黑色素瘤抗原基因在肝细胞癌细胞株中的表达

黑色素瘤抗原基因 (ＭＡＧＥ)是ｖａｎｄｅｒＢｒｕｇｇｅｎ等[1] 于 1991年发现的重要的肿瘤相关基因 ,在肝癌标本中ＭＡＧＥ 1表达率达 80 %左右 ,应用ＭＡＧＥ抗原肽对手术、化疗等常规方法治疗效果差的肝细胞肝癌 (ＨＣＣ)进行免疫治疗有一定的应用价值和可行性[2 ,3 ] 。应用ＭＡＧＥ抗原肽对ＨＣＣ进行免疫治疗的体外研究的关键是 ,诱导出对带有ＭＡＧＥ抗原的靶细胞具有特异性杀伤性能力的细胞毒淋巴细胞 (ＣＴＬ)。本实验对 8种ＨＣＣ细胞株ＭＡＧＥ基因的表达和人类白细胞抗原一类抗原 (ＨＬＡⅠ类抗原 )类型进行了研究 ,筛选出相…     

黑色素瘤抗原基因在食管鳞癌组织中的表达

黑色素瘤抗原 (ｍｅｌａｎｏｍａａｎｔｉｇｅｎ ,ＭＡＧＥ)基因是首先从黑色素瘤中发现的一组肿瘤相关抗原基因 ,其在肿瘤免疫治疗中的作用颇受重视。我们采用ＲＴ ＰＣＲ法 ,对 33例食管癌标本的ＭＡＧＥ基因表达进行了检测 ,旨在为ＭＡＧＥ基因及其产物在食管癌患者主动免疫治疗中的应用提供依据。1 临床资料与方法 :收集我院 1999年 6月～ 2 0 0 0年 3月的 33例食管鳞癌标本 ,男 2 3例 ,女 10例 ,患者平均年龄6 5 6岁。根据术后病理确定肿瘤的长度、分化程度、浸润深度、淋巴结转移情况。术中取材 ,先取肿瘤边缘 5ｃｍ外正常食管组织 ,…     

肝癌白细胞抗原-G的表达及其在肝癌肝移植预后中的价值

目的探讨人类白细胞抗原-G(human leukocyte antigen-G,HLA-G)在肝细胞肝癌组织中的表达及其在肝癌肝移植患者预后中的价值。方法回顾性分析2004年1月至2008年5月期间中山大学附属第三医院肝移植中心收治的83例肝癌肝移植患者的临床资料。应用免疫组化方法检测肝细胞肝癌组织及其癌旁组织中HLA-G的表达情况,应用Kaplan-Meier法计算累积生存率和无瘤生存率,采用log-rank检验和Cox回归模型分别进行无瘤生存率单因素和多因素分析。结果 83例肝癌肝移植患者中,35例(42.2%)肿瘤复发。全部病例1、3和5年累积生存率分别为97.2%、89.8%和43.1%,1、3和5年无瘤生存率分别为93.6%、68.9%和38.7%。肝癌组织中HLA-G表达阳性率(68.7%)明显高于癌旁组织(15.7%,P<0.01)。HLA-G的表达与肿瘤直径、病理分级和血管侵犯有关(P<0.05)。单因素分析显示,影响肝癌肝移植术后无瘤生存率的危险因素有HLA-G表达(P<0.01)、肿瘤直径(P<0.05)、肿瘤侵犯血管(P<0.01)及病理分化程度(P<0.01)。HLA-G表达阳性组移植后的无瘤生存率低于HLA-G表达阴性组(P<0.01)。Cox风险回归模型结果表明,HLA-G表达(P<0.05)、肿瘤侵犯血管(P<0.01)及病理分化程度(P<0.05)是影响肝癌肝移植患者术后无瘤生存率的独立危险因素。结论肝癌组织存在HLA-G表达。HLA-G表达、肿瘤侵犯血管及病理分化程度是影响肝癌肝移植患者术后无瘤生存率的独立危险因素。对HLA-G表达阳性患者采取干预治疗及严格筛选肝癌肝移植的适应证可有效降低术后肿瘤的复发率。     

细胞凋亡及增殖细胞核抗原双染色在肝细胞肝癌组织中的研究

目的 研究肝细胞肝癌细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）／凋亡细胞比值与肝细胞肝癌分化程度的关系。方法 应用原位末端标记法（TUNEL）及免疫组化双染色技术,对35例肝细胞肝癌石蜡包埋组织进行检测。结果 不同分化程度癌组织中细胞凋亡和PCNA的阳性率不同。分化程度高,细胞凋亡阳性率高、PCNA阳性率偏低;分化程度低,细胞凋亡阳性率偏低、PCNA阳性率高。随分化程度的降低,PCNA／凋亡细胞的比值显著增加,二者有良好的相关性。结论 PCNA／凋亡细胞的比值可作为评估肝细胞肝癌分化程度的指标。     

肝细胞癌抗原519基因在肝癌组织中的表达

我们采用逆转录 聚合酶链反应(RT PCR )对肝细胞癌抗原 5 19(HCA5 19)在肝细胞肝癌 (HCC)、肝硬化和正常肝组织中的表达情况进行了研究。一、材料与方法1.对象 :HCC患者标本 5 6例 ,均于术中切下标本后立刻取癌和癌旁组织 ,经过液氮速冻后保存于 -80℃冰箱待用 ,均经过常规病理检查证实。其中男41例 ,女 15例。取 15例肝硬化和 15例正常肝组织及 5例正常睾丸组织作为对照。2 .总RNA的提取、cDNA的合成和PCR反应参照文献中的方法[1] 进行 :HCA5 19引物序列为 5’ GCAAGC TATTGTCACACCTTTG 3’和 5’ AT GATTACAGGA…     

黑色素瘤抗原基因-3在直肠癌的表达及意义

目的检测黑色素瘤抗原基因3(MAGE3)在直肠癌中的表达,探索其与直肠癌临床病理的关系及其在直肠癌免疫治疗中的应用价值。方法采用RT PCR法,对33例直肠癌患者的癌组织及其相应距肿瘤边缘(5±1)cm的癌旁组织和手术切缘(乙状结肠端)以及3例直肠息肉标本(无瘤)的MAGE3的表达情况进行检测,并对RT PCR扩增产物中的目的基因片段进行DNA测序验证。结果33例直肠癌组织中,MAGE3基因的表达阳性率为42.42%(14/33),在癌旁组织和手术切缘组织中,MAGE3基因的表达阳性率分别为18.18%(6/33)和15.15%(5/33),3例直肠息肉标本未见MAGE3表达。肿瘤组织MAGE3基因表达阳性率均显著高于癌旁组织和手术切缘组织(P<0.05);而与患者年龄、性别、肿瘤组织学类型、Dukes分期及淋巴结转移无关(P>0.05)。结论基于MAGE3基因在直肠癌中的高表达率,MAGE3表达的蛋白可以作为一种有前途的靶点用于免疫治疗,同时有望成为一种筛查和随访指标。     

HER-2在恶性黑色素瘤中的蛋白表达、基因扩增及其临床意义

目的：检测恶性黑色素瘤中 HER2的蛋白表达、基因扩增情况,并探讨其临床意义。方法以石蜡包埋组织芯片为材料,分别采用免疫组织化学 PV9000二步法与荧光原位杂交技术检测 HER2蛋白在恶性黑色素瘤、色素痣中的表达及基因扩增。结果 HER2蛋白在恶性黑色素瘤、色素痣中的表达阳性率分别为76.9%、25.0%,扩增阳性率分别为75.0%、30.0%;两者比较,差异具有统计学意义(χ2=12.480,P=0);在恶性黑色素瘤中 HER2蛋白表达、基因扩增阳性率与浸润深度及淋巴结转移有关(P<0.05)。结论 HER2与恶性黑色素瘤的发生、发展有关,可以将其作为判断恶性黑色素瘤生物学行为的重要参考指标。     

黑色素瘤抗原-3基因在肝细胞癌中的研究

目的 检测黑色素瘤抗原－３（ｍｅｌａｎｏｍａ ａｎｔｉｎｅｇ－３,ＭＡＧＥ－３）ｍＲＮＡ在肝细胞癌（ＨＣＣ）中的表达,探计用ＭＡＧＥ－３基因编码蛋白作为疫苗对ＨＣＣ患者进行免疫治疗在理论上的可行性。方法 用ＲＴ－ＰＣＲ方法对４５例ＨＣＣ患者癌组织和相应癌旁肝组织以及１６例肝硬化组织和１２例正常肝组织的ＭＡＧＥ－３ ｍＲＮＡ表达情况进行研究,对３例ＲＴ－ＰＣＲ扩增产物中目的基因片段进行ＤＮＡ序列测定     

凋亡抑制基因x-相关细胞凋亡抑制蛋白基因在肝癌细胞中的表达及临床意义

目的探讨x-相关细胞凋亡抑制蛋白基因（XIAP）mRNA及蛋白在肝癌组织和癌旁组织中的表达情况，及其与肝癌发生的关系。方法肝癌患者手术切除标本10例，应用半定量逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测肝癌组织和癌旁组织细胞XIAP mRNA基因的相对表达量，并通过免疫组织化学SP法检测10例肝癌组织和癌旁组织标本XIAP蛋白的表达情况。结果（1）半定量RT-PCR显示：XIAP基因在肝癌组织中均呈高表达，相对表达量为3．211±2．43，而在对应的癌旁组织中呈低表达或无表达，相对表达量为1．947±1．890，两组之间差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）免疫组织化学及图像分析结果显示：在肝癌组织和癌旁组织中XIAP蛋白平均灰度扫描值分别为161．800±29．470和144．240±26．290，两组之间差异有统计学意义（P〈0．01）。结论XIAP在肝癌中的表达明显增高，可能在肝癌的发生、发展过程中发挥重要作用。     

利用组织芯片研究Rb基因在原发性肝细胞肝癌中的表达

目的：研究原发性肝细胞肝癌（HCC）中Rb基因的表达，方法：利用组织芯片技术和免疫组织化学技术（SP法）检测40例HCC有其相应癌旁，远癌正常组织中Rb蛋白的表达情况。结果：40例原发性HCC患者标本中，肿瘤组织中Rb蛋白表达缺失者有17例，癌旁组织中有4例，在远癌 正常组织有1例，HCC肿瘤组织中Rb蛋白缺失率显著高于相应癌旁及远癌正常组织（P＜0．05），Rb蛋白表达的缺失与肿瘤的大小，病理学分级无统计学相关性（P＞0．05），结论：HCC的发生，发展与Rb蛋白的缺失可能有关，组织芯片是一种可高效进行肿瘤分子病理研究的技术平台。     

膀胱移行细胞癌组织中黑色素瘤抗原基因及蛋白的表达

目的探讨膀胱移行细胞癌(TCC)中黑色素瘤抗原(MAGE)基因mRNA的表达及其临床意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)技术检测3个膀胱TCC细胞株和20例膀胱TCC患者癌组织(新鲜标本,T1期7例,T2期5例,T3期6例,T4期2例;G11例,G211例,G38例)MAGE A1,A2,A3,A4mRNA表达,免疫组化法检测105例膀胱TCC患者癌组织(石蜡标本,T1期35例,T2期12例,T3期26例,T4期13例,另19例无法确定分期;G113例,G244例,G348例)MAGE A4蛋白的表达。结果3个膀胱TCC细胞株均有MAGE基因mRNA的表达;20例膀胱TCC新鲜标本组织MAGEmRNA阳性:A112例(60%),A216例(80%),A311例(55%),A418例(90%),A1～A4均阳性8例(40%)。105例膀胱TCC石蜡标本组织中MAGE A4蛋白阳性53例(50%),高分级膀胱TCC组织中强表达(++或+++)率为27%(13/48),显著高于低分级的4%(2/57)(F=12.00,P<0.01),高分期膀胱TCC组织中强表达率为27%(14/51),显著高于低分期的0%(0/35)(F=11.48,P<0.01)。结论MAGE基因在膀胱TCC中有较高表达,分级或分期高的膀胱TCC中MACE A4蛋白明显强表达。     

4种肿瘤-睾丸抗原在肝细胞癌中的表达

目的 观察肿瘤睾丸(CT)抗原MAGE1、SSX-1、CTp11及HCA587基因mRNA在肝细胞癌(HCC)中的表达并探讨其对HCC免疫治疗的意义。方法 用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法对HCC患者癌组织和对照组织中的目的基因mRNA进行检测。结果在检测的105例HCC组织中,MAGE-1、SSX-1、CTp11、HCA 587基因mRNA阳性率分别是75.2％、72.4％、62.9％和56.2％:至少表达1种CT抗原者达93.3％;对照组仅有3例癌旁组织SSX-1基因mRNA表达为弱阳性。结论MAGE-1、SSX-1、CTp11及HCA 587基因mRNA在HCC中呈高比例、高特异表达,是HCC免疫治疗的理想靶位;多个CT抗原同时在HCC中表达;为HCC多价瘤苗的研制提供了实验依据。     

b-FGF在肾癌组织中表达的临床意义

目的 探讨ｂ－ＦＧＦ（碱性成纤维细胞生长因子）在肾癌中表达的临床意义。方法 采用斑点杂交技术和免疫组化技术测定２０例肾癌患者癌组织、癌旁和正常肾组织ｂ－ＦＧＦ表达情况。结果 肾癌组织中ｂ－ＦＧＦ表达明显高于癌旁和周围正常肾组织（Ｐ〈０．０１），ｂ－ＦＧＦ表达升高与肿瘤分期、分级密切相关，与肿瘤大小无明显关系。结论 ｂ－ＦＧＦ为肾癌组织自身分泌，与肾癌的发生和发展密切相关。     

冷冻肿瘤细胞膜抗原在膀胱肿瘤中的研究与应用

采用冷冻肿瘤细胞膜抗原接种预防膀胱肿瘤复发和转移。膀胱肿瘤患者２５例随机分为接种自体瘤苗组与非接种组，接种组ＮＫ活性、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ４／ＣＤ８接种后明显升高，达正常水平；ＩＬ２、ＳＩＬ２Ｒ亦明显升高；随访３～１６个月，未接种组２例复发，其中１例死亡。结果提示：冷冻肿瘤细胞膜具有明显的抗原性，能显著激活相关的Ｔ淋巴细胞，可做为一种新型肿瘤疫苗     

肿瘤-睾丸抗原SSX1基因mRNA在肝细胞肝癌中的表达

目的：检测肿瘤－睾丸抗原SSX1基因mRNA在肝细胞肝癌（HCC）中的表达情况。方法：用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）对47例HCC患者的癌组织和相应癌旁组织以及15例肝硬化和15例正常肝组织的SSX1基因mRNA表达情况进行检测，随机选择4例RT－PCR扩增产物的目的片段进行DNA序列测定。结果：47例HCC患者中，39例表达SSX1 mRNA，阳性率为83％，相应的癌旁组织中有3例为弱阳性，其中2例患者获得了离癌灶更远处的活检组织，对其进行RT－PCR检测，结果显示阴性；所测的15例肝化和15例正常肝组织均未检测到SSX1的表达。4例DNA测序结果表明RT－PCR产物确为SSX1 cDNA。SSX1的表达与年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、血清甲胎蛋白（AFP）水平、乙型肝炎病毒（HBV）和丙型肝炎病毒（HCV）感染无显著相关性（P＞0．05）。结论：SSX1在HCC中呈高比例、高特异表达，可望成为HCC免疫治疗的理想靶位。     

黑色素瘤抗原-D4在非小细胞肺癌组织中的表达及其意义

目的 检测黑色素瘤抗原(MAGE) -D4基因在非小细胞肺癌(NSCLC)组织及正常组织中mRNA的表达水平差异.方法 对54例NSCLC患者按年龄、性别、吸烟史、肿瘤大小、病理类型、细胞分化程度、淋巴结有否转移等进行分组,并检测其MAGE-D4的表达.结果 MAGE-D4在NSCLC组织的表达(1.74)高于其在正常组织中的表达(0.55,P＜0.05).MAGE-D4的表达与患者年龄、性别、烟龄、肿瘤大小无关;其在鳞癌中的表达(1.99)高于腺癌(1.27,P＜0.05);在细胞分化差的组织中表达(2.96)高于细胞分化较好的组织(1.01,P＜0.05);在淋巴结转移者中的表达(2.07)高于无淋巴结转移者(1.42,P＜0.05).结论 MAGE-D4基因在NSCLC组织中有较高的表达水平,并存在一定的表达规律,可作为NSCLC的特异性抗原.     

重组腺相关病毒介导的MDA-7基因对人肝癌细胞的选择性凋亡诱导效应

目的 探讨PEG启动子调控腺相关病人毒介导的黑色素瘤分化相关基因MDA-7对肝癌细胞的选择性凋亡诱导效应.方法 以重组腺相关病人毒rAAV-PEG-MDA-7表达系统感染人肝癌细胞株HepG2细胞和正常人肝细胞株LO2细胞,Westerm Blot检测转染细胞内MDA-7蛋白,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术分析细胞周期、Annexin-Ⅴ、线粒体跨膜电位(△Ψm),RT-PCR检测bcl-2基因mRNA.结果 重组腺相关病毒rAAV-PEG-MDA7可特异性转染HepG2细胞,MDA7蛋白在HepG2细胞中高效表达,并呈时间依赖性;重组腺相关病毒rAAV-PEC-MDA-7可抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡,细胞周期分析处于G0/G1期细胞百分比明显增多,处于G2/M期的细胞减少,并且可见到较明显的凋亡峰的形成,从24 h开始Annexin-Ⅴ阳性细胞比例增多,△Ψm降低,抗凋亡基因bcl-2 mRNA表达降低.而重组腺相关病毒rAAV-PEG-MDA-7对LO2细胞无类似效应.结论 构建出的重组腺相关病毒rAAV-PEG-MDA-7表达系统可选择性抑制肝癌细胞增殖和诱导其凋亡,其诱导凋亡机制受到bcl-2家族经线粒体途径的调节.     

RhoC基因在肝细胞癌中的表达及其意义

目的探讨RhoC基因与肝细胞癌 (HCC)的发生发展和侵袭转移的关系。方法采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)在半定量水平检测 2 5例HCC及其相对应的癌旁肝组织和 4例门静脉主干癌栓或肝外转移灶中RhoCmRNA的表达 ;同时采用PCR产物单链构象多态性 (PCR SS CP)银染法检测RhoC基因的突变情况。结果本组 2 5例HCC中RhoCmRNA的表达较癌旁肝组织高 ,其光密度比值分别为 1 8± 1 1和 1 0± 0 7,P <0 0 1,差异有显著意义 ;4例门静脉主干癌栓或肝外转移灶中的RhoCmRNA的表达较相对应的肝内肝癌病灶高 ,其光密度比值分别为 3 3± 0 5和 2 0± 0 7,P <0 0 1,差异有显著意义 ;将 2 5例HCC分为RhoC基因过表达组和高表达组后发现 ,过表达组中肝癌细胞分化较差 ,静脉受侵严重 ,且以结节性肝癌居多 (P <0 0 5 ) ;而 2 5例HCC经PCR SSCP银染法分析未发现异常泳动条带。结论RhoC基因与HCC的发生发展和侵袭转移密切相关 ,且可能是通过表达升高而非突变发挥作用。     

AG1024对肝癌细胞系增殖与凋亡的影响

目的 探讨胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF-IR)酪氨酸激酶阻断剂AG1024(3-溴-5-叔丁基-4-羟基苯叉苹果酸腈)对人肝癌癌细胞的增殖抑制作用和凋亡诱导作用.方法 采用MTY、流式细胞术、细胞侵袭实验、RT-PCR和Western blot等方法检测在不同浓度(0～40 μmol/L)的AG1024作用下,人肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721的细胞形态学及分子生物学特性的改变.结果 MTT检测显示,AG1024剂量依赖性地抑制肝癌细胞的增殖.流式细胞术提示,AG1024明显促进肝癌细胞的凋亡.Transwell小室侵袭实验显示,AG1024能明显抑制肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721的侵袭能力,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR结果显示,肝癌细胞中IGF-IR呈高表达,不同浓度AG1024作用后,剂量依赖性地增加细胞色素C的表达.Western blotting结果显示,AG1024降低胞外途径信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)的磷酸化水平,下调procaspase-3的表达,而总ERK保持不变.结论 AG1024阻断胰岛素样生长因子1型受体,从而阻断其下游的信号传导途径,抑制肝癌细胞的增生,诱导凋亡.     

马钱子碱抗肝细胞癌作用的实验研究

目的 探讨马钱子碱抗肝细胞癌的作用及其机制.方法 体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,加入不同浓度的马钱子碱(2.5～400μg/ml),细胞培养72 h,MTT法测定细胞生长抑制率.Western blotting和荧光定量RT-PCR技术分别测定培养24、48、72 h肝癌细胞PCNA、Cyclin D1、FAS基因mRNA和蛋白表达.结果 随着马钱子碱用量逐渐增加,对人肝癌细胞SMMC-7721生长抑制作用增强,马钱子碱用量为320 μg/ml时对肝癌细胞生长抑制率接近100%.马钱子碱作用肝癌细胞24 h与作用48 h相比,Fas蛋白和mRNA表达差异无统计学意义(分别F=2.547,1.582,均P＞0.05),作用72 h时差异有统计学意义(分别F=1.036,1.137,均P＜0.05);PCNA和Cyclin D1的mRNA和蛋白表达各时间点差异无统计学意义(PCNA分别F=3.612,2.174,3.029;Cyclin D1分别F=2.361,2.915,1.976,均P＞0.05).结论 马钱子碱抑制肝癌细胞生长,可能通过肝癌细胞FAS基因和蛋白表达增加,诱导肝癌细胞凋亡发挥抑制作用,而与PCNA和Cyclin D1作用无关.

Abstract：

Objective To study the effect of brucine on the growth of a hepatocellular carcinoma cell line in vitro. Methods Brucine was added into a liver cancer cell line of SMMC-7721 in vitro, at drug concentration of brucine from 2. 5 μg/ml to 400 μg/ml. The inhibition rate of cell growth was measured by MTT technique after the cells were cultured for 72 hours. The protein and mRNA expression of PCNA,cyclin D1 and FAS were respectively assayed with Western blotting and fluorescent quantitation RT-PCR techniques at 24, 48, 72 h. Results The inhibition rate of liver cancer cell was near 100% when the brucine concentration was at 320 μg/ml. The protein and mRNA expression of FAS were of no significant difference at 24 h vs 48 h ( seperately F = 2. 547,1. 582, all P ＞ 0. 05 ), and significant difference existed at 24 h vs 72 h( seperately F = 1. 036, 1. 137, all P ＜ 0. 05 ). The protein and mRNA expression of PCNA,Cyclin D1 were of no significant difference between various time period( seperately PCNA F = 3.612,2. 174,3.029;Cyclin D1 F=2.361,2.915,1.976,all P＞0.05). Conclusions Brucine inhibits the growth of liver cancer cells, by inducing increased apoptosis of the cells probably through FAS overexpression.