参附对大鼠肾缺血再灌注损伤NF-κB、细胞黏附分子-1、TNF-α表达的影响

目的:观察参附注射液(shenfu injection,SF)对大鼠肾缺血再灌注损伤细胞黏附分子-1(ICAM-1)、NF-κB、TNF-α表达的影响。方法:采用切除右肾,无创动脉夹夹闭左肾动脉45 min,再灌注2 h制作在体肾缺血再灌注损伤模型。36只SD大鼠随机分为缺血再灌注组、假手术对照组、参附预处理组(10 mL/kg),每组12只。免疫组化法检测肾组织中NF-κB、ICAM-1蛋白含量,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清、肾组织中TNF-α的表达。结果:缺血再灌注组NF-κB、ICAM-1表达和TNF-α含量明显高于假手术对照组(P<0.01)。与缺血再灌注组相比,参附预处理组NF-κB、ICAM-1表达和TNF-α含量明显降低(P<0.01)。结论:参附通过抑制NF-κB的表达,从而下调其下游的TNF-α、ICAM-1的表达,发挥其肾脏保护作用。     

参附注射液对大鼠急性缺血/再灌注损伤心肌核转录因子-κB的影响

目的:探讨参附注射液保护大鼠心肌缺血 再灌注损伤作用与机理。方法:采用大鼠心脏左冠状动脉前降支缺血 再灌注模型,缺血30min ,再灌注6 0min。2 4只SD大鼠随机分为3组:假手术组;缺血 再灌注组;参附注射液组。酶联免疫吸附实验法检测血浆中肿瘤坏死因子 -α(TNF- α)、白细胞介素- 6(IL- 6 )浓度,免疫印记法测心肌核转录因子- κB(NF -κB)活性水平,电镜观察心肌超微结构。结果:缺血 再灌注组心肌NF -κB的活性,血浆TNF- a、IL -6浓度较假手术组明显上升(P <0 .0 1)。参附注射液组中上述指标与缺血 再灌注组比较均显著下降(P <0 .0 1) ,电镜下参附注射液组中心肌超微结构较缺血再灌注组明显减轻并接近正常。结论:参附注射液通过抑制缺血心肌中NF- κB的活性,降低促炎因子水平,对心肌起保护作用。     

桑枝多糖预防性给药对肾缺血再灌注损伤模型小鼠炎症反应的影响及机制研究

目的:研究桑枝多糖(RMP)预防性给药对肾缺血再灌注损伤(RIRI)模型小鼠炎症反应的影响及可能的作用机制。方法:将60只C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、阿托伐他汀组(阳性对照,15 mg/kg)和RMP低、中、高剂量组(300、600、1 200mg/kg)。除假手术组外,其余5组小鼠复制RIRI模型。术前24 h灌胃给药,每天给药1次,连续给药1周。再灌24 h后处死各组小鼠,检测其血清中肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平;光镜下观察其肾脏病理组织学变化;采用酶联免疫吸附法测定其血清中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、IL-10和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;采用Western blot法测定其肾皮质中Toll样受体4(TLR4)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组小鼠血清中Scr、BUN水平明显升高(P<0.01);肾组织出现典型的炎性改变,肾小管上皮细胞大量变性、坏死,并见炎性细胞浸润;血清中IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α水平明显升高(P<0.01);肾皮质中TLR4、p38MAPK和p-p38MAPK蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠血清中Scr、BUN水平均明显降低(P<0.05或P<0.01);肾组织病理损伤均不同程度改善,尤以RMP中、高剂量组改善最为明显;各给药组小鼠血清中IL-1β、IL-6水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),阿托伐他汀组和RMP高剂量组小鼠血清中IL-10水平进一步升高(P<0.01),阿托伐他汀组和RMP中、高剂量组小鼠血清中TNF-α水平明显降低(P<0.05或P<0.01);各给药组小鼠肾皮质中TLR4、p-p38MAPK蛋白表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:RMP预防性给药能改善小鼠RIRI,其机制可能与通过抑制TLR4/p38MAPK通路,进而减轻炎症反应有关。     

银杏叶总黄酮对肾缺血-再灌注损伤大鼠p38 MAPK活性的影响

目的观察银杏叶总黄酮(TFG)对肾缺血-再灌注(I-R)损伤大鼠p38丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)活性的影响。方法 120只SD大鼠随机均分为假手术组I、-R组和TFG预处理组(TFG 250 mg/kg,每天3次)。3 d后采用夹闭双侧肾蒂致肾缺血45 min后再灌注制作大鼠肾I-R损伤模型。Western blot检测p38 MAPK和磷酸化p38 MAPK蛋白表达;免疫组化方法检测肾组织磷酸化p38 MAPK的分布情况。结果磷酸化p38 MAPK表达活性在再灌注10 min开始增加,1 h达最高峰,持续至24 h仍高于正常水平,且主要在肾小管细胞表达。TFG预处理组磷酸化p38 MAPK的表达较I-R组明显减弱(P<0.01)。结论 TFG可能通过抑制肾I-R损伤大鼠p38 MAPK的活化而发挥防治作用。     

依达拉奉抑制缺血再灌注肾脏ICAM-1的表达

目的探讨依达拉奉对大鼠肾脏缺血再灌注后ICAM-1表达的影响。方法将24只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(S组)、缺血再灌注组(I组)、依达拉奉治疗组(E组),其中S组和E组大鼠均夹闭双侧肾蒂45 min、再灌注24 h制成肾缺血再灌注损伤动物模型。缺血前和再灌注即刻,E组经尾静脉给予依达拉奉3 mg/kg,S组和I组经尾静脉给予等量生理盐水。于再灌注24 h取左肾苏木精-伊红染色观察炎症细胞浸润情况,免疫组织化学观察ICAM-1表达。结果光镜下S组结构正常,I组中大量炎症细胞浸润肾间质,EB组炎症细胞浸润减少;免疫组织化学显示,I组中ICAM-1表达较S组上升,EB组则较I组下降(P<0.05)。结论依达拉奉抑制大鼠肾脏缺血再灌注损伤时ICAM-1的表达。     

HIF-1α在肾缺血-再灌注损伤及高压氧、丹参酮Ⅱ_A治疗中的表达及意义

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在肾缺血-再灌注损伤及其治疗中的表达及意义。方法:选用Wistar大鼠84只,随机分为空白对照组、缺血组、缺血-再灌注组(1,3,5 h)、高压氧组(1,3,5 h)、丹参酮ⅡA组(1,3,5 h)及假手术组(1,3,5h)。空白对照组和缺血组及其余各组的每一时间点各6只。各组均先切除右肾,取左肾研究。取左肾部分皮髓质用4%的多聚甲醛固定并制作蜡块,行石蜡切片免疫组化检测各组肾HIF-1α蛋白的表达,另一部分提取总RNA,采用荧光定量PCR检测各组肾HIF-1αmRNA的表达。取肾后通过下腔静脉采血,检测MDA、TNF-α、Urea及Scr。结果:(1)Urea、HIF-1α蛋白表达及HIF-1αmRNA表达分别在假手术组5,3,1 h增高与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)Urea、Scr、MDA、TNF-α在缺血-再灌注组(1,3,5 h)增高与空白对照组、缺血组比较,其差异有统计学意义(P<0.05)。HIF-1αmRNA在缺血组呈高表达,缺血-再灌注组呈低表达,HIF-1α蛋白在缺血组和缺血-再灌注组均呈高表达。(3)经高压氧、丹参酮ⅡA治疗后,Urea、Scr、MDA、TNF-α降低,HIF-1αmRNA增高,与缺血-再灌注组比较,差异有统计学意义(P<0.05),HIF-1α蛋白的表达经丹参酮ⅡA治疗后降低,差异有统计学意义(P<0.05),而经高压氧治疗后变化不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:(1)手术本身的创伤对BUN的含量和HIF-1α的表达有影响。(2)HIF-1α在肾缺血-再灌注损伤中其基因的表达水平与蛋白的表达水平不同步。肾缺血-再灌注后,MDA和TNF-α含量增高以及肾组织中HIF-1α蛋白的过度表达是加重肾功能损害的重要原因。(3)抑制再灌注后氧自由基和致炎因子的产生是丹参酮ⅡA和高压氧产生肾保护效应的共同通路。丹参酮ⅡA对肾组织中HIF-1α蛋白的表达具有明显的抑制作用,这可能是肾缺血-再灌注后丹参酮ⅡA产生肾保护效应的另一重要机制。而高压氧对肾组织中HIF-1α蛋白的表达无明显的抑制作用,表明再灌注后高压氧可能没有通过HIF-1α环节发挥肾保护作用。     

雌激素联合依达拉奉对大鼠脑缺血再灌注的神经保护作用

目的通过观察雌激素和依达拉奉对大鼠脑局灶性缺血再灌注损伤后ICAM-1、TNF-α表达、SOD活力和MDA、NO含量的影响,探讨雌激素联合依达拉奉对大鼠脑缺血再灌注损伤后的脑保护作用及其可能机制。方法选择健康雄性SD大鼠200只,随机分为5组,即假手术组(SO)、缺血再灌注组(I/R)、依达拉奉组(Ed)、雌激素组(Es)和雌激素联合依达拉奉组(C),每组40只。建立大鼠右侧大脑中动脉闭塞局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组化法测定大鼠大脑皮质ICAM-1、TNF-α表达情况,用生化法测定各组脑缺血再灌注后SOD活力、MDA、NO含量。结果在I/R组缺血侧大脑皮质各个时间点ICAM-1和TNF-α的表达明显高于SO组和Ed组、Es组、C组(P<0.01)。Ed组各个时间点ICAM-1和TNF-α的表达明显低于Es组和C组(P<0.05)。Ed组、Es组、C组及SO组脑组织SOD活力均高于I/R组(P<0.05),脑组织MDA及NO含量显著低于I/R组(P<0.05)。C组NO、MDA含量低于Es组、Ed组,C组SOD活力高于Es组(P<0.05)。结论雌激素和依达拉奉能通过抑制TNF-α的激活、减少ICAM-1的表达,从而减轻神经元的炎性反应,起到保护大脑的作用;雌激素和依达拉奉能增强SOD活力、减少MDA及NO含量,改善自由基代谢,有效减轻局灶性脑梗死引起的缺血性损伤。二者联合应用效果更好。     

参附注射液对大鼠小肠缺血-再灌注后肾损伤的影响

目的 观察参附注射液(SF)对大鼠小肠缺血-再灌注后肾结构、功能和肾组织中bcl-2、bax表达水平的影响. 方法将36只SD大鼠随机平分为假手术组 (C组),缺血-再灌注＋0.9%氯化钠溶液组(IR＋NS组),缺血-再灌注＋参附注射液预处理组(IR＋SF组),各12只. IR＋NS组和IR＋SF组夹闭大鼠肠系膜上动脉60 min后松开建立小肠缺血-再灌注模型,C组穿线但不结扎. C组和IR＋NS组分别于阻断前30 min用微量泵经股静脉恒速泵入0.9%氯化钠溶液10 mL&#8226;kg^-1,IR＋SF组同法泵入参附注射液10 mL&#8226;kg^-1. 光镜下观察肾组织结构,i-STAT自动分析仪检测血清尿素(Urea)及电解质含量,免疫组化方法检测肾组织中bcl-2、bax蛋白的表达,TUNEL法检测肾脏细胞的凋亡水平. 结果 光镜下可见IR＋NS组肾组织结构损伤较IR＋SF组严重. IR＋NS组血清Urea和 钾离子(K＋)水平分别为(15.88±1.38 )和(6.88±0.43)mmol&#8226;L^-1, C组分别为(5.82±0.39)和(4.28±0.24 ) mmol&#8226;L^-1,IR＋SF组分别为(8.03±0.77)和(5.03±0.31 )mmol&#8226;L^-1,IR＋NS组和IR＋SF组与C组比较,差异有统计学意义(P＜0.01),IR＋SF组较IR＋NS组显著降低(P＜0.01). IR＋NS组bcl-2和bax阳性细胞率分别为(0.242 5±0.036 5)%和(0.281 7±0.029 2)%,显著高于C组[分别为(0.013 7±0.008 6)%和(0.011 7± 0.009 4)%](P＜0.01), IR＋SF组分别为(0.176 3±0.030 2)%和(0.196 7±0.024 6)%,较IR＋NS组显著降低(P＜0.01). C组凋亡指数(apoptotic index,AI)为(0.014 2±0.009 0)%,IR＋NS组为(0.179 2±0.028 4)%,IR＋SF组为(0.124 2±0.026 4)%,IR＋NS组和IR＋SF组与C组比较,差异有统计学意义(P＜0.01),IR＋SF组较IR＋NS组显著降低(P＜0.01). 结论 参附注射液对小肠缺血-再灌注造成的肾损伤组织具有保护作用.     

促红细胞生成素对大鼠肾缺血再灌注细胞间黏附分子-1及P选择素表达的影响

目的:探讨重组人促红细胞生成素(rHuEPO)对大鼠肾缺血再灌注细胞间黏附分子-1(ICAM-1)及P选择素(Ps)表达的影响。方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、治疗组,后2组建立肾缺血再灌注模型,造模前治疗组尾静脉一次性注射rHuEPO3000u·kg-1,其余2组给予生理盐水,各组再按再灌注时间分为1、6、12、24h取材组(n=6),测定各时间点肾髓过氧化物酶(MPO)水平,观察肾组织病理学变化,检测肾组织ICAM-1和Ps的表达情况。结果:与模型组比较,治疗组病理学变化明显改善,MPO、ICAM-1和Ps水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:rHuEPO可能通过抑制细胞间黏附分子介导的炎症反应,减轻肾缺血再灌注损伤。     

氟伐他汀对高脂血症兔心肌缺血再灌注损伤心肌局部细胞间粘附分子-1的影响

目的:研究氟伐他汀对高脂血症兔心肌缺血再灌注损伤心肌局部细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法:30只高脂喂养的日本大耳白兔随机分为3组(n=10):缺血再灌注组;氟伐他汀组,缺血再灌注前3 h,氟伐他汀10 mg·kg-1口服给药;假手术组。实验中监测心电图及心功能,实验完毕取心肌组织,Evans蓝及氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测心肌梗死程度,逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)测心肌局部ICAM-1 mRNA表达。结果:缺血再灌注后,与缺血再灌注组相比,氟伐他汀组心肌局部ICAM-1mRNA表达降低(P<0.01),心肌梗死程度降低(P<0.01),心功能显著改善。结论:ICAM-1mRNA表达增高是心肌缺血再灌注损伤的重要因素,氟伐他汀短期预治疗可降低ICAM-1 mRNA表达,降低心肌梗死程度,改善心功能。