副溶血性弧菌脉冲场凝胶电泳分子分型研究

目的用脉冲场凝胶电泳方法绘制副溶血性弧菌食物中毒分离株的DNA指纹图谱,分析各菌株间的同源性关系。方法 55株食物中毒来源的副溶血性弧菌基因组DNA经限制性内切酶NotI酶切,用脉冲场凝胶电泳方法获得电泳图谱,利用BioNumerics软件对图谱进行聚类分析。结果实验得到55株副溶血性弧菌的DNA指纹图谱,可大致分为30种PFGE图谱。聚类分析显示,在大约90%的相似性水平上,有38株菌的PFGE图谱属于同一个克隆群,为2007-2008年引起闵行区食物中毒的优势流行菌型。结论闵行地区存在遗传谱系密切相关的副溶血性弧菌流行克隆。脉冲场凝胶电泳方法是分析副溶血性弧菌同源性的有效方法 ,有助于追溯传染源。     

龙湾区副溶血性弧菌血清分型和耐药性研究

目的:掌握龙湾区副溶血性弧菌的血清型分布及耐药水平,为防治副溶血性弧菌所致食源性疾病的发生,指导临床合理用药提供依据。方法:对检出的副溶血性弧菌采用血清凝集试验进行血清分型;采用K-B法进行药敏试验。结果:2009年-2010年分离得到的47株副溶血性弧菌中1,9株食物中毒株中完全分型18株,共分出4个血清型,以O3群、O4群为主,占47.4%和36.8%;28株食品污染物株中完全分型28株,共分出6个血清型,以O1群为主,占32.1%。对头孢曲松等10种抗生素完全敏感。结论:要重点防治由O3群、O4群及抗生素耐药的副溶血性弧菌引起的食源性疾病。     

肇庆市副溶血性弧菌血清分型和耐药性研究

目的掌握肇庆市副溶血性弧菌的血清型分布及耐药水平,为预防副溶血性弧菌食源性疾病的发生,有效地指导临床合理用药提供依据。方法血清学检测采用玻片凝集法,用K-B法测定耐药性。结果2007-2009年收集的62株副溶血性弧菌中,在46株食物中毒分离株中完全分型45株,共分出8个血清型,以O3：K6为主,占45.7%（21/46）;在8株食品污染物分离株中完全分型8株,共分出4个血清型,以O1：K48为主,占50.0%（4/8）;在8株门诊病人分离株中完全分型8株,共分出4个血清型,以O3：K6为主,占50.0%（4/8）。对头孢呋辛、头孢噻肟、头孢噻吩有极高的耐药率,均在50.00%以上;对氧哌嗪西林、羧苄西林、氨苄西林、氯霉素的耐药率分别为38.71%、33.87%、20.97%和9.68%;对头孢曲松、头孢他啶、头孢西丁、环丙沙星、阿米卡星、左氟沙星、庆大霉素、四环素、甲氧苄啶等9种抗生素完全敏感。结论重点要防治O3：K6型及耐6种抗生素的副溶血性弧菌引起的食源性疾病,氨基糖苷类和喹诺酮类作为副溶血性弧菌感染的首选药物。     

120株副溶血性弧菌的血清群和耐药性分析

目的:通过对副溶血性弧菌食物中毒菌株的血清群、耐药性检测,了解浙江省各类副溶血性弧菌主要血清群及耐药状况,为预防副溶血性弧菌食源性疾病发生,为指导临床合理用药提供依据。方法:用VITEK全自动微生物分析系统进行耐药性鉴定;血清学检测采用玻片凝集法。结果:我省副溶血性弧菌血清群主要为O3群、O4群、O1群、O5群。不同来源菌株间的血清型差异较大。从门诊病人和食物中毒事件中分离的菌株主要为O3群、O4群、O5群,从食品中分离的菌株主要为O1群、O10群、O2群、O11群。对头孢呋辛新酯、头孢呋辛、头孢噻吩和头孢唑啉有极高的耐药率,均在50%以上;对胺苄西林、羧卡西林、阿莫西林/克拉维酸的耐药性分别为49.17%、43.33%、32.50%;对头孢曲松、环丙沙星、庆大霉素、米若环素、萘啶酸、呋喃妥因、诺氟沙星、氧氟沙星、替卡西林/棒酸、妥布霉素、复方新诺明11种抗生素完全敏感。结论:要重点防治由O3群、O4群血清型的耐7种抗生素的超级耐药株引起的副溶血性弧菌食源性疾病或食物中毒。     

泰州市不同来源副溶血性弧菌分离株毒力基因型和耐药性的比较研究

分析上海市奉贤区不同来源副溶血性弧菌耐药性、主要毒力基因携带及分子分型情况。

对2018—2020年上海市奉贤区分离到的210株副溶血性弧菌进行17种抗生素药物敏感试验,耐热直接溶血毒素基因（thermostable direct hemolysin,tdh）、耐热相关溶血毒素基因（thermostable direct hemolysin⁃related hemolysin,trh）和不耐热溶血素基因（thermolabile hemolysin,tlh）检测以及脉冲场凝胶电泳分型分析。

药敏结果显示,共检出耐药株147株,耐药率为70.00%。其中,126株对1种抗生素耐药,以耐头孢唑啉（CFZ）为主;15株对2种抗生素耐药,以耐CFZ和氨苄西林（AMP）为主;多重耐药菌（MDR）6株,以耐AMP、复方新诺明（SXT）、CFZ、头孢噻肟（CTX）、头孢他啶（CAZ）和头孢吡肟（FEP）为主。食源性菌株AMP耐药水平高于人源性菌株（P<0.05）。210株副溶血性弧菌均携带毒力基因tlh。84株人源副溶血性弧菌菌株tdh和trh基因携带率分别为89.29%和7.14%;126株食品源副溶血性弧菌菌株trh基因携带率为1.59%,未检出tdh基因。脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析得到173种带型,菌株之间的相似度为48.80%~100.00%,存在主要流行克隆系。

上海市奉贤区副溶血性弧菌存在多重耐药现象,对β⁃内酰胺类抗生素耐药情况较为严重,人源性菌株毒力基因携带率较高。PFGE带型总体上较为分散,但人源菌株中存在主要流行克隆系。奉贤区引起食源性疾病的风险性较高,应加强防控。

     

食物中毒中不同血清型副溶血性弧菌基因特征分析

目的对2起食物中毒中不同血清型的副溶血性弧菌进行基因特征分析。方法第1起食物中毒发生在2010年5月17日深圳市某食堂,感染人数20人左右,采集到病人肛拭子9份,可疑食品3份,每份样本挑取20个可疑菌落;第2起食物中毒发生在2010年7月1日深圳市某配餐中心,感染人数10人左右,采集到病人肛拭子7份,可疑食品2份,涂抹样3份,每份样本挑取10个可疑菌落。对可疑菌落分别进行盐耐受试验、生化试验和血清学鉴定。从2起食物中毒的每份样本中挑取不同血清型进行tdh、trh、GS—PCR、orf8基因检测和脉冲场凝胶电泳分析（PFGE）。结果第1起食物中毒分离到副溶血性弧菌180株,其中03：K6107株,02：K2870株,04：K34、03：K25、04：K12各1株;第2起食物中毒分离到副溶血性弧菌80株,其中03：K644株,04：K8、011：K36、011：K19各10株,01：K566株。03：K6、01：K56、04：K8、011：K36携带tdh基因,不携带砒基因,其他血清型（02：K28,04：K12,03：K25,04：K34,011：K19）均不携带tdh和f砘基因。03：K6和011：K362种血清型的GS-PCR和orf8基因阳性,其他血清型阴性。PFGE结果显示第1起食物中毒中食品和病人肛拭分离的02：K28（分别3、2株）的PFGE带型基本一致,属高度相关菌株。第2起食物中毒中病人肛拭分离的4株03：K6与卤鸡蛋盘涂抹样分离的1株03：K6PFGE带型一致。2起食物中毒的03：K6带型基本一致。来自相同样本不同血清型的副溶血性弧菌的PFGE带型不一致。结论第1起食物中毒与食用污染了副溶血性弧菌的食品有关,第2起食物中毒与污染了副溶血性弧茵的卤鸡蛋盘有关。通过血清分型和分子生物学分析,可认为相同样本中分离的不同血清型副溶血性弧菌未发现遗传学证据,为遗传不相关菌株。     

2014-2015年烟台市副溶血性弧菌临床分离菌株的生物学特征及分子分型研究

目的 了解烟台市副溶血性弧菌临床分离株的耐药特性、毒力基因分布情况以及分子分型特征。方法 对2014-2015年的副溶血性弧菌临床分离菌株按照美国临床实验室标准化协会(CLSI)推荐的微量肉汤稀释法进行14种抗生素的药敏试验;通过实时荧光PCR检测tlh、trh、tdh、orf8 4种毒力基因;采用脉冲场凝胶电泳对菌株基因组DNA进行分子分型。结果 (1)20株副溶血性弧菌仅对头孢唑啉耐药或处于耐受敏感之间,耐药率为5.0%,对其他13种抗生素100.0%敏感。(2)20株副溶血性弧菌均携带特异性基因tlh,其他3种毒力基因trh、tdh、orf8的阳性率分别为30.0%(6/20)、100.0%(20/20)、65.0%(13/20),毒力基因组成以orf8-tdh型为主,占60.0%(12/20)。(3)20株菌被限制性内切酶NotⅠ切出6个PFGE types(PT),带型相似度60.7%～100.0%,根据PT相似系数大于80.0%的菌株,可以分成A群和B群2个聚类群。结论 烟台市副溶血性弧菌临床分离菌株耐药较轻,毒力基因tdh、orf8的携带率较高,PFGE带型聚类群内相似度较高且存在优势明显的分子型别。     

宁波地区副溶血弧菌分型与毒力分析

目的:了解宁波地区不同来源副溶血性弧菌的毒力及血清型、基因型,为追溯病原和防控副溶血性弧菌提供依据。方法:海产品菌株分离采用PCR+GB筛检方法,病人采用全国临床检验操作规程方法;用诊断血清进行血清学分型,用PFGE进行基因分型;用PCR检测tdh和trh毒力基因。结果:海产品流行优势血清群为O6群和O5群,病人株为O3群;海产品株PFGE分型与病人株相比较为分散;88.04%的病人株带毒力基因,海产品株带毒力基因仅有1.11%。结论:海产品株和病人株在流行优势株上存在明显差别,提示血清型分型和PFGE分型能发现菌株间的亲缘关系,可用于病原的追踪与溯源;病人株带毒率明显高于海产品株(P<0.01),认为海产品株致病性不强,建议将VP分为致病的和非致病两类,有利于鉴别和防控措施的改进。     

腹泻标本分离的副溶血性弧菌的PFGE分型与tdh毒力基因的检测

目的了解腹泻患者中副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的检出情况,探讨流行优势型,分析副溶血性弧菌的毒力基因携带,从而了解疾病发生的诱因,为控制副溶血性弧菌引起的疾病提供依据。方法选择2017年5-10月分离培养腹泻患者标本中的病原菌;质谱仪鉴定出副溶血性弧菌菌株;利用脉冲场凝胶电泳(Pulsed Field Gel Electrophoresis,PFGE)进行分子分型;聚合酶链式反应(PCR)检测菌株毒力基因。结果 108份腹泻患者的粪便标本中培养分离副溶血性弧菌42株,检出率为38.89%(42/108)。PFGE分为12个型别,优势型为A1型,占59.52%(25/42)。tdh毒力基因阳性的副溶血性弧菌38株,阳性率为90.48%(38/42)。结论腹泻患者中副溶血性弧菌检出率较高,PFGE分型方法准确性高、特异性高、重复性好、结果易判读,致病性的菌株带型集中。患者中分离得到的副溶血性弧菌大多为带毒株,具有致病能力。     

副溶血性弧菌临床分离株血清型、毒力基因和PFGE分子分型特征分析

目的分析从2007-2012年腹泻病例标本中分离的168株副溶血性弧菌血清型分布、毒力基因携带情况和PFGE分子分型特征。方法采用血清学凝集实验,检测菌株的血清型别;采用实时荧光PCR方法,检测耐热性溶血毒素基因(tdh)和耐热性溶血毒素相关溶血毒素基因(trh);采用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE),分析56株O3∶K6型副溶血性弧菌的基因分型特征。结果 (1)168株菌可分为14种血清型,主要血清型为O3∶K6(114,67.9%)、O4∶K8(25,14.9%)、O3∶K29(6,3.6%);食物中毒分离株与腹泻门诊分离株血清型构成不同,但优势血清型均为03∶K6。(2)168株菌可分为4种毒力基因类型,分别为tdh+trh-(161,95.8%)、tdh+trh+(3,1.8%)、tdh-trh+(1,0.6%)、tdh-trh-(3,1.8%);食物中毒分离株与腹泻门诊分离株毒力基因类型构成不同,但优势毒力基因类型均为tdh+trh-。(3)56株O3∶K6型副溶血性弧菌共有15种PFGE带型(P1～P15),相似度>86%,有10个带型分别有多株菌处于同一聚类(P1～P4、P6、P7、P9、P10、P12、P15)。结论副溶血性弧菌临床分离株以tdh+trh-的O3∶K6为主;O3∶K6型副溶血性弧菌临床分离株的PFGE条带型相似性度高,菌株间亲缘关系较近。     

宁波沿海地区贝类产品副溶血性弧菌污染现况分析

目的:了解宁波鄞州区贝类产品中副溶血性弧菌的污染情况,为预防控制副溶血性弧菌引起的食物中毒提供依据。方法:从鄞州区不同农贸市场采集毛蚶、蚶子、牡蛎、蛏子和花蛤5种贝类产品作为检测对象,参照GB/T4789.7-2003方法,用标准血清进行分型,用纸片扩散法进行药敏试验,用PCR测定耐热直接血溶素(thermostabile direct hemoly-sin,tdh)和耐热直接相关血溶素(TDH-related hemolysin,trh)毒力基因。结果:检出阳性标本21份,检出率为50.0%(21/42)。分离到的21株副溶血性弧菌属于7个血清群,分别为O:1群占9.5%(2/21)、O:2群占19.0%(4/21)、O:3群占19.0%(4/21)、O:4群占28.6%(6/21)、O:7群占4.8%(1/21)、O:10群占4.8%(1/21)、O:11群占14.3%(3/21)。药敏试验显示,21株副溶血性弧菌对复方新诺明和氯霉素敏感,对青霉素类、氨基糖苷类、磺胺类、喹诺酮类、头孢类药物都有不同程度的耐药。21株副溶血性弧菌的tdh毒力基因2例阳性,trh毒力基因均为阴性。结论:本次贝类产品分离的副溶...     

副溶血性弧菌160株血清群型分布和耐药性分析

[目的]了解上海市浦东新区副溶血性弧菌群型分布及耐药情况。[方法]采用血清玻片凝集试验对160株副溶血性弧菌进行血清分型;采用改良K-B法进行耐药性测定。[结果]59株食物中毒分离株完全分型56株,分型率为94.92%,共分出7种血清型,O3∶K6(77.97%)居首位。101株水产品分离株完全分型32株,分型率为31.68%,共分出22种血清型,无优势血清型。药敏试验显示,副溶血性弧菌对氨苄西林高度耐药,对阿莫西林/克拉维酸、头孢吡肟、头孢噻肟、头孢他啶、氯霉素100.00%敏感。[结论]O3∶K6型是引起本区副溶血性弧菌食物中毒的主要血清型;水产品分离株血清型呈多样性,与食物中毒分离株不一致。本地区副溶血性弧菌没有产生广泛的耐药性变异。     

132株副溶血性弧菌毒力基因及耐药性分析

目的了解2014年-2017年桐乡市副溶血性弧菌分离株毒力基因携带与耐药性情况,为临床更为有效用药提供数据上的支持。方法利用RT-PCR技术对其分离株进行毒力(tlh、tdh、trh)检测;采用纸片扩散法操作,测定其对22种抗生素的耐药性。结果在132株副溶血性弧菌中,毒力基因tlh、tdh和trh阳性携带率分别为100.00%(132/132)、57.58%(76/132)和0.00%(0/132);对氨苄西林、头孢唑啉、哌拉西林、复方新诺明的耐药率分别为31.5%、23.5%、12.5%、12.5%,对除碳青霉烯类和喹诺酮类外的6大类抗生素均有耐药性,而其中对β-内酰胺类抗生素和叶酸代谢途径抑制剂及氯霉素的耐药性相对较高。多重耐药方面,对2种以上抗生素耐药的有15株,占11.90%。结论126株副溶血性弧菌分离株主要携带毒力基因为tlh、tdh。除氨苄西林等9类抗生素外,其余13类在副溶血性弧菌感染的治疗中可作为首选。     

大肠埃希菌的耐药特点与产超广谱β-内酰胺酶基因型分布

目的 探讨大肠埃希菌的耐药特点和产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因型分布.方法 对2009年1月-2010年12月临床分离的231株大肠埃希菌进行耐药性统计和ESBLs基因分析.结果 尿液、痰液为最主要标本来源,占43.29％、22.08％;大肠埃希菌对氨苄西林(耐药率85.28％)等多数β-内酰胺类、环丙沙星(75.76％)等氟喹诺酮类、庆大霉素(52.38％)等氨基糖苷类耐药率较高,对美罗培南(4.33％)等碳青霉烯类、头孢哌酮/他唑巴坦(6.93％)等含他唑巴坦β-内酰胺类抗菌药物耐药率低;CTX-M型、TEM型、SHV型耐药基因均可见,CTX-M型多见,可见复合基因.结论 大肠埃希菌耐药率高,应根据药敏及耐药基因合理使用抗菌药物.     

青岛市售贝类副溶血性弧菌污染状况及耐药性分析

目的:对青岛市售贝类中副溶血性弧菌进行污染状况调查,并对分离菌株进行毒力基因检测和耐药性分析,为贝类产品的食用安全及食源性疾病的防控提供依据。方法:根据GB/T 4789.7-2008标准对贝类中副溶血性弧菌进行分离鉴定,PCR法检测毒力基因,K-B法进行药敏试验。结果:143份样品中82份检出副溶血性弧菌,检出率达57.3%,不同品种和不同季节检出率差异显著。从阳性样品中分离到98株副溶血性弧菌,所有菌株均不含毒力基因tdh和trh,大部分菌株对氨苄西林和阿莫西林耐药,耐药率分别为92.9%和71.4%,所有菌株对头孢曲松、头孢吡肟、庆大霉素、卡那霉素、诺氟沙星、环丙沙星、萘啶酸、吡哌酸、氯霉素和呋喃妥因100%敏感。结论:青岛市售贝类副溶血性弧菌污染较严重,存在一定程度的耐药情况,应加强对水产品副溶血性弧菌的监控和抗生素的使用管理。     

2004～2006年深圳南山区副溶血性弧菌菌群菌型分布及耐药分析

目的：研究深圳南山区引起食物中毒的副溶血性弧菌的菌群菌型分布及耐药性。方法：细菌分离方法按GB/T4789-2003的常规方法进行,用K-B法测定细菌对10种抗生素的耐药性。结果：在248株副溶血性弧菌中,O3菌群135株,占54.4%;O1菌群42株,占16.9%;不定群有41株,占16.5%。血清型别中,K6型125株,占50.4%;K25型35株,占14.1%;耐药性试验,复方新诺明、氯霉素、庆大霉素3种抗生素100%敏感,对氨卞西林、头孢噻吩、头孢西丁耐药性占83.9%以上。结论：2004～2006年深圳南山区副溶血性弧菌以O3群K6型为主,占50.4%;复方新诺明、氯霉素、庆大霉素是首选的抗生素。