c—myc癌基因产物在胰腺癌组织中的表达及其临床意义的研究

用免疫组织化学方法,对59例胰腺癌组织和11例癌旁组织的石蜡包埋组织切片进行了c-myc P~(62)表达水平的研究。结果表明:1.胰腺癌与c—myc P~(62)有关,癌组织与癌旁组织有显著差异;2.c—myc P~(62)与胰腺癌的临床分期有一定关系;3.c—myc P~(62)与胰腺癌的病理组织学类型、分化程度、发生部位及肿瘤大小无明显关系,对判断胰腺癌患者预后的意义不大。     

P~(53)、C—myc、H—ras和HP基因检测在宫颈癌中的研究

本文收集的60例活检宫颈癌组织,对同一病例同时进行HPV、C-myc、H-ras和P~(53)对比研究发现85％的组织中感染HPV,尤其是HPV_(16)和HPV_(18)(78.43％与21.56％),表明HPV_(18)和HPV_(16)作为宫颈癌病因依据是充分的,但不是唯一因素。在癌基因研究中,C—myc扩增率比H—ras高(33％与6.6％),C—myc扩增在HPV感染阳性组织中占89.47％,而HPV_(16)占76.5％;HPV_(18)仅占11.8％,表明HPV DNA,尤其是HPV_(16)DNA对细胞基因的整合而激活C—myc原癌基因,起到了一定的协同致癌作用。C—myc及H—ras癌基因扩增和重排与P~(53)基因杂合性丢失似无关,而P~(53)基因杂合性丢失率在HPV感染阴性组织中比阳性组织高(89％与7.8％),提示P~(53)基因杂合性丢失与HPV感染无明显关。而未被HPV感染的宫颈癌组织中野生型P~(53)基因丢失可能是导致癌瘤的关键。     

不同表型的平滑肌细胞c-sis和c-myc基因表达的研究

平滑肌细胞(SMC)增生在动脉粥样硬化(AS)病变发生过程中起关键作用,增生的 SMC 由收缩型转变成合成型,分泌大量细胞外基质。而 c—sis 和 c—myc 基因在控制细胞增生过程中起重要作用。本文用异羟基洋地黄毒甙配基—durp 为底物,随机插入法进行 DNA 标记,通过酶联免疫斑点杂交法检测了胎儿(10例)和成人(6例)主动脉中膜、动脉硬化斑块和斑块旁中膜(6例)     

姜黄素和TSA对胃癌c—myc表达影响

目的了解姜黄素和TSA对胃癌c—myc基因表达影响,探讨组蛋白乙酰化／去乙酰化的动态平衡在胃癌基因表达和调控中的意义。方法进行胃癌细胞株SGC-7901和MGC803培养,然后加入不同浓度的组蛋白乙酰化酶抑制剂姜黄素和组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA分别进行干预,RT—PCR检测c—myc的mRNA的表达。结果通过RT—PCR的检测我们发现随着姜黄素的浓度增加及TSA浓度的减小c—myc的表达受到抑制（P〈0．01）。结论姜黄素与TSA对c—myc表达影响作用是相反的。     

胶质瘤中端粒酶逆转录酶、c—myc、cyclin D1表达与预后

目的 探讨端粒酶逆转录酶（hTERT）、c—myc、cyclin D1基因在胶质瘤中的表达与预后的关系。方法 收集56例手术切除的胶质瘤标本，应用原位杂交技术和免疫组化S-P法分别检测胶质瘤组织中hTERT和c—myc、cyclin D1基因的表达；6例正常脑组织作为对照。并对检测结果与随访结果进行综合分析。结果 56例胶质瘤中，30例表达hTERT，阳性率为53．6％；33例表达c—myc基因，阳性率为58．9％；32例表达cyclin D1基因，阳性率为57．1％。正常脑组织不表达hTERT、c—myc、cyclin D1。随着胶质瘤分级的升高，hTERT和c—myc、cyclin D1基因表达增强（P〈0．05）。hTERT与c—myc、cychn D1基因的表达两两成正相关关系（P〈0．05），三者的表达均与患者生存时间成负相关关系（P〈0．01）。结论 hTERT、c—myc、cyclin D1基因的过表达与胶质瘤细胞的恶性变和过度增殖有关，三者联合检测可作为临床判断胶质瘤患者预后的重要指标。     

三种癌基因片段的提取

将载有v—fos、c—sis和c—myc的PBR322转化HB101,并在LB培养基中扩增。用碱变性法提取质粒,透析袋法纯化v—fos、c—sis和c—myc基因片段。     

反义核酸对人白血病HL—60细胞中c—myc基因表达的抑制

研究两个反义核酸（18mer，21mer）对人白血病HL—60细胞中c－myc基因表达的抑制作用。用HL－60活细胞计数，RNA含量的RT－PCR测定和c－myc基因蛋白的免疫组化染色检查。结果：两个反义寡核苷酸都能抑制HL－60细胞的增殖，增殖抑制率为11％～75％。反义核酸还抑制c－mycmRNA和Myc蛋白的表达，而对c－mcy基因正常表达的红白血病细胞K562的增殖和PHA刺激的人淋巴细胞的增殖没有影响。结论：反义寡核苷酸能抑制c－myc基因的过度表达。     

甲基化抑制剂5－Aza－CdR对肺癌A549细胞株DNMT1及c－myc、MKi－67、p53基因表达的影响

目的：探讨甲基化抑制剂5－氮杂－2′脱氧胞苷（5－Aza－CdR）对肺癌A549细胞株中DNA甲基转移酶1（DNMT1）、c－myc、MKi－67和p53基因表达的影响。方法将肺癌A549细胞株分为两组,实验组采用5－Aza－CdR处理,对照组不加药处理;药物处理72 h后,采用FQ－PCR技术检测A549细胞株DNMT1及c－myc、MKi－67、p53基因mRNA的表达,Western blot检测DNMT1及c－myc、MKi－67、p53蛋白的表达。结果实验组DNMT1、c－myc和MKi－67mRNA的表达量明显低于对照组,而p53 mRNA的表达量明显高于对照组,两组比较差异均有统计学意义（ P＜0.01）;实验组DNMT1、c－myc和MKi－67蛋白的表达量明显低于对照组,而p53蛋白的表达量明显高于对照组,两组比较差异均有统计学意义（ P＜0.01）。结论甲基化抑制剂5－Aza－CdR可使肺癌A549细胞中DNMT1、c－myc、MKi－67基因表达降低,p53基因表达升高,这可能与基因启动子区域出现的去甲基化有关,可为去甲基化药物临床治疗肺癌提供理论依据。     

皮肤鳞状细胞癌中p53、bcl-2和c-myc的表达及意义

目的 研究p53、bcl—2和c—myc在皮肤鳞状细胞癌中的异常表达及其与癌分化程度的关系。方法 应用免疫组织化学S-P法检测58例皮肤鳞状细胞癌中p53、bcl—2和c—myc的表达水平。结果 58例皮肤鳞状细胞癌中p53、bcl-2和c—myc的阳性表达率分别为48．3％、67．2％和32．8％。结论 p53、bcl—2和c—myc异常表达在皮肤鳞状细胞癌的发生、发展中起重要作用，并与皮肤癌的恶性程度有关。     

原癌基因c—fos及c—myc在IL-13诱导Dami细胞分化中的表达关系

目的研究重组人白细胞介素-13（recombinant human interleukine-13,rhIL-13）诱导Dami细胞分化中原癌基因c-los及c—myc表达,探索原癌基因c-fos及c—myc在IL-13信号传导通路中的作用。方法采用RT—PCR检测rhIL-13分别作用不同时间GPⅡbmRNA、c-losmRNA和e-myc mRNA的表达;Western Blotting检测c—Fos和c—Mye的表达。结果IL-13促进巨核细胞表面标志物GPⅡb mRNA表达;诱导原癌基因c—fos mRNA和蛋白的表达,并随后下调原癌基因c-mycmRNA和蛋白的表达。结论原癌基因c—fos与c—myc参与了IL-13诱导的信号传导并具有相关性。     

c-myc反义核苷酸对淋巴瘤细胞系CA46凋亡的作用

目的 研究c—myc反义核苷酸对体外培养的淋巴瘤细胞系CA46基因表达及诱导凋亡的作用。方法 c—myc反义核苷酸(ASPO)为人工合成的针对c—myc基因的一段外源性基因片段，以无义的寡核苷酸作为对照，导入CA46细胞后观察其基因表达及诱导凋亡的作用。流式细胞仪检测c—myc基因产物表达，荧光染色观察CA46细胞的凋亡形态，流式细胞仪定量检测凋亡百分率，TUNEL检测加用VP16后的CA46原位凋亡。结果 c—myc反义核苷酸(ASPO)作用CA46细胞后，RT—PCR示c—myc mRNA表达降低。荧光染色ASPO组细胞胞体缩小，胞膜完整，核质浓缩，出现黄绿色不规则或局部致密荧光，凋亡细胞约占23．3％，而SPO组及空白组未见明显凋亡细胞，细胞呈均匀绿色荧光。流式细胞仪检测仅用VP16 10mg／L 3d，ASPO作用2d后加VP16 10mg／L 1d及ASPO作用3d均出现凋亡峰，凋亡率分别为16％，72％及52％，而SPO组及空白但均未见凋亡峰。流式细胞仪检测CA46细胞c—myc蛋白为95．3％，经ASPO作用后降为23．7％，同时SPO组c—myc表达率为90．6％，TUNEL检测ASPO组凋亡细胞为25．5％，加用VP16后的CA46凋亡率为36．7％。结论 体外实验中CA46特异地被c—myc反义核酸抑制生长，细胞出现凋亡表现，c—myc mRNA癌基因表达降低。     

川芎嗪对血管平滑肌细胞增殖抑制作用的探讨

目的观察川芎嗪（TMP）对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的抑制作用，并探讨其作用机制。方法利用大鼠颈动脉血管内膜损伤可引起VSMC增殖、血管增厚为实验模型。行增殖细胞核抗原（PCNA）、Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原组织化学检测，纤维母细胞生长因子（FGF）、血小板源生长因子（PDGF）、Bcl-2、Pax、C—myc原位杂交检测及TUNEL染色。结果内皮损伤后VSMC增殖，血管管腔面积减少；低剂量TMP治疗组有轻度抑制VSMC增殖的作用，使管腔面积有所增加；TMP高剂量抑制作用明显增强。高剂量TMP组和假手术组PCNA、Ⅳ胶原、PDGF的表达低于模型组；TMP低剂量组与模型组相比无显著差异。高、低剂量TMP组和假手术组的Ⅰ型胶原、FGF、Bcl-2、c—myc和TUNEL的表达低于模型组。高、低剂量TMP组和假手术组的Bax表达高于模型组。结论TMP能抑制平滑肌细胞Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原、FGF、PDGF表达；影响Bcl-2、c—myc、Bax基因表达，促进血管平滑肌细胞凋亡；达到抑制平滑肌细胞增殖的作用。     

高三尖杉酯碱对白血病原癌基因bcl-2、c—myc、抑癌基因p15的影响

目的 探讨高三尖杉酯碱对白血病治疗作用的机制。方法 用细胞培养、DNA片段凝胶电泳、Western blot和cDNA阵列杂交等方法检测高三尖杉酯碱对白血病HL-60细胞凋亡及原癌基因表达的影响。结果 高三尖杉酯碱使HL-60细胞bcl-2蛋白表达明显较低，c—myc表达较弱，而p15表达较强。结论 高三尖杉酯碱抑制HL-60细胞增殖、诱导其分化和凋亡，其机制可能与高三尖杉酯碱下调原癌基因bcl-2、c—myc及上调抑癌基因p15有关。     

结肠癌及其癌前病变中P~(53),c-myc蛋白的表达及与细胞凋亡关系的研究

[目的 ]探讨P53,c myc蛋白在结肠癌及癌前病变中的表达及与细胞凋亡的关系 .[方法 ]应用免疫组织化学染色及TENEL法 .[结果 ]P53,c myc蛋白的阳性表达率在结肠癌中分别为 60 % ( 2 4 / 4 0 )和 78% ( 3 1/ 4 0 ) ,在结肠腺瘤中分别为 4 0 % ( 6/ 15 )和 5 3 % ( 8/ 15 ) ,与正常组织中的 0 % ( 0 / 8)和 13 % ( 1/8)相比有显著性差异 .凋亡指数在结肠腺瘤中明显增高 ,与正常结肠组织比较有非常显著性差异 ;凋亡指数在结肠腺癌中明显降低 ,与结肠腺瘤比较有非常显著性差异 .P53阴性的结肠腺瘤凋亡指数增高 ,与P53阳性的结肠腺瘤凋亡指数相比有显著性差异 ;c myc蛋白阳性的结肠腺癌凋亡指数与c myc蛋白阴性的结肠腺癌凋亡指数相比有显著性差异 .[结论 ]P53,c myc蛋白的过表达在结肠组织恶性转化过程中起重要作用 ;结肠癌的发生与细胞凋亡调控失调有密切关系 ,其中P53蛋白对细胞凋亡起抑制作用 ,而c myc蛋白对细胞凋亡起促进作用 .     

人乳头瘤病毒与中国妇女宫颈癌相关性的研究(Ⅴ.人乳头瘤病毒与细胞原癌基因协同致癌的可能性)

本研究以α—~(32)P—dCTP标记的c—myc,c—fos和c—Ha—ras癌基因为探针,应用限制性内切酶技术和Southern印迹杂交方法对15例人乳头瘤病毒16型(HPV—16)基因组已发生整合的宫颈癌标本中上述三种癌基因进行了分析。结果表明,在含有HPV—16基因组整合的大多数宫颈癌组织(10/15)中,细胞myc(c—myc)原癌基因表现出不同程度的扩增或(和)重排,个别宫颈癌组织同时存在着c—ras原癌基因的重排,而HPV—16阳性但未发生整合的2例正常宫颈组织中(亚临床乳头瘤病毒感染)无类似的分子改变,提示c—myc原癌基因的扩增或(和)重排可能与HPV—16的整合有关,并协同参与致癌过程。     

IFN-α及其联合GMCSF对CML患者骨髓细胞凋亡相关基因表达的影响

目的 :探讨IFN α及IFN α联合GM CSF调节慢性期慢性粒细胞白血病 (CML CP)患者骨髓单个核细胞(MNCs) bcr abl,bcl 2 和 c myc基因表达的影响。方法 :淋巴细胞分离液离心富集 14例CML CP患者骨髓MNCs,经干扰素 α(IFN α)及IFN α联合粒细胞 -巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)培养 2 4h后 ,采用相对定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT PCR)及扩增片段光密度扫描分析bcr abl,bcl 2 ,c myc及β actin 基因表达水平 ,配对t检验统计分析组间差异。结果 :IFN α(2 0 0U·ml-1)及IFN α(2 0 0U·ml-1)联合GM CSF(10ng·ml-1)均显著抑制bcr abl基因表达 ;IFN α部分抑制 c myc及 bcl 2 基因表达 ;GM CSF在IFN α作用的基础上部分促进 bcr abl及 c myc基因表达和显著抑制 bcl 2 基因表达。结论 :IFN α及IFN α联合GM CSF均可抑制抗凋亡基因bcr abl和bcl 2基因表达 ,并调节c myc基因表达水平。通过促进细胞凋亡而抑制恶性克隆增长是IFN α或IFN α联合GM CSF治疗CML的可能作用机制。     

心血管基础研究的进展——记我校心血管基础研究所学术报告会

北京医科大学心血管基础研究所于1993年初举办学术报告会,会上报告了该所近一年多来执行国家攀登计划、863计划和85攻关计划有关心血管基础研究的成果。 一、癌基因/抗癌基因在心血管疾病中作用的研究:发现高血压和动脉粥样硬化(AS)时,不仅有癌基因(ras、fos、myc、sis等)的过量表达,还有抗癌基因p 53的表达不足。将反义ras核酸导入高血压血管平滑肌细胞(SHR—VSMC)中,可抑制正义ras癌基因的转录和内皮素的促VSMC增殖反应。此外,发现高血压和AS时,抗癌基因p 53发生甲基化和多态性变化。目前已从AS斑块中提取出mRNA,通过反转录和PCR,克隆出p 53     

8-Br-cAMP对Eca-109细胞凋亡的影响

目的：探讨8—Br—cAMP对人食管癌Eca—109细胞凋亡的影响及其相关基因表达的变化。方法：采用TUNEL法检测细胞凋亡,应用原位杂交、组织化学、免疫组织化学以及RNA和蛋白质斑点印迹技术相对定量,观察8—Br—cAMP对Eca—109细胞凋亡相关基因及凋亡效应分子表达的影响。结果：8—Br—cAMP作用48h后可显著诱导Eca—109细胞凋亡,并见到野生型(wt)p53及iNOS基因表达上调,bcl—2、c—myc基因表达下调,iNOS活性增强,Fas—IR减弱。结论：8—Br—cAMP通过调控凋亡相关基因及凋亡效应分子的表达,使之相互作用、相互协同,诱导人食管癌Eca—109细胞的凋亡。其中,wtp53在该凋亡的诸多因素中起着关键作用。     

c-myc 和p53基因与高温致神经管畸形中细胞凋亡发生的相关关系的研究

目的：探讨c-myc和p53基因与高温致神经管畸形中细胞凋亡发生的相关关系。方法：在高温致金黄地鼠神经管畸形的动物模型上，采用原位杂交和原位PCR技术，观察c—myc和p53 mRNA在各期实验组和对照组胚胎神经上皮和周围问充质中的分布和含量。结果：正常胚胎神经上皮和周围间充质细胞内c-myc基因随着神经管的发育其转录逐渐增加，于C16组和C24组达到高峰，以后各组c-myc基因转录减少。这与神经管形成过程中的细胞增殖规律相吻合。而p53的基因表达与神经管形成过程中的细胞凋亡规律基本一致。高温后c-myc和p53基因的转录均明显增加。结论：高温致神经管畸形中细胞凋亡的发生与c—myc和p53基因的过度表达密切相关。     

四种癌基因在急性髓细胞性白血病中转录水平的分析

用滤膜原位杂交方法，对M2、M3、M5和M6四型共18例急性髓细胞性白血病外周血和／或骨髓细胞中c－myc、c—fos、c—sis和c－N－ras4种癌基因的转录水平进行分析．结果表明：①c-myc在M2、M3、M5和M64型井13例中表达．②6例M3中，3例同时检测到c－myC和c－N－ras表达。③7例M5中，检测到3例c-fos表达。