RNAi沉默CD14基因对人胃癌细胞生物学行为的影响

目的以胃癌SGC-7901细胞为研究对象,在细胞水平观察沉默CD14基因对胃癌细胞增殖、凋亡、周期及下游靶因子TNF-α、IL-8的影响,探讨CD14基因在胃癌中的发病地位。方法重组CD14shRNA慢病毒为载体转染胃癌SGC-7901细胞。实验分3组,正常组、慢病毒阴性对照组(NCshRNA)、CD14沉默组(CD14shRNA)。采用荧光显微镜观察转染效率,确定最佳转染时间;Western blotting检测CD14蛋白的沉默效率;MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,Real-time PCR技术检测TNF-α、IL-8表达。结果成功转染慢病毒CD14shRNA的SGC-7901人胃腺癌细胞可表达绿色荧光蛋白,测得在病毒MOI=10时,转染72 h后,慢病毒的转染效率最佳。转染后24 h,正常组细胞增殖率为218.18%,阴性对照组为216.27%,CD14shRNA组为211.63%,各组间相比,差异无统计学意义(P0.05);转染后48 h、72 h,正常组细胞增殖率为427.49%、479.22%,阴性对照组为417.84%、473.37%,CD14shRNA组为345.54%、362.64%,经比较,CD14沉默后细胞增殖率下降(P0.05)。CD14shRNA组细胞早期凋亡、晚期凋亡及总凋亡率均高于正常组,差异有统计学意义(P0.05)。CD14shRNA组细胞G1期42.57%、S期38.65%、G2期13.22%,正常组细胞G1期35.91%、S期52.60%、G2期11.49%,差异有统计学意义(P0.05)。Western blotting结果显示,在转染胃癌细胞后,CD14shRNA慢病毒载体组细胞CD14蛋白表达相对于正常组及阴性对照组明显减少(P0.05);Real-time PCR结果显示,CD14shRNA转染胃癌细胞后,TNF-α、IL-8 mRNA表达较正常组、阴性对照组明显下降。结论 CD14基因沉默后,胃癌细胞增殖能力减弱,细胞周期阻滞在S期,细胞合成减少,凋亡率增加,TNF-α、IL-8表达下降,这说明CD14基因在胃癌细胞增殖、发展过程中占据重要地位。     

Twist基因沉默促进人胃癌SGC7901细胞凋亡的机制

目的探讨Twist基因沉默促进人胃癌SGC7901细胞凋亡的机制。方法以稳定转染pGenesil-Twist质粒的人胃癌SGC7901细胞作为研究对象,实验分为对照组、空载体组、Twist基因沉默组。采用AnnexinV-FITC/PI染色观察细胞凋亡情况;通过检测细胞Caspase3、9活性、p53、Bcl-2、Bax蛋白表达情况和Ca2+含量探讨细胞的凋亡机制。结果激光共聚焦显微镜检测结果显示Twist基因沉默组中有较多的细胞呈现绿色荧光,未见明显的呈现红色荧光的细胞。流式细胞仪检测显示,Twist基因沉默组AnnexinV-FITC阳性细胞的比例明显高于SGC7901组和空载体组(P<0.01);Twist基因沉默组细胞中p53蛋白表达量显著高于对照组和空载体组(P<0.01),Bcl-2蛋白表达量显著低于对照组和空载体组(P<0.01),而Twist基因沉默组中Bax蛋白表达比例显著高于对照组和空载体组(P<0.01);Twist基因沉默组Caspase3、9酶活性明显高于对照组和空载体组(P<0.01,P<0.05);Twist基因沉默组SGC7901细胞中Ca2+含量显著高于对照组和空载体组(P<0.05)。结论 Twsit基因通过线粒体介导的细胞凋亡途径调节细胞凋亡,Twist基因有望作为靶基因发挥抗肿瘤作用。     

防风对胃癌SGC-7901细胞抑制作用的实验研究

目的 探讨中药防风对胃癌SGC-7901细胞的抑制作用及作用机制.方法 应用电子显微镜、流式细胞仪、DNA末端原位标记染色法等,观察防风对胃癌SGC-7901细胞生长的抑制作用及作用机制.结果 防风对SGC-7901细胞的生长有明显的抑制作用,其IC50值为24 mg/ml;检测到SGC-7901细胞凋亡的形态学特征;防风使细胞周期发生改变;细胞凋亡指数最高为27.9%.结论 防风对SGC-7901细胞生长的抑制作用随浓度和时间的增加而增强;防风可诱导SGC-7901细胞凋亡,也可直接杀死肿瘤细胞,这些结果为防风在临床上的进一步应用提供了理论依据.     

硫酸酯化灰树花多糖体外诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡的研究

采用电镜、流式细胞仪、琼脂糖凝胶电泳等方法探讨了硫酸酯化灰树花多糖（S-GAP-P）对人胃癌细胞SGC-7901凋亡的诱导。结果表明，S-GAP-P明显诱导SGC-7901细胞的凋亡，可观察到凋亡小体、凋亡峰和DNA梯度条带，细胞凋亡率呈量效关系。     

木黄酮对人胃癌细胞SGC-7901作用的研究

目的探讨木黄酮对体外培养的人胃癌细胞SGC-7901生长的抑制和诱导细胞凋亡的作用。方法用MTT法检测药物效应，透射电镜及流式细胞仪观察木黄酮处理SGC-7901细胞后细胞周期和细胞凋亡。细胞免疫化学观察木黄酮处理SGC-7901细胞后，SGC-7901细胞PCNA，FAS，C-mvc的变化。结果①MTT法证实木黄酮对SGC-7901细胞生长有抑制作用，并呈剂量-效应关系。②流式细胞仪分析木黄酮处理SGC-7901细胞后细胞滞留于G2／M期，并可见凋亡峰。③透射电镜可见SGC-7901细胞出现典型的细胞凋亡及坏死形态学改变。④木黄酮下调PCNA及C—myc表达，上调FAS表达。结论木黄酮对人胃癌细胞SGC-7901有抑制作用，其抑制作用可能通过下调C-mvc基因表达，上调Fas蛋白表达，下调PCNA表达，从而多途径诱导胃癌细胞凋亡和坏死、阻抑细胞周期进程，抑制SGC-7901细胞增殖。     

RNAi沉默Notch1基因对人骨肉瘤细胞MG63的促凋亡作用

目的采用RNA干扰(RNAi)技术抑制Notch1基因的表达,观察阻断Notch信号通路对人骨肉瘤细胞MG63的促凋亡作用及其机制。方法构建mNotch-1短发夹状RNA(mNotch-1 shRNA),利用MTT增殖试验分析mNotch-1 shRNA转染前及转染24、48、72 h时MG63细胞的增殖情况;通过Annexin V法染色和流式细胞术检测细胞凋亡率及与mNotch-1 shRNA作用时间的关系;Western blot检测细胞中Notch1、Bcl-2及Bax蛋白表达的变化。结果与对照组相比,mNotch-1 shRNA转染MG63细胞后,细胞增殖水平明显下降。Annexin V染色后流式细胞仪检测可见实验组细胞凋亡率较对照组明显升高。Western blot结果分析显示mNotch-1 shRNA转染MG63细胞后,细胞中Notch1基因表达明显降低,并且显著抑制Bcl-2基因和上调Bax基因的表达。结论 RNAi沉默Notch1基因能明显抑制人MG63细胞增殖,促进细胞凋亡;其作用机制可能与调控Bcl-2及Bax蛋白表达有关。     

三氧化二砷诱导胃癌细胞凋亡及其对C-myc和TGF-β1表达的影响

目的 探讨三氧化二砷（As2O3）对体外培养的人胃癌细胞SGC-7901生长的抑制和诱导细胞凋亡的作用。方法 用MTT法检测药物效应，透射电镜及流式细胞仪观察As2O3处理SGC-7901细胞后细胞周期细胞凋亡。细胞免疫化学观察As2O3处理后SGC-7901细胞TGF-β1及C-myc表达的变化。结果 ①MTT法证实As2O3对SGC-7901细胞生长有抑制作用，并呈剂量．效应关系。②流式细胞仪分析As2O3处理SGC-7901细胞后细胞滞留于G2／M期，并可见凋亡峰。③透射电镜可见SGC-7901细胞出现典型的细胞凋亡及坏死形态学改变。④As2O3导致C—myc表达的波动，下调TGF-β1，表达。结论As203对人胃癌细胞SGC-7901有抑制作用，其抑制作用可能通过导致C—myc基因表达波动，诱导胃癌细胞凋亡和坏死、阻抑细胞周期进程，抑制SGC-7901细胞增殖。同时通过下调TGF-β1表达阻止胃癌的恶性进程。     

槲皮素对胃癌细胞SGC-7901和BGG-823生长的影响

目的 观察槲皮素对胃癌细胞SGC-7901和BGC-823生长和增殖的影响。方法 以台盼蓝拒染法计数胃癌细胞的生长抑制率，荧光显微镜了解凋亡的发生，流式细胞术检测细胞周期变化。结果 台盼蓝拒染法计数显示槲皮素抑制SGC-7901和BGC-823细胞增殖的作用明显，呈浓度和时问依赖性，槲皮素处理48h后的Ic50为14．12μm(SGC-7901)和28．13μm(BGC-823)。形态学检测显示出细胞凋亡的特征变化，流式细胞仪检测表明经10～20μm／L的槲皮素处理，SGC-7901细胞周期阻滞于G0／G1期，BGC-823细胞周期阻滞于S期。结论 槲皮素能抑制胃癌细胞的生长并诱导其发生凋亡，是有效的抗癌药。     

洛铂与放疗联合治疗对SGC-7901胃癌细胞凋亡的影响

目的观察洛铂与放疗联合治疗对SGC-7901胃癌细胞凋亡的影响。方法实验分为正常对照组、单纯化疗组、单纯放疗组、放疗化疗联合组。倒置显微镜观察细胞生长状态,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR方法检测p53 mRNA表达。结果倒置显微镜观察,正常对照组的细胞呈多角形,细胞大小均匀。加入洛铂与照射后,细胞生长相对减慢,细胞体积变小,出现明显的细胞生长抑制。流式细胞仪检测细胞凋亡率,单纯化疗组与单纯放疗组的细胞凋亡率均高于正常对照组(P<0.01),联合组细胞凋亡率明显高于单纯化疗与单纯放疗组,差异有统计学意义(P<0.01)。联合组p53 mRNA表达明显高于正常对照组(P<0.01),联合组p53 mRNA表达均高于单纯化疗组与单纯放疗组(P<0.05)。结论化疗与放疗联合应用增加胃癌细胞的凋亡率。     

沉默Bcl-2基因对A549细胞的影响

目的 探讨Bcl-2基因在抑制细胞凋亡的作用.方法 利用RNA干扰技术,通过向人非小细胞肺癌A549细胞中导入siRNA表达载体,抑制Bcl-2基因表达,诱导细胞凋亡.结果 Bel-2基因沉默导致A549细胞发生凋亡.结论 Bcl-2家族成员之间相互拮抗的关系及由此产生的A549细胞凋亡,为治疗肿瘤提供了一条新的途径.     

抗小鼠Caspase-12小干扰RNA对肝细胞凋亡的抑制作用

目的观察抗小鼠Caspase-12小干扰RNA（siRNA）对小鼠原代肝细胞凋亡的抑制作用。方法原位二步灌流法分离并培养Balb／c小鼠原代肝细胞，化学合成制备三种抗Caspase-12不同位点（130，214，521）的SiRNA，脂质体包裹转染小鼠原代肝细胞。毒胡萝卜素4μmol／L诱导肝细胞凋亡。逆转录聚合酶链反应、Westeril blot检测抑制效果；四甲基偶氮唑盐法检测对细胞凋亡的影响。结果在浓度为100nmol／L时。siRNA（130）对小鼠原代肝细胞Caspase-12 mRNA的抑制率为0，siRNA（214）为52．08％，siRNA（521）为30．73％（t=4．30，P〈0．05）；在浓度为200nmol／L时，三种siRNA的抑制率分别为88．07％、86．22％，89．41％。200nmol／L的siRNA（214）对凋亡细胞procaspase-12的抑制率为51．43％（f=4．30，P〈0．01）；MTT比色实验发现，凋亡细胞活力增高48．76％（f=2．23，P〈0．01）。结论抗Caspase-12 siRNA对小鼠原代肝细胞凋亡有一定的抑制作用。     

靶向Plk1的siRNA对肝癌细胞凋亡的影响

目的:观察靶向作用于Plk1的siRNA对肝癌细胞系BCL-7402细胞中Plk1基因和p53基因表达及细胞凋亡的影响,探求靶向该基因的治疗在肝癌基因治疗中的可行性及效应.方法:设计合成两对靶向作用于Plk1基因的双链siRNA序列,分别命名为siRNA1和siRNA2,应用脂质体法将其转入BCL-7402细胞中.实验...     

Apoptosis of human gastric cancer SGC-7901 cells induced by mitomycin combined with sulindac

AIM: To investigate the effects of mitomycin (MMC) combined with sulindac on cell viability, apoptotic induction and expression of apoptosis-related gene Bcl-2 and cyclooxygenase-2 (COX-2) in gastric cancer SGC-7901 cells. METHODS: Human gastric cancer SGC-7901 cells were divided into three treatment groups,namely sulindac treatment group, MMC treatment group and combined sulindac with MMC treatment group. After being treated with drugs, cell viability was examined by MTT assay. Flow cytometry was used to evaluate the cell cycle distribution and apoptotic rates. Morphology of the cells was observed under light microscope and interactive laser microscope. Expression of COX-2 and Bcl-2 was determined by immunocytochemical method. RESULTS: After exposure for 12 h to three kinds of drugs, gastric cancer SGC-7901 cells presented some morphological features of apoptosis, including cell shrinkage, nuclear condensation, DNA fragmentation and formation of apoptotic bodies. Growth inhibition was more obvious in combined sulindac with MMC treatment group and sulindac treatment group than in MMC treatment group. The apoptotic rates in co-treated cells and MMC-treated cells 24 h after treatment were 12.0% and 7.2%, respectively. After exposure for 24 h to MMC, the expression of COX-2 and Bcl-2 protein was up-regulated, COX-2 levels were down-regulated but Bcl-2 gene expression was not changed significantly in combined treatment group. CONCLUSION: MMC-induced apoptosis is reduced by up-regulating the expression of COX-2 and Bcl-2 genes. MMC combined with sulindac can suppress the growth of gastric cancer cells through induction of apoptosis mediated by down-regulation of apoptosis-related Bcl-2 and COX-2 gene.     

ezrin基因RNA干扰慢病毒表达载体的构建及其在人胃癌SGC-7901细胞系中的表达

目的构建ezrin基因RNA干扰慢病毒载体并建立ezrin基因稳定干扰的人胃癌SGC-7901细胞系,为ezrin基因的功能研究奠定基础。方法设计ezrin基因特异性RNA干扰靶序列,与PHR-SIN-CSGW-H1a载体定向连接,构建PHR-SIN-CSGW-H1a真核入门表达载体。通过与psPAX2和PMD2.G载体进行重组,获得ezrin基因真核表达重组慢病毒表达载体。利用包装细胞293FT获得重组的慢病毒,感染人胃癌SGC-7901细胞。结果成功构建PHR-Eai-psPAX2-PMD2.G真核表达慢病毒干扰载体并获得相应的慢病毒,病毒悬液的滴度>1×107U/L。RT-PCR、Western blot结果表明,ezrin基因mRNA及蛋白表达显著降低。结论成功构建人ezrin基因特异性的重组慢病毒干扰载体,获得ezrin基因稳定干扰的人胃癌SGC-7901细胞系。     

多巴脱羧酶小干扰RNA体外对胃癌细胞侵袭转移能力的影响

目的: 探讨多巴脱羧酶(DDC)在胃癌侵袭转移过程中的作用.方法:体外合成多巴脱羧酶的小干扰RNA(siRNA-DDC), 转染人胃癌细胞系BGC823, 逆转录酶链式反应(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)方法检测DDC基因和蛋白表达的变化, 体外侵袭实验检测转染后细胞侵袭能力的变化.结果: RT-PCR和Western blot显示siRNA-DDC转染胃癌细胞系BGC823之后, 其DDC的基因和蛋白表达明显受到抑制(0.27±0.09 vs 0.89±0.14;0.39±0.12 vs 1.26±0.19, 均P<0.05);而未转染组和阴性对照组间并无明显差异. 体外侵袭实验显示转染后胃癌细胞数明显低于未转染组和阴性对照组(6.48±3.62 vs 23.72±3.24, 22.38±3.84, 均P<0.05). 提示抑制DDC基因表达能显著降低胃癌细胞的侵袭能力.结论:siRNA-DDC能明显抑制胃癌细胞BGC823的DDC表达, 从而抑制胃癌细胞的侵袭转移能力.     

Anti-proliferation effects of Twist gene silencing in gastric cancer SGC7901 cells

AIM:To study the role of Twist gene in gastric cancer by gene silencing,including the potential of induction of apoptosis,cell cycle arrest,and proliferation inhibition in human malignant gastric SGC7901 cells.METHODS:The expression level of Twist in gastric cancer samples was measured by immunohistochemistry.The effects of Twist gene silencing were detected at both m RNA and protein levels by RT-PCR and Western blot.We also evaluated the cell proliferation and apoptosis by CCK-8 assay and flow cytometry.We determined the activity of caspase-3 and caspase-9 with a caspase activity assay kit.Cell cycle distribution was analyzed by flow cytometry.Cell migration and invasion ability was evaluated by wound scratch assay and Boyden chamber assay.RESULTS:Twist protein was highly expressed in gastric cancer samples.Twist gene silencing significantly induced apoptosis,cell cycle arrest at G0/G1 phase,proliferation inhibition,and reduced the ability of migration and invasion in human gastric cancer SGC7901 cells.Meanwhile,both caspase-3 and caspase-9 were activated.CONCLUSION:The Twist gene could serve as a potential molecular target for gene therapy of gastric cancer with targeted small interfering RNA.     

沉默SIRT1基因表达对胰腺癌细胞PANC1增殖和凋亡的影响

目的 应用RNA干扰技术沉默胰腺癌PANC1细胞的SIRT1基因表达,观察其对细胞增殖和凋亡的影响.方法 构建靶向SIRT1基因表达的短发夹RNA(shRNA)真核表达质粒pGC-shRNA,转染胰腺癌细胞PANC1.设对照shRNA(shRNA-C)转染组和未转染对照组.实时定量PCR和免疫细胞化学法检测转染后细胞SIRT1 mRNA及蛋白的表达;MTT法检测细胞的增殖率;ELASA法检测细胞caspase-3和caspase-9活性;Western bloting检测细胞Bax、Bcl-2蛋白表达.结果 与未转染组相比,shRNA组转染后48 h,PANC1细胞SIRT1 mRNA及蛋白表达的抑制率分别为(76.2%±10.4)%和(80.1±11.6)%;细胞增殖抑制率为(45.1±6.5)%;caspase-3和caspase-9酶活性显著增高;Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调.结论 应用RNA干扰技术能有效沉默PANC1细胞SIRT1基因的表达,其机制可能与caspasa酶活性升高及Bax表达上调、Bcl-2表达下调有关.