西奥骨化醇抑制TGF-β1诱导的肝癌细胞SMMC-7721上皮-间质转化

目的 研究西奥骨化醇(seocalcitol,EB1089)对TGF-β1诱导肝癌细胞SMMC-7721上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)的抑制作用.方法 用不同浓度维生素D类似物EB1089(1、10、100、1 000 nmol/L)作用于肝癌细胞SMMC-7721 6、12、24、48 h,筛选出具有统计学意义的作用浓度和时间.将肝癌细胞SMMC-7721分为4组(EB1089组、TGF-β1组、EB1089+TGF-β1组和空白对照组),分别干预48 h.用相差倒置显微镜观察细胞形态变化;通过实时RT-PCR和Western blot分别检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的mRNA和蛋白表达情况;迁移实验和侵袭实验检测EB1089对肝癌细胞SMMC-7721侵袭和迁移能力的影响.结果 TGF-β1作用后肝癌细胞SMMC-7721呈现长梭形,并伸出较多触角,EB1089能明显改善这种形态变化;EB1089可有效升高TGF-β1所致的E-cadherin mRNA和蛋白低表达(P＜0.05),同时降低N-cadherin、Vimentin mRNA和蛋白表达(P＜0.05);EB1089对TGF-β1诱导的细胞侵袭、迁移具有抑制作用(P＜0.05).结论 维生素D类似物EB1089能有效抑制TGF-β1诱导的肝癌细胞SMMC-7721上皮-间质转化现象和侵袭、迁移能力.     

白藜芦醇对食管鳞癌Eca-109细胞侵袭迁移及EMT的影响

目的:研究白藜芦醇(RES)对食管鳞癌Eca-109细胞侵袭迁移及上皮间质转化(EMT)的影响.方法:用不同浓度(50和100 μmol/L)的RES处理Eca-109细胞,采用细胞划痕实验、Transwell小室实验检测细胞迁移侵袭能力,荧光定量PCR检测EMT蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和MMP-2、MMP-9 mRNA的表达,Western blot检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP-2和MMP-9蛋白表达.结果:与对照组比较,RES各浓度(50 μmol/L和100 μmol/L)组均可明显抑制Eca-109细胞侵袭迁移(P<0.01),下调N-cadherin、Vimentin、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达(P<0.05~P<0.01),增加E-cadherin mRNA和蛋白表达(P<0.01).结论:RES抑制Eca-109细胞侵袭迁移能力,其机制可能通过下调MMP-2、MMP-9的表达,调控EMT蛋白(E-cadherin、N-cadherin和Vimentin)的表达、抑制上皮间质转化过程.     

AMPK抑制TGF-β信号通路减轻EMT诱导膀胱癌转移机制研究

目的探讨AMPK抑制TGF-β信号通路减轻EMT诱导膀胱癌转移机制。方法采用Lipofectamine2000介导AMPKα1转染至人膀胱移行上皮癌BIU-87,噻唑蓝(MTT)比色法和AnnexinV-FITC/PI双染法检测shRNA对细胞增殖和凋亡的作用。细胞划痕实验、Transwell小室侵袭实验检测体外细胞迁移和侵袭能力。Western blot检测E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白的表达情况。结果转染后的C4-2 DN细胞生长速度明显慢于未转染的BIU-87细胞及转染空载体的C4-2 E细胞,且在24 h内的细胞凋亡率均明显高于转染空载体的C4-2 E,组间差异具有统计学意义(P0.05)。AMPK抑制TGF-β信号通路能够抑制人膀胱移行上皮癌BIU-87细胞的增殖和侵袭迁移(P0.05)。同时,AMPK抑制TGF-β信号通路下调N-cadherin和Vimentin蛋白水平,上调E-cadherin蛋白表达。结论 AMPK抑制TGF-β信号通路下调N-cadherin和Vimentin蛋白水平,上调E-cadherin蛋白表达,减轻EMT诱导膀胱癌转移。     

“软坚护肝片”含药血清对Hep-G2细胞增殖及凋亡影响

目的:探讨"软坚护肝片"含药血清对Hep-G2细胞增殖和凋亡的影响。方法:给予人肝癌Hep-G2细胞不同剂量浓度的软坚护肝片含药血清进行干预。MTT法检测软坚护肝片对肝癌Hep-G2细胞增殖的影响;流式细胞术检测软坚护肝片对Hep-G2细胞周期、凋亡的作用;应用Western-blot法检测相关凋亡蛋白Bcl-2的变化。结果:软坚护肝片能抑制肝癌细胞增殖、诱导肝癌凋亡,其作用具有剂量依赖性,进一步研究显示,软坚护肝片可上调促凋亡蛋白Bax表达,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2表达。结论:研究表明软坚护肝片含药血清能够诱导肝癌细胞凋亡,但对肝癌细胞周期分布无显著影响;且能上调促凋亡蛋白Bax表达,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2表达。     

白花蛇舌草调控TGF-β/Smad信号通路介导的EMT抑制大肠癌细胞转移的研究

目的研究白花蛇舌草对大肠癌(CRC)细胞转移及对TGF-β/Smad信号通路介导上皮间质转化(EMT)的调控作用,以进一步阐明其抗CRC的分子机制。方法体外培养大肠癌HCT-8细胞经白花蛇舌草乙醇提取物(EEHDW)干预处理,MTT法检测细胞活力;倒置显微镜观察细胞形态和细胞密度;Transwell法观察细胞的转移;采用Western Blot检测细胞EMT标志蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)及TGF-β/Smad通路相关蛋白(TGF-β、Smad2/3、Smad4、p-Smad2/3)的表达。结果 EEHDW明显抑制HCT-8细胞的生长,显著降低HCT-8的细胞活力,显著抑制HCT-8细胞的迁移、侵袭,明显下调EMT标志蛋白N-cadherin、Vimentin的表达,上调E-cadherin的表达,显著抑制TGF-β、p-Smad2/3、Smad4的蛋白表达,对Smad2/3的蛋白表达无明显影响。结论白花蛇舌草可通过抑制TGF-β/Smad信号通路介导的EMT防治大肠癌细胞转移。     

护肝片对纤维化肝组织TGF-β1表达的抑制作用

目的:探讨护肝片对中、晚期纤维化肝组织转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白及mRNA表达的影响.方法:采用125 g/L CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型,自模型复制之日起,大鼠分组灌胃给药(护肝片921 mg/kg)或溶媒,每日1次,直至8,13周末,分别处死动物,取左叶肝组织石蜡包埋,制作组织芯片.免疫组化S-P法检测大鼠肝组织TGF-β1蛋白的表达;原位杂交检测TGF-β1 mRNA的表达.用MetaMorph图像分析系统对TGF-β1蛋白及mRNA的表达量进行定量分析.结果:①模型复制8周和13周,模型组的肝损伤及其纤维化分级均明显高于正常组(P<0.01),护肝片组的肝损伤及其纤维化分级均轻于模型组.②模型复制8周和13周,模型组TGF-β1及mRNA的表达均较正常组显著增多(P<0.01);且其蛋白和mRNA的表达相互间呈显著正相关(P<0.01).③护肝片显著抑制8,13周纤维化肝组织TGF-β1蛋白及mRNA的表达(P<0.01).结论:护肝片可减轻肝组织的损伤及其纤维化程度,它可能在蛋白及mRNA双重水平上抑制TGF-β1的表达,从而发挥抗肝纤维化作用.     

六味消癥方通过调节TRIM65表达抑制肝癌细胞侵袭和迁移机制研究

目的:研究六味消癥方含药血清对肝癌细胞侵袭和迁移能力的影响及其作用机制。方法:采用Transwell侵袭实验和划痕迁移实验,考察不同剂量六味消癥方和TRIM65表达对肝癌细胞侵袭和迁移能力的影响;采用RT-PCR实验和Western blot实验,考察不同剂量六味消癥方对肝癌细胞中TRIM65表达的影响,以及六味消癥方和TRIM65表达对Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白表达的影响。结果:六味消癥方含药血清显著抑制肝癌细胞通过基质胶的数量(P0.01)、伤痕愈合率(P0.01)、TRIM65的表达(P0.01),以及β-catenin、c-myc和MMP9的表达(P0.01)。TRIM65基因干扰加强了含药血清对肝癌细胞侵袭迁移能力的抑制,TRIM65过表达则减弱了含药血清对肝癌细胞侵袭迁移能力的抑制,同时减弱了含药血清对β-catenin、c-myc和MMP9的表达的抑制。结论:六味消癥方含药血清能够抑制肝癌细胞的侵袭和迁移能力,其作用机制可能是通过调控TRIM65的表达水平,进而抑制Wnt/β-catenin信号通路异常激活。     

香参壳方对人胃癌细胞上皮间质转化及转移的影响

目的 考察香参壳方调节人胃癌细胞SGC-7901上皮间质转化(EMT)及转移的作用机制。方法 体外培养SGC-7901细胞,随后加入不同浓度的香参壳方含药血清进行干预。划痕实验及Transwell小室法观察SGC-7901细胞的迁移与侵袭能力,MTT法考察SGC-7901细胞的增殖能力,Western blot法检测细胞中N-cadherin、Vimentin、E-cadherin、p-GSK3β/GSK3β、β-Catenin表达水平。结果 香参壳方可有效抑制SGC-7901细胞的迁移及侵袭能力,抑制其增殖,同时下调细胞中N-cadherin、Vimentin、p-GSK3β/GSK3β及β-Catenin的表达,上调E-cadherin的表达。结论 香参壳方主要通过介导GSK3β/β-Catenin信号通路抑制胃癌细胞的EMT,降低弱细胞迁移与侵袭能力,从而发挥其胃癌术后的辅助治疗作用。      

扶正抑癌方含药血清对结肠癌lovo细胞侵袭转移能力及TGF-β_1与TβRⅡ蛋白表达的影响

目的:观察扶正抑癌方含药血清对结肠癌lovo细胞侵袭转移能力及TGF-β_1和TβRⅡ蛋白表达的影响,以探讨扶正抑癌方降低结肠癌转移的机制。方法:lovo细胞体外培养,制备大鼠不同浓度含药血清后,MTT测定不同浓度含药血清对细胞增殖的影响,以5-Fu作为阳性对照药;通过细胞迁移实验检测细胞运动能力,肿瘤细胞体外侵袭实验检测细胞侵袭能力,SABC免疫组化法检测TGF-β_1和TβRⅡ的蛋白表达。结果:高浓度含药血清24 h对lovo细胞作用有效,与对照组和空白组相比,扶正抑癌方含药血清能显著降低细胞的运动能力和侵袭能力,免疫组化提示扶正抑癌方含药血清能降低lovo细胞TGF-β_1的蛋白表达和提高TβRⅡ的蛋白表达,差异具有统计学意义(P0.01)。结论:扶正抑癌方含药血清能有效抑制lovo细胞的增值和降低其侵袭力和运动能力,初步认为其作用机制与降低lovo细胞TGF-β_1的表达和升高βRⅡ的蛋白表达有一定的相关性。     

miR-30c对胃癌细胞株HGC-27侵袭转移能力的影响

目的探讨miR-30c对胃癌细胞株HGC-27侵袭转移能力的影响。方法使用miR-30c mimics和inhibitor分别进行miR-30c的过表达和抑制,采用划痕实验和transwell小室实验分析癌细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白E-cadherin、Vimentin和Fibronectin的表达差异。结果抑制miR-30c可促进胃癌细胞系HGC-27的侵袭(P<0.05),同时高表达miR-30c可抑制细胞侵袭(P<0.05)。抑制miR-30c后E-cadherin表达降低、Vimentin和Fibronectin表达升高,高表达miR-30c后E-cadherin的表达升高、Vimentin和Fibronectin表达下降。结论 miR-30c可能通过调节上皮间质转化(EMT)相关蛋白来影响胃癌的侵袭能力。     

槲皮素对转化生长因子-β_1诱导的肾小球足细胞转分化抑制作用的实验研究

目的研究槲皮素(Qu)不同给药时间对转化生长因子-β_1(TGF-β_1)诱导的肾小球足细胞向间充质细胞转分化(EMT)的影响。方法取经过鉴定的体外原代培养的足细胞,随机分为对照组、模型组、Qu先干预组、Qu同时干预组和Qu后干预组,共5组。对照组常规培养;模型组采用5 ng/m L TGF-β_1诱导48 h;Qu先干预组采用50μmol/L Qu干预24 h后,再用5 ng/m L TGF-β_1继续诱导24 h;Qu同时干预组采用50μmol/LQu和5 ng/m L TGF-β_1同时干预48 h;Qu后干预组先用5 ng/m L TGF-β_1干预24 h,再用50μmol/L Qu干预24 h。将上述5组细胞分别采用Western blot、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测足细胞裂孔膜蛋白(Nephrin)、Wilms瘤抑癌因子-1(WT-1)和足细胞EMT标志物波形蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白及mRNA表达量,并进行组间比较。结果 1)蛋白表达量:与对照组比较,模型组足细胞Nephrin,WT-1的蛋白表达量明显降低,Vimentin,α-SMA的蛋白表达量明显升高(P0.01);与模型组比较,3种不同干预方法中,Nephrin的蛋白表达量以Qu后干预组最高,WT-1的蛋白表达量以Qu同时干预组最高,Vimentin的蛋白表达量以Qu先干预组最低,α-SMA的蛋白表达量以Qu先干预组最低(P0.01)。2)mRNA表达量:与对照组比较,模型组足细胞Nephrin mRNA和WT-1 mRNA的表达量明显降低,Vimentin mRNA和α-SMA mRNA的表达量明显升高(P0.01);与模型组比较,3种不同干预方法中,Nephrin mRNA的表达量以Qu同时干预组最高(P0.05),WT-1 mRNA的表达量以Qu先干预组最高(P0.01),Vimentin mRNA和α-SMA mRNA表达量均以Qu先干预组最低(P0.01)。结论 Qu能够抑制T GF-β1诱导的足细胞EMT,且Qu先干预组能够更好地抑制TGF-β_1诱导的足细胞EMT,其作用机制可能与抑制TGF-β信号转导通路中的相关信号分子、维持足细胞生理结构的完整性从而保护肾小球滤过屏障有关。     

华蟾素对Wnt/β-catenin通路抑制肾癌细胞增殖及侵袭的影响

目的 探讨华蟾素对肾癌细胞侵袭和迁移的影响,并探讨其对Wnt/β-catenin信号通路的调控机制。方法将肾癌细胞分为对照组（添加PBS）和华蟾素组（添加华蟾素）,CCK-8法检测细胞增殖力,Transwell侵袭和细胞迁移法检测细胞侵袭和迁移力,流式细胞检测细胞凋亡和细胞周期,免疫蛋白印迹法检测Wnt/β-catenin和上皮间质变（epithelial mesenchymal transition,EMT）信号通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,华蟾素组可抑制肾癌细胞增殖,抑制细胞侵袭和迁移力,促进细胞凋亡,阻滞细胞周期 (P<005);E-cadherin蛋白表达上调(P<005),Wnt/β-catenin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达下调(P<005)。结论华蟾素可通过调控Wnt/β-catenin信号通路,逆转EMT,抑制肾癌细胞增殖和侵袭。     

γ-生育三烯酚抑制SGC-7901细胞上皮间质转化作用机制探讨

目的 观察γ-生育三烯酚(γ-T3)对转化生长因子(TGF-β1)诱导人胃癌SGC-7901细胞发生上皮间质转化(EMT)细胞迁移和侵袭能力的调控作用,探讨其可能的抑制机制.方法 用浓度为10ng/ml TGF-β1和10ng/ml TGF-β1+30μmol/L γ-T3分别作用于SGC-7901细胞24 h;利用倒置显微镜观察细胞形态学变化,并采用体外划痕实验、细胞侵袭实验和蛋白印迹等技术,检测γ-T3对TGF-β1诱导的胃癌细胞迁移和侵袭能力,以及E-cadherin和vimentin蛋白表达的影响.结果 γ-T3抑制TGF-β1诱导人胃癌SGC-7901细胞发生EMT.10ng/ml TGF-β1组细胞多数呈梭型,细胞边界模糊,细胞间间隙大;10ng/ml TGF-β1+30μmol/L γ-T3组细胞呈不规则多边形,细胞边界较清晰,间隙小.γ-T3抑制由TGF-β1诱导的SGA7901细胞的迁移能力(F＝74.106, P<0.05).γ-T3抑制由TGF-β1诱导的SGA7901细胞的侵袭能力(F＝181.921,P=0.000).γ-T3抑制TGF-β1诱导的E-cadherin蛋白表达降低(F=305.818,P=0.000);γ-T3也抑制TGF-β1诱导的vimentin蛋白表达增强(F=456.036, P=0.000).结论 γ-T3可能通过上调E-cadherin和下调vimentin蛋白表达,抑制TGF-β1诱导的人胃癌SGC-7901细胞发生EMT,降低胃癌细胞的迁移和侵袭能力.     

microRNA-7对人肝癌细胞MHCC-97H上皮间质转化的影响及作用机制

目的 探讨microRNA-7(miR-7)对肝癌细胞株MH-CC-97H上皮-间质转化(EMT)的影响及作用机制.方法 将构建的miR-7真核载体单独及分别联合野生型或突变型 EGFR 3'-UTR真核载体共转染MHCC-97H细胞,采用Real-time PCR、Western blot 检测 EMT 标识蛋白 E-cadherin、β-catenin、N-cadherin 和 Vimentin 的表达;细胞划痕、Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力的变化;双荧光素酶实验分析 miR-7对EGFR的调控作用.结果 与正常组相比,转染 miR-7真核载体组细胞E-cadherin、β-catenin表达均显著升高(P＜0. 01),N-cadherin、Vimentin 表达则明显降低(P＜0. 01);同时,细胞的侵袭、迁移能力均明显减弱(P＜0.01);分别与转染GV272 + EGFR 3'-UTR野生型和转染GV272/ miR-7 + EGFR 3'-UTR 突变型相比,转染 GV272/miR-7 + EGFR 3'-UTR野生型组萤火虫荧光素酶活性显著降低(P＜0.01).结论 miR-7可通过与EGFR 3'-UTR结合而抑制 EGFR信号通路,降低MHCC-97H细胞侵袭、迁移能力,进而抑制MHCC-97H细胞EMT.     

华蟾素对TGF-β1诱导人结肠癌细胞上皮-间质化的实验研究

目的 研究华蟾素在体外对肿瘤坏死因子-β1(TGF-β1)诱导的人结肠癌细胞上皮-间质化(EMT)的作用.方法 将体外培养的人结肠癌细胞株(SW480)分为:(1)正常对照组;(2)TGF-β1 (10 ng/mL)单独处理组;(3)TGF-β1(10 ng/mL)+华蟾素(2.5、5、10、20、40、80 mg/mL)共同处理组,并在体外培养48 h.CCK8检测细胞增殖抑制情况,利用倒置相差显微镜观察各处理组细胞形态学变化,Transwell小室检测细胞侵袭与迁移能力,实时荧光定量PCR(QRT-PCR)和Western blot分别检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)在mRNA及蛋白水平表达的变化.结果 (1)与TGF-β1(10 ng/mL)单独处理组比较,TGF-β1(10 ng/mL)+华蟾素(10、20、40、80 mg/mL)共同处理组对SW480具有显著的增殖抑制作用(P＜0.05).(2)与正常对照组相比,TGF-β1单独处理组、TGF-β1(10 ng/mL)+华蟾素(2.5 mg/mL)共同处理组呈现典型的间质化表型,TGF-β1 (10 ng/mL)+华蟾素(5 mg/mL)共同处理组则呈现经典的上皮表型.(3)TGF-β1(10 ng/mL)+华蟾素(2.5、5mg/mL)共同处理组与TGF-β1单独处理组相比侵袭和迁移能力均明显减弱(P＜0.05).(4) QRT-PCR和Western blot结果显示TGF-β1单独处理组与正常对照组比较,Vimentin表达水平明显增强,E-cadherin表达显著减弱.TGF-β1 (10 ng/mL)+华蟾素(2.5、5 mg/mL)共同处理组与TGF-β1单独处理组、对照组相比Vimentin表达水平显著降低,E-cadherin表达显著增强.结论 华蟾素可抑制TGF-β1诱导的人结肠癌细胞SW480的增殖,其机制可能与促进E-钙黏蛋白表达增强,同时使波形蛋白表达减弱,从而与抑制TGF-β1诱导的EMT过程有关.     

Amotl2促进肝细胞肝癌血管生成拟态及EMT形成

目的:研究Amotl2对肝癌细胞迁移侵袭能力的影响及其在诱导肝癌上皮间充质转化（EMT）及血管生成中的作用。方法:将Amotl2过表达质粒和干扰质粒分别转染至肝癌细胞系HepG2和Bel7402中,Western blot检测转染前、后HepG2和Bel7402中Amotl2、EMT相关蛋白（E-cadherin、Vimentin）表达变化情况;划痕、侵袭实验检测Amotl2对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响;三维培养检测Amotl2对HCC细胞形成血管样结构的影响。结果:促进Amotl2表达后HepG2表现出EMT样改变,E-cadherin表达下降、Vimentin表达上升、细胞迁移侵袭和三维成管的能力增强。抑制Amotl2表达后Bel7402由间质样表型转变为上皮样表型,E-cadherin表达上升、Vimentin表达下降、细胞迁移侵袭和三维成管的能力减弱。结论:Amotl2可能通过诱导EMT促进原发性肝癌的迁移侵袭能力和血管生成拟态的形成。     

CTP-NPRL2融合蛋白对肾癌原代细胞迁移侵袭能力的抑制及机制研究

目的 将原核表达的氮酶调节因子2(nitrogen permease regulator 2-like,NPRL2)融合蛋白通过胞浆转导肽(cytoplasmic transduction peptide,CTP)转入肾癌原代细胞内,观察其对肾癌原代细胞迁移侵袭的影响,并分析与肾癌上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系.方法 胶原酶消化法培养肾癌原代细胞;构建原核表达质粒pET15b-CTP-NPRL2和pET15b-NPRL2,表达融合蛋白CTP-NPRL2和NPRL2,并通过Western blot鉴定目的蛋白的表达.将培养成功的原代细胞分为BLANK组、NPRL2组和CTP-NPRL2组.免疫荧光检测目的蛋白的细胞定位;Transwell迁移侵袭实验检测导入NPRL2蛋白后,对肾癌细胞迁移侵袭能力的影响;Real-time PCR检测Raptor、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤粘蛋白(Fibronectin) mRNA表达水平;Western blot检测Raptor、E-cadherin、Vimentin、Fibronectin蛋白表达水平.结果 成功培养出肾癌原代细胞并通过鉴定;测序结果及Western blot检测结果显示质粒构建成功并表达出目的蛋白;免疫荧光检测结果显示CTP-NPRL2融合蛋白可以穿过胞膜并定位于胞浆;迁移和侵袭实验显示CTP-NPRL2组肾癌细胞迁移侵袭能力明显下降(P＜0.05);Real-time PCR和Western blot检测结果显示CTP-NPRL2组Raptor、Vimentin与Fibronectin的mRNA、蛋白表达水平与NPRL2组和BLANK组相比明显降低(P＜0.05),而E-cadherin的mRNA、蛋白表达水平与NPRL2组与BLANK组相比明显升高(P＜0.05).结论 NPRL2可能通过与Raptor相互作用影响mTORC1的活性,进而调节EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、Fibronectin的表达量,影响肾癌细胞的迁移侵袭能力.     

溶酶体跨膜蛋白5在卵巢癌细胞上皮-间质转化中的作用

目的 检测溶酶体跨膜蛋白5 (LAPTM5)在人卵巢腺癌细胞(OVCAR3)中的表达,观察LAPTM5对OVCAR3细胞迁移、侵袭能力的影响,并探讨LAPTM5在上皮-间质转化(EMT)过程中的作用。方法 采用Western blotting检测OVCAR3中LAPTM5的表达情况;将OVCAR3细胞随机分为2组,分别转染空载质粒和LAPTM5沉默质粒,实时定量PCR检测转染效率和EMT相关标志物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin mRNA的表达水平。结果 LAPTM5在OVCAR3细胞中表达上调(P <0.01);与对照组相比,转染LAPTM5沉默质粒的OVCAR3细胞株迁移、侵袭能力明显下降(P <0.05),EMT上皮标志物E-cadherin mRNA表达水平显著上调(P <0.05),间质标志物N-cadherin mRNA和Vimentin mRNA表达下调(P <0.05)。结论 LAPTM5在人卵巢腺癌细胞OVCAR3中表达上调,LAPTM5可能通过EMT影响OVCAR3细胞迁移和侵袭的能力。     

POSTN对人下咽癌细胞增殖、凋亡和EMT的影响

目的 研究骨膜蛋白(Periostin, POSTN)对人下咽癌细胞增殖、凋亡和上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响和机制。方法 通过TIMER2数据库分析POSTN基因在头颈部肿瘤中的表达情况。培养人下咽癌FaDu细胞,构建转染si-POSTN的实验组(si-POSTN1组、si-POSTN2组、si-POSTN3组)和转染阴性对照序列si-NC的对照组(NC组),然后通过PCR实验筛选出POSTN基因敲低效率较高的两组,用于后续的实验。CCK-8和细胞集落形成实验检测增殖情况;划痕和Transwell实验检测迁移和侵袭能力;Western blot实验检测凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)和EMT相关蛋白(N-cadherin、E-cadherin、Vimentin、Snail)的表达情况;PCR实验检测TGF-β/Smad通路相关基因(TGF-β1、SMAD2、SMAD3)mRNA的表达情况。结果 PCR实验发现si-POSTN1组和si-POSTN2组POSTN mRNA表达量比si-POSTN3组低(P<0...     

lncRNAENST00000484679促进肝癌索拉菲尼耐药细胞迁移侵袭的机制研究

目的探讨差异表达的长链非编码RNA（lncRNA）对肝癌索拉菲尼耐药细胞迁移、侵袭的影响。方法采用ln-cRNA芯片微阵列分析肝癌索拉菲尼耐药细胞Huh7SR和亲本细胞Huh7中的lncRNA,筛选出差异表达lncRNA;荧光定量PCR法进一步验证差异表达的lncRNA。将转染后的肝癌索拉菲尼耐药细胞Huh7SR分为ENST00000484679-小干扰RNA（siRNA）组和阴性对照（siNC）组。ENST00000484679-siRNA组加入lncRNAENST00000484679-siRNA转染,siNC组加入无关序列NC-siRNA转染。Transwell实验观察肝癌索拉菲尼耐药细胞株迁移侵袭能力的变化;Westernblot法检测肝癌索拉菲尼耐药细胞株的上皮-间质转化（EMT）标记蛋白钙黏蛋白N（N-cadherin）、钙黏蛋白E（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）表达水平。结果芯片筛选出lncRNAENST00000484679在肝癌索拉菲尼耐药细胞株中高表达,荧光定量PCR进一步验证了Huh7SR细胞ENST00000484679mRNA表达水平高于Huh7细胞（P＜0.01）。ENST00000484679-siRNA组ENST00000484679mRNA表达水平低于siNC组,迁移细胞数和侵袭细胞数均低于siNC组,N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平均低于siNC组,E-cadherin蛋白表达水平高于siNC组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论lncRNAENST00000484679促进肝癌索拉菲尼耐药细胞的迁移和侵袭能力可能与EMT有关。