺癌发生、发展的关系。方法对61例肺肿瘤标本,用免疫组化方法同时检测癌基因Bcl-2、抑癌基因视网膜母细胞瘤(Rb)、p53、p16。结果Rb与p16表达、p53与Bcl-2表达呈负相关(P<0．05),Rb与p53表达、p16与Bcl-2表达呈正相关(P<0．05)。结论肺癌的发生与发展是癌基因激活、抑癌基因失活及细胞凋亡调控基因异常等多基因损害的积累过程和协同作用使各细胞增殖调控途径失控,最终导致肺癌发生并使肺癌发展。