银杏叶提取物对胶质瘤细胞NF-κB表达和NO生成的调控

目的 研究银杏叶提取物(EGb761)对C6胶质瘤细胞核转录因子-κB(NF-κB)表达和可诱导型一氧化氮合酶(iNOs)、一氧化氮(NO)生成的影响。方法 以脂多糖(LPS)和佛波酯(PMA)诱导体外培养的C6胶质瘤细胞表达可诱导型一氧化氮合酶、产生大量NO，应用激光共聚焦成像系统和NO荧光探针监测细胞内NO浓度变化，逆转录基因扩增技术和蛋白质印迹技术检测EGb761对C6胶质瘤细胞中iNOs基因表达的影响，并探讨这一调控作用的分子机制。结果 EGb761能明显降低C6胶质瘤细胞中iNOs mRNA和蛋白的表达、减少NO的生成，抑制IκB-α的降解和阻止p65／RelA进入细胞核。结论 结果提示EGb761可通过NF-κB信号通路对C6胶质瘤细胞iNOs基因表达和NO的生成进行调控。     

银杏叶提取物对星形胶质细胞氧化损伤的保护作用

目的 研究银杏叶提取物（EGb761）对H2O2所致星形胶质细胞氧化损伤的保护作用。方法 用不同浓度的EGb761预处理细胞，再加入H2O2，通过噻唑蓝（MTT）实验、线粒体跨膜电位（△ψm）及细胞色素C释放实验、DNA损伤实验及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3（Caspase-3）活性测定，观察ECb761对细胞存活率、线粒体膜通透性、DNA氧化损伤及Caspase-3活性的影响。结果 EGb761能明显降低H2O2对星形胶质细胞的氧化损伤，提高细胞的存活率；维持线粒体膜的完整性，抑制跨膜电位的耗散和细胞色素C的释放；抑制Caspase-3的活化和DNA的降解。结论 EGb761具有清除活性氧，减轻H2O2所致星形胶质细胞的氧化损伤，对星形胶质细胞有保护作用。     

布洛芬对Aβ25-35所致大鼠海马损伤及iNOS表达的影响

目的研究非甾体类抗炎药布洛芬(Ibuprofen,Ibu)对大鼠脑室内注射Aβ25-35所致海马损伤及iNOS mRNA表达的影响.方法大鼠灌胃给予Ibu(7.5,15mg·kg-1)连续应用3w,脑室内注射Aβ25-35 (5μL, 2M),注射后1w,取脑组织,进行尼氏(Nissl)染色和胶质纤维酸蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)免疫组织化学染色,观察海马CA1区锥体神经元形态学改变和星形胶质细胞的活化浸润情况.RT-PCR 分析诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达水平.结果大鼠脑室内注射Aβ25-35可引起海马CA1区星形胶质细胞的激活和浸润及锥体神经元的损伤,同时伴有iNOS mRNA表达增加.Ibu(7.5,15mg·kg-1,连续应用4w)能减轻海马CA1区锥体神经元的损伤及星形胶质细胞的激活和浸润,抑制Aβ25-35引起的iNOS mRNA表达增加.结论 Ibu能够通过抑制Aβ25-35引起的iNOS mRNA表达,减轻大鼠海马锥体神经元的损伤.     

β淀粉样蛋白1-42对小胶质细胞产生一氧化氮作用的实验研究

目的：应用β淀粉样蛋白1-42（β-Amyloid，Aβ1-42）作用于小胶质细胞（microglia，MG），探讨其产生一氧化氮（nitric oxide，NO）的作用途径。方法：应用BV-2小胶质细胞作为体外小胶质细胞模型，测定加入Aβ1-42后细胞上清NO含量及细胞iNOS酶活力；流式细胞仪间接免疫荧光标记法观察Aβ1-42对iNOS蛋白表达的作用。结果：Aβ1-42可以刺激BV-2细胞产生NO、提高细胞iNOS酶活性、增加iNOS蛋白质表达，以上作用均具有时间及浓度依赖性。结论：Aβ1-42在体外可通过活化小胶质细胞，增加NO的表达及分泌，为进一步发挥神经元毒性作用创造条件。     

嗅鞘细胞对活化的星形胶质细胞的作用

目的:研究体外培养的大鼠嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cell,OEC)对活化的星形胶质细胞(astrocytes,AST)的作用.方法:体外培养嗅鞘细胞和星形胶质细胞.星形胶质细胞经纯化传代,细胞融合后利用划伤法得到活化的星形胶质细胞,将嗅鞘细胞与活化的星形胶质细胞共培养24 h后,观察星形胶质细胞增殖能力的改变,以及其表达胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和硫酸软骨素蛋白多糖(CSPG)的变化.结果:活化的星形胶质细胞与嗅鞘细胞共培养后,MTT实验表明其增殖能力增强;免疫荧光染色、RT-PCR和蛋白质印迹法测定结果表明共培养后活化的星形胶质细胞表达的GFAP和CSPG降低.结论:嗅鞘细胞作用于活化后的星形胶质细胞以后,能够促进星形胶质细胞的分裂增殖,同时能够减少星形胶质细胞胶质化,降低抑制性细胞因子的表达.     

川芎嗪、参麦注射液对缺氧复氧损伤后鼠脑星形胶质细胞释放一氧化氮的影响

目的：研究川芎嗪和参麦注射液对鼠脑星形胶质细胞缺氧复氧损伤后释放一氧化氮（nitric oxide,NO)的影响及可能机制。方法：培养Wistar乳鼠脑星形胶质细胞，用抗神经胶质纤维酸性蛋白单克隆抗体确认，建立缺氧／复氧模型，NO采用Griess反应法检测。结果：与对照组比较，缺氧复氧损伤后星形胶质细胞NO的释放显著增高，钙拮抗剂川芎嗪对缺氧复氧损伤后NO的过度释放无阻遏作用，而参麦注射液则能抑制O的过度分泌。结论：缺氧复氧损伤后星形胶质细胞释放NO增多可能与诱导型一氧化氮合成酶（iNOS)有关，参麦可能通过抑制NO的过度分泌以对抗缺氧复氧损伤。     

达纳康对类老年痴呆大鼠脑组织胶质细胞原纤维酸性蛋白和IL-1β、IL-6及APP mRNA表达的影响

目的研究达纳康(EGb761)对β-淀粉样蛋白(Aβ)25~35所致类老年性痴呆(AD)模型大鼠神经免疫调节的作用机制。方法采用双侧杏仁核注射Aβ25~35造成类AD大鼠模型,观察大鼠莫里斯(Morris)水迷宫空间记忆能力,并分别通过免疫组化和RT-PCR方法研究类AD大鼠神经元胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)、APP mRNA表达;观察炎性细胞因子IL-1β、IL-6的变化以及EGb761的影响。结果类AD模型大鼠Morris水迷宫测试出现空间记忆能力下降,皮层、海马APP mRNA的表达上调;海马、皮层GFAP阳性胶质细胞和IL-6 mRNA以及海马IL-1βmRNA表达增高。EGb761能够提高模型大鼠定向学习记忆能力,降低海马、皮层GFAP阳性胶质细胞表达,降低海马部位APP mRNA的表达。结论EGb761能显著改善Aβ诱导的痴呆模型大鼠学习记忆障碍,降低海马APP mRNA表达,减轻神经细胞的炎症和免疫联级反应。提示有效控制AD患者脑内Aβ免疫联级反应是EGb761的重要作用机制之一。     

星形胶质细胞抑制T细胞增殖及机制探讨

目的初步探讨星形胶质细胞影响T细胞增殖作用及机制。方法利用分离培养小鼠原代星形胶质细胞,以LPS和IFNγ刺激细胞活化,用RTPCR方法检测非活化与活化状态的星形胶质细胞B7.2、B7.1、MHCⅡ和B7H1等免疫分子的表达情况;将不同状态的细胞分别与PHA刺激活化的小鼠T细胞进行共培养,观测其对T细胞增殖的影响,并分析可能的机制。结果小鼠原代星形胶质细胞在非活化状态下组成性表达B7.2和B7H1mRNA,在LPS和IFNγ刺激活化24h后B7H1的表达减少,而同时诱导表达MHCⅡ和B7.1mRNA,而TNFα作用不明显;非活化的星形胶质细胞对PHA刺激活化的T细胞增殖具有明显的抑制作用,而活化的星形胶质细胞的抑制作用减弱。结论小鼠星形胶质细胞在非活化及活化状态下对T细胞增殖具有不同的作用,其机制可能与其表达不同的免疫分子有关。     

缺氧处理后鼠脑星形胶质细胞基因表达谱的初步分析

目的：本实验利用基因芯片技术研究缺氧处理后鼠脑星形胶质细胞基因表达谱的变化，以深入认识星形胶质细胞在缺氧处理后基因表达变化规律，为进一步全面认识神经胶质细胞在缺血情况下基因变化规律以及神经胶质细胞与神经元在损伤条件下相互依存关系提供实验依据和理论基础。方法：用TRIzol试剂经过多个步骤提取各组制备好的星形胶质细胞样本总RNA；利用基因芯片技术获取缺氧处理后鼠脑星形胶质细胞的基因表达谱；利用Gene Ontology Consortium分析系统、Gene Cards数据库和Pubmed检索系统对基因表达谱进行初步分析。结果：基因表达谱：在基因芯片上测定了4096个点，共有差异表达基因153个，其中，已知差异表达基因45个，未知差异表达基因108个(EST片段)；己知差异表达基因：在45个已知差异表达基因中，表达下调的基因有22个，表达上调的基因有23个，未见报道的与缺氧处理相关基因28个，已报道的有17个；已知差异表达基因功能聚类：共8类。结论：本实验获得鼠脑星形胶质细胞缺氧处理后的基因表达谱；首次发现28个与缺氧相关的未见报道基因；初步明确已知差异表达基因在缺氧处理后的基本变化规律．     

大鼠脊髓损伤后脊髓NOS表达变化研究

目的 观察大鼠脊髓损伤不同时间段一氧化氮合成酶（NOS）的表达变化，证实一氧化氮（NO）在创伤后神经元死亡中的作用和意义。方法 采用NYU大鼠脊髓损伤模型，将体重300－350g的成年Wistar大鼠42只，分为伤后24h、48h、72h、7d、14周、6周7组，每组各6只，应用辅酶Ⅱ黄递酶（NADPH－d)组织化学染色法，观察脊髓不同损伤时间段NOS表达的变化。结果 脊髓损伤后不同时间段NADPH－d阳性标记不同，在损伤晚期星形胶质细胞也出现阳性标记。损伤引起的前角神经元NOS表达与神经元的死亡相一致。结论 NO在创伤后神经元的死亡中起了重要作用，脊髓损伤后胶质细胞中诱导性NOS的表达可能是胶质细胞对损伤或神经元坏死的一种反应。     

一氧化氮合酶与脑缺血亚急性期神经损伤的关系

目的 探讨大鼠脑缺血亚急性期脑力内三型一氧化氮合酶（NOS）的表达及其与经济损伤的关系。方法 采用大鼠大脑中动脉缺血模型，用免疫组织化学方法检测局灶性脑缺血24h三型NOS在脑内的表达。结果 局灶性脑缺血24h，缺血中心区及部分边缘区内可见大量诱导型一氧化氮合酶（iNOS）阳性的胶质细胞浸润。表达神经元型一氧化氮合酶（nNOS）及内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的神经细胞数减少。结论 脑缺血亚急性期胶质细胞iNOS表达上调与迟发性神经元损伤有密切关系。在此期给予选择性iNOS抑制剂可以减少缺血性损害。     

桩蛋白在大鼠星形胶质细胞中的表达

目的：初步探讨桩蛋白（paxillin）在大鼠星形胶质细胞及神经元中的表达。方法：通过组织切片、细胞培养、免疫荧光和RT-PCR方法,观察桩蛋白在大脑皮层及体外培养的星形胶质细胞以及神经元中的表达。结果：桩蛋白在大鼠脑皮质的星形胶质细胞中表达,神经元未见明显表达;在体外培养的星形胶质细胞以及神经元中的表达情况与体内一致,主要表达于星形胶质细胞的胞浆及突起中。结论：桩蛋白主要表达于星形胶质细胞而非神经元中。本实验结果为进一步研究桩蛋白在星形胶质细胞中的生物学作用奠定了基础。     

褪黑激素对巨噬细胞呼吸爆发和iNOS基因表达的作用

目的：研究褪黑激素对巨噬细胞呼吸爆发和iNOS基因表达的作用，并探讨其作用的机制。方法：本项研究以佛波酯刺激巨噬细胞产生呼吸爆发，以脂多糖／γ—干扰素诱导巨噬细胞表达可诱导型一氧化氮合酶，应用化学发光技术以及ESR自旋捕集技术研究了褪黑激素对巨噬细胞产生内源性超氧阴离子、一氧化氮的作用。结果：研究结果表明褪黑激素能够清除巨噬细胞呼吸爆发产生的超氧阴离子自由基、抑制可诱导型一氧化氮合酶基因表达、减少内源性一氧化氮的生成，而这一抑制作用是通过NF—κB信号通路实现的。结论：褪黑激素对巨噬细胞的活化具有显的调控作用。     

巨噬细胞中诱导型一氧化氮合酶来源的NO对共培养HL-60细胞凋亡的影响

目的 研究巨噬细胞中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）来源的一氧化氮（NO）时共培养HL-60细胞凋亡的影响。方法 以脂多糖（LPS）和у-干扰素（INF-у）诱导RAW264．7巨噬细胞iNOS基因的表达产生过量NO为实验模型，通过噻唑蓝（MTT）试验、蛋白质印迹分析、荧光分析、流式细胞术（FCM）、透射电镜和DNA琼脂糖凝肢电泳等分析技术．观察NO对共培养的HL-60细胞存活率、Bcl-2和Bax蛋白表达、Caspase-3活性和细胞凋亡（apoptosis）的影响。结果 RAw264．7巨噬细胞中iNOS来源的NO对共培养HL一60细胞能造成氧化损伤，降低细胞的存活率；Bel一2表达明显下降。而Bax表达增加；激活Caspase-3和促进DNA的降解。结论 巨噬细胞中iNOS来源的NO在诱导细胞凋亡中发挥重要的作用。     

芳香开窍法对全脑缺血再灌注大鼠脑组织NO含量及NO合酶表达的影响

[目的]研究以麝香、冰片为代表的芳香开窍中药对大鼠脑组织一氧化氮(NO)含量及一氧化氮合酶内皮细胞型(eNOS)、一氧化氮合酶诱导型(iNOS)表达量的影响。[方法]Pulsinelli的4VO法建立大鼠全脑缺血再灌注模型,采用硝酸还原酶法测定NO及免疫组织化学染色技术观察脑微血管eNOS、iNOS及神经元iNOS表达,并进行半定量分析。[结果]芳香开窍中药和尼莫通能减少缺血再灌注大鼠脑组织中NO的含量,并接近于正常,与模型组比较P<0.01,与假手术组比较P>0.05。对NOS的两个亚型iNOS和eNOS分析提示芳香开窍药能提高脑微血管eNOS的表达,降低神经元及脑微血管iNOS表达(与模型组比P<0.01)。[结论]芳香开窍药有促进内皮细胞产生合成NO,同时也能降低神经元及微血管iNOS表达,从而减少总NO的生成量,降低缺血引起的NO毒性作用,对脑组织具有一定的保护作用。     

肉豆蔻提取物对IFN-γ干预的小胶质细胞BV2的调控作用

目的探讨肉豆蔻提取物对鼠性小胶质BV2细胞的作用机制。方法实验分为对照组、IFN-γ模型组、肉豆蔻提取物复合处理组。采用WST-8试剂盒,观察肉豆蔻提取物对体外培养的鼠性小胶质细胞BV2生存率的影响,采用分子生物学技术,检测IFN-γ所诱导的诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧合酶2(COX-2)的表达水平。结果肉豆蔻提取物对鼠性小胶质细胞BV2无毒性,且抑制了IFN-γ所诱导的iNOS和COX-2的表达,与IFN-γ模型组比较差异显著(P<0.01)。结论肉豆蔻提取物对鼠性小胶质细胞BV2具有很好的抗神经毒性及抗炎作用。     

星形胶质细胞对PC12细胞的分化及突触素和生长相关蛋白43表达的影响

目的：体外观察星形胶质细胞对PC12细胞向神经元分化的作用，以及对PC12细胞突触素和生长相关蛋白43（GAP-43）表达的影响，探讨星形胶质细胞促进非神经元细胞形成神经突触的可能性。方法：采用PC12细胞与新生大鼠皮层组织来源的星形胶质细胞共同孵育，分为共育组和对照组，应用免疫荧光技术检测星形胶质细胞对PC12细胞分化、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、突触素和GAP-43表达的影响。结果：共育组培养4d，大部分PC12细胞已具备神经元形态，PC12有突细胞／总细胞数目比率、突起长度和突触数目明显高于对照组（P〈0．01）；NSE、突触素和GAP-43免疫荧光染色强阳性的PC12细胞明显增多，与对照组比较具有统计学意义（P〈0．01）。结论：提示星形胶质细胞有助于促进非神经元细胞形成神经突触。     

吡格列酮对脂多糖所致大鼠海马损伤的保护作用及其对iNOS和IL-1β表达水平的影响

目的 研究过氧化体增殖物激活受体.y(PPARΥ)激动荆吡格列酮(pioglitazone,pio)对大鼠脑室注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)所致海马损伤的保护作用及对诱导型一氧化氮合酶(Inducibh Nitric Oxide Syn-thase,iNOS)和白介素-1β(Intedeukin-1β,IL-1β)表达水平的影响.方法 雄性大鼠40只,随机分为4组,每组10只,即对照组,LPS模型组,LPS Hio40mg/kg组和LPS pio80mg/kg组.大鼠灌胃给予pio(40,80mg/kg)3周,脑室内注射LPS(5μl,30μg)1周后,取脑组织,制成石蜡切片,进行尼氏(Nissl)染色和胶质纤维酸蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫组织化学染色.研究海马CA1区锥体神经元形态学改变和星形胶质细胞的活化、浸润情况.采用Western蛋白印迹检测方法观察IL-1β、iNOS的表达情况.结果 大鼠脑室内注射LPS可引起海马CA1区星形胶质细胞的激活和浸润及椎体神经元的损伤,同时伴有IL-1β,iNOS的表达增加.Pio(40、80mg/kg连续应用1周)能减轻海马CA1区椎体神经元的损伤及星形胶质细胞的激活和浸润,抑制鹏引起的IL-1β、iNOS表达增加.侧脑室注射LPS后1周,LPS组大鼠海马CAI区IL-1β蛋白表达水平较对照组差异有统计学意义(P＜0.01),LSP pio40mg/kg组和LSP Pio80mg,/kg组大鼠海马CAI区IL-1β表达量较LPS模型组差别有统计学意义(P＜0.01).LSP Pio40mg/kg组和LSP Pio80mg/kg组大鼠海马CA1区iNOS表达量较LPS模型组差别有统计学意义(P＜0.01).结论 Pio能够通过抑制LPS引起的IL-1β、iNOS的表达,减轻海马椎体神经元的损伤.     

静息态和活化态星形胶质细胞ASICs亚细胞分布研究

目的:探讨酸敏感离子通道(acid sensitive ion channels,ASICs)在大鼠静息态和活化态星形胶质细胞亚细胞分布变化及调控。方法:取大鼠静息态和活化态星形胶质细胞,通过应用免疫荧光、全细胞膜片钳和Western Blot等技术,观察ASICs在静息态和活化态星形胶质细胞亚细胞分布变化及可能机制。结果:(1)ASICs在静息态和活化态星形胶质细胞分别主要分布于细胞核或胞质/胞膜。以ASIC1为例进行分析,发现ASIC1胞核荧光密度在静息态和活化态星形胶质细胞分别为(54.32±1.29)(n=36)和(22.27±0.96)(n=34),而ASIC1胞质/胞膜荧光密度在这两种星形胶质细胞分别为(6.14±0.39)(n=38)和(37.45±1.31)(n=36),这种分布差异在功能学上表现为ASIC1电流的增加,即ASIC电流由静息态的10%增加到活化态的30%;(2)静息态和活化态星形胶质细胞之间ASICs蛋白表达总量差异无统计学意义;(3)活化态星形胶质细胞炎症指示蛋白诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达较静息态星形胶质细胞显著增多;用小胶质细胞原性炎症因子白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)刺激静息态星形胶质细胞,可使静息态星形胶质细胞ASIC1从胞核转向胞质/胞膜。结论:ASICs在静息态星形胶质细胞主要分布于胞核,而在活化态星形胶质细胞主要分布于胞质/胞膜;IL-1β可能调控星形胶质细胞ASICs由胞核转移至胞质/胞膜。     

5-脂氧合酶及诱导型一氧化氮合酶在星形细胞瘤中的表达及其相关性研究

目的:研究5-脂氧合酶(5-LOX)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在星形细胞瘤中的表达特点及相关性。方法:60例星形细胞瘤,免疫组织化学法检测5-LOX和iNOS的表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测二者的mRNA水平,14例非肿瘤脑组织作为对照组。结果:对照组5-LOX和iNOS不表达或低表达,星形细胞瘤高度恶性组5-LOX和iNOS的阳性表达率及mRNA含量均高于低度恶性组(P<0.01),二者呈正相关(γ=0.525,γ=0.431,P<0.01)。结论:5-LOX和iNOS的表达与星形细胞瘤恶性程度有关,二者在星形细胞瘤发生发展过程中有协同作用。