前列腺素E2对CD4+CD25+调节性T细胞免疫功能影响的实验研究

目的 探讨前列腺素E2对CD4+CD25+调节性T细胞免疫功能的影响。 方法 分离正常BALB/c小鼠脾脏CD4+CD25+ Treg,利用固相包被抗CD3和加入可溶性CD28辅助活化,予以PGE2刺激。根据刺激剂量不同,分成对照组、A (7 μmol/L)、B (14 μmol/L)、C (28 μmol/L)组,观察PGE2对Treg的增殖、IL-10、IL-2分泌和Foxp3表达的影响。 结果 PGE2刺激12 h,3组细胞较对照组增殖反应差异均无统计学意义(P＞0.05);B、C组IL-2表达显著降低(P＜0.05),而Foxp3表达明显升高(P＜0.05);C组IL-10分泌升高(P＜0.05);刺激24 h,B、C组细胞增殖反应较对照组显著增强(P＜0.05);A、B、C组IL-2分泌均下降(P＜0.05),而Foxp3表达均升高(P＜0.05);C组IL-10分泌升高(P＜0.05);刺激72 h,3组增殖反应、IL-10以及Foxp3表达均显著升高(P＜0.05),而IL-2分泌下降(P＜0.05)。 结论 PGE2能直接增强CD4+CD25+ Treg的免疫抑制功能,从而可能进一步对效应T细胞免疫功能产生影响。      

多发性硬化患者外周血γδT细胞与CD_4~+CD_(25)~+Foxp3~+Treg细胞比例的变化

目的探讨多发性硬化(MS)患者外周血γδT细胞与CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例的变化。方法采集37例MS患者(MS组)及25例健康对照者(NC组)的外周静脉血,分离外周血单个核淋巴细胞,以流式细胞术检测γδT细胞及CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的比例。结果 MS组外周血γδT细胞比例较NC组显著升高,且活动性患者较非活动性患者进一步升高;MS组外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例较NC组显著降低,而活动性患者较非活动性患者进一步降低。MS组外周血γδT细胞与CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例呈显著负相关(P<0.05)。结论 MS患者外周血γδT细胞比例的升高可下调CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例,从而促进疾病的发生。     

吸入激素对哮喘患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞水平及Foxp3 mRNA表达的影响

目的观察支气管哮喘患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)、Foxp3 mRNA的水平及吸入糖皮质激素对其的影响。方法流式细胞仪检测非急性发作期哮喘患者吸入激素前、后和健康志愿者(正常对照组)外周血单个核细胞(PBMCs)中CD4+CD25+Treg的比例,RT-PCR检测Foxp3 mRNA表达变化,肺功能仪检测第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV1%pred)和呼气峰流量(PEF)。结果哮喘组治疗前CD4+CD25+Treg水平及Foxp3 mRNA的表达显著低于正常对照组(P<0.05),治疗后CD4+CD25+Treg水平及Foxp3 mRNA的表达较治疗前显著升高(P<0.05);哮喘组治疗前FEV1%pred、PEF显著低于正常对照组(P<0.05),治疗后FEV1%pred、PEF较治疗前显著增加(P<0.05)。结论哮喘患者外周血中具有免疫抑制活性的CD4+CD25+Treg数量减少,功能下降,参与了哮喘的发病过程;吸入激素可以上调哮喘患者外周血CD4+CD25+Treg及Foxp3 mRNA的水平,改善哮喘患者的肺功能。     

小鼠孕早期暴露量子点对妊娠结局和CD4+ CD25+ Treg细胞的影响

目的  探讨小鼠孕早期暴露硫化锌量子点（QDs）对妊娠结局和外周血CD4+ CD25+ Treg细胞的影响。方法  制备成年健康孕鼠并将其随机分为高剂量QDs组、低剂量QDs组和对照组,分别于妊娠第3～5天尾静脉注射0.50和0.05μmol/L QDs,以及生理盐水各100μl,于妊娠第15天观察妊娠结局,并采用流式细胞术分析孕鼠外周血CD4+ CD25+ Treg细胞比例。结果  QDs可引起流产、吸收胎和死胎等不良妊娠结局,高剂量QDs使胚胎平均着床数、胎鼠均重及胎盘均重低于对照组,差异有统计学意义（P <0.05）;且QDs暴露孕鼠外周血CD4+ CD25+ Treg细胞的比例低于对照组,差异有统计学意义（P <0.05）。结论  小鼠孕早期暴露QDs具有胚胎毒性,且其毒性机制可能与降低外周血中CD4+ CD25+ Treg细胞比例、扰乱妊娠免疫耐受有关。

     

重度子痫前期患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞改变与发病孕周的关系

目的 探讨子痫前期患者外周血CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T淋巴细胞(Treg)的比例改变与发病孕周之间的关系.方法 2010年1月至2011年12月对宁波市妇女儿童医院早发型重度子痫前期患者20例、晚发型重度子痫前期患者20例、28～34周的正常妊娠组20例及34周以后的正常妊娠20例,采用流式细胞仪检测其外周血CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg的比率,分析其与子痫前期发病及发病孕周之间的关系.结果 早发型和晚发型子痫前期患者妇女外周血CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg比例分别为(2.80±0.54)％、(3.23±0.44)％,分别低于28～34、＞34周正常妊娠组妇女外周血CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg比例(3.48±0.3D％、(3.58±0.41)％,差异有统计学意义(P＜0.05).且早发型子痫前期患者妇女外周血CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg比例低于晚发型子痫前期患者,差异有统计学意义(P＜0.01).28～34、＞34周正常妊娠组妇女外周血CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg比例比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg的减少可能参与子痫前期的发病,下降程度可能与子痫前期发病孕周密切相关.     

PDCD4基因对T淋巴细胞亚群分化的影响

目的探讨PDCD4基因对小鼠T淋巴细胞亚群分化的影响。方法采用流式细胞术检测PDCD4基因缺失小鼠脾细胞和淋巴结细胞中的CD8+T和CD4+T,及其亚群Th1、Th2、Th17和调节性T细胞(Treg)的特异性标记分子,并分析各细胞亚群的比例变化。结果 pdcd4-/-小鼠脾脏和淋巴结中CD8+T细胞数量较野生型C57BL/6小鼠有所下降(P<0.05),CD4+T细胞及Th1细胞也呈下降趋势,差异无统计学意义(P>0.05);而PDCD4基因缺失后Th2和Th17的分化比例无显著变化(P>0.05);进一步分析CD4+T细胞群体中CD25+Foxp3+Treg的表达,发现pdcd4-/-小鼠CD25+Foxp3+Treg比例明显上调(P<0.05)。结论 PDCD4基因能够影响部分T淋巴细胞亚群的分化,PDCD4基因敲除小鼠中CD8+T细胞数量下降和CD25+Foxp3+Treg比例升高,提示PDCD4基因有可能在免疫调节方面起到一定作用。而PDCD4基因对于CD4+T以及Th1、Th2和Th17的分化并无明显作用。     

CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞与2型糖尿病肾病的关系

目的 探讨CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg细胞)与2型糖尿病肾病之间的关系,为2型糖尿病肾病的预防和治疗提供新的思路.方法 采用流式细胞仪胞内染色技术测定60例2型糖尿病患者和15例正常对照组外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达率.结果 ①CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达率在2型糖尿病组和对照组之间无显著性差异.②微量蛋白尿组和大量蛋白尿组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达率较对照组有显著性降低(P<0.05),而且大量蛋白尿组较微量蛋白尿组表达率降低更明显(P<0.05).③病程与CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达率呈显著负相关;UAER分级的等级变量与CD4+D25+Foxp3+Treg细胞表达率之间有显著的负相关性.结论 CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞可能参与了2型糖尿病肾病的发生和发展.     

CD4+CD25+FOXP3+Treg对乙型肝炎病毒宫内感染的影响

目的探讨CD4+CD25+Foxp3+Treg的表达水平对乙型肝炎病毒(HBV)宫内感染的影响。方法将109例HBsAg阳性无其他妊娠合并症孕妇按新生儿脐血HBsAg检测结果分为2组:HBsAg阳性表达为研究组,HBsAg阴性表达为对照组。采集孕妇外周血及其分娩新生儿脐血,运用流式细胞仪检测CD4+CD25+Foxp3+Treg的表达水平,ELISA法检测I-10、TGF-β1含量。结果新生儿脐血HBsAg阳性12例,宫内感染率为11.01%。研究组孕妇外周血及其新生儿脐血CD4+CD25+Foxp3+Treg的表达水平、I-10和TGF-β1含量均明显高于对照组(P<0.001);研究组与对照组孕妇外周血及分娩新生儿脐血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达水平与I-10、TGF-β1分泌水平均无明显相关性(P>0.05)。结论HBV宫内感染孕妇及其新生儿CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达水平明显升高,可能是HBV宫内感染的危险因素。 更多还原     

糖皮质激素对重症肌无力患者外周血调节性T细胞中Foxp3及其胞内CTLA-4表达的影响

目的 研究糖皮质激素治疗重症肌无力( MG)患者外周血CD4 +CD25 +调节性 T 细胞( Treg )中 Foxp3 和胞内CTLA-4的表达水平的变化. 方法 收集MG患者34例,分为非治疗组8例和糖皮质激素治疗组26 例. 另将20 例健康者设为对照组. 采用流式细胞仪检测分析患者和健康者外周血CD4 +CD25 +Treg细胞Foxp3和胞内CTLA-4的变化.结果 ① MG非治疗组患者外周血 CD4 +CD25 +Treg细胞Foxp3和胞内CTLA-4水平较对照组显著下降( P<0. 05 );②糖皮质激素治疗能显著提升CD4 +CD25 +Treg细胞Foxp3和胞内CTLA-4表达比例( P <0. 05 ) ,但仍低于对照组( P <0. 05);③ CD4 +CD25 +Treg细胞Foxp3和胞内CTLA-4表达呈正相关性(r=0. 870,P<0. 001). 结论 MG患者外周血CD4 +CD25 +Treg Foxp3和胞内CTLA-4呈低表达,糖皮质激素治疗能显著提升Foxp3和胞内CTLA-4表达水平,但尚未达正常者免疫状态.     

雷帕霉素体外促进小鼠调节性T细胞的分化和增殖

目的:观察雷帕霉素体外对小鼠调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)分化和增殖的影响,为进一步探讨其可能的免疫耐受诱导机制奠定基础.方法:无菌条件下取C57BL/6小鼠脾脏,分离单个核细胞,免疫磁珠阴性分选获得CD4+T细胞,分别与0.1 μmol/L雷帕霉素(RAPA组)、0.5 μmol/L环孢素(CsA组)进行共培养7 d,并以正常培养细胞作为空白对照.流式细胞仪检测各组CD4+CD25+Treg细胞比例;RT-PCR检测各组T细胞Foxp3 mRNA表达水平.结果:与空白对照[(7.42±0.82)%]相比,CsA组CD4+CD25+Treg细胞[(3.72±0.74)%]所占比例明显降低(P<0.01);RAPA组CD4+CD25+Treg细胞[(11.47±1.08)%]所占比例明显升高(P<0.01).RAPA组T细胞Foxp3 mRNA表达明显高于CsA组和空白对照(P<0.01);CsA组Foxp3 mRNA表达低于空白对照(P<0.05).结论:雷帕霉素体外可促进CD4+CD25+ Treg细胞的分化和增殖,有利于免疫耐受的形成,其免疫抑制机制不同于CsA.     

悬浮红细胞对CD4+CD25+Treg细胞分化的影响

目的 体外观察悬浮红细胞对异体T淋巴细胞向CD4+ CD25+ Treg细胞分化的影响.方法 采用Ficoll密度梯度离心法和免疫磁珠法从人外周血中分离纯化出CD3+T淋巴细胞,给予CD3/CD28抗体刺激,并分别与异体非去白悬浮红细胞或去白悬浮红细胞混合培养72 h.采用流式细胞仪检测各组培养体系中CD4+ CD25+Treg细胞的比例.采用实时荧光定量PCR检测各组Foxp3 mRNA的表达情况.采用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测各组细胞上清中促炎细胞因子[白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)和干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)]和抗炎细胞因子[白细胞介素10(interleukin-10,IL-40)和转化生长因子β(transforming growth factor beta,TGF-β)]的水平.结果 与阴性对照组(细胞培养液组)比较,非去白悬浮红细胞和去白悬浮红细胞组CD4+ CD25+ Treg细胞比例明显增加,功能基因Foxp3 mRNA表达也明显增高;1L-2和IFN-γ促炎细胞因子分泌减少,IL-10和TGF-β抗炎细胞因子分泌增多(P＜0.01).而与去白悬浮红细胞比较,非去白悬浮红细胞作用更加明显(P＜0.05).结论 悬浮红细胞可能通过调节促炎/抗炎细胞因子平衡诱导异体T淋巴细胞向CD4+ CD25+ Treg分化,而悬浮红细胞内残留的白细胞可能在其中起了关键作用.     

T淋巴细胞亚群在肝移植术后长期生存患者外周血中的变化

目的 分析肝移植术后长期生存患者外周血中Th1细胞和CD3+ CD8low抑制性T细胞(Ts)及CD4+ CD25+Foxp3+ Treg水平的变化及其临床意义.方法 研究对象为肝移植术后长期生存患者的外周血,血清学检测肝功能生化指标与FK506的含量,采用荧光标记单克隆抗体和流式细胞术检测Th1细胞、CD3+ CD8low抑制性T细胞及CD4+ CD25+Foxp3+ Treg含量变化,分析表达变化特点及与免疫抑制药物FK506(他克莫司)的相关性.结果 通过对肝移植术后存活2～3、8 ～ 10年患者及健康人外周血中Th1细胞、CD3+ CD8low抑制性T细胞及CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg的含量检测显示三者水平呈逐渐下降趋势,最终接近至健康人的水平;肝移植术后生存2～3年组外周血中3种细胞百分比计数水平均显著高于健康对照组(P＜0.05);生存8～ 10年患者CD3+ CD8low抑制性T细胞百分比计数水平显著高于健康人组(P＜0.05),而Th1及CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞百分比计数较2～3年组的水平显著降低(P＜0.05);生存8～10年组患者中CD3+ CD8low抑制性T细胞较生存2～3年组的水平虽然也降低,但无显著性差异(P＞0.05);肝移植术后长期存活患者血清FK506浓度与三者水平呈直线正相关.结论 肝移植术后患者产生免疫耐受一定程度上取决于Th1细胞、CD3+ CD8low抑制性T细胞及CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg的平衡.     

COX-2抑制剂塞来昔布对肝癌小鼠CD4+CD25+调节T细胞的影响

目的 探讨环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂塞来昔布对肝癌小鼠调节T细胞(regulatory T,Treg)的影响。 方法 昆明种小鼠随机分成正常组及肝癌组,每组各20只。肝癌小鼠和正常小鼠于背部皮下注射肝癌H22荷瘤小鼠腹水稀释液或生理盐水0.2 mL一次。于次日开始,每组各取10只采用塞来昔布30 mg/(kg·d)灌胃;肝癌组另外10只予以相同容积的生理盐水灌胃,作为肝癌对照组。灌胃均为1次/d,共24 d。正常组另外10只不做任何干预,作为健康对照组。给药24 d后处死全部小鼠,完整取出肿瘤后称取瘤重,HE染色检测是否成瘤;采用流式细胞学技术测定小鼠外周血中Treg细胞数量变化;免疫组织化学方法检测肝癌组织中叉头样/翼状螺旋转录因子-3(Foxp3)及COX-2的表达情况。 结果 塞来昔布干预后小鼠瘤重低于肝癌对照组[(0.82±0.30)g vs.(1.41±0.63)g,P<0.05]。HE染色证实所有肿瘤小鼠均已成瘤。肝癌对照组小鼠外周血中Treg占CD4+T细胞的比例高于健康对照组[(4.26±0.89)% vs.(3.01±0.65)%,P<0.05];经塞来昔布作用后,其Treg占CD4+T细胞的比例下降[(3.04±0.74)% vs.(4.26±0.89)%,P<0.05]。正常小鼠经塞来昔布作用后,其外周血Treg与健康对照组相比无明显变化。塞来昔布干预后肝癌小鼠肿瘤浸润淋巴细胞中Foxp3蛋白阳性细胞低于肝癌对照组[(8.87±3.72)% vs.(30.78±9.26)%,P<0.05],肿瘤组织中COX-2表达水平亦下调[IOD值(2.90±1.030)vs.(6.63±2.279),P<0.01]。 结论 肝癌小鼠外周血中Treg比例增高;COX-2抑制剂能明显降低其外周血及肿瘤浸润淋巴细胞中Treg的比例。     

维生素D诱导调节性T细胞分化及其在自身免疫性肝炎发病中的作用

目的分析自身免疫性肝炎(AIH)患者外周血调节性T细胞(Treg)比例、白细胞介素-10(IL-10)水平与维生素D的相关性,探讨维生素D对Treg细胞分化的影响。方法选取平顶山市第一人民医院2015年2月至2016年12月收治的AIH患者30例为观察组,另选取同期体检健康者18例为对照组,对照组于体检当日、观察组于入院次日抽取晨起空腹肘静脉血10 m L,以肝素锂抗凝,分离血浆冻存,并采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC),分别采用全自动生物化学分析仪和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆25-羟维生素D[25-(OH)-D3]和IL-10水平,采用多色荧光抗体结合流式细胞术分析样本中CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ IL-10~+ Treg细胞比例,分析三者之间的相关性。在体外条件下分离观察组患者的PBMC,在有或无活化形式的维生素D[1,25-(OH)2-D3]的条件下给予佛波酯(PMA)刺激16 h,再用流式细胞术检测刺激后PBMC中CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ IL-10~+ Treg细胞比例,同时采用ELISA法检测刺激后上清液中IL-10水平。结果观察组患者血浆25-(OH)-D3、IL-10水平显著低于对照组(P<0.05,P<0.01)。观察组患者外周血CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ IL-10~+ Treg细胞比例显著低于对照组(P<0.05)。观察组患者外周血25-(OH)-D3水平与IL-10水平及CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ IL-10~+ Treg细胞比例均呈正相关(R2=0.379,P=0.000 3;R2=0.151,P=0.034 1)。在有1,25-(OH)2-D3的条件下给予PMA刺激,观察组患者的CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ IL-10~+ Treg细胞比例和上清液中IL-10水平均显著高于无1,25-(OH)2-D3的条件下给予PMA刺激后(P<0.05)。结论维生素D可直接诱导Treg细胞增殖分化,AIH患者体内Treg细胞减少在某种程度上与维生素D缺乏有关。     

组合压气机中尾迹与势流同频/异频干涉的叠加特性

目的 探讨环氧合酶-2 (eyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂塞来昔布对肝癌小鼠调节T细胞(regulatory T,Treg)的影响.方法 昆明种小鼠随机分成正常组及肝癌组,每组各20只.肝癌小鼠和正常小鼠于背部皮下注射肝癌H22荷瘤小鼠腹水稀释液或生理盐水0.2 mL一次.于次日开始,每组各取10只采用塞来昔布30mg/(kg·d)灌胃;肝癌组另外10只予以相同容积的生理盐水灌胃,作为肝癌对照组.灌胃均为1次/d,共24 d.正常组另外10只不做任何干预,作为健康对照组.给药24 d后处死全部小鼠,完整取出肿瘤后称取瘤重,HE染色检测是否成瘤;采用流式细胞学技术测定小鼠外周血中Treg细胞数量变化;免疫组织化学方法检测肝癌组织中叉头样/翼状螺旋转录因子-3(Foxp3)及COX-2的表达情况.结果 塞来昔布干预后小鼠瘤重低于肝癌对照组[(0.82±0.30)g vs.(1.41±0.63)g,P＜0.05].HE染色证实所有肿瘤小鼠均已成瘤.肝癌对照组小鼠外周血中Treg占CD4+T细胞的比例高于健康对照组[(4.26±0.89)％Vs.(3.01±0.65)％,P＜0.05];经塞来昔布作用后,其Treg占CD4+T细胞的比例下降[(3.04±0.74)％ vs.(4.26±0.89)％,P＜0.05].正常小鼠经塞来昔布作用后,其外周血Treg与健康对照组相比无明显变化.塞来昔布干预后肝癌小鼠肿瘤浸润淋巴细胞中Foxp3蛋白阳性细胞低于肝癌对照组[(8.87±3.72)％vs.(30.78±9.26)％,P＜0.05],肿瘤组织中COX-2表达水平亦下调[IOD值(2.90±1.030) vs.(6.63±2.279),P＜0.01].结论 肝癌小鼠外周血中Treg比例增高;COX-2抑制剂能明显降低其外周血及肿瘤浸润淋巴细胞中Treg的比例.     

掌叶半夏提取物对宫颈癌荷瘤小鼠脾脏免疫的作用

 目的  观察掌叶半夏提取物(Pinellia extracts,PE)对HPV+TC-1荷瘤小鼠T细胞免疫应答的作用。方法  宫颈癌荷瘤小鼠建模后随分成4组:机对照组(生理盐水,0.2 mL/d,灌胃)、PE低剂量组(10 mg/kg, 0.2 mL/d,灌胃)、PE高剂量组(20 mg/kg,0.2 mL/d,灌胃)、CDDP组(4 mg/kg,0.2 mL/3 d,腹腔注射)。给药期间测瘤、描绘肿瘤生长曲线,21天后处死小鼠并计算抑瘤率,流式细胞术检测脾脏CD4+和CD8+T细细胞以及Th1、Th2、Treg和Th17亚群的比例。结果  抑瘤率:CDDP组(29.82%)>PE高剂量组(21.73％)>PE低剂量组(8.23%);PE高剂量组和CDDP组CD4+和CD8+T细胞比例较阴性对照组均显著增多(P<0.01);PE两组Th1比例显著升高、Th2和Th17比例显著下降(呈现剂量依赖性),Treg亚群分泌TGF减少,而FOXP3水平增高。结论  PE能通过诱导CD4+T细胞向Th1型分化,抑制Th1/Th2漂移,改善Treg和Th17的比例,发挥抗肿瘤免疫作用。     

人外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞分选及扩增方法的建立

目的建立人外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Treg)的免疫磁珠分选法(MACS)及体外扩增方法 ,并对扩增前后Treg细胞纯度及表型进行鉴定。方法流式细胞术检测人外周血Treg细胞占CD4~+T细胞的比例;免疫磁珠法分选CD4~+CD25~+Treg细胞,用CD3/CD28单抗包被的Dynalbeads联合IL2共同刺激CD4~+CD25~+Treg细胞进行体外扩增培养,在扩增培养的第0、7、14、21天分别进行细胞计数及检测细胞的活性,取扩增培养第0天及第14天细胞行流式细胞术检测扩增前后细胞纯度、主要表面标记及Foxp3的表达情况。结果正常人外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg水平占CD4~+T细胞(7.94±1.86)%,MACS能够成功分选出CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞,分选平均纯度达(95.86±0.65)%,细胞活性95%;以CD3/CD28单抗包被的Dynalbeads联合IL2共同刺激CD4~+CD25~+Treg细胞进行外扩增培养后,细胞有明显扩增。经2周扩增后,细胞扩增倍数达到原细胞数量的(21.33±1.53)倍,扩增后细胞Foxp3的表达由(95.86±0.65)%下降至(93.71±1.30)%,但差异无统计学意义(P0.05)。结论免疫磁珠分选法能够分选出高纯度的CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞,体外成功扩增CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞,扩增前后Treg细胞的纯度及表型无明显变化。     

FoxP3基因在胃癌患者Treg细胞中的表达及其对Treg细胞的调节作用

目的:研究Foxp3基因在CD4+、CD25+调节性T细胞(Treg细胞)中的表达水平及其对Treg细胞的调节作用。方法:应用流式细胞术(FACS)测定实验组和对照组患者术前外周血中T淋巴细胞及Treg细胞含量的改变;采用RT-PCR技术检测FoxP3基因在胃癌患者外周血Treg细胞中的表达与对照组的差异。结果:胃癌患者外周血中T淋巴细胞(CD3+T)及抑制杀伤性T细胞(CD8+T)总数,与健康对照组相比无明显统计学差异(P>0.05);Treg细胞含量显著高于健康对照组(P<0.01);FoxP3基因在胃癌患者外周血Treg细胞中呈现高表达,明显高于健康对照组(P<0.01)。结论:FoxP3基因可能与Treg细胞发挥抑制胃癌病人产生的抗肿瘤自身免疫功能作用有着密切的关系。     

胃癌患者Th17/Treg细胞失衡的研究

目的 检测Th17和Treg细胞在胃癌患者外周血中的分布,探讨Th17/Treg细胞免疫平衡与胃癌发生发展的关系。方法 选取2010年7月—2011年9月河北医科大学第四医院住院的胃癌患者45例作为病例组,另选取同期本院健康体检者20例作为对照组。取受试者外周血5 ml,分离单个核细胞,采用流式细胞分析技术检测CD+4CD+25Foxp3+和CD+4IL-17+细胞的表达,以产生IL-17的CD+4T为Th17细胞,以CD+4CD+25Foxp3+细胞为Treg细胞,检测Th17和Treg细胞的数量和比例。结果 流式细胞术检测结果显示,病例组外周血Th17细胞比例、Treg细胞比例、Th17/Treg均高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。对照组中,外周血Th17细胞比例与Treg细胞比例呈正相关（r=0.64,P=0.003）;病例组中,外周血Th17细胞比例与Treg细胞比例无直线相关性（r=0.12,P=0.490）。多元线性回归分析结果显示,Th17细胞比例升高与TNM分期（P=0.002）、淋巴结转移（P=0.017）有关;Treg细胞比例升高与TNM分期（P=0.034）、分化程度（P=0.015）有关;Th17/Treg升高与淋巴结转移有关（P=0.036）。结论 胃癌患者Th17、Treg细胞比例及Th17/Treg明显增高,并与患者TNM分期、淋巴结转移、肿瘤分化程度有关,提示胃癌患者存在Th17/Treg细胞免疫平衡失调,这种失调可能促进了胃癌的进展。     

肥胖伴2型糖尿病患者外周血调节性T细胞的表达研究

目的 检测CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞在肥胖症患者外周血中的表达情况及与胰岛素抵抗的关系。方法 采用流式细胞术检测体质量指数（BMI）≥28 kg/m2的单纯肥胖症患者20例,BMI ≥28 kg/m2且口服葡萄糖耐量试验（OGTT）证实为初发糖尿病的肥胖伴糖尿病患者20例及20例正常对照外周血CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞的比例。将临床指标、稳态胰岛素抵抗评价指数（HOMA-IR）及松田指数（Matsuda Index）与CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞水平做相关性分析及多元逐步回归分析。结果 单纯肥胖组、肥胖伴糖尿病组CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞比例分别为（3.86±0.27）%、（3.76±0.25）%,低于正常对照组（6.36±0.21）%（ P均+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞均表达细胞毒T细胞抗原-4（CTLA-4）,分别为（77.27±2.81）%、（60.32±2.48）%、（80.09±1.69）%,单纯肥胖组、肥胖伴糖尿病组均低于正常对照组,且肥胖伴糖尿病组更低（ P均+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞比例的因素（标准偏回归系数分别为-0.351、-0.419、-0.437, P+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞数量下降,且其下降与胰岛素抵抗相关。