骨髓移植供受者HLA—DRB的单链构型多态性配型

用ＰＣＲ和单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）法检查供受的ＨＬＡ－ＤＲＢ－１基因座的多态性的一致性，以此做ＤＲＢ的基因配型。１６例同胞供受对的ＤＲＢ－１的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ配型，有６对相合（６／１６），１０对不合（１０／１６）。此基因配型结果与其它配型结果比较，说明ＤＲＢ－１的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ配型在区分同胞供受对Ⅱ类抗原多态性上有较高的灵敏度，同时表现此类配型在应用于骨髓移植前检查同胞供的意义     

骨髓移植供受者HLA－DRB的单链构型多态性配型

用ＰＣＲ和单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）法检查供受者的ＨＬＡ－ＤＲＢ－１基因座的多态性的一致性，以此做ＤＲＢ的基因配型。１６例同胞供受者对的ＤＲＢ－１的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ配型，有６对相合（６／１６），１０对不合（１０／１６）。此基因配型结果与其它配型结果比较，说明ＤＲＢ－１的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ配型在区分同胞供受者对的Ⅱ类抗原多态性上有较高的灵敏度，同时表明此类配型在应用于骨髓移植前检查同胞供者的意义。     

聚合酶链反应—单链构象多态性分析与反向杂交法进行骨髓移植…

用聚合酶链反应（ＰＣＲ），扩增骨髓移植（ＢＭＴ）受者及７８例无关供者ＨＬＡ－ＤＰＢ１基因，作单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析，初步选出与受者ＨＬＡ－ＤＰＢ１ＳＳＣＰ带型相同者；最后进行反向杂交检测，确定ＨＬＡ－ＤＰＢ１更为相容的供者。应用上述技术，从７８例无关供者中选择出１例与ＢＭＴ受者基因相同的供者。整个过程快速、经济、准确性高。     

可变串联重复区多聚酶链反应法评估异基因骨髓移植后的嵌合状态

为更好地评价异基因骨髓移植（ａｌｏ－ＢＭＴ）后的嵌合状态，采用可变串联重复区（ＶＮＴＲ）Ｄ１Ｓ８０位点多聚酶链反应（ＰＣＲ）法对１０例白血病患者ａｌｏ－ＢＭＴ后的嵌合状态进行检测。结果９例为完全嵌合（ＣＣ），１例为混合嵌合（ＭＣ），其中２例经核型分析结果证明为ＣＣ，６例经小卫星ＤＮＡ探针Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析也证明为ＣＣ。说明ＶＮＴＲ位点ＰＣＲ法检测ａｌｏ－ＢＭＴ后的嵌合状态具有方法简便、快速、灵敏度高的优点，且不需放射性同位素操作，不受血型、性别、ＨＬＡ配型及骨髓增生低下等影响。     

骨髓移植供受者MLR与HLA－D基因配型相关性分析

用血清学、混合淋巴细胞反应（ＭＬＲ）和基因配型法分析了骨髓移植供受者ＨＬＡ－ＩＩ类抗原的匹配程度。结果ＨＬＡ－ＤＲ血清型相合的８５对供受者中仅有３１对基因配型相合；ＤＲ血清不合的８对中有７对ＤＲβ＿１基因不合。说明基因配型较血清配型有较高的不匹配率和灵敏度。混合淋巴细胞反应（ＭＬＲ）的配对刺激指数（ＲＲＩ）＞１５％时大部分供受者对的ＨＬＡ－ＩＩ类基因配型是不合的，而ＲＲＩ＜１５％时则不能肯定地反映供受者对ＩＩ类基因的相容性。     

HLA—Ⅱ类基因分型在器官移植中的应用研究

目的：探讨应用于临床器官移植的组织配型新技术。方法：采用快速一提技术；建立微量ＳＳＰ－ＨＬＡ－ＤＲＢ／ＤＱＢ基因分型方法，并与单克隆抗体一步法分型结果进行对比研究。结果：应用两种方法对７３份标本进行ＨＬＡ－Ⅱ类抗原／基因分型。结果完全相符，微量ＳＳＰ法不但快速，需血量少，而且分辨率高，结论：微量ＳＳＰ法具有快速１、准确、省血等优点，适合在临床器官移植配型中推广应用。     

骨髓移植供受者MLR与HLA—D基因配型相关性分析

用血清学、混合淋巴细胞反应（ＭＬＲ）和基因配型法分析了骨髓移植供受ＨＬ－ＩＩ类抗原的匹配程序。结果ＨＬＡ－ＤＲ血清型相合的８５对供受中仅有３１对基因配型相合；ＤＲ血清不合的８对中有７对ＤＲβ１基因不合。说明基因配型较血清配型有较高的不匹配率和灵敏度。混合淋巴细胞反应（ＭＬＲ）的配对刺激指数（ＲＲＩ）〉１５％时大部分供受对的ＨＬＡ－Ｉ类基因配型是不合的，而ＲＲＩ〈１５％时则涌步定地反映供受对     

骨髓移植后肝静脉闭塞病四例

肝静脉闭塞病（ＶＯＤ）是骨髓移植后主要早期并发症之一,病死率高。目前国内有关ＶＯＤ的报告较少。现将我院４例ＶＯＤ患者的情况报告如下。病例和方法１病例４例患者均为白血病,其中异基因骨髓移植３例,自体骨髓移植１例。移植前分别化疗４～７个疗程。异基因骨髓移植供、受者为ＨＬＡ相合的同胞。一般情况见表１。２预处理方案及移植经过４例患者均为环磷酰胺（ＣＴＸ）加全身照射（ＴＢＩ）。ＣＴＸ６０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１×２天,例１和例２ＴＢＩ３．３Ｇｙ／ｄ×３天,例３ＴＢＩ４．０Ｇｙ／ｄ×３天,例４ＴＢＩ５．０Ｇｙ…     

微量聚合酶链反应对人类白细胞抗原的基因分型

目的 探讨应用于移植的人类白细胞抗原（ＨＬＡ）二类基因（ＤＲＢ／ＤＱＢ）快速分型新技术。方法 采用快速ＤＮＡ抽提技术,建立了ＨＬＡ＿ＤＲＢ／ＤＱＢ微量序列特异性引物聚合酶链反应基因分型方法,对１４２份供受者ＤＮＡ进行ＨＬＡ－ＤＲＢ／ＤＱＢ基因分型,并与单克隆抗体一叔法ＨＬＡ血清学分型技术进行对比研究。结果 应用微量ＰＣＲ－ＳＳＰ方法共检出１３种ＤＲＢ１等位基因和 ＤＱＢ１等位基因,与血清学分型结果     

应用PCR－SSP对异基因骨髓移植供受者HLA－DQA1位点的基因分型

为探索一种可靠性和灵敏性高的ＨＬＡⅡ类基因的配型方法，根据Ｏｌｅｒｕｐ提出的１６个特异性引物序列，用多聚酶链反应－序列特异性引物（ＰＣＲ－ＳＳＰ）方法，对ＤＱＡ＿１基因位点的多态性进行检测和分型，并与多聚酶链反应－序列特异性寡核苷酸探针杂交（ＰＣＲ－ＳＳＯＰＨ）及多聚酶链反应－单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）检测结果进行比较，获得了一致的分型结果。ＰＣＲ－ＳＳＰ可分辨出ＤＱＡ＿１位点的纯合体和杂合体等位基因，并能检测出单一碱基的点突变；它将ＰＣＲ扩增和检测两个步骤合并为一次完成，操作更简便、快速。并已将ＰＣＲ－ＳＳＰ方法成功地用于１５对异基因骨髓移植的供、受者的分型。ＰＣＲ－ＳＳＰ作为基因分型的有效技术，可为骨髓来源提供直接的科学依据。     

聚合酶链反应顺序特异性寡聚核苷酸探针反向杂交法在HLA-DRB1分型中的应用

目的:探讨聚合酶链反应顺序特异性寡聚核苷酸探针(polymerasechainreaction-sequencespe-cificoligonucleotideprobes,PCR-SSOP)反向杂交法应用于人类白细胞抗原(humanleukocyteantigen,HLA)-DRB1配型的可行性。方法:随机选取25例已行聚合酶链反应顺序特异性引物(polymerasechainreac-tion-sequencespecificprimers,PCR-SSP)法HLA-DRB1配型的肾移植受者的血标本,采用PCR-SSOP反向杂交法再次配型,并与PCR-SSP法的结果比较。结果:两法的一致性达92%。2例不一致的患者经再次PCR-SSOP反向杂交法配型后,其中1例与PCR-SSP结果一致,PCR-SSOP反向杂交法的平均操作时间为4小时30分。结论:PCR-SSOP反向杂交法是一种能以中等分辨度进行等位基因分型的方法,操作较简单,结果解读客观,适用于临床肾移植配型。     

散发性阿尔茨海默病易患性与人类白细胞抗原基因频率的相关性

目的探讨人类白细胞抗原HLA-DR2,DRB1*04,DRB1*09基因频率与散发性阿尔茨海默病(SAD)的关系,试图从分子免疫遗传学角度揭示SAD的发病机制。方法SAD组44例(广州市精神病院中筛选),男11例,女33例,年龄59～91岁。正常对照组45例(中山大学附属第二医院保健科体检的自愿健康老年人),男14例,女31例,年龄61～88岁。采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)技术分别测定44例SAD患者(SAD组)和45例正常老年人(对照组)的HLA-DR2,DRB1*04,DRB1*09基因频率。结果SAD患者中3种基因频数分别为25,5,16;频率分别为28.41%,5.68%,18.18%。而正常老年人中的相应基因频数分别为16,13,19;频率分别为17.78%,14.44%,21.11%。其中HLA-DR2,DRB1*04较对照组差异有显著性意义(χ2=4.002,4.187,P<0.05),DRB1*09差异无显著性意义(χ2=0.050,P>0.05)。结论HLA-DR2可能是SAD的易感基因,而HLA-DRB1*04可能对SAD的发病起到保护作用。HLA-DRB1*09与SAD发病无关联。     

HLA-A,B,DRB1单体型频率计算及其在骨髓库中的应用

目的从群体资料计算HLAA,B,DRB1三座位单体型频率,并用于骨髓库寻找HLA匹配供者。方法根据HLA表型群体资料,使用最大数学预期值算法(ExpectationMaximization,EM)计算HLA三座位单体型频率。通过实例运算介绍HLA表型频率以及发现HLA匹配无关供者的概率。结果①使用DNA基因分型技术鉴定12193例无关汉族健康个体HLA表型,计算求得HLAA,B,DRB1单体型频率。②预期概率与观察结果吻合,并用于评估骨髓库的最适大小。结论使用EM算法估计大样本汉族群体HLAA,B,DRB1三座位单体型频率,结果可靠,可用于评估骨髓库的最适大小和组份。     

Contribution of genetic factors to RA]

Multiplex families of rheumatoid arthritis (RA) and concordance of the development of RA in monozygotic twins strongly suggest the relationship of genetic factor to the onset of RA. Among many genetic markers, HLA shows the strongest association with RA and association between RA and HLA-DR4 has been reported in many ethnic groups. DNA typing of HLA class II genes revealed that DRB1 * 0405 (Dw 15) is the most susceptible DRB1 allele for RA in the Japanese. The particular epitope sequence at the third hypervariable region (position 70-74, and 86) and DR beta chain, expressed with the structure of the DR4 molecule seems to be important for the susceptibility to RA.     

Age-dependent HLA genetic heterogeneity of type 1 insulin-dependent diabetes mellitus.

The association of insulin-dependent diabetes mellitus (IDDM) with certain HLA alleles is well documented in pediatric patients. Whether a similar association is found in adult-on-set IDDM is not clear, although the disease occurs after the age of 20 in 50% of cases. HLA class II DRB1, DQA1, and DQB1 alleles were studied in 402 type I diabetics and 405 healthy controls (all Caucasian) using oligonucleotide typing after gene amplification. Alleles DRB1*03, DRB1*04, DQB1*0201, DQB1*0302, DQA1*0301, and DQA1*0501 were indeed enriched in diabetics and the highest relative risk was observed in patients carrying both the DRB1*03-DQB1*0201 and the DRB1*0402 or DRB1*0405-DQB1*0302 haplotypes. However none of these alleles, or specific residues, could alone account for the susceptibility to IDDM. Furthermore, there were major differences in HLA class II gene profiles according to the age of onset. Patients with onset after 15 yr (n = 290) showed a significantly higher percentage of non-DR3/non-DR4 genotypes than those with childhood onset (n = 112) and a lower percentage of DR3/4 genotypes. These non-DR3/non-DR4 patients, although presenting clinically as IDDM type 1 patients, showed a lower frequency of islet cell antibodies at diagnosis and a significantly milder initial insulin deficiency. These subjects probably represent a particular subset of IDDM patients in whom frequency increases with age. The data confirm the genetic heterogeneity of IDDM and call for caution in extrapolating to adult patients the genetic concepts derived from childhood IDDM.     

河南省骨髓库汉族捐献者HLA-A、B、DR高分辨基因多态性调查分析

背景：2009年开始,中华骨髓库加大HLA高分检测的力度,可缩短配型检索周期,提高配型成功率。目的：统计分析河南省骨髓捐献者HLA-A、B、DRB1高分辨基因多态性。方法：河南省汉族造血干细胞志愿捐献者血样3874人份,志愿捐献静脉血,EDTA抗凝。采用SSOHD荧光微珠流式高分辨HLA-A、B、DRB1基因分型检测方法,对3874份骨髓捐献志愿者血样进行高分辨分型检测,用PCR-SSP高分辨检测、SBT检测解决存在的模棱两可问题。等位基因计数法计算等位基因的基因频率。结果与结论：共检出A34个,B84个,DRB150个,A位点基因频率处于前5位的有A＊0201（0.1609）、A＊1101（0.1627）、A＊2402（0.1602）、A＊3001（0.0808）、A＊3303（0.0789）;B位点处于前5位的是B＊1302（0.0777）、B＊4001（0.0722）、B＊5101（0.0628）、B＊4601（0.0612）和B＊0702（0.0507）;DRB1位点处于前5位的是DRB1＊1501（0.1469）、DRB1＊0901（0.1318）、DRB1＊0701（0.1211）、DRB1＊1202（0.0612）、DRB1＊0405（0.0582）。     

应用反向斑点杂交技术进行脐血HLA-DRB基因分型方法的建立

HLA分子的多态性对于移植有十分重要的意义。常用的HLA基因分型方法中SSOP基因分型方法有较高分辨率，但操作过程复杂，仅适于大样本的HLA分型。PCR－SSP基因分型方法分辨率较低，但操作过程简单，适于临床要求。有必要建立一种简便、快速、价廉、高分辨率的基因分型方法。本研究取63份已知HLA－DRB型的脐血标本，经盐酸胍方法提取DNA用于反向斑点杂交（RDB）基因分型，同时采用SSOP和PCR－SSP方法进行比较。结果表明，所有样本用RDB方法基因分型均获得成功，可准确地分辨60个HLA－DRB等位基因，且结果与用SSOP和PCR－SSP方法的结果完全一致。结论提示，RDB方法可准确地分辨HLA－DRB等位基因，分辨率高，操作简单，适用于各种情况的HLA分型。     

P52Characteristics of HLA Class I and Class II Antigens of the Somali Population

HLA antigens of the Somali population are not categorised as well as those of other international ethnic groups. We analysed the HLA antigens of 76 unrelated Somalis who lived in the west of England. HLA ‐A, ‐B, ‐C and DRB1 typing was performed by polymerase chain reaction using sequence‐specific oligonucleotide probes (PCR‐SSOP) at a low‐intermediate resolution level. Phenotype frequency, gene frequency and haplotype frequency were used to study the relationship between Somalis and other relevant populations. The antigens with highest frequencies were HLA ‐A1, A2, and A30; B7, B51 and B39; Cw7, Cw16, Cw17, Cw15 and Cw18; DR 13, DR17, DR8 and DR1. HLA haplotypes with high significance and characteristics of the Somali population are B7‐Cw7, B39‐Cw12, B51‐Cw16, B57‐Cw18. The result of HLA class I and class II antigen frequencies show that the Somali population appear more similar to Arab or Caucasoid than to African populations. The results are consistent with hypothesis, supported by cultural and historical evidence, of common origin of the Somali population. This study will serve as a reference for further anthropological studies, as well as studies of associations between HLA and disease.     

HLA—Cw配型与异基因造血干细胞移植后GVHD关系的临床初探

目的探讨HLA-Cw配型在异基因造血干细胞移植中与GVHD的发生和复发的关系。方法对HLA6个位点（A、B、DR／DQ）全相合的同胞供者9例异基因外周血干细胞移植和10例脐带血移植进一步进行HLA-Cw配型,分析HLA-Cw配型与GVHD发生的关系。结果16例HLA-Cw相合者,共植入15例（94％）,其中Ⅰ-Ⅱ度急性GVHD发生11例（69％）,Ⅲ度急性GVHD2例（12．5％）,慢性GVHD15例（94％）,无复发病例。在HLA—Cw不相合3例中,2例发生Ⅲ度GVHD并且早期死亡,1例早期复发。在HLA—Cw配型相合与不相合两组间,急性Ⅰ～Ⅱ度及Ⅲ度GVHD的发生其差异均具有统计学意义（P〈0．05）。结论HLA—Cw配型相合供体造血干细胞移植有利于减少植入后急性GVHD发生及复发,提示HLA-Cw位点配型在造血干细胞移植,尤其是异基因移植中具有重要意义。