Fkbp51基因敲除对小鼠肝脏转录组基因可变剪接的影响

目的通过分析Fkbp51基因敲除(knock out,KO)与野生型(wild type,WT)小鼠肝脏表达谱,研究Fkbp51基因敲除对肝脏组织基因可变剪接的影响。方法利用二代测序对Fkbp51 KO与WT小鼠肝脏进行表达谱测序,用Top Hat对RNA测序结果进行可变剪接分析,筛选出KO与WT小鼠肝组织中差异的内含子保留(intron retetion,RI)和外显子跳跃(exon skipping,SE)。通过在线工具DAVID对这些差异可变剪接体进行基因功能(gene ontology,GO)和代谢通路(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析,同时用NCBI基因数据库对这些基因进行注释。结果 (1)Fkbp51缺失可导致小鼠肝脏mRNA可变剪接发生变化;(2)Fkbp51基因敲除造成小鼠肝脏mRNA可变剪接表达量的变化;(3)通过GO与KEGG分析,我们发现这些发生差异可变剪切的基因主要与脂肪相关衍生物的代谢、免疫、胆汁酸分泌等通路相关。(4)与差异内含子保留相关的基因主要与肌动蛋白细胞骨架调控,氨基酸及其衍生物代谢相关。结论 Fkbp51基因敲除能够改变基因组中mRNA的可变剪切,进而影响小鼠肝脏的代谢功能。     

Fkbp51基因敲除小鼠肝脏与大脑海马区RNA表达谱系的分析比较

目的通过分析野生型小鼠(WT)与Fkbp51基因敲除(KO)小鼠肝脏、海马RNA表达谱系之间的差异,研究Fkbp51基因在代谢通路和神经通路中的作用。方法利用第二代测序技术对Fkbp51KO与WT小鼠的肝脏与海马mRNA进行表达谱测序,将测序结果用BRB-Array Tools进行分析,筛选出小鼠肝脏与海马的差异基因,然后分别利用在线工具DAVID对差异基因进行GO本体分析,STRING数据库对其进行蛋白质的相互作用网络分析,并利用Genecard对基因进行注释。结果 (1)Fkbp51的缺失,在肝脏中造成类固醇生物合成及代谢、脂类物质代谢以及氧化还原反应等相关基因表达水平的变化;(2)在海马中造成机械刺激探测、学习或记忆、突触传递的调节、PPAR信号通路、肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)等相关基因表达水平的变化;(3)在肝脏与海马中,Fkbp51的缺失同时造成了11个基因的共差异表达,这11个基因的蛋白网络互作图显示:HMGCS2与INSIG1及相关蛋白形成网络,而USP2与PER、CRY、DBP等相关蛋白形成另一个网络。这两个网络既参与代谢也参与神经调节。结论Fkbp51在代谢与神经中的作用既是相互独立又是相互联系的。     

Slc4a11基因缺失在CHED发病中的作用

目的　探讨Slc4a11缺失在先天性遗传性角膜内皮营养不良（congenital hereditary endothelial dystrophy, CHED）发病中的作用及其与自噬信号通路的潜在调控关系。方法　利用CRISPR/Cas9技术构建Slc4a11基因敲除小鼠模型。以野生型小鼠（wild type, WT）和Slc4a11基因敲除小鼠（knockout, KO）为实验对象,通过Western印迹法、RT-qPCR、茜素红染色、H-E染色、透射电镜评估KO小鼠角膜表型特征的变化。通过Western印迹法和RT-qPCR检测自噬标志物LC3、beclin1、p62在角膜内皮的表达量。透射电镜观察两组小鼠角膜内皮细胞自噬情况。结果　Slc4a11基因敲除小鼠角膜显示与CHED相似的表型特征,包括角膜厚度增加;角膜内皮细胞体积增大,密度减小;后弹力层增厚;角膜内皮空泡形成。KO小鼠与WT小鼠相比,LC3、beclin1的mRNA和蛋白的相对表达量上升,差异有统计学意义（P<005）,而p62的mRNA和蛋白的相对表达量下降,差异有统计学意义（P<005）。KO小鼠角膜内皮细胞内自噬体明显多于WT小鼠。结论　利用CRISPR/Cas9技术构建的Slc4a11基因敲除小鼠角膜显示CHED特征的表型。同时Slc4a11缺失通过增强自噬信号通路参与CHED的发病机制。     

Fkbp38基因缺失导致小鼠早发性卵巢功能不全：基于激活mTOR通路并诱导细胞凋亡

目的 探讨他克莫司结合蛋白38（Fkbp38）在卵泡发育中的作用及其缺失导致早发性卵巢功能不全（POI）的机制。方法 采用Cre-loxp系统构建卵母细胞特异性敲除Fkbp38转基因小鼠,并应用PCR鉴定小鼠基因型,然后在蛋白水平上验证Fkbp38在卵母细胞中的敲除效果。通过HE染色在显微镜下计数敲除小鼠与同窝对照小鼠卵巢原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡及窦卵泡数量分析卵母细胞缺失Fkbp38基因对小鼠卵泡发育的影响。通过繁殖实验及ELISA实验检测小鼠繁殖能力及血清性激素水平,明确卵母细胞敲除Fkbp38基因对卵巢功能的影响。TUNEL法检测敲除小鼠与同窝对照小鼠卵巢颗粒细胞凋亡情况。检测雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路下游靶蛋白磷酸化核糖体S6（PS6）活性验证Fkbp38基因对mTOR信号通路的影响。IF检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）及Bcl2-Associated X（BAX）表达明确Fkbp38基因敲除对卵母细胞发育的影响。结果 卵母细胞特异性敲除Fkbp38转基因小鼠模型构建成功。敲除小鼠较对照小鼠表现出生育力下降,性激素水平紊乱,卵巢内原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡数均显著减少（P<0.05）,引起POI样改变。卵母细胞特异性敲除Fkbp38基因后,mTOR信号通路激活,颗粒细胞凋亡增加,卵母细胞内BAX蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达减弱,BAX/Bcl-2蛋白比值显著升高（P<0.05）。结论 Fkbp38在卵泡发育中发挥重要作用,其缺失致POI发生的机制可能是通过激活mTOR信号通路诱导细胞凋亡而引起的。     

Notch1、Notch3及Hes1在胃肠道间质瘤中的表达及临床意义

目的 探讨胃肠道间质瘤(GIST)患者肿瘤组织中Notch信号通路相关蛋白Notch1、Notch3及Hes1表达水平及临床意义.方法 采用实时定量PCR (Q-PCR)和Western blot方法检测135例新鲜GIST标本及临近非肿瘤组织中Notch1、Notch3及Hes1 mRNA和蛋白表达情况.同时采用免疫组织化学方法检测Notch1、Notch3及Hes1蛋白表达情况,并分析各蛋白表达与GIST患者临床病理因素的关系.另将野生型小鼠(WT)和Notch1基因敲除小鼠(KO) 40只,分为WT组、KO组、WT+ GIST组和KO+GIST组,检测各组Notch1、Notch3及Hes1蛋白表达情况.结果 与临近非肿瘤组织相比,GIST组织中Notch1、Notch3及Hes1 mRNA和蛋白表达均上调(P＜0.05).GIST标本的Notch1、Notch3、Hes1阳性率(5926％、65.19％、62.22％)均高于临近非肿瘤组织(17.78％、22.22％、17.78％),差异有统计学意义(P＜0.05).统计分析证实Notch1蛋白表达与GIST的NIH分级密切相关(x2=8.532,P=0.002);Notch3蛋白表达与GIST的肿瘤转移密切相关(x2=7.532,P=0.003);Hes1蛋白表达与GIST的肿瘤大小密切相关(x2=6.781,P=0.012).各组小鼠Notch1、Notch3及Hes1蛋白表达情况显示,与WT组相比,WT+ GIST组小鼠体内3种蛋白表达升高(P＜0.05);与KO组相比,KO+GIST组小鼠体内3种蛋白表达无明显变化(P＞0.05);与WT+ GIST组相比,KO+ GIST组小鼠体内3种蛋白表达降低(P＜0.05).结论 Notch信号通路相关蛋白Notch1、Notch3及Hes1在GIST患者组织中表达升高,Notch信号通路的激活可能在GIST发生、发展过程中起重要作用.     

补阳还五汤对Cav-1敲除小鼠脑缺血后mTOR通路的影响

目的探讨小窝蛋白(caveolin-1,Cav-1)对脑缺血后哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的影响及补阳还五汤抗脑缺血的可能作用机制。方法将Cav-1基因敲除(knock out,KO)与野生型(wild type,WT)小鼠随机分为KO假手术组、KO模型组、KO补阳还五汤组(补阳组)、WT假手术组、WT模型组及WT补阳组。采用大脑中动脉栓塞法建立脑缺血模型,干预14 d后观察小鼠神经功能评分;免疫组化检测大脑mTOR、磷酸化核糖体S6蛋白激酶(phospho-ribosomal S6 kinase,p-S6K1)、磷酸化真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白-1(phospho-eukaryotic initiation factor 4E-binding protein 1,p-4EBP1)的蛋白表达;qRT-PCR检测大脑mTOR的mRNA水平。结果与同类假手术组比较,其他4组神经功能评分、mTOR、p-S6K1、p-4E-BP1蛋白表达及mTOR mRNA表达明显上升(P<0.01);与同类模型组比较,KO补阳组、WT补阳组神经功能评分明显下降(P<0.01),各蛋白表达与mRNA表达明显上升(P<0.01);与WT模型组比较,KO模型组神经功能评分上升(P<0.05),各蛋白与m RNA表达明显下降(P<0.01);与WT补阳组比较,KO补阳组神经功能评分明显上升(P<0.01),各蛋白及m RNA明显下降(P<0.01)。结论Cav-1基因的缺失会导致mTOR通路活性降低并加重脑缺血后神经功能损伤;补阳还五汤可能通过Cav-1调控mTOR信号通路的活性,发挥抗脑缺血损伤的作用。     

髓系KLF5基因缺失小鼠腹主动脉瘤形成的生物信息学分析

背景　腹主动脉瘤（AAA）是一种老年常见高死亡率的心血管系统疾病，发病机制不明确，临床上无有效治疗药物。本课题组前期研究发现，KLF5基因在人和小鼠AAA组织中表达升高，但是对于详细的KLF5基因调控炎症相关基因表达的网络分析未见报道。目的　利用基因芯片技术对髓系KLF5基因表达缺失（LyKLF5-/-）小鼠AAA的差异表达基因进行生物信息学分析，探讨KLF5基因在AAA中的调控机制。方法　研究时间为2015年1月-2019年4月。将SPF级KLF5-flox小鼠和SPF级LysM-cre小鼠杂交培育的雄性髓系遗传性LyKLF5-/-小鼠与同笼野生型（WT）C57BL/6小鼠各3只作为实验动物。通过CaPO4诱导小鼠AAA模型，并提取肾下腹主动脉组织总RNA行mRNA芯片筛查。对于筛选出的差异表达基因，利用在线数据库Metascape进行GO功能富集分析和KEGG富集分析，再利用STRING在线数据库进行蛋白互作网络分析。结果　mRNA芯片共筛选到上调表达基因646个，下调表达基因1 410个（|FC|≥2，P<0.05）。与WT小鼠比较，抑制炎症的基因在LyKLF5-/-小鼠表达增加，Bcas3、Hck基因表达分别上调3.96、3.14倍；促进炎症的基因在LyKLF5-/-小鼠表达降低，Retnla、Olig1、Tnfrsf11a分别下调7.68、5.07、3.66倍。GO功能富集分析显示上调差异基因主要参与多肽抗原合成和表达的调控、核苷二磷酸代谢过程、肌节组织的正向调节等过程；下调差异基因主要参与生长发育、细胞对葡萄糖刺激反应的胰岛素分泌调节、平滑肌细胞迁移的正调控等过程。KEGG富集分析显示上调差异基因主要影响破骨细胞分化、吞噬小体、氨基酸的生物合成等通路；下调差异基因主要影响血管平滑肌收缩、泛素介导的蛋白水解作用以及肌动蛋白细胞骨架的调控等通路。蛋白互作网络分析证实，小鼠髓系LyKLF5-/-导致参与血管炎症相关基因Bcas3、Hck表达上调和Retnla、Olig1、Tnfrsf11a表达下调。结论　Bcas3、Hck、Retnla、Olig1、Tnfrsf11a基因可能是参与血管炎症和AAA形成的重要候选基因。     

基于mRNA高通量测序筛选调控小鼠术后谵妄重要差异基因

目的 基于高通量测序技术筛选小鼠海马组织中术后谵妄(POD)发生的相关重要差异基因。方法 将16只健康雌性C57小鼠随机分为术后谵妄(POD组)和对照组(CON组),每组8只。采用异氟烷麻醉下剖腹探查构建POD模型,术后多时间点行为学检测POD改变。于造模后24 h收集小鼠海马组织进行高通量测序,对显著差异基因进行基因本体(GO)分析及京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路数据库分析,采用RT-qPCR验证关键差异表达基因(DEGs)。结果 相比于对照组,POD组共鉴定了105个DEGs,其中79个DEGs上调,26个DEGs下调;GO分析结果显示,主要富集的生物过程包括应激反应、代谢过程等,主要表达于细胞器、细胞膜,参与的分子过程涉及转录活性调节等。KEGG分析提示,通路主要富集于NF-κB、趋化因子、mTOR、FoxO和Hippo等信号通路;综合上述结果并结合RT-qPCR验证筛选出Cdkn1a、Nfkbia、Card14、Wnt3、Bcl2、Gng11、Grm3和Akt2 8个关键基因。结论 高通量测序筛选出的差异表达基因,可能通过NF-κB、趋化因子、mTOR等信号通路介导P...     

跳台实验训练后 FMR1基因敲除小鼠学习记忆与细胞外信号调节激酶1／2的关系

目的：探讨跳台实验训练后FMR1基因敲除（ KO）小鼠学习记忆与海马CA1、CA3区细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）信号通路的关系。方法将20只4周龄FVB近交系KO及20只野生型（WT）小鼠分为KO组和WT组。利用跳台实验观察各组小鼠被动学习记忆能力,并通过Western blot检测海马CA1、CA3区ERK1／2及p－ERK1／2的表达。结果跳台实验第1天KO组的潜伏期较WT组短,错误次数较WT组多。跳台实验第2天KO组的潜伏期较WT组短,错误次数较WT组多。 Western blot结果显示跳台后KO组海马组织CA1区p－ERK1／2表达增加,与WT组比较差异有统计学意义（ P＜0.05）;跳台后KO组海马CA3区p－ERK1／2表达虽有增加,但与WT组比较,差异无统计学意义;跳台后KO组海马组织CA1及CA3区ERK1／2的表达与WT组比较差异无统计学意义。跳台后KO组和WT组ERK1／2及p－ERK1／2的表达与跳台前比较差异无统计学意义。结论 FMR1基因敲除小鼠学习记忆障碍与海马p －ERK1／2的异常表达有关。     

基于转录组测序筛选不同性别C57BL/6J小鼠差异基因及通路

目的 通过转录组测序筛选雌性与雄性C57BL/6J小鼠差异基因及通路,为进一步探讨小鼠雌雄间行为学差异的分子机制奠定基础。方法 C57BL/6J品系的8周龄雌性与雄性小鼠,完整分离小鼠海马体组织,提取总RNA后逆转录构建cDNA文库,并在华大基因平台上生成单端为50个碱基的读数进行转录组测序。测序结束后基于GO和KEGG数据库,结合R语言中的phyper函数对数据进行筛选、校正和富集分析,计算P值;然后对P值进行矫正得到Q值并基于超几何测试方法对带注释的不同基因表达情况进行了分析,筛选出不同性别小鼠海马体中的差异基因及通路。测序结束后,使用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证在雌雄小鼠海马中筛选出的差异基因并比较差异基因在不同信号通路上的表达情况。结果 通过雌雄差异比较,筛选出325个差异基因,其中上调基因233个,下调基因92个,这些差异基因功能主要富集于长时程增强(LTP)、钙离子信号通路、尼古丁成瘾等过程;雌雄差异基因相互作用网络共有362个连接点和1 703个相互作用边,筛选出的10个核心基因分别为：赖氨酸脱甲基酶5D(Kdm5d)、细胞周期蛋白依赖性激酶5(Cdkl5)、...     

共伴侣蛋白FKBP51在高脂诱导肥胖中的作用

目的 通过FKBP51基因敲除小鼠模型和细胞脂肪分化模型,探究FKBP51在高脂诱导肥胖中的机制。 方法 4周龄雄性野生型和FKBP51基因敲除小鼠以普通或高脂饲料单只单笼喂养6周,每周记录小鼠体重和饮食量,应用MM-100代谢笼系统,监测各组小鼠24 h内氧气消耗量、二氧化碳产生量、呼吸交换率和产热量的变化,对上述小鼠肝脏组织进行油红O染色,同时检测肝脏和脂肪组织代谢相关基因的表达情况。同时对取自野生型和FKBP51基因敲除小鼠的永生化成纤维细胞(MEF)进行脂肪诱导分化,观察FKBP51缺失对脂肪分化的影响。 结果 高脂饮食诱导后,两种基因型小鼠饮食量无明显变化,但与野生型小鼠相比,FKBP51基因敲除小鼠体重明显减轻,肝脏中脂滴减少。FKBP51基因敲除小鼠在基础和高脂诱导条件下,氧气消耗量、二氧化碳产生量、呼吸交换率以及产热量均高于野生型小鼠,肝脏中糖异生相关酶PEPCK、G6Pase等表达上调,脂肪中能量代谢相关基因UCP-1等表达上调。此外,FKBP51基因缺失的MEF诱导脂肪分化,细胞内脂滴明显少于野生型MEF细胞。 结论 FKBP51基因在脂肪合成和能量代谢方面起着重要作用,因此FKBP51基因缺失小鼠能够抵制高脂诱导的肥胖。     

缺氧条件下血管内皮生长因子受体2对视锥细胞的保护作用

目的 探讨缺氧条件下血管内皮生长因子受体2（vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2）对视网膜视锥细胞的作用。方法 8周龄视锥细胞特异性敲除VEGFR2（cone-specific VEGFR2 knockout）小鼠（简称KO小鼠）和野生型C57BL/6小鼠（简称WT小鼠）各6只,右眼均予以玻璃体腔内一次注射8 mmol/L氯化钴（CoCl₂）制作缺氧模型,左眼注射磷酸盐缓冲液（PBS）作为对照。次日行视网膜电图（ERG）检查光感受器功能,免疫荧光共定位法检测视锥细胞密度,并观察其形态。结果 KO和WT小鼠缺氧侧眼的暗适应ERG a波振幅和b波振幅均下降,与PBS对照侧相比差异有统计学意义（P<0.01）,但KO小鼠与WT小鼠之间相比差异无统计学意义（P>0.05）。KO小鼠和WT小鼠缺氧侧眼的明适应ERG a波振幅和b波振幅较对照侧均下降,差异有统计学意义（P<0.01）,且KO小鼠较WT小鼠下降更明显（P<0.05,P<0.01）,说明视锥细胞功能下降。形态学观察发现KO小鼠和WT小鼠缺氧侧眼的视锥细胞均出现变化,表现为密度下降,形态短小,排列疏松、紊乱,且KO小鼠的改变更为显著。结论 VEGFR2在缺氧条件下对视锥细胞具有保护作用。     

TALEN构建Fndc5基因敲除小鼠及初步分析

目的通过构建Fndc5基因敲除小鼠,为后续的研究提供动物模型。方法运用TALEN技术在Fndc5基因FNIII domain中造成缺失突变,并通过测序进行基因型鉴定。通过配对建立稳定遗传系并在mRNA和DNA水平鉴定出生小鼠基因型;对不同年龄段出生小鼠进行体重、血糖分析;通过q PCR确定Fndc5在肾脏、肝脏、大脑、肌肉、心脏等组织中的表达情况。结果成功构建并鉴定得到4种不同的Fndc5基因敲除小鼠品系;不同年龄段出生小鼠体重、血糖未见显著性差异;确定Fndc5在肌肉、心脏等组织中高表达。结论本实验在国际上成功构建了Fndc5基因敲除小鼠,并进行了初步分析,为深入研究Fndc5基因在体内中的功能提供了动物模型。     

Piwi互作RNA的筛选及其在儿童肾母细胞瘤组织中的表达

目的 探讨Piwi互作RNA（piRNA）在儿童肾母细胞瘤中的表达及临床意义。方法 对Piwi样蛋白2（Piwil2）基因重编程人成纤维细胞所形成的肿瘤样干细胞进行高通量测序,筛选出差异表达piRNA,并利用miRanda软件预测其靶基因,对靶基因进行基因本体（GO）功能分析。采用qRT-PCR检测差异表达piRNA及其靶基因在34例肾母细胞瘤患儿肿瘤组织及癌旁正常肾组织标本中的表达,并分析差异表达piRNA及其靶基因与肾母细胞瘤临床病理特征的关系。结果 通过高通量测序筛选出230个差异表达piRNA,利用miRanda软件预测出43个靶基因,经GO分析发现其参与的生物学过程主要为调节细胞钙离子浓度,分子功能主要为参与ATP酶的活动及多聚A尾RNA结合。选取5个未知的差异表达piRNA及其靶基因检测其在肾母细胞瘤肿瘤组织及癌旁正常组织中的表达情况,结果显示第13位未知上调piRNA（NU13）表达量在肿瘤组织中下调（P<0.01）,其靶基因NOP56核糖核蛋白（NOP56）表达在肿瘤组织和癌旁正常组织中差异表达无统计学意义（P=0.58）;第9位未知上调piRNA（NU9）表达量在肿瘤组织中下调（P<0.01）,其靶基因40S核糖体蛋白S8（RPS8）基因在肿瘤组织和癌旁正常组织中差异表达无统计学意义（P=0.29）;第5、7、9位未知下调piRNA（ND5、ND7、ND9）及其共同靶基因MT-RNR2样蛋白1（MTRNR2L1）基因的表达量在肿瘤组织中均下调（P均<0.01）。以上在儿童肾母细胞瘤组织中出现差异表达的piRNA及其靶基因与患儿年龄、性别、肿瘤临床分期、病理分型无明显相关性（P均>0.05）。结论 piRNA NU9、NU13、ND5、ND7、ND9及靶基因MTRNR2L1在儿童肾母细胞瘤组织中出现差异表达,有望成为鉴别肾母细胞瘤与正常肾组织的标志物。     

生长激素基因在西藏小型猪不同生长阶段和不同组织器官中的表达

目的对西藏小型猪生长激素基因在不同脏器和不同年龄阶段的表达水平进行测定。方法采用Real-time PCR的方法,以GAPDH为内参,定量分析0岁(1日龄)、0.1岁(36日龄)、0.25岁(90日龄)、0.5岁(180日龄)、1岁(360日龄)、2岁(720日龄)、3岁(1080日龄)的西藏小型猪的心、肝、脾、肺、肾、肌肉、皮肤组织中生长激素基因mRNA表达水平,并且进行比较分析。结果生长激素基因在各个年龄阶段的西藏小型猪的心、肝、脾、肺、肾、肌肉、皮肤中均有表达。在不同脏器的表达中,生长激素基因在0岁、0.5岁时皮肤中的表达量最高,肌肉组织中的表达量最低。在0.25岁、1岁时肺组织中表达量最高,在0.1岁、3岁时肝脏表达量最高;在不同年龄阶段的表达中,生长激素基因在0.1岁时表达达到峰值。结论西藏小型猪的生长激素基因的表达呈现出明显的时空特异性。     

ABCA6缺失对生酮饮食喂养的小鼠代谢的影响

目的：检测ATP转运蛋白6(ATP binding cassette transporter A6,ABCA6)基因缺失对生酮饮食喂养的小鼠代谢的影响。方法：给予小鼠生酮饮食(ketogenic diet,KD)或普通饮食(normal diet,ND)2周,通过Western blot检测肝脏ABCA6的表达水平;给予ABCA6敲除(KO)小鼠或对照(WT)小鼠KD 或ND 2周,检测小鼠的体重、血糖、血清甘油三酯(TG)、胆固醇(TCH)、游离脂肪酸(FFA)、酮体(β-HB)和转氨酶(AST、ALT)等指标,测定肝脏TG和TCH含量,并通过real-time PCR 检测代谢相关基因的表达水平。结果：生酮饮食诱导小鼠肝脏ABCA6的表达;在普通饮食条件下,ABCA6 KO小鼠与对照小鼠在体重、血糖及血清TG、TCH、FFA、β-HB等代谢相关指标、肝脂质含量和代谢相关基因表达水平等方面无明显差别;在生酮饮食条件下,和WT小鼠相比,ABCA6 KO小鼠的血糖、FFA和TCH降低,肝脏TG蓄积更显著,肝脏FAS、DGAT2、PCK1和HMGCS2 mRNA显著增加。结论：ABCA6缺失引起小鼠对生酮饮食的代谢障碍,ABCA6可能参与肝脏的脂质代谢过程。     

腺相关病毒介导的腺苷激酶过表达减轻高脂饮食诱导的小鼠葡萄糖耐量异常与肝脏脂肪变性

目的 探讨特异性上调肝细胞中腺苷激酶（ADK）表达对高脂饮食诱导的小鼠葡萄糖耐量异常与肝脏脂肪变性的影响。方法 20只雄性C57BL/6J小鼠随机分为2组,每组10只,其中1组通过尾静脉注射将携带甲状腺素结合球蛋白（TBG）启动子驱动表达ADK的腺相关病毒（AAV8-TBG-ADK）注入小鼠体内（AAV8-TBG-ADK组）,另1组注射对照腺相关病毒AAV8-TBG（AAV8-TBG组）。上述2组小鼠接受腺相关病毒注射后,再分别随机分为2个亚组,每亚组5只,分别给予8周普通饮食或高脂饮食。造模过程中检测各组小鼠体质量变化。造模结束后处死小鼠,采用蛋白质印迹法与qRT-PCR检测各组小鼠肝脏ADK表达,葡萄糖耐量试验检测小鼠葡萄糖耐量情况,H-E染色、油红O染色检测肝组织病理改变及脂滴沉积,qRT-PCR检测小鼠肝组织中糖异生相关基因[葡萄糖-6-磷酸酶（G6P）、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）]和脂肪生成相关基因[胆固醇调节元件结合蛋白1（SREBP-1）、乙酰辅酶A羧化酶1（ACC-1）、脂肪酸合成酶（FAS）、硬脂酰辅酶A脱氢酶1（SCD-1）]的mRNA水平。结果 与普通饮食饲喂小鼠相比,高脂饮食可导致小鼠体质量增加、葡萄糖代谢紊乱和肝脏脂质沉积。与注射AAV8-TBG的小鼠相比,注射AAV8-TBG-ADK特异性上调小鼠肝脏ADK的表达后,对普通饮食和高脂饮食饲喂的小鼠体质量均无明显影响,但可减轻高脂饮食导致的葡萄糖耐量异常和肝脏脂质沉积（P均<0.05）,并可抑制高脂饮食饲喂小鼠肝脏糖异生与脂肪生成相关基因的表达（P均<0.05）。结论 利用腺相关病毒特异性上调肝细胞ADK表达可改善高脂饮食导致的小鼠葡萄糖耐量异常与肝脏脂肪变性。