芒果苷抑制糖基化产物的生成及对血管内皮保护作用

目的探讨芒果苷对体外糖基化终产物生成的抑制作用,以及对血管内皮的保护作用。方法采用体外蛋白质非酶糖基化反应系统,分别加入不同浓度的芒果苷或阳性药氨基胍,孵育21 d后检测其荧光强度,研究其对蛋白质非酶糖基化是否有抑制作用。并利用大鼠离体胸主动脉舒张功能实验,研究芒果苷对棕榈酸诱导血管内皮舒张功能失调的改善作用。结果在体外蛋白质非酶糖基化反应系统中,芒果苷可浓度依赖性抑制蛋白糖基化终末产物的生成,不同浓度的芒果苷可以一定程度地预防棕榈酸对血管内皮的破坏作用。结论芒果苷对体外蛋白质非酶糖基化终末产物的生成有一定的抑制作用,并具有内皮保护功能。     

氨基胍对糖基化蛋白损伤大鼠血管内皮功能的影响

目的　探讨糖基化终末产物形成抑制药氨基胍对外源性制备的糖基化终末产物损伤大鼠离体胸主动脉环内皮依赖性舒张功能的影响及其机制。方法　采用外源性制备的糖基化牛血清白蛋白孵育大鼠离体胸主动脉环 60min诱导血管内皮损伤 ,观察氨基胍对糖基化牛血清白蛋白所致的血管内皮依赖性舒张反应损伤是否具有保护作用。结果　外源性糖基化牛血清白蛋白明显抑制乙酰胆碱诱导的内皮依赖性血管舒张反应 ,但并不影响硝普钠诱导的内皮非依赖性血管舒张反应。用氨基胍 (50～ 50 0 μmol·L- 1 )预孵育血管环 1 5min ,再与糖基化牛血清白蛋白共同孵育 60min ,呈浓度依赖性降低糖基化终末产物对血管内皮依赖性舒张反应的抑制。此外 ,氧自由基清除剂超氧化物歧化酶 (superox idedismutase,SOD ;2× 1 0 5U·L- 1 )也能完全取消糖基化终末产物的抑制作用 ,并与 50 0 μmol·L- 1 氨基胍的保护作用相似。氨基胍 (50 0 μmol·L- 1 )亦能完全逆转SOD抑制剂二乙基二硫氨甲酸酯 (diethyldithiocarbamate,DETC ;1 0 μmol·L- 1 )诱导产生内源性氧自由基所致的血管内皮依赖性反应的损害。结论　氨基胍能取消糖基化终末产物所致大鼠离体胸主动脉环内皮依赖性舒张反应的抑制 ,氨基胍的这种保护作用可能与其抗氧化作用有关     

银杏叶提取物等5种药物抑制蛋白质体外糖基化作用的比较

目的 :研究银杏叶提取物、葛根素、氨基胍、二甲双胍和普罗布考对蛋白质体外非酶糖基化反应的影响。方法 :分别将上述 5种药物与葡萄糖和牛血清清蛋白孵育 ,并在 4 ,8,12wk时取出 ,用荧光法测定糖基化产物的自发荧光值。结果 :银杏叶提取物组、葛根素组、氨基胍组均能抑制蛋白质体外非酶糖基化在 5 0mmol·L- 1葡萄糖组分别为 (5 .6±s 0 .4 ) ,(8.3± 0 .7) ,(6 .0± 0 .6 )AFU ,与对照组(11.0± 1.0 )AFU比较 ,差异有非常显著意义 (P <0 .0 1) ,其中银杏叶提取物组的抑制作用比氨基胍组更明显。二甲双胍组与对照组相比 ,糖基化产物的荧光值有降低趋势 ,但差异未达到显著水平。普罗布考组对蛋白质糖基化无影响。结论 :银杏叶提取物和葛根素可明显抑制蛋白质体外糖基化反应 ,它们在防治糖尿病血管并发症方面可能有较好的应用前景     

川芎嗪、氨基胍对糖尿病大鼠肾脏组织非酶糖化和细胞凋亡的影响

目的观察川芎嗪、氨基胍对糖尿病大鼠肾脏晚期糖基化终末产物（AGEs）和细胞凋亡的影响。方法将Wistar大鼠随机分为糖尿病组、氨基胍组、川芎嗪组和对照组,灌胃16周后观察肾脏形态结构、凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达和肾皮质AGEs含量。结果电镜下见糖尿病组肾小管上皮细胞呈典型的凋亡改变,氨基胍组和川芎嗪组凋亡减轻。糖尿病组肾小管上皮细胞Bcl-2、Bax表达增多,氨基胍组和川芎嗪组Bcl-2表达较糖尿病组增多,Bax表达减少。氨基胍组和川芎嗪组肾皮质AGEs含量较糖尿病组减少。结论氨基胍、川芎嗪可通过降低糖尿病肾皮质AGEs含量调节凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达,抑制肾脏细胞凋亡。两种药物作用相似。     

5-氨基酮戊酸对人舌麟癌Tea8113细胞株体外光动力杀伤作用的基础研究

目的初步研究体外5-氨基酮戊酸介导的光动力疗法对人舌鳞癌Tea8113细胞的杀伤效应。方法体外培养Tca8113细胞,以5-氨基酮戊酸为光敏剂,半导体激光治疗仪给予光动力疗法,采用MTr法检测光敏剂不同孵育时间、不同光敏剂浓度对Tea8113细胞抑制率的影响。结果5-AIA—PDT作用后,Tea8113细胞生长受到抑制,孵育时间和浓度效应关系显著（P〈0．05）。药物最佳作用浓度为1mmoL／l,最佳孵育时间为6h。结论5-氨基酮戊酸一光动力疗法能有效杀伤Tea8113细胞,光敏剂孵育时间、光敏剂浓度是影响疗效的重要因素。     

氨基胍、黄芩苷对糖尿病大鼠组织非酶糖化及视网膜细胞凋亡的影响

目的研究非酶糖化、凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax与糖尿病视网膜病变（DR）的关系,探讨非酶糖化抑制剂氨基胍和具有非酶糖化抑制作用的中药黄芩苷干预治疗,对DR的治疗作用。方法雄性Wistar大鼠40只,随机平均分为4组,正常对照组、糖尿病组、糖尿病氨基胍（100mg／kg&#183;d）治疗组、糖尿病黄芩苷（150mg／kg&#183;d）治疗组,腹腔注射链脲佐菌素（60mg／kg）诱发糖尿病。16周后,处死大鼠,分离主动脉,测定组织非酶糖化,观察视网膜Bcl-2、Bax的表达,电镜观察细胞凋亡的形态学变化。结果①与正常对照组相比,糖尿病组非酶糖化明显升高（P〈0．001）,氨基胍治疗组、黄芩苷治疗组较糖尿病组非酶糖化明显降低（P〈0．01）,而血糖无明显变化;②糖尿病组视网膜Bcl-2蛋白表达明显减少、Bax蛋白表达明显增加．氨基治疗组、黄芩苷治疗组的Bcl-2蛋白表达明显增加、Bax蛋白表达较糖尿病组明显减少;③透射电镜下见糖尿病视网膜组神经节细胞呈典型的凋亡形态学改变,氨基胍治疗组、黄芩苷治疗组大鼠组织细胞凋亡改变明显减轻。结论①非酶糖化通过调节Bcl-2,Bax蛋白的表达诱导细胞凋亡,而参与DR的发生与发展;②非酶糖化抑制剂通过抑制非酶糖化,调节Bax、Bcl-2的表达抑制细胞凋亡,延缓DR的发展;③黄芩苷对非酶糖化抑制作用与典型非酶糖化抑制剂氨基胍相似,且价格低、副作用少,值得临床推荐应用。     

葛根素对D-半乳糖诱导大鼠抑制蛋白非酶糖基化及增强胰岛素敏感性的作用

目的观察葛根素对D-半乳糖(D-gal)诱导大鼠体内蛋白非酶糖基化反应、胰岛素抵抗、糖耐量和醛糖还原酶(AR)活性的作用。方法除空白对照组外,其余大鼠均采用腹腔注射(ip)D-gal150mg/kg,1次/d×56d致病,D-gal处理大鼠2周后,将大鼠按体重均衡随机分成:模型对照、葛根素和氨基胍3组,然后继续ipD-gal处理同时灌胃给予葛根素和氨基胍(每10ml300mg/kg)或蒸馏水,1次/d×42d;实验结束时,观察葛根素和氨基胍对D-半乳糖诱导大鼠体内晚期糖基化终末产物(AGEs)、糖化血红蛋白(HbA1c)、果糖胺(FRA)、糖耐量、血糖和胰岛素含量,并计算胰岛素敏感指数(ISI),以及醛糖还原酶(AR)活性的作用。结果与空白对照组比较,D-gal处理大鼠出现血糖升高、糖耐量减退(IGT)、糖基化产物(包括HbA1c,FRA和AGEs)和胰岛素含量增高,ISI降低,以及红细胞内AR活性增强(P<0.01);葛根素和氨基胍均能改善D-gal诱导大鼠IGT和降低空腹血糖、糖基化产物和胰岛素含量(P<0.01～0.05),提高ISI(P<0.01),并明显抑制AR活性(P<0.01～0.05)。结论D-gal能诱导大鼠体内糖基化反应、高胰岛素血症、胰岛素抵抗和醛糖还原酶活性增强;而葛根素和氨基胍能抑制蛋白非酶糖基化反应和醛糖还原酶活性,提高胰岛素敏感性,改善高胰岛素血症,提示葛根素可用于治疗糖尿病某些慢性并发症。     

晚期糖基化终末产物的临床病理机制及抑制剂的研究进展

在糖尿病患者体内以及衰老进程中晚期糖基化终末产物（AGEs）是不断 积累的，其可以通过直接成间接的方式对机体产生病理作用。本文概述了AGEs对各种组织或细胞包括心血管组织、肾脏、 大脑和骨组织等的间接病理作用和机制、介导该作用的AGEs受体或其他结合蛋白，以及抑制AGEs形成和作用的药物如氨基胍等。     

荞麦花总黄酮对体内外蛋白质非酶糖基化的抑制作用

目的　探讨荞麦花总黄酮 (TFBF)对体内外蛋白质非酶糖基化终产物 (AGEs)形成的影响。方法　用链脲佐菌素建立大鼠糖尿病模型 ,以不同剂量 (0 1,0 2 ,0 4g·kg-1·d-1)TFBF口服治疗 12wk ,检测血糖、血浆及肾组织果糖胺和AGEs的含量。同时将不同浓度TFBF与葡萄糖和牛血清白蛋白孵育 ,于 4、8、12wk取出 ,用荧光光度法测定糖基化终产物的自发荧光值。结果　TFBF能明显降低糖尿病大鼠血糖含量 (P <0 0 1) ,抑制肾脏果糖胺和肾脏AGEs的形成 (P <0 0 1) ,并呈明显的剂量依赖性。TFBF对体外蛋白质非酶糖基化终产物的生成也有明显的抑制作用 ,孵育时间越长 ,TFBF剂量越大 ,其抑制作用越明显。结论　TFBF对体内外蛋白质非酶糖基化终产物 (AGEs)的形成具有明显的抑制作用。     

氨基胍对糖尿病大鼠非酶糖化和细胞凋亡的影响

目的观察氨基胍对2型糖尿病大鼠肾脏晚期糖基化终末产物（AGEs）和细胞凋亡的影响。方法利用高糖高脂饮食及注射小剂量的链脲佐菌素（STZ）建立2型糖尿病大鼠模型,随机分为糖尿病组、氨基胍组,并设对照组,分别于16周观察大鼠肾脏形态结构、肾脏凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达和肾皮质AGEs含量。结果电镜下见糖尿病组肾脏小管上皮细胞呈典型的凋亡改变,氨基胍组细胞凋亡明显减轻。免疫组化显示,糖尿病组肾小管上皮细胞中Bcl-2、Bax表达较对照组增多,氨基胍组Bcl-2蛋白表达较糖尿病组增多,Bax蛋白表达减少。氨基胍组大鼠肾皮质AGEs含量较糖尿病组明显减少。结论氨基胍可通过降低糖尿病肾皮质AGEs含量调节凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达,抑制肾脏细胞凋亡。     

3-脱氧葡萄糖醛酮体外生成AGEs模型的建立

目的：建立可用于药物筛选的体外蛋白质非酶糖基化模型。方法：37℃孵育1周后用流动注射法于波长（λ：Ex／Em）：370／440nm处测定糖基化终产物（AGEs）。结果：反应1周后，反应体系内3-脱氧葡萄糖醛酮（3．DG）浓度与AGEs的吸收度值呈线性关系，y=22．946x＋22．846；r^2=0．9985。结论：随着各反应体系中底物3-DG浓度的增加及反应时间的延长，蛋白质非酶糖基化反应增强3-DG为底物与牛血清白蛋白组成反应系统，能较可靠地反映AGEs的生成变化，有望成为体外蛋白质非酶糖基化的1种新模型。     

糖和晚期糖基化终末产物对牛肾小球系膜细胞的影响

目的 研究比较高糖和晚期糖基化终产物(AGEs)在糖尿病肾病发病中的作用。方法 将牛血清白蛋白(BSA)和D葡萄糖在37℃培养箱内孵育60天制备AGE-BSA，采用MTT比色法，观察不同作用时程和不同浓度的高糖和AGEs-BSA对肾小球系膜细胞(GMC)增殖的影响。结果 高糖和AGEs的作用相似，在培养早期(24～48h)剌激GMC增殖，此后48～72h对GMC的增殖起抑制作用。结论 在糖尿病肾病的发病中AGEs的形成和高血糖起着同样重要的作用。     

Inhibitory effects of Terminalia chebula extract on glycation and endothelial cell adhesion

Terminalia chebula Retz. has been used in India for a long time to treat many diseases, and its extract was reported to have antidiabetic activity in vivo. In this study, T. chebula methanolic extract (TCE) containing 2.7 % chebulic acid was evaluated for its preventive effects against the formation of advanced glycation end products (AGEs) and endothelial cell dysfunction. When the effects of TCE on AGE formation and on protein crossing-linking by glycation with D-threose and lens crystallines were examined, TCE showed inhibitory activity in a dose-dependent manner, and the concentration of 1000 μg/mL presented an activity similar to that of 5 mM aminoguanidine as a positive control. Upon investigating the protective activity of TCE against AGE-induced vascular endothelium dysfunction, human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) incubated with 100 μg/mL of AGEs had significantly enhanced reactive oxygen species (ROS) formation, whereas the treatment of T. chebula reduced AGE-induced ROS generation. The incubation of HUVEC with 100 μg/mL of AGEs caused a considerable increase in THP-1 monocytic cell adhesion, but this adhesion was reduced by the treatment of TCE. These results suggest that TCE is a potential agent for alleviating diabetic complications.     

HPLC-FIA法检测糖基化终末产物方法的建立

目的:建立糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)的一种检测方法。方法:利用高效液相色谱议(high performance liquid chromatography,HPLC)构建流动注射分析系统,检测体外制备的AGEs。荧光检测的激发波长和发射波长(Ex／Em)为370／440 nm。结果:Ex／Em为370／440 nm时,在原反应液的0．1～0．000 1浓度范围内仍有良好的线性,Y=67 979．98X+4．38,r=0．999 99;平均回收率98．5％,RSD= 3．4％。结论:流动注射分析(flow injection assay,FIA)是较可靠的检测AGEs水平的新方法。     

Enzyme activity and AGE formation in a model of AST glycoxidation by D-fructose in vitro

Non-enzymatic glycation as the chain reaction between reducing sugars and free amino groups of proteins has been shown to correlate with physiological ageing and severity of diabetes. The process involves oxidative steps (glycoxidation). In this paper, the effect of D-fructose as a reactive sugar on aspartate aminotransferase (AST) as a model protein was monitored by measurements of the enzyme activity and formation of fluorescent advanced glycation end products (AGEs). Change in the AST activity was considered as a measure of the overall protein damage caused by glycation, and total AGEs and pentosidine represent, at least partly, the formation of glycoxidation products. Catalytic activity of AST in an incubation mixture containing D-fructose (50 mmol L(-1)), decreased compared to control values to 42% (p < 0.05) and to 11% (p < 0.05) on the 5th and on 21st day of incubation, respectively. In the presence of fructose, total fluorescent AGEs concentration was significantly higher since 5th day of incubation (110%, p < 0.05) and the fluorescent pentosidine concentration from 15th day of incubation (117%, p < 0.05) compared to control values, respectively. Catalytic activity of AST clearly and quantitatively demonstrated functional changes in the enzyme molecule caused by structural modifications initiated by fructose, while the evaluation of AGE formation and especially that of pentosidine by fluorescence measurement was less reliable.     

糖基化终产物对人肾小球系膜细胞细胞外基质金属蛋白酶促进因子基因表达的影响

目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对人肾小球系膜细胞(HMRC)细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)基因表达的影响.方法 在培养的人肾系膜细胞(HRMC)中分别加入不同浓度AGEs干预24 h和同一浓度AGEs干预HRMC不同的时间点,以无血清培养基(DMEM)和相应浓度的牛血清白蛋白(BSA)为对照.RT-PCR法检测EMMPRIN mRNA的表达水平.结果 与对照组相比,经各浓度及各时间点AGEs干预后, HMRC的EMMPRIN mRNA水平与对照组相比有显著差异(P＜0.01),且随AGEs浓度以及干预时间增加,EMMPRIN mRNA水平也明显逐渐降低(P＜0.05).结论 EMMPRIN可能是AGEs所致糖尿病肾病的因素之一.     

外源性糖基化终末产物对体外培养的内皮细胞损伤机制的研究

目的:探讨外源性糖基化终末产物(AGEs)对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的作用机制.方法:外源性AGEs与HUVEC共孵12 h,以组胺(Hi)和过氧化氢酶(CAT)为对照,检测内皮细胞的活性、单层通透性、凋亡率及细胞培养液生化指标,并且观察内皮细胞形态学改变.结果:外源性AGEs呈剂量依赖性(40 mg/L、120 mg/L、160 mg/L)地降低了内皮细胞的活性、增加了内皮细胞的单层通透性及凋亡率、增加了细胞培养液中丙二醛(MDA)含量,并降低了过氧化物歧化酶(SOD)的含量(均P < 0.05),与阳性对照组Hi的作用相当(均P ＞ 0.05).CAT明显抑制了外源性AGEs对内皮细胞的损伤作用.结论:外源性AGEs诱导血管内皮细胞损伤,其机制可能与氧化应激有关.     

糖基化终末产物所致大鼠肾皮质损伤与Na＋/H＋交换蛋白1关系的探讨

目的观察Na＋/H＋交换蛋白1（NHE-1）抑制剂cariporide对糖基化终末产物（AGEs）所致肾皮质损伤的影响,探讨NHE-1在AGEs所致肾损伤中的作用。方法参考文献方法制备肾皮质薄片,用外源性AGEs与肾薄片在DMEM培养液（37℃,95%O2和5%CO2）孵育120 min,以乳酸脱氢酶（LDH）漏出率、丙二醛（MDA）含量,谷胱甘肽（GSH）活性和NHE-1表达为指标,观察NHE-1抑制剂cariporide、anti-RAGEs对AGEs所致肾皮质损伤的影响。结果AGEs能明显上调肾皮质NHE-1表达,使肾皮质中MDA含量和孵育液中LDH漏出率分别升高2.2倍和2.4倍（P〈0.01）,GSH活性降低3.5倍（P〈0.01） Cariporide（0.1、1μmol.L-1）能显著抑制AGEs引起的这些变化（P〈0.01）。anti-RAGE也能明显阻断AGEs对肾皮质的损伤作用（P〈0.01）。结论AGEs引起的肾皮质损伤主要是通过与受体RAGE结合所导致,NHE-1激活可能参与了AGE-RAGE反应引起肾损伤。     

二甲双胍对晚期糖基化终产物诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察晚期糖基化终产物（advanced glycation endproducts,AGEs）对血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）增殖的影响及二甲双胍的干预作用。方法：生长状态良好的VSMCs,用不同浓度的AGEs（50、100、200、400 mg/L）干预细胞不同时间（12、24、48、72 h）;不同浓度的二甲双胍（10-3,10-4,5×10-5,10-5,10-6mol/L）与200 mg/L AGEs共干预不同时间（12、24、48、72 h）,MTT法测定VSMCs增殖。结果：50 mg/L AGEs干预72 h时表现出促进增殖的作用,200 mg/L AGEs干预12 h即有增殖促进作用,24 h时作用最强,400 mg/L AGEs各时间点作用同200 mg/LAGEs组;10-3与10-4mol/L二甲双胍干预24 h抑制作用最强,持续到72 h,10-6mol/L抑制增殖作用降低,24 h起效,72 h时仍有作用。结论：AGEs呈浓度和时间依赖性地促进VSMCs增殖;二甲双胍可抑制AGEs诱导的VSMCs增殖作用。