实时荧光定量聚合酶链反应技术检测解脲脲原体生物群的研究

目的建立解脲脲原体生物群Taqman荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测方法。方法根据解脲脲原体生物群MBA基因差异,分别设计并合成引物和探针。优化引物和探针浓度及试验条件,并进行试验的灵敏度、特异性和重复性评价。结果生物1群最适缓冲体系:25μL反应体系中包含2.5U Taq酶,Mg2+2.5mmol/L,上、下游引物0.1pmol/L,TaqMan探针0.2pmol/L,模板DNA 2μL。生物2群最适缓冲体系:25μL反应体系中包含2.5UTaq酶,Mg2+2.5mmol/L,上、下游引物0.2pmol/L,TaqMan探针0.3pmol/L,模板DNA2μL。PCR反应条件:95℃2min;95℃10s;55℃(检测荧光信号)20s,循环40次。该方法线性范围在1.0×102～8 copy/mL之间,检测限达到100～200copy/mL,特异性达到100%,CV值为2.5%。结论 本研究建立的TaqMan荧光PCR检测解脲脲原体生物群线性范围宽、灵敏度高、特异性及重复性好,能够快速进行解脲脲原体生物群检测。     

聚合酶链反应检测解脲脲原体的研究

鉴于临床迫切需要建立特异、敏感、快速的实验诊断方法，从解脲脲原体（ＵＵ）基因组保守区域选择一对寡聚核甘酸引物建立检测ＵＵ的聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，扩增产物片段为１８６ｂｐ，同时采用ＰＣＲ法和培养法对５２份孕妇宫颈分泌物检测。结果ＰＣＲ检出率（７５％）明显高于培养法检出率（２９％），经统计学配对计数资料χ￣２检验有显著性差异（Ｐ＜０．０２５）。研究表明：ＰＣＲ具有特异、敏感、快速等优点，是临床检测ＵＵ切实可行的方法。     

荧光定量PCR检测解脲脲原体不同生物群的临床应用

目的 探讨解脲脲原体(Uu)的感染状态及生物分群.方法 采用荧光定量PCR 技术对皮肤科和泌尿外科患者157例尿道/宫颈分泌物进行Uu分群;分析Uu不同生物群与不同性别患者泌尿生殖道感染的临床症状和体征的相关性.结果 157例标本中96例Uu呈阳性,其中生物1群57例(阳性率59.38%),生物2群39例(阳性率40.62%),男性患者临床症状和体征的阳性率与Uu分群无关(P＞0.05),而女性生物1群感染者的临床症状和体征阳性率高于生物2群(P＜0.05).结论 我院患者Uu以生物1群为主,生物1群可能是女性Uu感染的主要病原体,Uu对男性致病性与分群无关.     

聚合酶链反应检测解脲脲原体的临床应用

２３８例非淋菌性尿道炎的阴道分泌物作解脲脲原体ＰＣＲ检测与培养法比较，结果ＰＣＲ检出率为４９．６％（１１８／２３８），培养检出率为３９％（９３／２３８）。通过６０例治疗追踪，四环素－周疗程后，培养均转阴，而ＰＣＲ尚有９例阳性，二周疗程后ＰＣＲ仍有３例最性，三周疗程后才全部转阴性。     

五对聚合酶链反应引物检测解脲脲原体的比较

筛选解脲脲原体尿素酶基因上的不同引物及扩增模板式，使扩增敏感性达到最佳。方法以ＵＵ尿素酶基因为靶序列，设计５对引物，用聚合酶链反应扩增ＵＵ１－１４个血清型和系列稀释的ＵＵ８ＤＮＡ，用ＯＬＩＧＯ程序分析引物序列与ＰＣＲ敏感性间的关系。结论引物自由能谱之差影响着ＰＣＲ扩增的敏感性ＵＵ１＋Ｂ引物扩增敏感性最佳。     

五对聚合酶链反应引物检测解脲脲原体的比较

目的筛选解脲脲原体（ＵＵ）尿素酶基因上的不同引物及扩增模板区，使扩增敏感性达到最佳。方法以ＵＵ尿素酶基因为靶序列，设计５对引物，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ＵＵ１～１４个血清型和系列稀释的ＵＵ８ＤＮＡ，用ＯＬＩＧＯ程序分析引物序列与ＰＣＲ敏感性间的关系。结果不同种的引物对１４个血清型的扩增结果有差异。引物Ｕ１＋Ｂ、Ｕ１＋２、ＵＡ＋Ｂ、Ｕ２＋Ａ及Ｕ１＋Ｃ对１４个血清型的检出率分别为１００％、８６％、７８％、６４％及６４％。结论引物自由能谱之差影响着ＰＣＲ扩增的敏感性。ＵＵ１＋Ｂ引物扩增敏感性最佳     

聚合酶链反应-单链构象多态性技术快速筛选结核杆菌的利福平耐药性

目的：探讨利用分子生物学方法直接快速检测结核分枝杆菌利福平（RFP）药物敏感性的可行性。方法：应用聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）技术分别检测了40株RFP药物敏感及耐药的结核分枝杆菌临床分离株。先用PCR扩增rpoB基因，随后用SSCP方法鉴定其扩增产物有无突变，并与药敏试验结果作对照分析。结果：所有临床分离株均观察到rpoB基因PCR扩增产物。40株RFP敏感的临床分离株SSCP带谱与结核分枝杆菌H37RV标准株相同，40株RFP耐药株中37株检测到突变图谱。与Bactec结果对照，用PCR-SSCP技术检测结核分枝杆菌RFP耐药性的敏感性为93％，特异性为100％。结论：结核分枝杆菌耐RFP是其rpoB基因突变所致。PCR-SSCP技术可用于结核分枝杆菌RFP药物敏感性的直接快速检测。     

聚合酶链反应检测沙眼衣原体和解脲脲原体

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对１５６例非淋病性尿道炎（ＮＧＵ）和１２８例淋病性尿道炎（ＧＵ）患者进行沙眼衣原体（Ｃｔ）和解脲脲原体（Ｕｎ）检测，其中ＮＧＵ中Ｃｔ、Ｕｕ的阳性率分别为２６．３％、１７．９％，Ｃｔ、Ｕｕ双阳性率为７．７％；ＧＵ患者Ｃｔ、Ｕｕ的阳性率分别为４３．８％、３３．６％，Ｃｔ、Ｕｕ双阳性率的为１６．４％。     

聚合酶链反应-单链构象的多态性技术鉴定解脲脲原体生物群和基因型鉴定中的应用

本研究通过对解脲脲原体(UU)的14个标准血清型的聚合酶链反应-单链构象的多态性(PCR-SSCP)电泳分析,直接鉴定UU生物群和基因型.     

聚合酶链反应—单链构象多态性分析与反向杂交法进行骨髓移植…

用聚合酶链反应（ＰＣＲ），扩增骨髓移植（ＢＭＴ）受者及７８例无关供者ＨＬＡ－ＤＰＢ１基因，作单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析，初步选出与受者ＨＬＡ－ＤＰＢ１ＳＳＣＰ带型相同者；最后进行反向杂交检测，确定ＨＬＡ－ＤＰＢ１更为相容的供者。应用上述技术，从７８例无关供者中选择出１例与ＢＭＴ受者基因相同的供者。整个过程快速、经济、准确性高。     

聚合酶链反应-单链构象多态性检测淋病奈瑟菌gyrA基因突变的研究

国外研究表明 ,DNA旋转酶是淋病奈瑟菌 (淋菌 )中氟喹诺酮类药物的首要作用靶位 ,淋菌对氟喹诺酮类药物耐药主要与编码该酶的gyrA基因喹诺酮耐药决定区 (QRDR)突变有关[1] 。为建立一种简便、快速、可靠的淋菌gyrA基因突变的检测方法 ,并进一步探讨该突变与我国临床分离淋菌对氟喹诺酮类药物耐药的关系 ,本课题以浓度梯度 (Etest)法检测了 42株临床分离淋菌对环丙沙星敏感性 ,采用聚合酶链反应 单链构象多态性分析 (PCR SSCP)结合DNA测序技术 ,对淋菌gyrA基因QRDR突变进行了研究 ,报告如下。一、材料与方法1.菌株来源 :本研究中 4…     

聚合酶链反应检测解脲脲原体的研究

鉴于临床迫切需要建立特异、敏感、快速的实验诊断方法，从解脲脲原体（ＵＵ）基因组保守区域选择一对寡核甘酸引物建立检测ＵＵ的聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，扩增产物片段为１８６ｂｐ。同时采用ＰＣＲ法和培养法对５２份孕妇宫颈分泌物检测。研究表明：ＰＣＲ具有特异、敏感、快速等优点，是临床检测ＵＵ切实可行的方法。     

快速免疫法在检测泌尿生殖道解脲脲原体中的应用

目的 应用聚合酶链反应（PCR）结合反向杂交技术这一快速免疫法检测解脲脲原体，用于非淋茵性尿道炎的诊断和治疗。方法 用聚合酶链反应（PCR）结合反向杂交技术对163例男性非淋茵性尿道炎患者的尿道分泌物进行了解脲脲原体检测，以拭子培养法为金标准判断该方法的检测效果。结果 聚合酶链反应结合反向杂交技术的敏感度为100％，特异度为97．44％，与培养法相比较无显著性差异（P〉0．05）。结论 聚合酶链反应结合反向杂交技术是一种具高敏感性和特异性的男性泌尿生殖道解脲脲原体的检测方法，值得临床推广使用。     

聚合酶链反应单链构象多态性和银染技术筛查胰岛素受体基因突变

目的建立聚合酶链反应单链构象多态性（ＲＣＲＳＳＣＰ）和银染技术筛查胰岛素受体基因突变方法。方法选择８９例非胰岛素依赖型糖尿病患者,ＰＣＲ扩增编码胰岛素受体酪氨酸激酶域的外显子（外显子１７～２１）,进行ＳＳＣＰ电泳,银染色后,对突变样品进行序列分析。结果发现１１例外显子１７和１例外显子２０的异常电泳条带,外显子１７的突变经顺序分析,为ＣＡＣ１０５８→ＣＡＴ１０５８的杂合和纯合多态性突变。结论ＰＣＲＳＳＣＰ结合银染技术是一种操作简便、经济、灵敏度高、适合于临床大样本基因突变筛查的方法。     

聚合酶链反应-单链构象多态性结合银染技术检测低密度脂蛋白受体基因点突变

家族性高胆固醇血症 (Familialhypercholesterolemia ,FH)是一种常染色体显性遗传病 ,是导致动脉粥样硬化(Atherosclerosis,As)和早发冠心病的重要危险因素 ,其发病机理主要为低密度脂蛋白受体 (Lowdensitylipoproteinreceptor,LDL R)基因突变引起LDL R功能异常。本研究应用聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)结合银染技术对一例临床诊断为FH的先证者的LDL R基因进行研究 ,以探讨其分子病理机制。一、材料和方法1.研究对象 :由我室门诊收集 ,先证者系女性 ,1992年出生 ,籍贯北京。先证者黄色瘤累及肘、膝、踝关节等处易受…     

聚合酶链反应-单链构象多态性银染后胶回收在基因改变检测中的应用

目的:探讨聚合酶链反应-单链构象多态性银染后胶回收的方法在基因改变检测中的应用。方法:实验于2004-09/2005-10在南方医院心内科实验室完成。样本来源:于2004-09/2005-08选择南方医院心内科收治的冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)患者123例,均符合WHO冠心病诊断标准,并经心电图、超声心动图、CT确诊。患者均知情同意。聚合酶链反应-单链构象多态性银染方法检测冠心病患者三磷酸腺苷结合盒转运体A1基因改变,对1例怀疑存在基因改变样本的聚丙烯酰胺凝胶采用银染后单链胶回收,以胶回收后的单链聚合酶链反应产物为模板重复聚合酶链反应后进行测序。结果:在对三磷酸腺苷结合盒转运体A1基因Exon7进行单链构象多态性检测时,发现一样本泳带异常,对其样本进行银染后胶回收,结合限制性内切酶酶切,证实此样本存在碱基改变,从而验证了非变性聚丙烯酰胺凝胶银染后胶回收的准确性和可行性。结论:经聚合酶链反应-单链构象多态性银染后的非变性聚丙烯酰胺凝胶胶也可进行胶回收。聚合酶链反应-单链构象多态性银染后胶回收在基因改变检测中可以增强单链构象多态性基因突变检测的准确性,由于其无毒性、成本低及操作简单等优点,更易被实验人员所接受。     

荧光定量聚合酶链反应检测男性尿道炎沙眼衣原体和解脲脲原体感染

沙眼衣原体（CT）和解脲脲原体（UU）是引起人泌尿生殖道感染的主要病原体，近年来由此引起的非淋球菌尿道炎增加较快，成为较常见的性传播疾病。我们应用荧光定量聚合酶链反应（FQ－PCR）方法犤１犦对３２５例男性尿道炎患者的尿道分泌物进行了检测，取得了较好的效果。结果报道如下。１材料和方法１．１检测对象：本院性病专科门诊和泌尿外科门诊疑为沙眼衣原体和解脲脲原体感染的男性尿道炎患者，共３２５例，年龄８～６０岁，平均年龄３２岁。１．２标本采集：用特制消毒棉签伸入尿道约２cm处，旋转几周，停留数秒，以获取上皮细胞…     

荧光定量聚合酶链反应在同时检测淋病奈瑟菌、沙眼衣原体和解脲脲原体中的应用

目的探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)在淋病奈瑟菌(NG)、沙眼衣原体(CT)和解脲脲原体(UU)检测中的应用价值及NG、CT、UU的感染状况。方法采用FQ-PCR同时检测328例疑有泌尿生殖道感染患者的NG、CT和UU,并与培养法做比较。结果 FQ-PCR对NG、CT和UU的阳性检出率高于培养法。阳性标本定量均值分别为NG 1.1×108拷贝/mL、CT 1.2×107拷贝/mL、UU 3.9×106拷贝/mL。UU的阳性率为60.67%,CT为6.40%,NG为3.05%;CT+UU合并感染的阳性率为4.57%,NG+UU为1.83%,NG+CT为0.61%,总阳性率为70.12%(230/328)。结论 FQ-PCR灵敏度高、特异性强,可对NG、CT和UU进行定量测定,对三者感染的诊断具有重要的临床意义。