多柔比星叶酸隐形脂质体对HeLa229荷瘤裸鼠的抑瘤作用

考察多柔比星（1）叶酸隐形脂质体对荷瘤裸鼠肿瘤生长的抑制作用。以pH梯度法分别制备了多柔比星叶酸隐形脂质体（1-FSL）和普通脂质体。比较两者在荷瘤裸鼠瘤旁给药后对瘤体动态变化趋势、瘤体组织病理学差异和瘤体中肿瘤细胞DNA质量的影响等。结果表明，1-FSL对荷瘤裸鼠具有显著的抑瘤效果，1-FSL抑瘤率略高于普通脂质体，但两者抑瘤特性明显有别。     

叶酸脂质体的研究进展

发展选择性破坏肿瘤组织的肿瘤靶向治疗已成为当今肿瘤治疗的主导方向.鉴于许多恶性肿瘤细胞膜表面叶酸受体活性和数量显著高于正常细胞,叶酸脂质体通过叶酸分子修饰脂质体所获得的主动受体型靶向脂质体,在肿瘤靶向治疗中具有潜在应用价值.本文就叶酸受体及其在肿瘤细胞的表达、叶酸脂质体工作原理及其制备技术、叶酸脂质体介导的肿瘤靶向治疗等研究进展做一综述.     

叶酸受体靶向伊马替尼pH敏感脂质体的制备工艺及质量评价研究

摘 要 目的：运用改良的硫酸铵梯度法制备叶酸受体靶向伊马替尼pH敏感脂质体（FSLI）,并评价其质量。方法: 采用改良的硫酸铵梯度法制备FSLI,以包封率为指标进行制备工艺的优化;采用琼脂糖凝胶CL 4B柱分离脂质体和游离药,HPLC法测定FSLI的包封率;运用Zeta PALS粒径电位分析仪测定脂质体的平均粒径及Zeta电位,透射电镜观察脂质体的形态;运用动态透析法考察FSLI在不同pH环境中的药物释放情况,并考察FSLI在不同pH、37℃水浴中的粒径随时间的变化情况。结果: 制得的FSLI为圆形或类圆形的大单室脂质体,平均粒径为（155.2±1.92）nm,Zeta电位为 （29.36±3.21）mV,平均包封率为（90.7±1.70）%。FSLI在pH 7.4的中性环境中,药物释放缓慢,24 h累积释放度为2.76%,而在pH 5.5的酸性环境中,药物释放显著加快,24 h累计释放度均达到93.2%,表现出非常强的pH敏感性能。FSLI在pH 7.4的中性环境中不具有融合性能,而在pH 5.5的酸性环境中,粒径迅速增大,脂质体发生融合。结论:采用改良硫酸铵梯度法制备的FSLI,能获得较高的包封率,并具有良好的pH敏感性能。     

以叶酸受体为靶向的阳离子脂质体的制备与性质考察

为了研制一种能通过叶酸受体途径靶向肿瘤细胞的叶酸受体靶向脂质体，将叶酸(folate，folic acid，F)、 聚乙二醇二胺(polyoxyethylene-bis-amine，NH₂-PEG-NH₂)、 琥珀酸酐(succinic anhydride，SUC)和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(distearoylphosphatidylethanolamine，DSPE)按序共价连接， 并使用薄层色谱和飞行时间质谱确证合成产物为叶酸-聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(folate-polyethyleneglycol-distearoylphosphatidylethanolamine，F-PEG-DSPE)。膜材选用二棕榈酰磷脂酰胆碱(dipalmitoylphosphatidylcholine，DPPC)， 3β-［N-(N′,N′-二甲基胺乙基)胺基甲酰基］胆固醇(3β-［N(N′,N′-dimethylaminoethane) carbamoyl］ cholesterol，DC-Chol)和F-PEG-DSPE，以10∶10∶0.75(摩尔比)的配比，以荧光素标记的阴离子葡聚糖(dextran fluorescein anionic，DFA)为模型，用薄膜分散法制备含DFA的叶酸受体靶向脂质体，其包封率较高(>55%)、稳定性好，平均粒径为144 nm，体外释放慢。MTT法考察其对细胞的毒性结果表明该阳离子脂质体具有一定的细胞毒性，在低浓度时(0.012 5～0.1 μmol·L^{-1)脂质体的细胞毒性与DC-chol浓度成正比。流式细胞技术检测KB细胞和HepG2细胞对DFA脂质体的摄取，结果表明叶酸受体靶向的长循环阳离子脂质体能提高细胞对脂质体的摄取。该研究为进一步研究叶酸受体靶向阳离子脂质体在肿瘤基因治疗中的应用提供了理论基础。}     

脂质体肝实质细胞靶向性研究

目的 脂质体经配体修饰后介导受体细胞,以达靶向给药。方法 肝实质细胞上无唾液酸糖蛋白受体(ASGP-R)的配体无唾液酸胎球蛋白(AF)修饰脂质体得AF-SSL。将ASGP-R重组于脂质双分子膜(BLM)得ASGP-R-BLM,与AF-SSL相互作用,监测BLM膜电参数变化,确定受体-配体间识别反应;用3H标记方法测AF-SSL与肝实质细胞在体内外靶向性;将AF-SSL包抗癌药阿霉素(ADM),考察其抗癌药效。结果ASGP-R-BLM稳定时间随AF-SSL加入量增加而缩短,表现出明显的量效关系,证明在ASGP-R-BLM与AF-SSL之间有特异识别反应;体外AF-SSL与肝实质细胞结合率明显高于无AF修饰脂质体SSL(在第10和90 min时P<0.05,在第30和60 min时P<0.01);抗肝癌疗效,AF-SSL组大鼠存活期显著长于无AF修饰组,且对心、肾、肺的毒副作用小。结论配体修饰脂质体达到主动靶向对应受体细胞是可行的,本文为脂质体细胞水平靶向给药提供依据。     

叶酸靶向的肿瘤治疗研究进展

叶酸靶向的递药系统是一种新兴的治疗多种恶性肿瘤的方法。利用叶酸分子与肿瘤细胞表面叶酸受体的高亲和力,叶酸偶联的化合物能够将分子大小不同的复合物递送给病理细胞而不对正常组织造成伤害。目前,通过这种方法成功递送到叶酸受体高表达肿瘤细胞的复合物包括:蛋白毒素、化疗药物、免疫治疗剂、基因载体、反义寡核苷酸、小分子干扰RNA和纳米载体。该文综述了多种叶酸作为靶向配体治疗恶性肿瘤的方法。     

褪黑激素对HeLa细胞生长的影响

目的　研究褪黑激素对体外培养的人宫颈癌(HeLa)细胞活性的影响。方法　MTT测定褪黑激素的抗肿瘤活性;电镜观察药物对肿瘤细胞形态学的影响;流式细胞仪检测药物对肿瘤细胞周期的影响。结果　褪黑激素高浓度(2mmol·L^-1 )可抑制HeLa细胞的生长,使细胞倍增时间TD 延长,细胞杀伤率达61.0 %。用此浓度作用3d ,可使S期细胞的比例减少,细胞形态学发生非特异性改变,有较多的坏死细胞和少量凋亡细胞。结论　高浓度褪黑激素抑制HeLa细胞增殖,可能与抑制细胞的S期有关。     

螺旋藻多糖对HeLa细胞生长的影响

目的；研究螺旋藻多糖（polysaccharide from Spirulina platensis,PSP)对体外培养的HeLa细胞生长的影响。方法：MTT法测定螺旋藻多糖的抗肿瘤活性；光镜观察螺旋藻多糖对HeLa细胞形态学的影响；流式细胞术检测螺旋藻多糖对肿瘤细胞周期的影响。结果：随螺旋藻多糖浓度的增加，HeLa细胞存活率逐渐降低。抑制率逐渐增加；光镜下的观察显示，螺旋藻多糖作用24-48h后，细胞出现明显的形态学改变；流式细胞术证实螺旋藻多糖对肿瘤细胞存在周期特异性，使细胞发生G1期阻滞。结论：螺旋藻多糖抑制HeLa细胞的增殖，可能与该细胞发生G1期阻滞有关。     

丹参酮Ⅱ_A对HeLa宫颈癌细胞凋亡的影响

目的:探讨丹参酮ⅡA对HeLa宫颈癌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:应用MTT比色法检测不同浓度丹参酮ⅡA对HeLa宫颈癌细胞的增殖抑制,采用烟酸己可碱33258染色法观察丹参酮ⅡA对HeLa细胞凋亡的影响,并用半定量逆转录聚合酶链反应法检测用药后Bcl-2和bax基因mRNA的表达水平。结果:丹参酮ⅡA对HeLa细胞增殖的抑制作用呈剂量依赖性;它能促使HeLa细胞发生凋亡;用药48h后Bcl-2基因mRNA的表达水平明显降低,而bax基因的表达则无明显变化。结论:丹参酮ⅡA对HeLa细胞的增殖具有显著的抑制及诱导凋亡作用。     

褪黑激素对HeLa细胞生长的影响

目的　研究褪黑激素对体外培养的人宫颈癌 (HeLa)细胞活性的影响。方法　MTT测定褪黑激素的抗肿瘤活性 ;电镜观察药物对肿瘤细胞形态学的影响 ;流式细胞仪检测药物对肿瘤细胞周期的影响。结果　高浓度 (2mmol·L- 1 )褪黑激素可抑制HeLa细胞的生长 ,使细胞倍增时间TD 延长 ,细胞杀伤率达 6 1 0 %。用此浓度作用 3天 ,可使S期细胞的比例减少 ,细胞形态学发生非特异性改变 ,有较多的坏死细胞和少量凋亡细胞。结论　高浓度褪黑激素抑制HeLa细胞增殖 ,可能与抑制细胞的S期有关     

Calcium Enabled Remote Loading of a Weak Acid Into pH-sensitive Liposomes and Augmented Cytosolic Delivery to Cancer Cells via the Proton Sponge Effect

Pharmaceutical Research - While delivery of chemotherapeutics to cancer cells by nanomedicines can improve therapeutic outcomes, many fail due to the low drug loading (DL), poor cellular uptake and...     

GSTθ高表达抑制宫颈癌HeLa细胞的生长和增加放射敏感性

目的了解增加GSTθ表达水平对人类宫颈癌HeLa细胞生长,细胞周期和放疗敏感性的影响。方法通过脂质体LipofectAMINE将pcDNA3-GSTθ真核质粒载体转染获得高GSTθ表达水平的HeLa稳定转染细胞;采用RT-PCR和Western蛋白免疫印迹法检测分别检测GSTθ mRNA和蛋白的表达水平;采用细胞记数和MTT法测定细胞的生长;采用流式细胞仪分析细胞周期的变化。结果GSTθ高水平表达显著地延缓和降低HeLa细胞的生长,并导致G2/M期的阻滞。GSTθ水平提高也增加了细胞对培养基中血清和生长因子的依赖性。另外,GSTθ高水平的表达增加了HeLa细胞对电离辐射的敏感性。结论我们首次证实在HeLa细胞,GSTθ高水平表达可以引起细胞周期阻滞,延缓和降低细胞生长和增加细胞的放射敏感性。这些实验结果将为GSTθ作为一新的靶基因在宫颈癌治疗中的作用提供了实验基础和依据。     

Effect of Nicotinic Acid Conjugated to DNA-Transfecting Complexes Targeted at the Transferrin Receptor of HeLa Cells

A conjugate consisting of streptavidin (biotinylated transferrin)-biotinylated polylysine for DNA delivery to cells was modified by partial nicotinylation of the polylysine component of the conjugate and used for transfection studies. A conjugate of biotin¹⁰- nicotinyl₆₀-polylysine₂₅₀ containing 60 weakly basic nicotinyl (pyridine-3-carboxyl) residues was prepared. The design of the modified polylysine was directed to the possible binding of H⁺ ions in the endosome-lysosomal vesicles (pH 5-6) by the nicotinyl groups, thus circumventing the use of chloroquine. The results obtained, however, while showing a 5- to 6-fold increase in luciferase transfection activity still necessitated an absolute requirement for chloroquine. A further polylysine conjugate containing a larger number of nicotinyl residues, biotin¹⁰-nicotinyl₁₂₀-polylysine₂₅₀, also was prepared and studied. This macromolecule stimulated luciferase activity to a small extent and was also dependent on chloroquine. Smaller biotinylated polylysine₁₀₀ conjugates containing nicotinyl groups were also prepared. These were biotin¹⁰-nicotinyl₃₀-polylysine, and biotin₁₀-nicotinyl₆₀-polylysine₁₀₀, respectively. Both substances, however, gave opaque, hazy aqueous solutions with precipitates on standing and could not be used for further experimental work. The results indicate that the introduction of weakly basic nicotinyl (pyridine-3-carboxyl) groups onto polylysine₂₅₀ give conjugates that are unable to replace the lysosomotrophic agent chloroquine in the HeLa cell sysem studied. A 5- to 6-fold increase in luciferase activity, however, was found with biotin¹⁰-nicotinyl₆₀- polylysine₂₅₀.     

Delivery of Genes via Liposomes to Corneal Endothelial Cells

Liposomes have been useful models for studying the chemistry of lipid bilayers and the biology of the cell membrane. It has also been found that liposomes can be used as vehicles for chemicals and drugs and, more recently, as a tool for gene delivery. Compared with viral vectors, liposomes are particularly suitable with respect to simplicity of preparation, large-scale production and their lack of specific immune response. After systemic administration, however, a lower transfection efficiency as compared with viral systems and a transient gene expression limit their use. We therefore focus on organ specific, ex vivo gene therapy to prevent tissue or organ damage of the eye. The eye is an interesting organ for gene therapy and provides several advantages, including an overproportional number of well-defined genetic defects. In addition, the organ is easily accessible, and its transparency allows visual observation in a number of conditions. This is particularly true for the cornea. Gene transfer to corneal endothelial cells could be an important advantage in modulating functions of these critical cells and is an area that is currently being investigated. (c) 2002 Prous Science. All rights reserved.     

番茄红素对宫颈癌HeLa细胞bax、bcl-2基因表达的影响

目的 研究番茄红素对人宫颈癌HeLa细胞的诱导凋亡作用并探讨其对凋亡相关基因bax和bcl-2表达的影响。方法不同浓度番茄红素分别处理HeLa细胞24～72h后，MTT法检测细胞的生长活性，RT-PCR方法检测凋亡相关基因bax，bcl-2的表达。结果实验结果随着番茄红素浓度的增加，bax基因mRNA表达增加而bcl-2的mRNA表达减少。结论番茄红素对HeLa细胞的生长具有抑制作用，可促进宫颈癌HeLa细胞发生凋亡，bcl-2基因的减少与bax基因表达增加可能是HeLa细胞凋亡的机制之一。     

甘草酸通过线粒体膜去极化诱导HPV18阳性的人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用研究

目的 分析甘草酸对人乳头瘤病毒（human papilloma virus,HPV）18阳性的人宫颈癌HeLa细胞的抗增殖和促凋亡特性及其可能的作用方式,探讨甘草酸在预防HPV感染的作用和治疗宫颈癌的潜力。方法 MTT法检测甘草酸在caspase-8,caspase-9,caspase-3抑制剂存在的情况下对HeLa细胞增殖的抑制作用,相差显微镜观察细胞形态学,4’,6-二脒基-2-苯基吲哚染色检测细胞核凝结和Hoechst 33342染色检测核形态,Annexin V-FITC/PI法分析细胞凋亡,采用caspase-8,caspase-9和caspase-3比色试剂盒测定宫颈癌细胞中caspase的活性,通过Mito Tracker Red CMX Ros染色评估线粒体膜电位（ΔΨm）。结果 与对照组相比,甘草酸可显著降低HeLa细胞活力,并伴随着核浓缩和DNA碎片的增加,呈剂量依赖性。甘草酸可通过线粒体去极化诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡,并诱导caspase-8,caspase-9和caspase-3活化。结论 甘草酸对宫颈癌细胞的抗增殖和促凋亡特性可能是通过诱导线粒体膜电位的破坏,激活细胞内和细胞外途径的caspases活性,甘草酸可作为预防和控制宫颈癌的一种辅助手段。