阻断Rho/ROCK信号传导通路对大鼠脊髓损伤的治疗效果

目的：探究阻断Rho/ROCK信号传导通路对大鼠脊髓损伤的治疗效果。方法选取大鼠脊髓损伤动物模型150只,分为假手术组、实验组和对照组,各50只。假手术组进行椎板切除术;对照组进行脊髓横断损伤,并对其腹腔注射生理盐水;实验组进行脊髓横断手术,给予腹腔注射Fasudil。结果实验组的RhoA mRNA明显降低。同时还能见到部分纤维以及大量的NF阳性纤维穿过脊髓横断部位,并沿其尾端伸长。结论阻断Rho/ROCK信号传导通路对轴突再生、传导功能恢复以及损伤脊髓运动具有显著的促进作用。     

ROCK1和ROCK2与心血管疾病的研究进展

1996年,研究人员首次发现Ras同源基因家族之一的成员Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶(Rho associated coiled coil containing protein kinase ,ROCK )-Rho 激酶[1 ] ,因其被激活后产生多种生物学效应,特别是对心血管系统的影响而被广泛研究.RhoA相关Rho激...     

细胞外ATP对大鼠脊髓损伤后MAP-2表达及运动功能恢复的影响

目的研究细胞外三磷酸腺苷（ATP）对大鼠脊髓损伤后微管相关蛋白-2（MAP-2）表达及运动功能恢复的影响。方法选择健康成年Wistar大鼠110只,随机取10只作为正常对照组,其余100只制作成脊髓打击伤动物模型,然后分为A组（ATP组）和B组（阳性对照组）,每组50只。伤后1、3、7、14、28d取材,应用免疫组织化学方法观察MAP-2的表达;并用改良的Tarlov评分观察大鼠脊髓损伤后运动功能的恢复情况。结果脊髓损伤后14d和28d。A组大鼠MAP-2表达明显强于B组（P〈0．05）;伤后14d和28d,A组大鼠改良Tarlov评分明显优于B组（P〈0．05）。结论细胞外ATP能促进大鼠脊髓损伤表达MAP-2,并能促进大鼠脊髓损伤后运动功能的恢复。     

高压氧对大鼠脊髓损伤后Bcl-2表达的影响

目的 探讨高压氧对脊髓损伤后Bcl-2蛋白表达的影响及意义.方法 将54只健康成年雌性Wister大鼠随机分为假手术组6只、损伤组和实验组各24只.采用Allen's法制作大鼠脊髓损伤模型,术后实验组进行高压氧治疗,损伤组和假手术组动物常规饲养.分别在各个时间点取材,进行常规HE和免疫组织化学染色,观察脊髓组织学及Bcl-2蛋白表达情况.结果 HE染色可见损伤组脊髓组织结构紊乱,组织出血、水肿、空泡变性.实验组脊髓结构相对完整,组织水肿程度减轻.免疫组化染色可见假手术组偶见Bcl-2阳性表达,损伤组和实验组均可见Bcl-2表达,实验组Bcl-2阳性表达较高,与损伤组相比具有显著性差异(P＜0.05).结论 高压氧可能通过增加脊髓损伤后Bcl-2蛋白表达抑制神经细胞凋亡,从而对脊髓损伤起到治疗作用.     

实验性大鼠脊髓损伤后环氧化酶2的表达及意义

目的：检测大鼠脊髓损伤后环氧化酶-2(COX-2)的表达，以探讨脊髓损伤后的继发性损伤机制。方法：将60只SD大鼠随机分为两组：损伤组48只，行脊柱椎板切除及脊髓打击术；对照组12只，仅行椎板切除术。应用免疫组化及Westem blot analysis方法，分别测定脊髓细胞质内COX-2表达的变化情况。结果：在损伤后2h，COX-2表达开始升高，24h升至最高点，损伤48h后开始逐步降至正常。结论：COX-2活性变化可作为急性创伤性脊髓损伤时炎症反应程度的一项观测指标，抑制COX-2成为抑制炎症反应的新途径。     

脊髓损伤后髓磷脂抑制分子及作用机制的研究进展

脊髓损伤（SCI）常导致损伤平面以下运动、感觉以及括约肌永久性功能障碍。尽管国内外学者对此进行了不懈的探索,但是如何治愈SCI迄今仍是一全球性的医学难题。脊髓损伤后轴突不能再生的主要原因包括髓磷脂相关抑制分子的存在、含抑制分子的胶质瘢痕形成、硫酸软骨素蛋白多糖等。其中,髓磷脂相关神经生长抑制因子对中枢神经再生抑制起着关键作用,其相关抑制因子主要包括三种髓磷脂源性生长抑制蛋白：髓磷脂相关糖蛋白、少突胶质细胞髓磷脂糖蛋白、Nogo—A。所有这些生长抑制因子都结合共同抑制蛋白受体-Nogo-66（NgR）受体复合体,激活远端的Rho信号途径。激活Rho与其下游的效应器蛋白-Rho蛋白激酶11（ROCK Ⅱ）,激活的ROCK Ⅱ作用于多种蛋白质底物而产生级联瀑布信号传递,调节生长锥内细胞骨架的重组,改变神经的生长方向,影响肌球蛋白的收缩等,引起轴突生长锥的回缩及塌陷,介导脊髓损伤后轴突的再生抑制。本文简要综述SCI后几类髓磷脂相关抑制分子及其通过Rho—ROCK Ⅱ信号途径传递及机制的研究进展。     

山楂叶总黄酮对脊髓损伤后大鼠的作用研究

目的:探讨山楂叶总黄酮(TFHL)对脊髓损伤(SCI)后大鼠血液和脊髓中炎症水平及其体重和运动功能的影响.方法:构建SCI模型,分为假手术组、模型组和TFHL低剂量组、TFHL中剂量组、TFHL高剂量组3个剂量组.予不同浓度TFHL灌胃,Basso-Beattie-Bresnahan评分评价大鼠的运动功能;酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RT-qPCR)检测大鼠的白细胞介素(IL)-17A、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)和IL-4等炎症因子的水平,HE染色观察脊髓组织的完整性和神经元的形态及数量.结果:相较于模型组,TFHL低(P＜0.01)、中(P＜0.05)、高(P＜0.01)剂量组大鼠体重减轻情况均有所缓解、运动功能评分显著升高;在基因水平上,相较于模型组,TFHL低剂量组的IL-17A(P＜0.01)和TNF-α(P＜0.001),TFHL 中剂量组的 IL-17A(P＜0.001)、TNF-α(P＜0.01)和 IFN-γ(P＜0.01)及 TFHL 高剂量组的 IL-17A(P＜0.01)和IFN-γ(P＜0.05)水平显著降低,TFHL低剂量组的IL-4水平显著升高(P＜0.001);在蛋白水平上,相较于模型组,TFHL低剂量组的IFN-γ(P＜0.05),TFHL中剂量组的1L-17A(P＜0.05)和1FN-γ(P＜0.05)水平显著降低,TFHL中剂量组的IL-4水平显著升高(P＜0.01).假手术组脊髓结构完整,神经元丰富;模型组脊髓结构完整性被破坏,神经元减少;相较于模型组,TFHL低剂量组的结构完整性更佳,神经元数量有所增加,TFHL中剂量组的结构完整性最佳,神经元数量最接近于假手术组,TFHL高剂量组的结构完整性和神经元数量介于模型组和TFHL中剂量组之间.结论:TFHL抑制了促炎因子IL-17A、TNF-α和IFN-γ和促进了抗炎因子IL-4的mRNA表达,抑制了促炎因子IL-17A和IFN-γ和促进了抗炎因子IL-4的蛋白表达,促进了SCI后大鼠运动功能的恢复.     

大鼠脊髓损伤后脊髓NOS表达变化研究

目的 观察大鼠脊髓损伤不同时间段一氧化氮合成酶（NOS）的表达变化，证实一氧化氮（NO）在创伤后神经元死亡中的作用和意义。方法 采用NYU大鼠脊髓损伤模型，将体重300－350g的成年Wistar大鼠42只，分为伤后24h、48h、72h、7d、14周、6周7组，每组各6只，应用辅酶Ⅱ黄递酶（NADPH－d)组织化学染色法，观察脊髓不同损伤时间段NOS表达的变化。结果 脊髓损伤后不同时间段NADPH－d阳性标记不同，在损伤晚期星形胶质细胞也出现阳性标记。损伤引起的前角神经元NOS表达与神经元的死亡相一致。结论 NO在创伤后神经元的死亡中起了重要作用，脊髓损伤后胶质细胞中诱导性NOS的表达可能是胶质细胞对损伤或神经元坏死的一种反应。     

大鼠脊髓损伤后尿动力学改变及P2X3表达的研究

目的探讨大鼠不同平面脊髓损伤(SCI)造成神经源性膀胱后尿动力学,和P2X3的表达情况。方法成年健康SD雌性大鼠52只,将其随机分为正常组、骶上脊髓损伤组、骶下脊髓损伤组。采用脊横断法制备大鼠神经源性膀胱模型。四周后行尿流动力学检查,免疫组化法和Western blotting检测P2X3表达情况。结果骶上脊髓损伤组组逼尿肌漏尿点压较对照组、骶下脊髓损伤组组明显升高,骶下脊髓损伤组组逼尿肌漏尿点压较对照组显著降低;骶上脊髓损伤组组P2X3表达较对照组、骶下脊髓损伤组组明显升高,骶下脊髓损伤组组P2X2表达较对照组明显降低。结论尿流动力学检查为神经源性膀胱的早期诊断及选择个体化治疗方案提供了一种有效的检查手段。骶上脊髓损伤组组为逼尿肌反射亢进,骶下脊髓损伤组组为逼尿肌反射无力,膀胱逼尿肌P2X3表达增高可能是逼尿肌反射亢进机制之一。     

大鼠急性脊髓损伤后tau蛋白表达规律及意义

目的：探讨急性脊髓损伤后Wistar大鼠脊髓组织中tau蛋白动态表达规律及意义.方法：健康Wistar大鼠56只,雌雄不限随机分为两组,其中1组用改良Allen法制备成急性脊髓损伤模型,即作为手术组（48只）;另1组则作为对照组（对照组仅开椎板,不损伤大鼠脊髓组织n=8）.分别在12h、1d、3d、5d、7d、10d取出大鼠在T10及部分T9、T11椎板下的损伤脊髓组织制作蜡块并切片.采用HE染色及免疫组化法测定大鼠脊髓损伤后受损脊髓组织中tau蛋白的表达.结果：Wistar大鼠在急性脊髓损伤后,受损脊髓组织内即出现tau的阳性表达,随着时间的延长,tau蛋白的阳性表达结果逐渐增多;伤后3d阳性表达到达最大表达值,10d表达仍呈阳性且高于对照组.结论：损伤大鼠的脊髓组织后,组织中tau蛋白表达明显增加,且在不同时间点上有一定的变化关系,为急性脊髓损伤后临床的早期干预时机提供了一定的理论依据.     

大鼠脊髓全横断后NT-3在运动皮质表达的变化

目的研究大鼠脊髓全横断后神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)在运动皮质表达的变化,为进一步探索脊髓损伤后的再生修复机制和神经营养因子治疗脊髓损伤提供实验依据。方法雄性SD大鼠36只随机分为3组:手术组(脊髓横断组),大鼠脊髓在T10-T11节段之间完全横断,按存活时间不同又分为术后1、3、7及14 d组;假手术组,只行椎板切除术;正常对照组。动物到达存活时间点后,应用免疫组织化学ABC法和图像分析技术检测NT-3在运动皮质的表达。结果对照组和手术组运动皮质第V层有NT-3阳性细胞。脊髓全横断后NT-3的表达逐渐增高,在运动皮质于术后3 d达高峰,后缓慢下降。结论脊髓全横断后运动皮质NT-3的表达增加,内源性NT-3的增加可能有利于受损的皮质脊髓束神经元的存活与再生。     

2-氯腺苷对大鼠脊髓损伤后脊髓血流量和神经功能的影响

目的：观察腺苷受体激动剂2－氯腺苷对大鼠脊髓损伤后神经功能和脊髓血流量的影响,探讨腺苷在继发性脊髓损伤中的作用。方法：脊髓腹侧压迫法造成T13脊髓损伤,用激光多普勒血流仪检测损伤前后的脊髓血流量、治疗组于伤前15例min蛛网膜下腔注射不同剂量的非特异性腺苷受体激动剂2－氯腺苷（2－CADO）,对照组注射同量的生理盐水。伤后24h观察神经功能评分、倾斜平面临界角和组织学变化。结果：脊髓损伤后脊髓血流量立即下降,而治疗组较对照组显改善（P＜0．05,P＜0．01）。大剂量（500μmol/L)的2－CADO能显改善损伤后的神经功能,小剂量（50μmol/L)则对脊髓损伤无明显神经保护作用,大小剂量的作用有显差异（P＜0．01）。结论：腺苷通过改善脊髓血流量,从而对脊髓损伤起保护作用。     

Rho/ROCK激酶信号通路在大鼠宫腔粘连中的作用

目的 复制宫腔粘连大鼠模型,探讨Rho/ROCK信号通路相关蛋白的表达及其在宫腔粘连中的作用机制。方法 SD大鼠宫腔注入0.5?ml 95%乙醇,复制宫腔粘连模型;对照组注入等量生理盐水。术后15?d观察两组子宫内膜形态学变化,免疫组织化学法检测子宫内膜角蛋白、波形蛋白、Rho（RhoA、RhoB、RhoC）、Rho激酶（ROCKI、ROCKII）及TGF-β1表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠子宫内膜厚度变 薄（P?<0.05）;两组腺体数目比较,模型组腺体数目减少（P?<0.05）;两组角蛋白比较,模型组表达下降（P?<0.05）;两组波形蛋白比较,差异无统计学意义（P?>0.05）;两组大鼠子宫内膜RhoA、RhoB、RhoC、ROCKI、ROCKII的表达比较,差异有统计学意义（P?<0.05）,模型组均高于对照组;模型组大鼠子宫内膜TGF-β1的表达高于对照组（P?<0.05）。结论 注射无水乙醇可复制稳定的大鼠宫腔粘连动物模型,其Rho/ROCK信号通路处于激活状态,TGF-β1通过激活Rho/ROCK信号通路促使子宫内膜损伤后组织纤维化,参与宫腔粘连的发生、发展。     

ROCK2在ARC中的表达及对晶状体上皮细胞的自噬及氧化损伤的影响

目的 探讨Rho激酶2(ROCK2)在年龄相关性白内障(ARC)晶状体前囊膜中的表达及其对H₂O₂诱导的人晶状体上皮细胞自噬及氧化损伤的影响。方法 收集2020年6月～2021年4月在我院行超声乳化白内障吸出术的ARC患者20例,获取晶状体前囊膜,并获取眼科标本库中无眼科疾病、眼球结构完整且晶状体透明的正常晶状体前囊膜。免疫组织化学染色和Western blot检测ROCK2蛋白表达;将人晶状体上皮细胞HLE-B3随机分为对照组、H₂O₂组、sh-NC+H₂O₂组和sh-ROCK2+H₂O₂组,转染sh-NC或sh-ROCK2至对应组细胞,并用H₂O₂处理细胞,实时荧光定量PCR和Western blot检测细胞转染效率,MTT法检测各处理组细胞增殖活性,透射电镜观察细胞内自噬现象,自噬双标腺病毒mRFP-GFP-LC3转染细胞后观察自噬溶酶体和自噬体水平,Wester...     

大鼠脊髓慢性损伤脊髓组织PLA2、PGE2的检测

目的检测大鼠脊髓慢性损伤脊髓组织磷脂酶A2（PLA2）的活性、前列腺素E2（PGE2）的含量。方法采用生化活性法测定PLA2的活性，采用放射免疫法测定PGE2的含量。结果（1）PLA2活性：脊髓受压后各模型组PLA2活性增高，其中以中压组增高最明显（与假手术组比较，P〈0．01）；而重压组、轻压组与假手术组比较，P〈0．05；（2）PGE2含量：中、重压模型组与假手术组相比有非常显著性差异（P〈0．01），轻压模型组与假手术组相比有显著性差异（P〈0．05），重压模型组与轻压模型组相比也有显著性差异（P〈0．05）。结论大鼠脊髓慢性损伤后会继发炎症反应，炎症加重了脊髓的继发性损伤。     

电针刺激对局灶性脑梗死大鼠梗死灶周围皮质ROCK1与ROCK2表达的影响

目的 观察电针刺激对局灶性脑梗死大鼠神经功能及梗死灶周围皮质ROCK1和ROCK2表达的影响,初步探讨其对大脑缺血组织的保护机制。方法 将40只雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和电针穴位组,每组10只。用改良Longa法制作大脑中动脉闭塞（MCAO）模型,在大鼠麻醉苏醒后90 min对电针穴位组大鼠进行电针刺激,每天1次,连续14 d。分别在术后1、3、7、14 d时对各组大鼠进行改良神经功能缺损评分（mNSS）。术后14 d时,用免疫组化和蛋白质印迹法检测缺血侧大脑皮质中ROCK1、ROCK2蛋白的表达情况。结果 正常组和假手术组未出现神经功能缺损表现。术后7、14 d,电针穴位组mNSS评分较模型组下降（P<0.05）。免疫组化和免疫印迹结果显示,模型组ROCK1和ROCK2蛋白表达上调,电针穴位组ROCK1和ROCK2蛋白表达较模型组减少（P<0.05）。结论 电针刺激促进局灶性脑梗死后大鼠神经功能恢复,可能与其下调ROCK1和ROCK2蛋白表达有关。     

实验性大鼠脊髓损伤后运动能力及病理学变化的研究

目的:研究实验性大鼠脊髓损伤后不同时点的运动能力及脊髓组织病理学改变。方法:在以10×10克.厘米力(gram.centimeter force,gcf)打击大鼠脊髓背侧致脊髓损伤实验模型上,利用改良后Gale联合评分法(the combine behavioral score,CBS)判断脊髓损伤后大鼠的运动功能;通过HE和NSE免疫组化染色观察损伤后脊髓组织和神经元的病理变化。结果:实验性大鼠脊髓损伤后表现为双后肢软瘫,肌张力降低,损伤平面以下各种反射不同程度的减弱或消失;脊髓损伤后12 h、1、3、5、7和14 d CBS各项运动能力评分明显低于对照组(P<0.01);12 h~5 d的损伤脊髓组织主要表现出血、细胞肿胀、尼氏体消失及大量炎性细胞浸润;7~14 d炎性反应逐渐减轻,损伤区出现囊性变,空洞形成。在脊髓损伤后12 h~3 d损伤及周围区神经元数量急剧减少。结论:大鼠实验性脊髓损伤早期以炎性反应和神经细胞大量死亡为主,并伴随着动物运动能力的显著降低。     

选择性COX-2抑制剂对大鼠急性脊髓损伤后运动诱发电位和后肢运动功能的影响

目的 探讨选择性COX-2抑制剂对大鼠脊髓损伤后运动诱发电位(MEP)和后肢运动功能的影响.方法 将24只Wistar大鼠随机分为对照组和选择性COX-2抑制剂组(COX-2组),每组12只.改良Allen方法致T11段脊髓不完全损伤,两组分别经尾静脉注射生理盐水0.5 mL、哌瑞昔布10 mg/kg, 分别于伤后即刻、30 min、1 h、4 h、8 h、1 d、3 d、5 d进行MEP测定, 伤后2周进行行为学检查(斜板实验+Gale评分).结果 大鼠脊髓损伤后,COX-2组MEP潜伏期延长和波幅降低的变化小于对照组(t=2.947～5.627,P<0.05); COX-2组后肢运动功能的变化优于对照组(t=2.538、2.863,P<0.05).结论 选择性COX-2抑制剂能有效地阻止潜伏期的延长,明显抑制波幅的降低,并促进后肢运动功能的恢复;MEP恢复早于后肢运动功能的恢复.     

大鼠慢性压迫性脊髓损伤后EphA2在脊髓前角运动神经元中的表达

目的 探讨慢性脊髓损伤后红细胞生成素诱导肝癌细胞株受体A2(EphA2)在脊髓中的变化规律,寻找脊髓损伤后治疗的靶点.方法 将40只Wistar大鼠分为假手术组、轻度压迫组(CR 20%)、中度压迫组(ca 40%)、重度压迫组(ca 60%)4组.T10水平脊髓背侧加压,压迫方法采用塑料螺钉渐进性加压,分次完成手术.对大鼠进行后肢运动功能评分及所取脊髓标本进行原位杂交分析,对脊髓前角EphA2阳性细胞率进行统计分析,比较各组之间的差异.结果 EphA2阳性细胞主要存在于压迫远端脊髓灰质中,其中以脊髓前角运动神经元为著.假手术组有很少量EphA2阳性细胞,压迫组EphA2阳性细胞明显升高(P<0.01),中度压迫组及重度压迫组较轻度压迫组升高(P<0.05).中度压迫组及重度压迫组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 慢性压迫性脊髓损伤后脊髓前角运动神经元EphA2表达升高.慢性脊髓压迫可以诱发脊髓EphA2表达升高,对脊髓损伤是一个保护性因素.     

大鼠脊髓急性损伤后凋亡相关基因的表达

目的：检测大鼠脊髓损伤后凋亡相关基因的表达,以探讨神经细胞凋亡的分子机制。方法：大鼠脊髓T8-9经中度压迫损伤后,分别在30min,2、4、8、24、48和72h处死取材（n=6）,应用免疫组化及原位杂交技术对脊髓组织进行标记,以检测p53,bcl-2,bax的表达。结果：损伤4h后P53,Bax蛋白及p53mRNA大量表达,其中P53蛋白在24h达到高峰,而Bcl-2仅有少量表达,bcl-2mRNA未见表达。结论：脊髓损伤后凋亡基因（p53,bax)大量表达,并可能在神经细胞的凋亡过程中起重要作用。