2011年苏州地区诺如病毒GⅡ组变异株的分子特征研究

目的 了解苏州地区诺如病毒的感染状况及其变异株的分子特征.方法 收集苏州市儿童医院疑似病毒性腹泻粪便标本419例,采用荧光定量PCR方法检测粪便中诺如病毒RNA及其基因组别,并对部分阳性标本测序分析.结果 419份粪便标本中,GⅡ组诺如病毒为122例,阳性率为29％,未检测出GⅠ组诺如病毒,对本地区部分诺如病毒阳性标本进行测序,A区(RdRp区)测序的25份GⅡ标本中25株均为GⅡ.4型;C区(N-S区)测序的26份GⅡ标本中17株为GⅡ.4型,8株为GⅡ.3型,1株为GⅡ.2型;D区(P区)测序的25份GⅡ标本中16株为GⅡ.4型,9株为GⅡ.3型.结论 诺如病毒是本地区婴幼儿病毒性腹泻的重要病原体,以诺如病毒GⅡ.4-2006b亚型为主,此外发现有GⅡ.4-2010亚型(GⅡ.4 New Orleans株)的流行,这是国内首次对该亚型毒株进行报道,同时还检测到部分重组毒株,提示诺如病毒在本地区的遗传变异日趋复杂.     

创新型诺如病毒GⅠ/GⅡ抗原荧光纳米颗粒快速联检试纸条检测效能测评

目的 评估诺如病毒GⅠ和GⅡ抗原荧光纳米颗粒快速联检试纸条的灵敏度和特异性.方法 以培养的轮状病毒等其他肠道病原体和245例具有胃肠道感染症状患者的粪便为检测标本,分别用诺如病毒GⅠ和GⅡ抗原荧光纳米颗粒快速联检试纸条和诺如病毒GⅠ和GⅡ抗原二合一彩色微球法检测试纸条检测.结果 诺如病毒GⅠ和GⅡ抗原荧光纳米颗粒快速联检试纸条的灵敏度显著高于诺如病毒GⅠ和GⅡ抗原二合一彩色微球法检测试纸条;对常见的轮状病毒(Wa株)、肠道腺病毒(40型)、肠道病毒柯萨奇病毒(A16)、埃可病毒(30型)和肠道病毒(EV71)无交差反应.结论 诺如病毒GⅠ和GⅡ抗原的荧光纳米颗粒快速联检试纸条灵敏度显著高于彩色微球法快速检测试纸条,特异性良好.     

含人FcγRⅡB基因慢病毒的制备及其在HT-1080细胞中的表达

目的构建FcγRⅡB慢病毒诱导表达载体,并鉴定其在细胞中的表达。方法以人mRNA为模板逆转录获得FcγRⅡB基因片段,并将其克隆入慢病毒表达质粒TRE,构建TRE-FcγRⅡB慢病毒表达重组质粒。将慢病毒表达重组质粒TRE-FcγRⅡB、慢病毒可诱导质粒Tet分别与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,分别包装表达病毒和可诱导病毒,分别测定表达病毒和可诱导病毒感染滴度。表达病毒和可诱导病毒共感染HT-1080细胞,经梯度浓度强力霉素(Dox)诱导,实时定量PCR检测FcγRⅡB mRNA表达,免疫荧光染色检测HT-1080细胞FcγRⅡB表达,Western blot法检测FcγRⅡB蛋白表达。结果重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定,测序结果显示插入片段碱基序列与GenBank提供FcγRⅡB基因序列同源性100%。表达病毒滴度达106TU/mL,可诱导病毒滴度达105TU/mL,感染性良好。HT-1080细胞被病毒感染后经Dox诱导表达FcγRⅡB,免疫荧光染色结果显示FcγRⅡB能够在HT-1080细胞中表达;实时荧光定量PCR和Western blot法结果显示FcγRⅡB表达水平与诱导剂浓度正相关。结论成功制备了FcγRⅡB慢病毒,感染HT-1080细胞后可实现FcγRⅡB的诱导表达。     

贵阳地区GⅡ.4型诺如病毒变异株的初步研究

目的 了解贵阳地区GⅡ.4型诺如病毒变异株的组成及其点突变.方法 监测2010年6-11月于贵阳地区哨点医院就诊的急性胃肠炎病例,收集粪便标本,采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real-time RT-PCR)初步鉴定,随机选取部分GⅡ型诺如病毒阳性标本,采用一步法RT-PCR对其VP1基因区克隆及测序,基因序列与国内外流行的GⅡ.4型诺如病毒进行系统进化及氨基酸位点的突变分析.结果 检测标本426份,有267份(62.68％)GⅡ型诺如病毒阳性,测序获得了9份GⅡ.4型诺如病毒VP1基因组序列,贵州省2010年流行的GⅡ.4型诺如病毒包括2个变异株(GⅡ.42008a和GⅡ.4 2008b新型变异株),亚型组闻的VP1基因的同源性为95.90％ ～ 96.72％,亚型组内同源性为99.45％ ～ 100％,有2个氨基酸位点易发生突变.结论 贵阳地区2010年夏秋季急性胃肠炎以诺如病毒GⅡ型为主,并且变异株具有多样性.     

中药抗病毒胶囊对Ⅱ型单纯疱疹病毒作用的电镜观察

目的　探讨抗病毒胶囊治疗生殖器疱疹的作用机理。方法　运用透射电镜采用负染方法 ,观察药物与单纯疱疹病毒Ⅱ型 (HSV Ⅱ )相互作用后病毒颗粒形态改变情况。结果　病毒颗粒变形 ,大小不均匀 ,包膜裸露或破损以及病毒颗粒凝集融合成块 ,结构模糊不清。结论　抗病毒胶囊在体外对HSV Ⅱ病毒颗粒的形态结构、表面成分和分散均有显著破坏作用。     

PRA、AT-Ⅱ和Ald在病毒性肝炎、肝硬化患者中的表达

目的:探讨肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)在肝脏疾病病程进展中的水平变化.方法:应用放射免疫分析对31例病毒性肝炎患者及35例肝硬化患者血浆肾素活性(PRA)、血管紧张素Ⅱ(AT-Ⅱ)及醛固酮(Ald)含量进行检测,并与38例健康成年人比较.结果:病毒性肝炎患者的PRA、AT-Ⅱ高于健康对照组(P＜0.01),Ald水平稍高于健康对照组,但差异无统计学意义(P＞0.05).而肝硬化患者PRA、AT-Ⅱ及Ald三者的水平明显高于健康对照组及病毒性肝炎组,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论:随着病毒性肝炎、肝硬化病人病情的进展RAAS被激活,而RAAS参与了肝纤维化的病理过程.     

河北省卢龙地区2008-2009年5岁以下腹泻住院儿童中诺如病毒的检测和分型

目的 了解河北省卢龙地区2008 -2009年5岁以下住院儿童中诺如病毒的分子流行病学特征.方法 收集2008年10月至2009年8月325例5岁以下腹泻住院患儿粪便标本和流行病学资料,采用酶联免疫吸附试验( ELISA)检测轮状病毒抗原,利用多重RT-PCR方法检测诺如病毒,并对部分诺如病毒阳性株进行序列测定和系统进化分析.结果 诺如病毒的检出率为11.3％ (37/325),仅次于轮状病毒的检出率(48.6％),高于腺病毒(6.5％)和星状病毒(4.3％),主要感染2岁以下儿童,季节高峰在11月,系统进化分析表明诺如病毒流行优势株为GⅡ-4/2006b变异株,并发现一株未见报道的新型GⅡ-4变异株.结论 诺如病毒是引起2008 -2009年卢龙地区的急性胃肠炎的重要病原之一,GⅡ-4/2006b变异株仍是流行优势株,要进一步监测新型GⅡ-4变异株的流行.     

2008-2009年北京地区GⅡ.12型诺如病毒基因特征研究

目的 了解2008-2009年北京地区成人腹泻样本中诺如病毒(Norovirus,NoV)GⅡ.12型毒株的基因特征.方法 用三对引物对11株GⅡ.12型诺如病毒毒株RdRp,、ORF2、ORF3及ORF1/OFF2重叠区分别扩增,PCR产物纯化、克隆、测序,通过DNAStar、MEGA、SimPlot等生物软件进行比对、系统进化分析及重组分析.结果 根据系统进化分析,11株在RdRp区属于GⅡ.g,在ORF2和ORF3区均属于GⅡ.12.SimPlot分析进一步证实了11株均为GⅡ.g/GⅡ.12重组株.结论 北京地区流行的GⅡ.12型诺如病毒与世界其他地区流行的GⅡ.12型诺如病毒毒株均属同一毒株,确定了北京地区GⅡ.12型诺如病毒毒株的基因特征.     

南京地区婴幼儿杯状病毒感染的分子流行病学研究

目的 了解南京地区婴幼儿杯状病毒腹泻的感染状况、临床表现以及分子流行病学特征.方法 采集2010年7月至2011年6月南京医科大学附属南京儿童医院5岁以下腹泻患儿粪便标本及儿童保健中心健康婴幼儿粪便标本各428份.采用反转录-聚合酶链反应( RT-PCR)检测杯状病毒,测序确定其基因型别.结果 428份腹泻样本中有63份为杯状病毒阳性,检出率为14.72％.其中诺如病毒GⅡ型58例,未检出诺如病毒GⅠ型,札如病毒5例,以诺如病毒GⅡ-4 2006b型为主要流行株.428份健康对照组标本杯状病毒检出19例,诺如病毒6例,札如病毒11例,2例为诺如病毒GⅡ型和札如病毒混合感染.结论 南京地区婴幼儿中存在不同基因型杯状病毒感染,流行毒株以GⅡ.2006b为主.     

广东省暴发性胃肠炎中诺如病毒的分子流行病学特点分析

目的研究广东省暴发性胃肠炎中诺如病毒的分子流行病学特点。方法对2003年至2004年的13起急性胃肠炎患者的粪便和肛拭子标本,采用针对诺如病毒的特异引物和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术进行检测,再经核苷酸序列测定分析病毒的基因型,同时收集患者相关流行病学资料。结果13起暴发性胃肠炎中有8起是由诺如病毒引起的,时间主要集中在每年的10月至12月,基因分析显示这些病毒都属基因Ⅱ组,但分属3个亚型,6株病毒属GⅡ-4型。结论诺如病毒是广东省暴发性非细菌性胃肠炎的重要病原体之一,具有分布广、流行时间集中在秋冬季的特点。引起暴发的病毒主要为基因Ⅱ组,在现阶段存在优势毒株。     

北京市肠道门诊腹泻患者人杯状病毒感染调查

目的 调查北京地区肠道门诊就诊腹泻患者人杯状病毒的感染情况.方法 收集北京市2011年4月至2012年3月丰台、昌平、怀柔3个区县的肠道门诊就诊腹泻患者450例,采集患者粪便标本,使用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)对粪便标本进行人杯状病毒RNA检测,对RT-PCR阳性标本的PCR产物进行克隆测序.结果 450例患者标本中68例人杯状病毒阳性(68/450,15.11％).选择其中18例PCR产物进行克隆测序,将获得的序列进行比对分析、构建系统发生树,结果表明,15株为诺如病毒,3株为扎如病毒.其中诺如病毒GⅡ/4型11株(11/18,61.11％),GⅡ/7型1株(1/18,5.56％),GⅡ组未定型3株(3/18,16.67％).结论 人杯状病毒是北京地区肠道门诊就诊腹泻患者的重要病原,主要流行株为诺如病毒GⅡ/4型.     

010HIV/HTLV基因的命名

人类逆转录病毒(人类T-细胞白血病病毒HTLV-Ⅰ和HTLV-Ⅱ,以及引起人类免疫缺陷病毒HIV-1和HIV-2)基因组的复杂性正在被迅速阐明,这个过程还会持续发展和扩大。这些病毒基因组除了含有大量协调病毒表达的正负调节基     

乌鲁木齐地区孕妇人细小病毒B19与TORCH感染的比较

目的了解我区孕早期妇女TORCH及人细小病毒B19的感染情况.方法用ELISA法检测185例孕早期妇女血清中特异性 TORCH/HPVB19-IgM抗体.结果感染率分别为弓形体(TOX)2.16%,风疹病毒(RV)1.62%,巨细胞病毒(CMV)1.62%,单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)1.08%,人细小病毒B19(HPVB19)8.11%,其HPVB19-IgM抗体阳性率与TORCH各项相比,差异有显著的统计学意义(P＜0.01).结论我区孕妇中人细小病毒B19新近感染率明显高于其它TORCH各项病原体的新近感染率,有必要把HPVB19列入TORCH监测项目中,以提高妊娠质量.     

AIDS患者血清中HTLV-Ⅲ的被膜和核心结构基因产物的特征

人类T细胞白血病(嗜淋巴性)病毒Ⅲ型(HTLV-Ⅲ)是一种和人类白血病病毒Ⅰ型和Ⅱ型(HTLV-Ⅰ,HTLV-Ⅱ)性质近似的人类逆转录病毒;这种致细胞病变的病毒的维士那(Visna)的病毒密切相关,它是在Lentivirine亚系中的一个致病性逆转录病毒.在获得性免疫缺陷综合征(AIDS)、AIDS相关综合征(ARC)和有关高危人群中应用酶联免疫吸收分析或电子转移试验,结果发现上述疾病人群中体内有HTLV-Ⅲ抗体存在,推测HTLV-Ⅲ可能是上述疾病的致病因子.虽然HTLV-Ⅲ抗体的存在表示以往受过病毒感染,但是对病     

小儿急性病毒性肝炎粪便SIgA的测定

近年来,对病毒性肝炎的体液和细胞免疫研究已有不少报道。而有关其肠道局部免疫研究甚少。本文应用单向琼脂扩散法,对23例急性病毒性肝炎(简称急肝)患儿测定其粪便中分泌型免疫球蛋白A(简称SIgA),以了解急肝时肠道局部免疫情况,现将结果扼要报告如下。     

中药抗病毒胶囊对Ⅱ型单纯疱疹病毒作用的电镜 …

目的 探讨抗病毒胶囊治疗生殖器疱疹的作用机理。方法 动用透射电镜采用负染方法,观察药物与单纯郊疹病毒Ⅱ型（ＨＳＶ－Ⅱ）相互作用后病毒颗粒形态改变开矿情况。结果 病毒颗粒变形,大小不均匀,包膜裸露或破损以及病毒颗粒凝集融合成协,结构模糊不清。结论 抗病毒胶囊在体外以ＨＳＶ－Ⅱ病毒颗粒的形态结构、表面成分和分散均有显著破坏作用。     

人乳头瘤病毒、沙眼衣原体和单纯疱疹病毒Ⅱ型感染与宫颈疾病的相关性研究

目的 探讨人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)、沙眼衣原体(chlamydia trachomatis,CT)和单纯疱疹病毒Ⅱ型(herpes simplex virusⅡ,HSV-Ⅱ)感染与宫颈疾病的关系.方法 采用核酸分子快速杂交基因分型技术对598例宫颈脱落细胞进行HPV感染基因型分型测定,同时应用实时荧光定量PCR法(FQ-PCR)检测CT和HSV-Ⅱ两种病原体的感染情况.结果 HPV、CT和HSV-Ⅱ的阳性检出率分别为24.9％、9.2％和8.9％,且随着宫颈病变程度加重而逐渐增高,宫颈炎组和宫颈癌病变组三种病原体的感染率差异均有统计学意义.HPV感染以高危型为主(占77.9％),低危型为22.1％.HPV高危型和阴性组比较两种病毒的感染率有统计学差异(CT:x2=26.97,P＜0.05;HSV-Ⅱ∶x2=65.93,P＜0.05).各宫颈病变组均有多病毒混合感染情况出现,其中宫颈癌组混合感染率为22.2％.结论 HPV、CT和HSV-Ⅱ感染与宫颈癌的发生密切相关,多病原体混合感染会促进宫颈癌的发生.     

重组趋化因子vMIP-II在大肠杆菌中的表达和纯化

目的　重组病毒巨噬细胞炎性蛋白Ⅱ (viralmacrophageinflammatoryproteinⅡ ,vMIPⅡ )在大肠杆菌中表达及纯化。方法　以pET32a( )vMIPⅡ为重组趋化因子vMIPⅡ克隆基因的表达质粒 ,以大肠杆菌BL2 1(DE3)pLysS为表达菌 ,在IPTG诱导下表达出一个由 2 30个氨基酸残基组成的硫氧还蛋白 (thioredoxin)vMIPⅡ的融合蛋白 (2 6×10 3 )。经细菌裂解、金属离子螯合亲和层析、肠激酶消化以游离vMIPⅡ及阳离子交换层析等步骤纯化目的蛋白 ,以配体结合实验鉴定纯化产物的生物学活性。结果　从 1L发酵菌液中可获得高纯度目的蛋白约 4～ 6mg。配体结合实验表明 ,该产物能与CCR5结合 [Kd =(10 .90± 1.0 7)nmol/L]。结论　采用本方法可获得高表达、高纯度的具有生物学活性的重组病毒趋化因子vMIPⅡ。     

抗脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原单克隆抗体的研制

目的应用杂交瘤技术制备抗脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原的单克隆抗体。方法用脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原免疫雌性Balbc小鼠,取其致敏脾脏淋巴细胞与SP20小鼠骨髓瘤细胞融合。间接ELISA法筛选阳性克隆,制备腹水。检测McAb效价、抗体亚类和杂交瘤细胞核型。结果获得4株阳性杂瘤细胞株,选择一株制备腹水,ELISA效价为1∶2.4×106,中和试验效价1∶1.3×104,蛋白浓度为27.2mgmL。McAb与Ⅱ型Sabin株C抗原(ⅡC)、Ⅰ型Sabin株及Ⅲ型Phizer株D抗原(ⅠD、ⅢD)不发生交叉反应,具有高度特异性。结论成功的制备了针对脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原的McAb,为进一步研究IPV效力检测奠定了基础。     

预防肾移植患者并发巨细胞病毒性疾病—口服Acycloviv与安慰剂的对照研究

1964年,人们就认识到巨细胞病毒(CMV)是肾移植患者的主要致病原。本文作者通过口服acyclovir(简称A)与安慰剂(简称D)来研究预防肾移植患者并发cmv 性疾病中A 的作用。