受体相关蛋白对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠乙酰胆碱受体的作用

目的：探讨受体相关蛋白(Bapesyn)对实验性自身免度性重症肌无力(EAMG)动物终板乙酰胆碱受体的作用。方法：用基因工程的方法制备提取pcDNA-Rapsyn，并将其注入动物肌肉左大腿外侧，右大腿相应部位注射相同剂量的空白质粒(Vector)以方波刺激使其进入细胞膜内，2w后用单克隆抗体35（mAb35)诱导出EAMG模型并进行症状评估,mAb3S诱导48h后取双大腿外侧肌，用放射免疫法检测AChR，并计算出AChR的损失率。结果：在EAMG模型中，被pcDNA-Rapsyn预处理的肌肉从AChR损失率明显低于未经处理的肌肉。结论：Bapsyn蛋白对EAMG模型的AChR有保护作用。     

炙马钱子对自身免疫性重症肌无力大鼠免疫调节机制研究

目的：探讨炙马钱子对实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）大鼠的免疫调节机理。方法：采用鼠源乙酰胆碱受体α亚基97-116肽段方法免疫Lewis大鼠建立实验性重症肌无力模型,观察实验大鼠的临床表现,并将建模成功的EAMG大鼠随机分为模型组,强的松组,炙马钱子低剂量、中剂量和高剂量组,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测正常对照组和成模各组大鼠血清中体液免疫指标AChRab与细胞免疫指标IL-6的含量情况并比较各组之间的差异。结果：大鼠EAMG模型组血清中AChRab和IL-6含量相比正常组显著升高（P＜0.01）,药物干预后各组含量都有所下降。炙马钱子高剂量组AChRab含量比中、低剂量组下降更显著（P＜0.01）,与强的松组比无显著差异（P＞0.05）;炙马钱子各剂量组IL-6含量均低于强的松组,特别是中、高剂量组更明显低于强的松组,差异有统计学意义（P＜0.01）;炙马钱子中、高剂量组之间的差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：炙马钱子能降低EAMG大鼠血清中AChRab和IL-6含量,抑制T、B细胞活化,减轻对突触后膜AchR的损害,缓解EAMG病情,一定剂量范围内的炙马钱子在免疫调节方面表现优于强的松。     

抗乙酰胆碱受体单克隆抗体A7诱导实验性重症肌无力

目的:探讨抗乙酰胆碱受体单克隆抗体A7(Anti-AChR mAbA7)对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)的作用.方法:Lewis大鼠腹腔注射5ml 20倍浓缩的含Anti-AChR mAbA7培养上清液,建立EAMG被动转移模型.对照组腹腔注射同体积的PBS.每8 h监测体重和临床症状评分.48h后处死实验动物.用放射免疫法检测AChR,并计算出AChR的损失率.结果:Anti-AChR mAbA7诱导的EAMG模型AChR损失率高,为24.3%～45.2%.而且AChR损失率与临床症状评分相关(r=0.74,P＜0.01).Anti-AChR mAbA7攻击的位点在终板的AChR上.结论:Anti-AChR mAb A7可用作诱导EAMG模型而应用于重症肌无力的研究.     

“温阳补气”针法对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠神经肌肉接头处 AchR mRNA 表达的影响

目的：探讨“温阳补气”针法对实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）大鼠神经肌肉接头处（NMJ）乙酰胆碱受体（AchR）mRNA表达的影响,阐明“温阳补气”针法对治疗EAMG的效应机制。方法：AchRα1 129-145多肽片段主动免疫60只SPF三级Lewis雌性大鼠,构建EAMG大鼠模型,模型制备成功后,随机选取30只大鼠分为模型对照组、针刺治疗组和药物对照组,每组10只,并将同批购进且相同条件下饲养的另外10只SPF三级Lewis大鼠设为空白对照组。空白对照组及模型对照组大鼠不予任何干预,针灸治疗组大鼠施以“温阳补气”针法治疗,药物对照组大鼠施以溴吡斯的明灌胃治疗。15d后,取实验大鼠腓肠肌NMJ处周围组织,采用RT-PCR法检测AchR mRNA表达水平,并定量分析各组之间的表达差异。结果：与空白对照组比较,针刺治疗组、药物对照组和模型对照组大鼠NMJ处γ-AchR和ε-AchR mRNA相对表达水平均升高（P<0.01）;与模型对照组比较,针灸治疗组与药物对照组大鼠NMJ处γ-AchR和ε-AchR mRNA相对表达水平均升高（P<0.01）。结论：“温阳补气”针法能够有效提高EAMG大鼠AchR mRNA表达水平,提示该方法可能是治疗重症肌无力的有效方法。     

“温阳补气”针法对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠血清AchR-Ab和IFN-γ表达水平的影响及其作用机制

目的：观察“温阳补气”针法对实验性自身免疫性重症肌无力 (EAMG) 大鼠血清中乙酰胆碱受体抗体 (AchR-Ab)和干扰素γ (IFN-γ) 表达水平的影响,分析针灸治疗重症肌无力 (MG) 的作用机制。方法：采用乙酰胆碱受体α1 (AchRα1) 129-145多肽片段免疫接种雌性Lewis大鼠,建立EAMG模型。随机选取建模成功的EAMG大鼠30只,分为针灸治疗组、药物对照组及模型对照组,每组10只,并将同期购进未建模的10只大鼠设为空白对照组。针灸治疗组大鼠予以“温阳补气”针法治疗,每次30 min,每天1次,7 d为一疗程,疗程间休息1 d,连续治疗2个疗程;药物对照组大鼠予以溴吡斯的明灌胃治疗,18.5 mg•kg^-1•d^-1,连续治疗15 d;其余2组不予任何特殊处置,仅作对照观察。治疗前后24 h,抽取大鼠尾根静脉血,采用ELISA法测定大鼠血清中AchR-Ab和IFN-γ的表达水平。结果：与模型对照组及治疗前比较,治疗后针灸治疗组和药物对照组EAMG大鼠血清的AchR-Ab和IFN-γ表达水平均明显降低 (P<0.05 或 P<0.01);与空白对照组比较,模型对照组大鼠血清中AchR-Ab和IFN-γ表达水平明显升高 (P<0.01)。但治疗后针灸治疗组与药物对照组比较无明显变化(P>0.05)。结论：“温阳补气”针法可以降低EAMG大鼠血清中AchR-Ab和IFN-γ的表达水平,从而达到治疗MG的作用。     

双类似物鼻黏膜耐受对实验性自身免疫性重症肌无力的影响

目的　在实验性自身免疫性重症肌无力 (EAMG)动物模型采用双类似物进行鼻黏膜免疫耐受 ,观察其临床及免疫功能变化 ,评价疗效并探讨其作用机制。方法　建立Lewis大鼠EAMG动物模型 ,选取经预实验证实有效的最低剂量为治疗量 ,检测致敏同时 (A组 )和缓解期第 1天 (B组 )给予以类似物鼻黏膜免疫耐受治疗后 ,大鼠体重、临床症状、致敏第 35天血清抗AChR抗体IgG含量及其淋巴细胞在不同刺激原作用下的增殖情况。结果　①治疗后EAMG大鼠体重增加 ,临床症状缓解。②治疗后血清抗AChR抗体IgG含量 (吸光度 ,A值 ) :A组 (0 .98± 0 .2 4 )和B组 (0 .95± 0 .2 6 )均少于各自对照组 (分别为 1.18± 0 .10和1.19± 0 .12 ) ,但A、B组间差异无显著意义。③针对AChR等特异性抗原的淋巴细胞增殖指数 :A组 (1.71± 0 .78)和B组 (1.97± 0 .5 6 )与对照组 (3.2 4± 1.31和 3.19± 1.5 0 )相比均减低 ,增殖反应明显受抑制。结论　双类似物鼻黏膜耐受能明显缓解EAMG的肌无力症状 ,并伴有特异性T、B细胞免疫功能抑制。     

小剂量阿托伐他汀对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠的治疗作用

目的 探究阿托伐他汀对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠的免疫调节机制。方法 用人工合成的大鼠乙酰胆碱受体α亚基97-116肽段免疫Lewis大鼠制造重症肌无力(MG)模型,随机分为阿托伐他汀治疗组和对照组,采用Lennon评分标准评价大鼠病情, 采用双盲法隔天评估大鼠肌力并记录体质量;免疫组化检测大鼠胸腺抑制性转录调节因子Foxp3的表达,以此反映调节性T细胞(Treg)的数量;CCK-8检测淋巴结单个核细胞增殖;ELISA检测细胞培养上清液IL-4及血清抗R97-116抗体的水平。结果 阿托伐他汀治疗组大鼠临床症状较对照组明显缓解,胸腺Foxp3的表达及细胞培养上清液IL-4的水平均高于对照组,血清抗R97-116抗体水平低于对照组。结论 阿托伐他汀通过上调Treg和Th2型细胞因子IL-4的水平,从而降低血清中抗R97-116抗体水平,缓解EAMG病情。     

中医药治疗实验性自身免疫性重症肌无力作用机制研究进展

重症肌无力(MG)是一种以乙酰胆碱受体(AChR)抗体引起的神经肌肉连接(NMJ)功能障碍为特征的全身肌肉无力的自身免疫性疾病.多年来,实验性自身免疫性(EAMG)动物模型对MG的致病机制和评价新疗法、新方案的疗效提供了极好的帮助.中医药治疗MG疗效明显以其独特的优势逐渐成为国内学者研究的热点,本研究总结、归纳近10年...     

鼻腔AChR耐受低调EAMG大鼠特异性T淋巴细胞反应

用乙酰胆碱受体(AChR)加完全弗氏佐剂(CFA)免疫前,鼻腔给予大鼠AChR可有效地预防实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)。本文结果表明,与非耐受对照组相比,鼻腔AChR耐受组免疫后,腘窝、腹股沟淋巴结(PILN)的单个核细胞(MNC)AChR特异的淋巴细胞增生反应受到明显抑制,鼻腔耐受组PILN中AChR特异的CD4~+/CD8~-克隆增生亦明显受抑制,差异均有显著性。此外,鼻腔耐受组AChR特异性皮肤迟发型过敏反应(DTH)也显著降低。提示鼻腔AChR耐受后引起的特异性T淋巴细胞反应的低调可能是临床肌无力抑制的基础。     

健肌宁对实验性重症肌无力大鼠差异蛋白表达的调节作用

目的:观察中药复方健肌宁对实验性自身免疫性重症肌无力(experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG)大鼠脾脏差异蛋白表达的调控作用。方法:制备实验性EAMG大鼠模型,随机分为模型组、中药复方健肌宁组、强肌健力胶囊组和醋酸泼尼松龙组。采用双向电泳-串联质谱法分离和鉴定EAMG大鼠脾脏和正常组间的差异表达蛋白,并观察应用健肌宁、强肌健力胶囊和醋酸泼尼松龙连续干预4周后,各组差异蛋白表达水平的变化。结果:在已鉴定的12个疾病相关蛋白中,健肌宁对于同种异体移植炎性因子-1、过氧化氢酶Ⅰ和肌动蛋白相关蛋白2/3复合体亚单位5的蛋白表达水平有显著调控作用(P<0.01),这些蛋白多与免疫反应和细胞运动密切相关。结论:EAMG大鼠与正常大鼠间有差异蛋白表达,具有补益脾肾作用的中药复方健肌宁可以调节部分差异蛋白的表达水平。     

Familial autoimmune myasthenia gravis

Familial Autoimmune Myasthenia Gravis (FAMG) is rarely reported. We present a mother and son with late-onset mild to moderate ocular disease, low acetylcholine receptor antibody titre and the absence of a thymoma. Both responded well to low doses of anticholinesterase. HLA typing revealed that they did not share the usual HLA antigens or haplotypes with that previously reported in Caucasian and Chinese sporadic Myasthenia Gravis. Chinese FAMG may be associated with HLA antigens different from that of sporadic MG.     

青蒿琥酯对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠的免疫调节作用

目的探究青蒿琥酯对实验性自身免疫性重症肌无力（experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG）大鼠TNF-α、IgG2a、IgG2b的影响。方法用人工合成的大鼠来源的乙酰胆碱受体（acetylcholine receptor,AChR）α亚基97-116肽段免疫Lewis大鼠制造重症肌无力（myasthenia gravis,MG）模型,随机分为青蒿琥酯大剂量组（100mg/kg）、小剂量组（10mg/kg）和模型对照组,流式细胞仪检测不同组大鼠淋巴结单个核细胞（mononuclear cell,MNC）中TNF-α＋细胞的百分比;酶联免疫吸附法（ELISA）检测EAMG大鼠血清中抗R97-116IgG2a和IgG2b抗体的水平。结果与对照组相比,青蒿琥酯小剂量组明显下调了TNF-α＋的百分比（P=0.046）,而大剂量组中TNF-α下调不显著,两治疗组血清中抗R97-116IgG2a和IgG2b抗体的水平下降,且小剂量组血清中抗R97-116IgG2a和IgG2b抗体的水平下降更显著。结论青蒿琥酯主要是通过下调TNF-α＋细胞的数量和降低血清中抗R97-116IgG2a和IgG2b抗体水平来改善EAMG大鼠的病情。     

实验性重症肌无力大鼠模型的研究

目的 从丁氏双鳍电鳐的电器官分离乙酰胆碱受体(AChR)免疫大鼠,建立实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)动物模型.方法 参照徐氏法从丁氏双鳍电鳐的电器官提取AChR蛋白,并采用Folin-酚试剂法及酶联免疫吸附法检测提取蛋白的含量及活性;以提取的蛋白主动免疫Lewis大鼠,每天观察其临床表现,并于免疫后7周进行低频重复电刺激、单纤维肌电图及血清中AChRAb水平的检测.结果 提取蛋白的含量为35.4 mg/mL,AChR提取物可以与阳性血清中的AChRAb发生结合反应.免疫后1周左右,实验组有3只大鼠出现轻度的肌无力症状,持续2～5d自行缓解;免疫后5周左右实验组8只大鼠均表现出不同程度的肌无力症状.实验组大鼠低频重复电刺激阳性率达75%,其衰减率明显高于对照组.实验组大鼠单肌纤维动作电位平均连续差(MCD)值与正常对照组比较明显延长(P＜0.01),而福氏完全佐剂(CFA)对照组与正常对照组间MCD值无明显差异.实验组大鼠AChRAb水平明显高于CFA对照组(P＜0.01);实验组7只大鼠AChRAb的P/N值＞2.1,而CFA对照组P/N值均＜1.4.结论 从丁氏双鳍电鳐的电器官提取的AChR蛋白成功地诱导EAMG动物模型,可为重症肌无力进一步研究创造条件.     

双类似物鼻黏膜耐受对EAMG临床发病的抑制作用

目的　采用双类似物 (Lys2 6 2 Ala2 0 7)通过不同时间点对实验性自身免疫性重症肌无力 (EAMG)模型进行鼻黏膜耐受预防性给药 ,观察临床发病变化 ,并评价疗效 ,探讨其控制EAMG临床发病作用机制。方法　应用AChR加CFA致敏Lewis大鼠建立EAMG模型 ,并在致敏前 10天 (A组 )及致敏当日 (B组 )鼻腔给药。观察给药后A、B组及相应对照组大鼠体重、临床症状及肌电图变化。结果　①急性期和慢性期A、B组体重明显超过、而病情明显轻于相应对照组 ,慢性期A组体重明显超过、病情明显轻于B组 ,P均 <0 .0 5 ;②A、B组低频重复电刺激出现衰减反应D5阳性率明显低于相应对照组 ,P均 <0 .0 5。结论　Lys2 6 2 Ala2 0 7鼻黏膜预防耐受可有效地抑制临床发病 ,为采用双类似物鼻黏膜耐受防治人类重症肌无力提供了依据。     

实验性自身免疫性重症肌无力动物模型研究

研究表明,实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）与重症肌无力（MG）在症状、病理、免疫及组织学方面相似。EAMG 动物模型主要通过主动或被动免疫实验动物,制备与重症肌无力患者的临床表现、免疫组织学、电生理学等相似的动物模型,为临床诊断及治疗提供依据。但目前 EAMG 模型仍不完善,仍需进一步探索。     

重症肌无力大鼠膈肌运动终板的形态学研究

目的: 探讨重症肌无力大鼠膈肌运动终板的光镜及电镜结构变化.方法: 被动转移乙酰胆碱受体单抗mAb35建立SD大鼠获得性自身免疫性重症肌无力模型,用乙酰胆碱酯酶法显示膈肌运动终板,并行超微结构观察.结果: 实验组大鼠注射mAb35后出现明显肌无力症状,其膈肌运动终板数量基本不变,但出现与重症肌无力患者相似的超微结构变化,对照组则无明显变化.结论: 膈肌出现运动终板超微结构的改变,是重症肌无力被动转移模型大鼠呼吸衰竭的可能原因.     

Ad-ING4对人胃癌AGS细胞凋亡及其p53基因表达的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）治疗实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）的作用机制。方法将Lewis大鼠随机分为移植组、模型组和正常对照组,每组各10只。移植组、模型组大鼠腹腔注射单克隆抗体35（mAb35）建立EAMG模型,正常对照组大鼠腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液。分离培养BMSCs并作鉴定后,调整密度至1.5x106/600滋lPBS,移植组尾静脉注射细胞悬液600滋l,模型组和正常对照组均予600滋lPBS。采用双盲法、免疫荧光检测、ELISA和real-timeRT-PCR分别测定3组大鼠Lennon临床评分、腓肠肌乙酰胆碱受体（AChR）数量变化、血清乙酰胆碱受体抗体（AChR-Ab）含量和腓肠肌AChR、基质金属蛋白酶9（MMP-9）mRNA表达。结果移植组Lennon临床评分、血清AChR-Ab含量、腓肠肌AChRmRNA表达均低于模型组（P＜0.05）。正常对照组大鼠神经肌肉接头处可见明显红色荧光,移植组可见断断续续、较为微弱的荧光,模型组未见红色荧光。模型组大鼠腓肠肌MMP-9mRNA表达量明显高于移植组（P＜0.05）。结论BMSCs能缓解EAMG大鼠的临床症状,抑制MMP-9mRNA表达可能是其作用机制。     

一氧化氮合酶抑制剂和一氧化氮供体对沙土鼠缺血性脑损伤的影响

目的：研究一氧化氮（ＮＯ）在缺血性脑损伤中的作用。方法：夹闭沙土鼠双侧颈总动脉２０ ｍ ｉｎ 制备前脑缺血性脑损伤模型,分生化组和病理组。每组又分：（１） 假手术组;（２） 缺血对照组; （３） 硝基－Ｌ－精氨酸（ＬＮＮＡ）组,分３种剂量（３,２０,５０ ｍ ｇ／ｋｇ ｉｐ）;（４） Ｌ－精氨酸（Ｌ－Ａｒｇ）组,３００ ｍ ｇ／ｋｇ ｉｐ。第１,２组仅ｉｐ 等量生理盐水。结果：缺血性损伤后脑含水量增加,一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性明显升高,ＬＮＮＡ剂量依赖性抑制ＮＯＳ活性,小剂量能明显减轻脑水肿。小、中剂量ＬＮＮＡ 能减轻缺血性损伤后海马ＣＡ１区和ＣＡ２区锥体细胞缺失,小剂量作用明显,大剂量加重细胞缺失。结论：脑缺血后ＮＯＳ活性明显增加,加重缺血性脑损伤。通过ＬＮＮＡ适当降低脑组织ＮＯＳ活性能明显减轻脑水肿和海马区细胞坏死,对脑损伤有保护作用