甘草酸二铵对人肝癌细胞SMMC-7721增殖和p53表达的影响

目的 探讨甘草酸二铵(DG)对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用及对p53表达的影响.方法 实验分对照组及DG干预组,采用MTT比色法测定细胞的生长情况,检测DG对细胞增殖的抑制作用;RT-PCR检测DG对p53 mRNA表达水平的影响;通过Western blot测定DG对p53蛋白表达的影响.结果 DG(0.50、1.00、2.00、4.00、8.00、16.00 mg/L) 呈浓度依赖性降低人肝癌细胞存活率,作用48 h时IC50值为(4.31±0.21)mg/L;DG可明显抑制肝癌细胞增殖,剂量为4.00、8.00、16.00 mg/L时,其抑制率分别为44.52%、66.78     

反义p55PIK慢病毒载体的构建及其对甲状腺癌细胞FTC236增殖的影响

目的:观察反义p55PIK慢病毒对甲状腺癌细胞FTC236的增殖是否有抑制作用?方法:构建含p55PIK反义RNA的慢病毒载体并包装成慢病毒,使之感染FTC236细胞,得到稳定的细胞系后用Western blot方法检测p55PIK蛋白的表达情况,用Real-time PCR检测p55PIK的mRNA的表达情况?同时用四甲基偶氮唑盐(MTT)法及BrdU掺入法检测各组细胞的增殖情况?结果:构建的慢病毒感染甲状腺癌细胞FTC236的效率约为95%; Western blot证明反义p55PIK病毒可以使该细胞的p55PIK蛋白水平降低,mRNA水平降为对照组的(47 ± 8)%(P < 0.01)?MTT法检测发现反义p55PIK慢病毒感染后的FTC236细胞增殖明显受到抑制,增殖率为未处理组的(59 ± 19)%(P < 0.05)?且反义p55PIK慢病毒组的平均BrdU掺入率比未处理组降低了10.64%(P < 0.02)?结论:反义p55PIK病毒可以通过抑制p55PIK蛋白的表达而抑制了FTC236细胞的增殖?     

TSA抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖能力

目的 研究TSA对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响.方法 选用人肝癌SMMC-7721细胞作为实验对象,分为对照组和不同浓度TSA(0.1、0.5、1.0.2.0 μM)处理组,倒置显微镜观察TSA对SMMC-7721细胞形态的影响,MTT比色法测定TSA对SMMC-7721细胞增殖的抑制情况,流式细胞术(FCM)分析细胞周期;结果 倒置显微镜下.经TSA处理的细胞增殖速度显著减慢;MTT比色法测定结果显示不同浓度TSA对SMMC-7721细胞的增殖均有抑制作用,并有明显的剂量依赖和时间依赖关系;流式细胞仪检测结果 显示,SMMC-7721细胞经TSA处理后,GO/G1期细胞明显增加,S期细胞则明显减少,细胞被阻滞于GO/G1期.结论 TSA通过抑制HDAC的活性,调节相关基因的转录,从而调控细胞周期,有效抑制肝癌细胞的增殖.     

原发性肝细胞性肝癌细胞凋亡及p53基因表达的研究

目的研究原发性肝细胞性肝癌(HCC)细胞凋亡的发生情况及与凋亡相关的p53基因的表达,探讨p53基因与细胞凋亡的关系.方法以TUNEL法检测HCC细胞凋亡的发生情况,免疫组化SABC法检测p53基因的表达.结果34例HCC平均凋亡指数为4.16%±0 70%,有18例p53蛋白阳性,凋亡指数的高低与p53蛋白的阳性率有关,p53蛋白阳性者凋亡指数低;正常肝组织平均凋亡指数为0 51%±0.09%,无p53蛋白阳性者.结论HCC患者中存在肿瘤细胞增殖和死亡调控的异常,其细胞凋亡的发生可能与p53基因失控有关.     

p53基因突变与肝细胞癌

肝细胞癌（ＨＣＣ）是临床常见的恶性肿瘤之一,研究发现其病因与肝炎病毒感染和黄曲霉素（ＡＦＢ１）摄入有关。主要涉及到致癌基因和抑癌基因的改变,在许多ＨＣＣ中都可以检测到重要的抑癌基因－ｐ５３基因的异常,说明ｐ５３基因突变与ＨＣＣ关系十分密切。自１９９０年以来,国内外许多学者对ＨＣＣ与ｐ５３基因的关系进行了研究报道,笔者对ｐ５３基因的改变特点及与ＨＣＣ之间的关系进行综述。１人类野生型及表达产物人类ｐ５３基因位于染色体１７ｐ１３上,长２０ｋｂ,由１１个外显子和１０个内含子组成。ｐ５３基自除了外显子１的…     

槲寄生生物碱通过P53途径抑制肝癌细胞株SMMC-7721的研究

目的：探讨槲寄生生物碱对肝癌细胞株SMMC-7721 P53基因表达的影响。方法：MTT法测定槲寄生生物碱对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的抑制作用;半定量RT—PCR法测定抑癌基因P53 mRNA表达变化。结果：槲寄生生物碱作用后SMMC-7721细胞出现显著生长抑制作用,且呈剂量和时间依赖性。RT—PCR检测SMMC-7721细胞中P53 mRNA表达的相对强度,发现0.100mg／mL的槲寄生生物碱作用于SMMC-7721细胞24小时后,P53 mRNA表达的相对强度增高（P〈0．01）。结论：擗寄生生物碱对抑癌基因P53表达的影响可能是其抑制肿瘤生长的分子基础。     

SETDB1通过p53/p21通路调控结肠癌细胞衰老

目的 探讨组蛋白甲基化酶SET结构域分支型1(SETDB1)对结肠癌细胞衰老与增殖影响。方法 利用多柔比星(DOX)诱导结肠癌细胞衰老,Western blot证实SETDB1在衰老细胞中的蛋白表达量。利用SETDB1的shRNA(shSETDB1#1和shSETDB1#2)和过表达质粒分别构建低表达和过表达SETDB1的结肠癌细胞模型,用Western blot检测SETDB1表达程度;用CCK8法和β-半乳糖苷酶染色法分别检测细胞增殖能力及衰老细胞的百分比,p53和p21的变化由Western blot检测;针对p53过表达质粒行逆转实验。结果 DOX诱导细胞衰老后SETDB1的蛋白表达量可降低。低表达SETDB1后结肠癌细胞的增殖能力下降,衰老细胞比例由(22.00±4.35)%升至(54.00±5.56)%和(53.33±4.93)%(P<0.001);过表达SETDB1后结肠癌细胞增殖能力升高,衰老细胞比例从(43.33±6.11)%降低至(21.33±3.51)%(P<0.01);通过GSE56496数据富集分析发现SETDB1与p53信号通路有关,沉默SETD...     

整合蛋白β1亚基过表达上调p27抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖

目的:研究整合蛋白β1亚基过表达对肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响及机制。方法:采用MTT及细胞流式测定观察整合蛋白β1亚基过表达对肝癌细胞SMMC-7721增殖及细胞周期的影响。蛋白质印迹及RT-PCR检测细胞中p27的蛋白及mRNA的表达,并构建p27的RNA干扰质粒,转染整合蛋白β1亚基过表达细胞,再观察p27的表达变化对细胞增殖的影响。结果:整合蛋白β1亚基过表达可以抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖,并将细胞阻滞在细胞周期的G1期。整合蛋白β1亚基过表达可以在蛋白水平上调p27的表达,但并不影响p27的mRNA水平。p27的RNA干扰质粒可明显抑制p27的表达,而且p27表达的下调可以阻止整合蛋白β1亚基过表达所引起的细胞增殖抑制。结论:整合蛋白β1亚基过表达通过上调p27抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖。     

抑癌蛋白p21和p53表达与胃癌细胞增殖的关系

为探讨抑癌蛋白ｐ２１和ｐ５３的表达与胃癌恶性生长的关系，选择８８例手术切除的胃癌和胃溃疡蜡块标本，用免疫组织化学方法检测上述标本中ｐ２１，ｐ５３和ＰＣＮＡ的表达。结果表明：胃癌组织中ｐ５３的突变蛋白表达率约为４０％，ｐ２１蛋白在胃粘液腺癌和低分化及未分化型腺癌表示明显低下，ＰＣＮＡ在胃腺癌中的表达水平高。提示胃癌细胞ｐ２１蛋白水平（低）和ｐ５３的突变与胃癌的发病有一定的关系，而与胃癌细胞恶性增长的     

白藜芦醇对人肝癌细胞SMMC-7721增殖影响的研究

目的已有较多研究表明白藜芦醇能抑制多种肿瘤的生长和促进肿瘤细胞的凋亡,观察白藜芦醇对原发性肝癌(简称肝癌)细胞SMMC-7721增殖的影响,探讨其可能的调控机制。方法 MTT法观察不同浓度白藜芦醇(50、100μmol/L)对肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响;应用锥虫蓝拒染法检测白藜芦醇对肝癌细胞SMMC-7721的细胞毒性作用;流式细胞术测定肝癌细胞SMMC-7721细胞周期的变化;Western blot法测定细胞周期相关蛋白(Cyclin D1、Cyclin E、P21)变化。结果白藜芦醇呈浓度和时间依赖地抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖(P<0.05)。100μmol/L白藜芦醇干预48 h后,可使G0/G1期肝癌SMMC-7721细胞比例升高,S期细胞比例下降,Cyclin D1和Cyclin E的蛋白表达水平均受到抑制,同时P21蛋白的表达水平上调(P<0.05)。结论白藜芦醇可能通过调控细胞周期来抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖。     

原发性肝细胞癌p53基因突变检测

为了解在黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１）低含量区以ＨＢＶ为主要危险因素的ＨＣＣｐ５３基因突变情况，并分析它与ＨＢＶ及其它因素的关系，作者筛检了成都地区３２例原发性肝癌（ＨＣＣ），分别应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰＳｏｕｔｈｅｒｎ吸印杂交及免疫组化染色法检测了３２例ＨＣＣ及２７份癌旁肝组织中ｐ５３基因突变、ＨＢＶＤＮＡ整合及ＨＢｓＡｇ表达。结果：所有ＨＣＣ病例均感染过ＨＢＶ，肝癌细胞中ＨＢＶＤＮＡ整合率７１．９％，癌旁组织均有肝硬化或／和慢活肝病变，且ＨＢｓＡｇ表达率９６．３％。３２例ＨＣＣ中检出８例Ｐ５３蛋白阳性（２５％），这种改变与ＨＢＶＤＮＡ整合及ＨＢｓＡｇ表达无明显关系，而与ＨＣＣ发生年龄有关；３２例ＨＣＣ组织中有２例ｐ５３基因第２４９号编码子突变（６．２５％），明显低于ＡＦＢ１高含量区ＨＣＣ，而与台湾、日本等ＡＦＢ１低含量区报道一致，提示：成都地区ＨＣＣ与ＨＢＶ感染确有密切关系；ｐ５３改变在ＨＣＣ发生上有一定作用，但是多数ＨＣＣ并无ｐ５３基因突变又提示ＨＣＣ发生尚涉及其它复杂机制；ＨＢＶ在ＨＣＣｐ５３基因改变中的作用机制值得进一步探索。     

p21、p53基因表达及其单核苷酸多态性与肝细胞肝癌的关系

目的探讨肝细胞肝癌患者p21和p53基因的表达及其单核苷酸的多态性,分析其与肝细胞肝癌的关系。方法选择50例肝细胞肝癌患者和50名健康志愿者,采用PCR技术检测两组外周血白细胞中的p21和p53基因的表达情况,采用PCR—RFLP方法检测p213’UTR位点以及p53intron6位点的基因多态性。结果肝癌组p21和p53mRNA表达显著高于对照组（P〈0．01）。饮酒能够增加p53mRNA的表达。p21基因3’UTRC／T位点C／T＋T／T型与60岁以上人群肝癌患病率升高有关。结论p21基因以及p53基因的高表达可能与肝细胞肝癌有一定的相关性,饮酒能够使肝癌患者1353基因的表达升高。     

p53在肝细胞肝癌和食管鳞癌中的表达

目的 通过检测p53在肝细胞肝癌和食管鳞癌中的阳性表达，探讨p53与肝细胞肝癌与食管鳞癌临床病理学之间的关系，帮助诊断肿瘤及判断预后。方法 福尔马林固定，石蜡包埋，免疫组化LSAB法染色，免疫组化ABC法检测。结果 肝细胞肝癌中p53阳性率为79．49％，HBsAg阳性者为87．93％，肝硬变者为90．14％，癌转移者为92．5％。食管鳞癌中p53阳性率为53．01％。癌转移者63．41％。两种肿瘤p53阳性反应均随癌分化程度降低而增强。结论 p53在肝细胞肝癌和食管鳞癌加的阳性表达基本平行，阳性反应程度与HBsAg、周围病变、癌分化、癌转移等因素呈正相关。     

应用寡核苷酸芯片并行检测肝细胞癌p53基因突变类型

目的：并行检测原发性肝癌p53基因突变类型。方法：参照国际公共p53突变数据库资料发生频率最高的7个突变类型作为检测探针设计寡核昔酸芯片，应用该项技术检测肝癌抑癌基因p53上对应的7个常见突变位点的突变频率及形式。结果：检测高发区及低发区肝癌石蜡包埋标本各14例，p53突变发生率分别为64．3％及14．3％(P＜0．05)，高发区组p53突变热点为249编码区，占该组突变的77．8％，突变形式为^249ser突变。结论：本研究发现高发区组肝癌p53基因突变热点为^249ser突变，应用寡核昔酸芯片技术可并行、高效、多位点检测肿瘤的基因突变。     

下调P55PIK基因表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞体外增殖和迁移能力的影响

目的通过RNA干扰(RNA interference,RNAi)抑制P55PIK基因表达,观察下调P55PIK对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231体外增殖和迁移能力的影响。方法利用脂质体将特异性针对P55PIK的siRNA瞬时转染P55PIK高表达细胞株MDA-MB-231,以转染无关序列siRNA(siRNA-NC)和未转染细胞作为对照。通过Western blot检测其对P55PIK表达的下调效果,MTT法和Transwell实验分别检测MDA-MB-231细胞的增殖和迁移能力。结果 siRNA-P55PIK明显下调MDA-MB-231细胞中P55PIK蛋白的表达;MTT检测显示下调P55PIK后,MDA-MB-231生长明显受到抑制;Transwell实验显示siRNA-P55PIK组穿膜细胞数为(5.2±1.3),显著低于siRNA-NC组(18.6±3.8)和空白对照组(18.4±4.3)(P<0.05)。结论应用RNAi抑制P55PIK基因的表达可抑制MDA-MB-231细胞体外增殖和迁移能力,为乳腺癌的靶向治疗提供了新思路。     

肝细胞癌p53及c-myc mRNA的表达

目的探讨p53及cmycmRNA表达在原发性肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)发生发展过程中的作用。方法应用原位杂交方法检测63例HCC癌及其癌周组织中p53和cmyc基因mRNA的表达状况。结果p53基因mRNA在HCC中阳性表达率显著高于癌周组织(P<0.05),癌周组织中p53基因表达仅见于癌周增生结节,癌周肝硬化及正常肝组织内未见p53mRNA阳性表达;cmyc基因mRNA的阳性表达率在HCC与癌周增生结节中相近(P>0.05),且两者均显著高于癌周肝硬化和正常肝组织(分别为P<0.05,P<0.01);p53及cmyc基因mRNA表达均与HCC分化程度呈显著正相关,低分化组p53及cmyc基因的mRNA阳性表达率均显著高于高分化组(P均<0.05)。结论p53及cmyc基因mRNA过度表达可能参与了人肝细胞癌的发生发展过程。     

p53基因突变与肝细胞癌

肝细胞癌(HCC)是临床常见的恶性肿瘤之一，研究发现其病因与肝炎病毒感染和黄曲霉素(AFB1)摄入有关。主要涉及到致癌基因和抑癌基因的改变，在许多HCC中都可以检测到重要的抑癌基因—p53基因的异常，说明p53基因突变与HCC关系十分密切。自1990年以来，国内外许多学者对HCC与p53基因的关系进行了研究报道，笔者对p53基因的改变特点及与HCC之间的关系进行综述。     

肝细胞癌p53基因的突变与表达

目的：对HCC患者的肝组织和外周血单核细胞（PBMC）进行突变p53基因、p53蛋白和HBX的检测并作比较,以助评估它们与HCC发生的关系。方法：从HCC患者肝组织和PBMC中提取DNA,用PCR/SSCP和PCR/RFLP法分析p53基因突变。HCC中HBx与p53蛋白表达用免疫组化法检测。结果：HCC标本35.8%（5/14)显示p53基因第7外显子突变发生在249密码子。同样的PBMC标本中亦测到p53基因第7外显子有突变。免疫组化分析HCC肝组织中p53蛋白检出率为28.6%,而HBx在大多数标本中均有表达。结论：在HCC,p53基因突变热点在第7外显子,p53基因突变率与p53蛋白检出率均约30%～40%,HBx较善遍地存在于所测的HCC标本中。这提示p53蛋白与HBx蛋白相互作用可能是HCC发病机制中的重要一步。     

肝细胞肝癌VEGF与p53的表达及其意义

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)和p53蛋白表达与原发性肝细胞肝癌(HCC)的关系。方法用免疫组织化学SP法,检测49例HCC组织、21例癌旁组织、10例正常肝组织VEGF及p53蛋白的表达情况,并与临床病理指标比较分析。结果49例HCC中VEGF、p53蛋白阳性表达分别为63.2%和53.1%;VEGF和p53蛋白表达有相关性(P<0.05)。21例癌旁组织中VEGF和p53蛋白阳性表达分别为19.0%和9.5%。肝癌组织和癌旁组织VEGF和p53蛋白表达差异有显著性(P<0.01)。10例正常肝组织无VEGF和p53蛋白表达。HCC组织中VEGF、p53蛋白阳性表达与血管侵犯和转移倾向明显相关(P<0.05)。结论HCC组织中VEGF、p53蛋白过表达,通过促进HCC肿瘤血管的生成而促进HCC的生长和浸润转移,p53和VEGF可作为反应HCC生物学行为的重要指标。