天鹅记忆接骨器对实验性骨折愈合时骨桥素和骨连接素mRNA表达的影响

目的:探讨天鹅记忆接骨器对实验性骨折愈合中骨桥素和骨连接素mRNA表达的影响.方法:30只新西兰兔双侧肱骨干横断截骨,随机选一侧以天鹅记忆接骨器内固定作为实验组,对侧以4孔加压钢板固定作为对照组.分别于术后第2、7、14、28、56天时,在骨折间隙取材,行组织学观察及半定量RT-PCR检测骨桥素和骨连接素mRNA的表达.结果:实验组骨折间隙软骨内成骨和编织骨向板层骨的改建均早于对照组;相应地,实验组的骨桥素和骨连接素mRNA分别在术后第14天和28天时达峰值,早于对照组,且其愈合进程也明显提前.结论:天鹅记忆接骨器产生的持续动态压应力可能促进了骨折愈合.     

海尔福对氟中毒小鼠粪氟、骨氟的影响

用氟化钠做实验性氟中毒小鼠模型，然后灌服海尔福口服液１５天，检测粪氟排出量和骨氟排出量的变化。结果表明，服药组服药前粪便含氟量为３４７．２μｇ／ｇ，服药后为５１１．９μｇ／ｇ（ｘ），前后比较Ｐ＜０．０００１，差异有高度显著性；中毒对照组和正常对照组粪便含氟量分别为３８５．５和２０．０μｇ／ｇ（ｘ），两组比较Ｐ＜０．０００９，差异有高度显著性。正常对照组③、中毒对照组①和服药组②骨氟含量分别为２．５７、３５．１９、３３．１３μｇ／ｇ（ｘ），①与③、②与③比较Ｐ＜０．００１，差异有高度显著性，而①与②比较Ｐ＞０．０５，差异无显著性。提示海尔福口服液作用机理之一有可能是通过抑制氟中毒动物对氟的吸收而起治疗作用，而对骨氟的影响尚无明显。     

阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞护骨素及护骨素配体mRNA表达的影响

目的：研究阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL表达的影响，探讨阿胶强骨胶囊治疗骨质疏松的分子机制。方法：3月龄wistar（雌雄各半）30只，随机分为阿胶强骨口服液，雌激素，及生理盐水对照组，灌胃7d后，制备实验组和对照组的含药血清。将新生SD大鼠分离的颅骨成骨细胞，制成单细胞悬液，消化传代，取二代培养的成骨细胞，制成细胞悬液。培养细胞分为5组，分别加同体积药液，对照组仅加培养液，继续培养。采用MTT比色分析法、3H-胸腺嘧啶核苷（3H—TdR）渗入法测定成骨细胞增殖，用放免法测定细胞内BGP含量，RT—PCR测定胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL mRNA的表达。蛄果：阿胶强骨口服液含药血清以剂量依赖方式促进成骨细胞的增殖，与对照组相比，差异显著（P〈0．05）。成骨细胞OPG基因mRNA表达在阿胶强骨口服液含药血清1000ml／L时最强，与雌激素组比较无显著性差异（P〉0．05），且明显高于对照组（P〈0．05）。成骨细胞RANKL基因mRNA表达在1000ml／L阿胶强骨口服液含药血清与雌激素组比较无显著性差异（P〉005），且明显低于对照组（P〈0．05）。结论：阿胶强骨口服液可在细胞水平上促进骨的合成代谢及前成骨细胞的有丝分裂，分子水平上调节OPG／RANKL表达而治疗骨质疏松。     

骨桥连接素(OPN)在肺癌中的表达及其临床病理学意义

目的　探讨骨桥连接素 (OPN)在肺癌中的表达及其临床病理学意义。方法　应用免疫组织化学方法对 78例肺癌组织标本进行OPN检测。结果　 6 5例非小细胞肺癌 (NSCLC)阳性率为 5 8.4 6 % ,13例小细胞肺癌(SCLC)的OPN表达均为阴性。OPN表达率与患者TNM分期及淋巴结转移有密切关系 (P <0 .0 1) ,与细胞分化程度无明显关系 (P >0 .0 5 )。结论　OPN的表达同肺癌病理类型、发生、发展、淋巴结转移有密切关系 ,可作为临床评估NSCLC进展及预测肿瘤转移潜能的指标。     

氟对成骨细胞影响的研究进展

骨组织在整个生命过程中,经历着新陈代谢,即骨再建过程。骨再建是由骨形成和骨吸收两个过程协调完成的。成骨细胞（osteoblast,OB）对骨形成起着主要作用,破骨细胞（osteclast,OC）对骨吸收起着主要作用,二者共同维持骨的结构、形态和强度。氟（fluorine）是人体的必需微量元素之一,是一种已知可影响骨形成的非激素因子,对骨形成具有双向调节作用。长期小剂量氟可促进骨形成,大剂量可引起骨质疏松或骨硬化。     

脂联素对人成骨细胞护骨素和核因子κB受体活化素配体表达的影响

目的 探讨脂联素影响骨代谢的可能作用机制.方法 体外培养人成骨细胞,(1)分别加入0、3、10和30 mg/L的脂联素作用48 h;(2)加入0或30 mg/L脂联素分别作用12、24、48 h;采用荧光定量PCR和ELISA方法检测护骨素和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的表达.另将人成骨细胞与CD14+外周血单个核细胞(PBMC)共培养,加入30 mg/L脂联素作用14 d,行破骨细胞标志酶抗酒石酸磷酸酶染色.结果 0、3、10和30 mg/L的脂联素作用48 h,成骨细胞护骨素mRNA和蛋白表达分别为100%±9%、68%±7%、47%±8%、30%±5%与(9.2±0.3)、(6.6±0.4)、(4.1±0.4)、(2.6±0.4)ng/ml,RANKL mRNA和蛋白表达分别为100%±5%、165%±8%、213%±6%、316%±10%与(1.3±0.2)、(2.1±0.1)、(2.3±0.2)、(2.8±0.1)ng/ml.脂联素对护骨素表达的抑制和对RANKL表达的促进作用均呈剂量和时间依赖性(P＜0.05).脂联素干预成骨细胞与CD14+PBMC共培养体系可诱导破骨细胞生成.结论 脂联素可通过抑制护骨素表达、诱导成骨细胞RANKL表达,诱导破骨细胞生成,这可能是脂联素影响骨代谢的作用机制之一.     

甲状旁腺激素对成人成骨细胞护骨素和护骨素配体及其相关因子的调节

目的：探讨甲状旁腺激素（PTH）调节骨吸收作用的途径和机制。方法：观察PTH对人成骨细胞(HOB)表达护骨素(OPG)、护骨素配体(OPGL)及其相关因子,如肿瘤坏死因子相关性凋亡诱导配体(TRAIL)、巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）的影响,用RT-PCR法检测OPG,OPGL,TRAIL及M-CSF基因表达情况,用Western blotting分析法检测OPG和OPGL蛋白表达情况。结果：PTH下调HOB细胞中OPG的表达,上调OPGL,M-CSF及TRAIL的表达。结论：PTH通过降低成骨细胞中OPG与OPGL的比值,增加M-CSF和TRAIL的表达,促进破骨细胞生成、活化,促进骨吸收。     

护骨素基因多态性对绝经后妇女骨量的影响

目的　探讨绝经后妇女护骨素 (osteoprotegerin ,OPG)基因启动子 95 0T C单核苷酸多态性与骨密度和骨代谢生化指标的相关性。方法　应用聚合酶链反应 限制性片断长度多态性 (PCR RFLP)方法测定 2 5 9名上海市绝经后女性OPG基因启动子 (95 0T C)基因型 ;应用双能X线骨密度仪(DEXA)测定股骨颈、腰椎等部位的骨密度 ,同时检测骨代谢生化指标。结果　在绝经后妇女中发现TT、TC、CC 3种基因型 ,各基因型的分布频率分别为 :TT 5 9%、TC 2 8%、CC 13%。将绝经后妇女分为 <6 5岁组 (Ⅰ组 )和≥ 6 5岁组 (Ⅱ组 ) 2组 ,发现在Ⅰ组不同基因型妇女股骨颈部位骨密度 (BMD)间差异有显著意义 (P <0 .0 5 ) ,分别为 :TT (0 .6 4± 0 .11)g/cm2 ,TC(0 .6 7± 0 .11)g/cm2 ,CC (0 .6 8± 0 .14 )g/cm2 。经体重指数、年龄等因素校正后 ,差异仍有显著意义 (P <0 .0 5 )。而Ⅰ组的其他指标和Ⅱ组的各项指标在不同基因型间的差异无显著意义 (均P >0 .0 5 )。结论　OPG基因多态性对年龄小于 6 5岁的绝经后妇女的股骨颈部位骨密度有明显影响 ,OPG基因多态性可能对女性峰值骨量的获得有影响。     

过量氟对人成骨细胞骨分化功能的影响

【立论依据】 过量氟能够引起氟中毒,例如氟骨症和氟斑牙。氟骨症可致关节韧带钙化,关节强直,活动困难,重病者丧失劳动能力。饮水型地方性氟中毒(简称地氟病)在新疆地区广泛流行,个别地区尤为突出,如阿克苏市8-12岁儿童氟斑牙检出率高达70.8%。虽然该病病因清楚,但是致病机制未明。观察不同剂量氟作用下对成骨细胞凋内质网应激影响,并在此基础上探讨氟骨症发病可能的发病机制,为氟骨症的早期诊断及治疗提供科学依据。 【设计思路】 本文拟从内质网应激和骨分化两方面对体外染氟成骨细胞进行研究,采用real-time PCR技术和蛋白质印迹技术分别分析,并对两方面结果进行相关性分析,以期从成骨细胞内质网应激角度了解氟中毒致病机制。采用体外细胞染氟模型,分析不同剂量氟化钠对人成骨细胞成骨分化的直接影响。 【实验内容】 不同剂量氟作用下成骨分化因子COL1A(胶原I)、OCN(骨钙素)的mRMA表达(内参基因GAPDH)情况如下:当NaF剂量为5 000、10 000 mg/L时,COL I A2 mRNA的表达水平(7.66±1.34、8.96±2.30)均高于对照组(1.00±0.04,P<0.05);20 000及40 000组,COL I A2表达(2.72±0.23、1.47±0.11)与对照组相比,差异无统计学意义(P均>0.05)。骨钙素mRNA表达在5 000 mg/L组(23.70±1.20)高于对照组(1.00±0.01,P均<0.01),组间比较差异有统计学意义(P<0.01).其余三组表达水平(8.82±0.20、4.23±0.13、1.26±0.12)高于对照,但差异无统计学意义。采用蛋白质印迹法分析内质网应激标志分子BIP,内参基因β-actin。BIP的表达从5 mg/L至40 mg/L呈现明显的随着染氟剂量的增加而升高,4个剂量组的表达水平均高于对照,尤其是NaF 20和40 mg/L两组蛋白表达高于对照组近3倍。BIP表达与胶原I表达呈现负相关。 【材料】 合成引物、RNA提取试剂、反转录试剂、荧光定量PCR mix、琼脂糖、TBE 和DNA marker、核酸染料. 【可行性】 以往研究未能将骨转化基因与内质网应激相联系。因此本研究在理论上是合理的。指导教师在内质网应激和成骨分化这两方面均有过研究,是本研究的基础。新疆医科大学有完善实验设施的生物学实验室,能够提供所有实验设备,是完成本项目的物质保障。 【创新性】 国内首次研究将染氟成骨细胞内质网应激情况与骨分化联合分析。     

骨宝含药血清对成骨细胞碱性磷酸酶活性及护骨素mRNA表达的影响

目的：观察骨宝含药血清对SD大鼠成骨细胞（OB）中护骨素（OPG）mRNA表达的影响。方法：①将20只10月龄SD雌性大鼠随机分为2组,每组10只,分别为骨宝组和生理盐水对照组,制备含药血清和空白血清,MTT法确定最佳添加剂量;②取1d龄SD大鼠颅骨分离培养OB,分为骨宝含药血清组和对照组,磷酸对硝基苯酯法（PNPP法）检测OB碱性磷酸酶（ALP）活性,荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）检测OB中OPG mRNA的表达。结果：①15%浓度的骨宝含药血清对OB的增殖具有明显的促进作用（P〈0.05）;②骨宝含药血清组中OB的ALP活性2.527±0.185高于对照组1.839±0.040（P〈0.05）,骨宝含药血清组中OB的OPG mRNA表达量1.457±0.031高于对照组0.852±0.090（P〈0.05）。结论：骨宝含药血清能上调OB中OPGmRNA的表达,增强OB的ALP活性,可能是骨宝防治骨质疏松症的作用机制之一。     

维拉帕米对腹腔镜胆囊切除术氧化应激反应的影响

目的：探讨术前静脉注射维拉帕米对腹腔镜胆囊切除术（LC）患者氧化应激反应的影响。方法：收集2007年1月至2008年10月广东省深圳市人民医院收治的30例行择期LC的慢性胆囊炎并胆囊结石患者的临床资料,将患者随机分为对照组和维拉帕米组,每组15例。分别测定两组患者术前（T1）、手术气腹结束即刻（他）及术后24h（T3）血清ALT、AST和丙二醛（MDA）的浓度。结果：与T1时相点比较,两组患者1、2、T3时相点ALT和AST值均增高（P〈0．05）,维拉帕米组患者T2、T3时相点ALT和AST值增高幅度明显低于对照组（P〈0．01）;与T1时相点比较,对照组患者他、r乃时相点MDA值增高显著（P〈0．05）,维拉帕米组患者T2,T3时相点MDA值明显低于对照组（P〈0．01）。结论：术前静脉注射维拉帕米能有效减小气腹带来的氧化应激反应,有效保护肝脏等脏器的功能。     

氟对大鼠肝脏氧化应激及超微结构的影响

目的:研究氟对大鼠肝脏氧化应激及超微结构的影响.方法:在饮水中加入不同剂量的氟化钠(0,50,100和150 mg/L)喂饲大鼠3个月后,测定肝脏丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,并用透射电镜观察肝脏超微结构的改变.结果:与对照组比较,染氟组大鼠肝脏MDA含量升高,SOD、GSH-Px活性下降.透射电镜下肝细胞染色质边集于核膜下,线粒体肿胀,嵴断裂或消失,内质网扩张,胞质内多见脂滴.结论:过量氟使大鼠肝脏处于氧化应激状态,损伤细胞膜性结构和DNA,造成肝脏损伤.     

氧化应激在高糖诱导成骨细胞凋亡中的作用

目的：探讨氧化应激在高糖诱导成骨细胞凋亡中的作用。方法：体外培养的MC3T3-E1细胞,分为正常对照组、N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)组、11.0 mmol/L高糖组、11.0 mmol/L高糖+NAC组、22.0 mmol/L高糖组、22.0 mmol/L高糖+NAC组。应用Annexin V-FITC/PI处理不同组别细胞,流式细胞术检测细胞凋亡;Honchest33258 染色观察细胞核形态;采用MTT法检测细胞增殖;采用DCFH-DA荧光探针检测细胞活性氧类（reactive oxygen species,ROS）的生成。结果：①11.0 mmol/L高糖组较正常对照组MC3T3-E1细胞凋亡率显著增加（P=0.004）;22.0 mmol/L高糖组较正常对照组和11.0 mmol/L高糖组MC3T3-E1细胞凋亡率明显增加（P=0.000;P=0.000）。②11.0 mmol/L高糖组较正常对照组MC3T3-E1细胞增殖轻微下降（P=0.305）;与正常对照组和11.0 mmol/L高糖组相比,22.0 mmol/L高糖组MC3T3-E1细胞增殖显著降低（P=0.001;P=0.009）。③11.0 mmol/L和22.0mmol/L高糖组MC3T3-E1细胞胞内ROS水平均明显增加（P=0.000;P=0.000）,但无明显浓度依赖性,抗氧化剂NAC可明显降低ROS水平,改善高糖所致的凋亡增加和增殖下降。结论：高糖可通过增加成骨细胞胞内ROS生成引起MC3T3-E1成骨细胞凋亡增加、增殖下降。     

氟化物对乳鼠颅骨成骨细胞活性的影响

目的:建立大鼠颅骨成骨细胞体外培养技术,用一种新的试剂alamarBlueTM研究不同浓度氟化物对大鼠成骨细胞活力的影响.方法:应用酶消化法分离培养大鼠颅骨的成骨细胞;AlamarBlueTM摄入法检测细胞增殖.结果:100μmol/L～1 mmol/L氟化钠在体外可刺激细胞增殖,2 mmol/L以上氟化钠可抑制细胞增殖.结论:氟化物对大鼠颅骨成骨细胞的增殖具有双向作用,即低浓度促进,高浓度抑制.     

miR-17表达对内皮细胞氧化应激作用的影响

目的探讨microRNA-17(miR-17)表达对内皮细胞氧化应激作用的影响。方法培养原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC),分别转染阴性对照病毒[Ad(N)组]、上调miR-17腺病毒(Ad-Pre-miR-17组)及下调miR-17腺病毒(Ad-Antagomir-17组),用硝酸银法检测细胞内源性NO的释放,DAF FM探针检测细胞内NO含量,以及采用DHE探针检测细胞内超氧化物(ROS)的含量,并进行统计分析。结果与Ad(N)组比较,Ad-Antagomir-17组细胞内NO含量提高(P<0.05),细胞内ROS含量降低(P<0.05);而Ad-Pre-miR-17组细胞内NO含量降低(P<0.05),细胞内ROS含量增加(P<0.05)。结论降低miR-17可以改善冠心病患者血流供应,降低氧化应激反应,有助于其血管功能的改善。     

Effects of Selenium and Zinc on Renal Oxidative Stress and Apoptosis Induced by Fluoride in Rats

To study the effects of selenium and zinc on oxidative stress, apoptosis, and cell cycle changes in rat renal cells induced by fluoride. Methods Wistar rats were given distilled water containing sodium fluoride (50 mg/L NaF) and were gavaged with different doses of selenium-zinc preparation for six months. Four groups were used and each group had eight animals (four males and four females). Group one, sham-handled control; group two, 50 mg/L NaF; group three, 50 mg/L NaF with a low dose of selenium-zinc preparation (0.1 mg/kg Na2 SeO3 and 14.8 mg/kg ZnSO4·7H2O); and group four, 50 mg/L NaF with a high dose of selenium-zinc preparation (0.2 mg/kg Na2 SeO3 and 29.6 mg/kg ZnSO4·7H2O). The activities of serum glutathione peroxidase (GSH-Px), kidney superoxide dismutase (SOD), and the levels of malondialdehyde (MDA) and glutathione (GSH) in the kidney were measured to assess the oxidative stress. Kidney cell apoptosis and cell cycle were detected by flow cytometry. Results NaF at the dose of 50 mg/L increased excretion of fluoride in urine, promoted activity of urineγ-glutamyl transpeptidase (γ-GT), inhibited activity of serum GSH-PX and kidney SOD, reduce kidney GSH content, and increased kidney MDA. NaF at the dose of 50 mg/L also induced rat renal apoptosis, reduced the cell number of G2/M phase in cell cycle, and decreased DNA relative content significantly. Selenium and zinc inhibited effects of NaF on oxidative stress and apoptosis, promoted the cell number of G2/M phase in cell cycle, but failed to increase relative DNA content significantly. Conclusion Sodium fluoride administered at the dose of 50 mg/L for six months induced oxidative stress and apoptosis, and changes the cell cycle in rat renal cells. Selenium and zinc antagonize oxidative stress, apoptosis, and cell cycle changes induced by excess fluoride.     

缺氧、氧化损伤对培养人TEC整合素α3表达的影响

目的：观察缺氧、氧化损伤后不同染色程度对培养肾小管上皮细胞（TEC）整合素α3染色结果的影响。方法：采用免疫荧光激光共聚焦观察乙醇固定及培养活细胞两种实验条件下TEC整合素α3分布的染色结果，结果：正常组TEC整合素α3主要于细胞基底部极性分布，缺氧，氧化损伤后出现向细胞侧缘及预侧分布的趋势，活细胞染色仅缺氧组于细胞周缘有阳性荧光染色。结论：缺氧、氧化损伤后不同实验程序对TEC整合素α3染色结果有影响。     

卡托普利对非酒精性脂肪肝的防治作用及氧化应激的影响

目的 观察卡托普利对大鼠非酒精性脂肪肝的作用及其氧化应激的影响.方法 将78只雄性SD大鼠随机分为6组,正常组给予普通饲料;其余组(包括模型组)给予高脂饲料,造模6周后,将卡托普利高、中、低剂量组和罗格列酮组分别给予等体积高、中、低剂量卡托普利和罗格列酮;给予正常组和模型组等体积蒸馏水,6周后取血做血生化检测及丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)测定;取肝脏称重,计算肝脏指数;取相同部位的肝组织匀浆测总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG);另取肝组织同定做病理检查;其余液氮固定测定 CYP2E1 mRNA.结果 模型组谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、TG、TG、MDA、肝指数、CYP2E1 mRNA表达水平均增高,GSH含量下降;卡托普利高剂量组ALT、AST、TC、 TG、MDA、肝指数、CYP2E1 mRNA表达水平均降低(P＜0. 05),GSH含量升高(P＜0. 05).肝脏病理学检查显示模型组可见肝细胞广泛发生脂肪变性及炎症反应,卡托普利高剂量组肝细胞脂肪变性与炎症程度明显减轻.结论 卡托普利可增强抗氧化应激能力,减轻肝细胞脂肪变性,对非酒精性脂肪肝有一定的防治作用.     

氧化应激对血管内皮细胞Grx表达的研究

目的采用体外实验，研究人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells．HUVEC）是否受氧化应激而高表达Grx。方法体外分离培养HUVEC；用不同浓度H2O2处理HUVEC，MTT法检测HUVEC活力。RT—PCR半定量检测GrxmRNA表达水平的差异。结果成功获得体外培养的HU—VEC；300-500mol／L H2O2均在不同程度上抑制细胞增殖（P〈0.05）。RT—PCR结果表明，GrxmRNA的表达随着200umol／L H2O2作用时间的增加而增加，30min时与正常对照组差异显著（P〈0．01）；不同终浓度H2O2作用30min结果表明，300umol／L H2O2作用可使GrxmRNA的表达量最高（P〈0．01）。结论建立了分离培养HUVEC的方法；氧化应激可上调HUVEC Grx mRNA表达，且HUVEC内Grx的表达与H2O2刺激呈时间剂量依赖关系。     

H2O2对人淋巴细胞8-羟基-2''-脱氧鸟苷三磷酸酶表达及端粒长度的影响

目的:探讨人外周血淋巴细胞遭受H2O2损伤时,8-羟基-2'-脱氧鸟苷三磷酸酶(8鄄oxo鄄dGTPase)的表达及端粒长度的变化,评估氧化应激对端粒长度的影响。方法:体外培养人外周血淋巴细胞,分为正常对照组、氧化组和抗氧化组,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT鄄PCR)及凝胶成像技术,测定8鄄oxo鄄dGTPase的mRNA表达水平,并应用Southern杂交技术检测端粒长度的变化。结果:①随着H2O2作用时间的延长,8鄄oxo鄄dGTPasemRNA的相对含量也增加,尤以氧化组增加最显著(P<0.05),而抗氧化组与对照组相比较则差异无显著性(P>0.05);②端粒长度则随着时间的变化表现为缩短,且3组之间均有差异(P<0.05)。结论:①8鄄oxo鄄dGTPase的表达随着氧化应激的程度加深而显著增加;②维生素C具有一定的抗氧化作用,它能明显减低过氧化损伤,抑制8鄄oxo鄄dGTPase的生成,同时能减缓端粒缩短的速率;③氧化应激在一定程度上可以引起人淋巴细胞端粒长度的缩短。