不同浓度芦荟多糖对外周血单个核细胞和HepG2 生长的影响

目的:为芦荟多糖的抗肿瘤作用研究提供实验用细胞模犁,筛选最佳干预药物及其浓度.方法:采用人淋巴细胞分离液,Ficoll Hypaque密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC),Alamar Blue法观察芦荟多糖对PBMc生长的影响,四唑氮蓝(Methylthiazolctrazolium,MTT)法观察芦荟多糖对HepG2生长的影响.结果:密度梯度离心法成功分离PBMC.芦荟多糖AP11在200μg·mL-1时已较明显促进和维持PBMc的生长(P<0.01).各不同浓度芦荟多糖对HepG2的生长无显著影响(P>0.05).结论:芦荟多糖AP11(200μg·mL-1)可作为开展抗肿瘤作用机理的理想实验用药.     

芦荟多糖干预的PBMC对肝癌细胞生长的影响

目的:研究芦荟多糖(AP)干预的外周血单个核细胞(PBMC)对体外肝癌细胞(HepG2)生长的影响,从免疫学角度探讨AP的抗肿瘤机理。方法:Alamar Blue法检测AP及其联合Anti-CD3mAb与rhIL-2对体外培养的PBMC生长的影响;以各组干预后的PBMC为效应细胞,HepG2为靶细胞,MTT法观察各组效应细胞对靶细胞杀伤活性的影响;流式细胞术PI单染法检测各组效应细胞对靶细胞细胞周期及凋亡率的影响。结果:AP及其联合Anti-CD3mAb与rhIL-2可显著促进PBMC的增殖;各组效应细胞可显著抑制靶细胞的生长,降低S期比例,提高G1比例和凋亡率。其中AP联合Anti-CD3mAb与rhIL-2干预的PBMC对靶细胞生长的抑制率可达46.30%,靶细胞S期比例,G1期比例和凋亡率明分别为24.37%,75.63%和30.37%。结论:AP及其联合Anti-CD3mAb与rhIL-2可提高PBMC抑制肝癌细胞生长的活性。     

白花蛇舌草多糖对人宫颈癌Hela细胞和人肝癌Bel-7402细胞生长的影响

目的研究白花蛇舌草多糖对体外培养的人肝癌Bel-7402细胞和人宫颈癌Hela细胞生长的影响。方法常规法体外培养人肝癌Bel-7402细胞和人宫颈癌Hela细胞,设空白对照组、阳性对照组和供试药物组(大、中、小剂量),分别采用MTT法和流式细胞仪检测白花蛇舌草多糖对人宫颈癌Hela细胞和人肝癌Bel-7402细胞的生长抑制率和凋亡率;采用倒置显微镜观察细胞形态学变化。结果白花蛇舌草多糖可抑制人肝癌Bel-7402细胞和人宫颈癌Hela细胞的生长,并促进其凋亡,其作用效果与其浓度正相关,与空白对照组相比具均有显著性差异(P﹤0.01)。结论本研究结果提示,白花蛇舌草多糖具有较好的抗肿瘤活性。     

天花粉多糖促人外周血单个核细胞增殖和对人乳腺癌细胞人子宫颈癌细胞的生长抑制作用

目的 研究天花粉多糖促人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)增殖作用和对人乳腺癌细胞(MCF-7细胞)、人子宫颈癌细胞(HeLa细胞)生长抑制作用.方法 分离健康人PBMC,采用MTT法测定不同浓度天花粉多糖(0.5,1.0,2.0,5.0,10.0,20.0 mmol·L-1)作用于人PBMC 72h后,对人PBMC的促增殖作用;不同浓度天花粉多糖对MCF-7细胞和HeLa细胞生长的抑制作用.结果 2.0～20.0 mmol·L-1天花粉多糖具有显著促进人PBMC增殖(P<0.05),且呈一定的浓度依赖关系;5.0,10.0,20.0 mmol·L-1天花粉多糖均能有效抑制MCF-7细胞和HeLa细胞生长(P<0.05).结论 天花粉多糖具有促人PBMC的增殖作用,并可显著抑制肿瘤细胞MCF-7和HeLa细胞的生长.     

黄芪多糖对过氧化氢诱导大鼠视网膜神经节细胞氧化损伤的保护作用

目的观察黄芪多糖(APS)对过氧化氢诱导的大鼠视网膜神经节细胞(RGC)氧化损伤的保护作用。方法将RGC-5细胞分为正常对照组、阴性对照组、过氧化氢损伤组、黄芪多糖干预组。正常对照组不做处理,阴性对照组和过氧化氢损伤组分别加入1 000μg/ml的黄芪多糖和100μmol/L的过氧化氢,黄芪多糖干预组加入不同浓度(1 000μg/ml、500μg/ml、250μg/ml)黄芪多糖后加入100μmol/L的过氧化氢。用倒置相差显微镜观察各组细胞形态变化;MTT法检测细胞活性;DAPI染色观察细胞核形态学变化;实时细胞电子传感器(RT-CES)分析系统记录细胞生长状态。结果倒置相差显微镜下正常RGC-5细胞呈扁平梭形,边缘清晰,有较短突起,过氧化氢损伤组细胞皱缩,细胞密度减低,轴突缩短,其他各组细胞形态未见明显改变。MTT:各浓度黄芪多糖干预组的细胞活性均较过氧化氢损伤组升高,差异具有统计学意义(P0.01)。DAPI染色:过氧化氢处理后RGC-5细胞核可见染色质凝聚,边缘化;黄芪多糖干预后仅少量细胞出现染色质凝聚现象。RT-CES:与正常对照组相比,过氧化氢损伤组细胞生长受到抑制,其余各组细胞生长曲线基本正常。结论黄芪多糖可以抑制过氧化氢诱导的大鼠RGC凋亡,这为黄芪类药物治疗糖尿病视网膜病变提供了一定的实验基础。     

芦荟多糖与大黄素配伍对人舌鳞状癌细胞活力及VEGF表达的影响

目的:探讨芦荟多糖与大黄素不同配伍比例对SCC15人舌鳞状癌细胞的活力及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:体外培养SCC15口腔癌细胞,分为实验空白组、芦荟多糖组、大黄素组、芦荟多糖与大黄素配伍1∶1组、1∶2组、1∶3组、2∶1组、2∶3组、3∶1组9个不同的组别,观察SCC15的生长状态,免疫组化鉴定细胞,MTT法检测细胞活性,免疫印迹法检测VEGF蛋白的表达。结果:①MTT法检测细胞活性:与空白组比较,芦荟多糖单剂量组、大黄素单剂量组、各配伍组的细胞活性均显著降低(P 0. 05),且随大黄素比例的增加抑制作用而增强,其中以芦荟多糖与大黄素配伍1∶2组、2∶3组、1∶3组最为显著(P 0. 01);②VEGF蛋白的表达显示,空白组的VEGF蛋白表达较强,各给药组VEGF蛋白的表达均显著降低(P 0. 05),其中以配伍组1∶3最为明显。结论:芦荟多糖与大黄素配伍对体外培养的SCC15口腔癌细胞有显著抑制作用,且抑制作用随大黄素比例增加而增强(1∶3最佳),其机制可能与下调VEGF蛋白的表达有关。     

芦荟多糖的纯化工艺与体外抗肿瘤活性

目的:研究芦荟多糖的提取、纯化工艺及体外抗肿瘤活性,为芦荟的产业化开发提供实验依据。方法:采用水提醇沉,三氯乙酸法除蛋白,DEAE-52离子交换色谱分离。用Sephacryl S-400凝胶柱层析纯化并确定芦荟多糖的相对分子量,HPLC法检测纯度,GC法鉴别单糖组成及分子摩尔比。以MTT法观察其体外抗肿瘤活性等。结果:从中华芦荟(Aloe vera L.var. chinesis(Haw.)Berger.)凝胶冻干粉中提取分离得到纯多糖AVP,经HPLC检测为单一对称峰,相对分子量为86000,由甘露糖和葡萄糖组成,摩尔比为10.3∶1.0。AVP对人肝癌细胞(SMMC-7721)、人胃癌细胞(BGC-823)及人肺癌细胞(A549)的增殖均有抑制作用。结论:该法分离的芦荟多糖AVP纯度好,收率高达3.6%,可用于进一步的研究和开发,提高芦荟的资源利用率。     

白花蛇舌草对人肝癌Bel7402细胞凋亡的影响

目的从基因水平研究白花蛇舌草对体外培养的人肝癌Bel7402细胞诱导凋亡的作用及其可能的作用机制。方法采用人肝癌Bel7402细胞常规体外培养,随机设定空白对照组、5-氟尿嘧啶(5-Fu)阳性对照组、白花蛇舌草组。倒置显微镜直接观察细胞形态变化。HE染色法光镜下观察细胞形态改变,计算凋亡指数。采用MTT法检测白花蛇舌草对癌细胞的生长抑制作用。RT-PCR半定量法检测Bcl-xl、p53基因mRNA表达的变化。结果光镜下观察到白花蛇舌草组肿瘤细胞脱壁,有细胞出芽现象等凋亡形态改变;凋亡指数略低于5-Fu阳性对照组,但与空白对照组比较有显著差异(P<0.01);细胞抑制率略低于5-Fu阳性对照组,与空白对照组相比有显著差异(P<0.01);上调p53基因mRNA表达,降低Bcl-xl基因mRNA表达,与空白对照组比较均有显著差异。结论白花蛇舌草抑制人肝癌Bel7402细胞增长,诱导细胞凋亡,其分子机制可能与激活抑癌基因p53基因、抑制原癌基因Bcl-xl基因表达有关。     

中华芦荟多糖对辐射小鼠胸腺细胞凋亡及细胞周期的影响

目的研究芦荟多糖(AP)对受60Coγ射线辐射后小鼠胸腺细胞凋亡及细胞周期进程的影响.方法取小鼠辐射后不同时间点胸腺单细胞悬液,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期的改变,1.8%琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯形条带,透射电镜观察细胞超微结构的变化.结果辐射前30 min ip 50 mg/kg AP能显著降低6 Gy γ射线辐射后4 h、8 h和12 h小鼠胸腺细胞凋亡率,显著提高各时间点G0/G1期细胞所占比例,降低G2/M期细胞比例.能使DNA片段明显减少;显著改善细胞超微结构,明显减少凋亡小体数量.结论AP对辐射小鼠胸腺细胞的保护作用与改善细胞周期紊乱、抑制细胞凋亡有关.     

野西瓜多糖诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究

目的观察野西瓜多糖诱导人肺癌HepG2细胞凋亡作用。方法通过MTT法测定野西瓜多糖对HepG2细胞的细胞毒作用;倒置显微镜观察野西瓜多糖对HepG2细胞形态的影响;AO/EB双染,激光共聚焦扫描显微镜观察野西瓜多糖对HepG2细胞形态的影响;PI染色法,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果MTT结果显示野西瓜多糖对HepG2细胞有抑制作用,IC50为471.53mg/L;倒置显微镜、激光共聚焦扫描显微镜下观察细胞形态,表现为细胞皱缩、碎裂、甚至出现凋亡小体;流式细胞术检测到野西瓜高剂量组凋亡率为74.926%。结论野西瓜多糖具有诱导HepG2细胞凋亡的作用。     

扶正抗癌方对人肝癌细胞分化的影响

目的:寻找新的肿瘤细胞诱导分化剂,探讨扶正抗癌方对人肝癌细胞诱导分化作用及机制。方法:用扶正抗癌方灌胃,分离大鼠血清,作用于体外培养细胞。通过噻唑蓝法、双抗体放射免疫法和酶联免疫吸附法检测,观察扶正抗癌方药物血清对人肝癌细胞SMMC_(7721)分化的影响。结果:扶正抗癌方药物血清处理后,SMMC_(7721)细胞活力明显减弱,细胞内 cAMP 明显升高,细胞分泌白蛋白量增多,分泌甲脂蛋白减少。结论:扶正抗癌方对人肝癌细胞 SMMC_(7721)具有诱导分化作用。其机理可能与升高细胞内 cAMP 有关。     

姜黄素对Raji细胞体外抗癌作用的实验研究

目的研究姜黄素对Raji细胞体外抗癌作用及其机制,对比研究其对RaIi细胞和人单个核细胞的细胞毒性。方法用MTT法检测姜黄素对Raji细胞及人单个核细胞增殖的影响,Annexin—V／PI双标流式术、缺口末端标记法检测姜黄素对Raji细胞及人单个核细胞凋亡的影响,PI单标流式细胞术测定姜黄素对Raji细胞DNA含量分布的影响。结果(1)姜黄素对Raji细胞具有明显的增殖抑制作用。(2)姜黄素可以时间和剂量依赖性方式诱导Raji细胞凋亡。(3)姜黄素组Raji细胞周期发生变化,细胞周期被阻滞于G0／G1和G2／M期,S期比例减少。(4)姜黄素对人单个核细胞无明显抑制增殖和诱导凋亡作用。结论姜黄素能够调控Raji细胞的细胞周期并诱导其凋亡,从而抑制Raji细胞增殖;姜黄素对人单个核细胞无明显细胞毒作用,而选择性作用于肿瘤细胞。     

红花多糖对人PBMC增殖活性及NK、LAK细胞杀伤活性的影响

目的:探讨红花多糖(Safflower polysaccharide,SPS)体外对人外周血单个核细胞(PBMC)的增殖作用及对NK细胞、LAK细胞杀伤活性的影响。方法:采集健康成人外周血,常规分离PBMC,体外与不同浓度的SPS共同培养,用3H-TdR法检测PBMC的增殖活性;MTT法检测NK、LAK细胞的杀伤活性。结果:SPS对PBMC增殖有促进作用,其促增殖作用呈现量效依赖性,以1.25mg.mL-1和0.625mg.mL-1剂量组促增殖作用明显(P0.05);SPS对NK细胞与LAK细胞的杀伤活性都有明显的提升作用(P0.05)。结论:SPS可促进PBMC的增殖,增强NK细胞、LAK细胞的杀伤活性,增强免疫功能。     

人眼结膜上皮细胞的体外培养

目的探讨体外分离培养结膜上皮细胞的方法。方法用组织块培养法将人眼结膜上皮组织分别种植于培养皿及处理过的羊膜上,培养2周。观察结膜上皮细胞的生长特点。结果接种在培养皿的结膜上皮6天左右组织块之间可融合成膜状,细胞为单层上皮细胞。接种在羊膜上的结膜组织,生长较慢,2周左右组织块之间可互相连接,融合成膜状,细胞为复层上皮细胞。免疫组化鉴定结膜上皮细胞CK13染色阳性。结论组织块培养法是结膜上皮细胞培养的较好方法,种植在羊膜上可获得复层上皮细胞。     

Ginseng total saponin enhances the phagocytic capacity of canine peripheral blood phagocytes in vitro

The clinical and pharmacological activities of ginseng are known to modulate immune function, metabolic processes and neuro-endocrine system activities. Ginseng saponins are the principle active ingredients in the formation of immune stimulating complexes. The objective of this study was to evaluate the in vitro effect of ginseng total saponin (GTS) on the phagocytic capacity of canine peripheral blood phagocytes. GTS itself did not cause any direct effect on the phagocytic capacity of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and polymorphonuclear cells (PMN) but not peripheral blood monocytes. However, the phagocytic capacity of PMN and monocytes, but not PBMC, was enhanced by the culture supernatant from PBMC treated with GTS. The phagocytic capacity of PMN and monocytes was also increased by treatment with recombinant canine (rc) tumor necrosis factor (TNF)-alpha. The ability of the culture supernatant from GTS-treated PBMC to stimulate the phagocytic capacity of phagocytes was inhibited by addition of anti-rc TNF-alpha polyclonal antibody (pAb) prior to the culture. The amount of TNF-alpha in the culture supernatant from PBMC was shown to increase upon treatment of GTS as compared with that of vehicle-treated PBMC culture supernatant. These results suggest that GTS has an immunoenhancing effect on the phagocytic capacity of canine peripheral blood phagocytes, which is mainly mediated by TNF-alpha released from GTS-stimulated PBMC.     

沙苑子黄酮对人肝癌HepG2细胞的体外抑制作用

目的:观察沙苑子黄酮对人肝癌HepG2细胞的体外抑制作用。方法:采用MTT法观察沙苑子黄酮对人肝癌HepG2细胞的抑制作用,进一步观察沙苑子黄酮对HepG2细胞形态、超微结构、生长曲线以及集落形成的影响。结果:沙苑子黄酮可明显抑制HepG2肿瘤细胞的增殖和集落的形成,50μg/mL剂量组集落形成率为25.6(P<0.01),远低于对照组;光镜及透射电镜可以发现细胞形态有凋亡特征变化。结论:沙苑子黄酮体外对人肝癌HepG2细胞具有明显的抑制肿瘤细胞增殖的作用,其作用与诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

人骨髓间充质干细胞的分离、培养与鉴定

目的：探讨一种优化的骨髓问充质干细胞（Bonemarrow stromal stem cells,BMSCs）获取、分离、培养、鉴定的方法,为进一步骨组织工程实验研究奠定基础。方法：抽取健康自愿者骨髓,采用密度梯度离心法分离贴壁培养BMSCs,倒置显微镜观察细胞形态,结合流式细胞技术来间接鉴定BMSCs。结果：首次换液时间为5—6d,20d左右细胞逐渐汇集可以进行传代,获得纯化的人的BMSCs。结论：采用密度梯度离心法分离贴壁培养的方法能够分离纯化的人BMSCs,9代以前生长迅速,形态稳定,可传至11代,可以作为后续骨组织工程实验种子细胞。     

扶正祛邪中药复方对猴艾滋病模型实验研究

扶正被动邪中药复方“艾克冲剂“对猴SIV感染模型(SAIDS)治疗作用。方法：利用SIVmac病毒液静脉接种恒河猴造成猴艾滋病实验模型，流式细胞仪测定感染及治疗动物外周血CD4^ 细胞、CD8^ 细胞数及CD4^ /CD8^ 比值，并以MTT法观察T、B细胞对有丝分裂原诱导分化增殖反应。结果：艾克冲剂能提高CD4^ 细胞百分数及CD4^ /CD8^ 比值，并能促进T、B淋巴细胞增殖。结论：扶正被动邪中药艾克冲剂能够提高、改善SIVmac感染动物免疫功能。     

熊果酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖作用的实验研究

目的:评定熊果酸对肝癌细胞SMMC-7721的增殖作用,流式细胞术研究对肝癌细胞凋亡的影响。方法:将不同浓度的熊果酸分别与人肝癌细胞SMMC-7721共同培养24,72 h后,采用中性红染色法测定吸光度(A),评定熊果酸对肝癌细胞的增殖作用,流式细胞术研究其对肝癌细胞的凋亡。结果:熊果酸对SMMC-7721细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.05或P<0.01),呈时间-剂量依赖关系,24 h和72 h半数抑制浓度(IC50)分别为12.59,8.32μg·mL-1;对肝癌细胞凋亡率为14.07%,药物浓度与凋亡率呈正相关。结论:熊果酸对肝癌细胞SMMC-7721增殖有明显抑制作用,该抑制作用可能与诱导肝癌细胞凋亡有关。     

预知子、白花蛇舌草抑制肝癌细胞恶性增殖的研究

目的:在中医药常用治法方药中筛选最具抑制肝癌细胞恶性增殖的药物。方法:采用MTT法和细胞形态学检查,观察中药行气活血方、清热解毒方及其各组成药物乙醇提取物及联合细胞毒抗生素G418对肝癌细胞恶性增殖的抑制作用。结果:清热解毒方及各单味药物对肝癌细胞恶性增殖均具有不同程度的抑制作用,存在量效关系;其中5mg/ml白花蛇舌草对肝癌细胞的增殖抑制作用最强(P<0.05)。行气活血方及各单味药物对肝癌细胞恶性增殖也多具不同程度的抑制作用,存在量效关系;其中5mg/mL预知子的作用尤为突出,强于阳性对照G418 0.6 mg/mL(P<0.01)。2.5mg/mL预知子联合0.3 mg/mL G418用药,其对肝癌细胞恶性增殖的抑制作用接近0.6 mg/mL G418,提示有减量增效作用。无论是单独用药还是联合G418,预知子对肝癌细胞恶性增殖的抑制作用均显著于白花蛇舌草(P<0.01)。结论:预知子、白花蛇舌草是抑癌扶正行气活血方中抑制肝癌细胞恶性增殖的主要药物,其中预知子的作用最显著。预知子联合细胞毒抗生素,具有减少细胞毒抗生素用量且增效的作用。