兔角膜缘上皮细胞羊膜种植及生物学特性研究

研究兔角膜缘上皮细胞(含干细胞)在完整羊膜和去上皮羊膜上种植及生物学特征,探讨组织工程技术体外重建角膜上皮良好的方式和方法.将兔角膜缘上皮细胞分别种植于去上皮羊膜基底膜和完整羊膜上进行体外培养扩增.从倒置显微镜下的生长特性、光镜下的组织结构、超微结构、免疫组织化学检测等方面对培养获得的复合组织进行观察.结果表明兔角膜缘上皮细胞在完整羊膜上不易贴壁、生长缓慢、很难汇合成片.而在去上皮羊膜上细胞能黏附生长并增殖形成由羊膜基底膜和4～5层上皮细胞组成的复合组织,基底层细胞与羊膜之间有半桥粒连接,细胞之间可见桥粒连接,细胞表达角蛋白3.该复合物可作为组织工程化角膜上皮组织.     

羊膜预防硬膜外粘连的初步研究

目的：观察羊膜预防椎板切除术后硬膜外粘连的作用，寻求预防硬膜外粘连的有效材料和方法。方法：制备椎板切除模型兔60只，依术前随机分组，分别在硬膜外覆盖羊膜（AM组）、几丁糖膜（CHS组）、空白对照组不做任何覆盖（CON组）。于术后2、4、8、12周每组分别处死5只动物，对标本做大体解剖及组织学观察。结果：CON组暴露的硬膜发生广泛粘连，硬膜外腔几乎消失；AM组和CHS组硬膜外瘢痕稀少，硬膜表面光滑，硬膜外形成潜在腔隙，维持了硬膜外的有效空间：不同时间段三组间粘连度评分以AM组最低，CHS组次之，CON组最高，组间比较有显著性差异（P〈0．05）。结论：羊膜能预防硬膜外瘢痕向椎管内延伸，防止硬膜外粘连，是一种能有效预防硬膜外粘连的生物相容性材料；几丁糖膜亦显示了一定的预防硬膜外粘连作用。     

不同表面电荷微球改性聚乳酸表面的制备及其细胞相容性研究

采用不同的表面活性剂制备得到不同表面电荷性质的聚乳酸微球。并利用表面截留原理,将不同表面电荷性质的微球结合到聚乳酸基材表面,制备获得了不同表面电荷性质的微球改性聚乳酸表面。激光共聚焦显微镜、扫描电镜对改性表面的稳定性、表面形貌的测试结果显示,该方法成功地获得了稳定的、具有不同表面电荷性质的微球改性聚乳酸表面;软骨细胞相容性测试结果表明正电荷表面性质的微球改性聚乳酸表面较其他表面电荷性质的微球改性聚乳酸表面具有更好的细胞相容性,更能促进细胞的黏附、增殖等生长过程。     

γ射线低温辐照对胶原膜体外稳定性和细胞相容性的影响

低温下,胶原膜经γ射线辐照改性,采用剂量率为22 KG y/h,辐照剂量分别为15、25、35 KG y。测定辐照前后胶原膜抗胶原酶酶解能力,对胶原膜的体外稳定性进行了初步评价,结合红外光谱分析对辐照改性机理进行了探讨。结果表明,在实验所设计的条件下,辐照改性后胶原膜的交联度及稳定性均增加。采用M TT法结合扫描电镜观察,对辐照后胶原膜的细胞相容性进行了研究,表明在一定的辐照剂量范围内(<25 KG y),辐照对胶原膜的细胞相容性没有明显的影响。当超过一定剂量后,辐照改性将在一定程度上影响胶原膜的细胞相容性。     

羊膜基质在组织修复中的应用研究进展

羊膜（Amniotic membrane)由羊膜上皮，基底膜及基质3部分组成，羊膜是一种易得的生物材料，也易于加工，处理，保存和运输，并且在贮存相当长的时间（一年）后其适用性仍然不会受到损害，它在实验室和临床中已得到了广泛的应用，异源性羊膜移植后一般不发生排斥反应，是一种可被降解吸收的生物材料，本文旨在对羊膜作为生物敷料与其它生物敷料的比较，羊膜的组织结构，生物特性，在促进组织修复中的应用及生物学基础进行综述。     

生物羊膜冷冻干燥工艺优化研究

为探索羊膜冷冻干燥保存的最佳工艺条件,取健康剖宫产产妇胎盘,钝性剥离羊膜。以保存羊膜组织形态变化、胶原蛋白酶降解速度、生物力学特征、细胞因子含量为考察指标,对羊膜冷冻干燥工艺中的关键因素进行优化。结果显示,改良冷冻干燥羊膜上皮细胞、纤维基质层形态结构与新鲜羊膜基本相同,但纤维基质厚度略有增加,上皮细胞表面微绒毛略有减少;Ⅳ型胶原酶在溶液中降解速度有所加快;生物力学特征与新鲜羊膜无明显差别;6种细胞因子含量明显低于新鲜羊膜。结合前期工作,与常规冷冻干燥法比较,改良冷冻干燥工艺对保存羊膜组织结构和生物学活性因子影响较小,并能使保存羊膜具有更好的生物力学特性。     

Human Amniotic Fluid Stem Cell-derived Muscle Progenitor Cell Therapy for Stress Urinary Incontinence

The most promising treatment for stress urinary incontinence can be a cell therapy. We suggest human amniotic fluid stem cells (hAFSCs) as an alternative cell source. We established the optimum in vitro protocol for the differentiation from hAFSCs into muscle progenitors. These progenitors were transplanted into the injured urethral sphincter and their therapeutic effect was analyzed. For the development of an efficient differentiation system in vitro, we examined a commercial medium, co-culture and conditioned medium (CM) systems. After being treated with CM, hAFSCs were effectively developed into a muscle lineage. The progenitors were integrated into the host urethral sphincter and the host cell differentiation was stimulated in vivo. Urodynamic analysis showed significant increase of leak point pressure and closing pressure. Immunohistochemistry revealed the regeneration of circular muscle mass with normal appearance. Molecular analysis observed the expression of a larger number of target markers. In the immunogenicity analysis, the progenitor group had a scant CD8 lymphocyte. In tumorigenicity, the progenitors showed no teratoma formation. These results suggest that hAFSCs can effectively be differentiated into muscle progenitors in CM and that the hAFSC-derived muscle progenitors are an accessible cell source for the regeneration of injured urethral sphincter.     

Cytocompatibility of Highly Dispersed Nano Hydroxyapatite Sol

Nano hydroxyapatite (HA) crystals were prepared and dispersed in water to form HA sol by simple methods. The cytotoxicity of the sols were tested by MTT assay and lymphocytotoxicity test. Results show that the average secondary particle size of the sol containing uncalcined HA crystals is around 750 nm, within micrograde; while the sol of calcined HA contains over 88% nanoparticles with the size between 65～86 nm, in which nano HA crystals are highly dispersed. Both the HA sols have no toxicity on the proliferation of 3T3 cells and lymphocytes. It demonstrates that the nano sol is safe for the application of drug delivery.     

归巢因子基质细胞衍生因子1/CXCR4在角膜上的分布

背景：基质细胞衍生因子1/CXCR4在介导骨髓移植等组织器官的干细胞归巢中起着重要的作用。对于角膜干细胞移植的归巢和目前角膜上基质细胞衍生因子1/CXCR4的具体分布及含量较为少见。 目的：荧光定量PCR检测大鼠角膜组织中基质细胞衍生因子1/CXCR4基因mRNA的表达水平。 方法：取完整正常大鼠角膜组织,细分为角膜中央区,角膜旁中央及角膜缘区,用荧光定量PCR法(染料法)检测相应部位基质细胞衍生因子1/CXCR4基因mRNA的表达水平。 结果与结论：角膜中央区基质细胞衍生因子1及CXCR4基因mRNA的表达水平分别为0.213±0.015,0.189± 0.02;角膜旁中央区基质细胞衍生因子1及CXCR4基因mRNA的表达水平分别为0.529±0.077,0.285± 0.015;角膜缘区基质细胞衍生因子1及CXCR4基因mRNA的表达水平分别为0.666±0.069,0.258±0.067。结果表明,在大鼠角膜组织中,角膜中央区,周边区及边缘区相应基质细胞衍生因子1及CXCR4的基因mRNA的表达水平均存在着显著性的差异,这种差异性对于角膜缘干细胞缺乏症干细胞移植治疗中细胞的归巢及移行起着重要的作用。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

医用聚乙烯醇及其智能改性物的细胞相容相性比较研究

医用聚乙烯醇（ＰＶＡ）是具有良好生物相容性的水凝胶类生物材料。在其表面辐射接枝Ｎ异丙基丙烯酰胺（ＮＩＰＡＡｍ ）,进行改性,赋予其智能特性。在制成此类复合智能水凝胶生物材料试样的基础上,着重比较了智能化改性前后的两种材料,即ＰＶＡ 和ＰＶＡｇＮＩＰＡＡｍ 的细胞相对增殖度值和对细胞形态学的影响,从细胞相容性的角度肯定了对ＰＶＡ 进行智能化改性,以形成新型生物材料的可行性,并为其应用研究提供了初步的生物相容性依据。     

非穿透性小梁切除术联合羊膜植入治疗开角型青光眼

目的：评价非穿透性小梁切除术（non-penetrating trabecular surgery，NPIS）联合羊膜植入治疗开角型青光眼的临床疗效。方法：将23例（30只眼）具备手术适应证的开角型青光眼分为两组。Ⅰ组14例20眼，行NPIS联合羊膜植入术；Ⅱ组9例10眼，行NPIS手术联合透明质酸生物胶植入术。术后对两组患者的视力、眼压、滤过泡及并发症进行对比观察。结果：术后1个月时，Ⅰ组与Ⅱ组的视力变化比较，无显著差异（P〉0．05）；术后6、12、24月时，两组眼压值无显著差异（P〉0．05）。Ⅰ组术后早期有少量前房积血2只眼，轻度房水闪光5只眼；Ⅱ组术后早期1只眼有轻度房水闪光。结论：NPIS联合羊膜植入术与NPIS联合透明质酸生物胶植入术分别用于治疗开角型青光眼，其术后降眼压效果均较好（P〉0．05）。但前者的成本明显低于后者，可降低患者的经济负担。     

胶联羊膜的制备及生物力学研究

目的 探索胶联羊膜的制备工艺,检测其生物力学特性,探讨其作为眼表移植材料的可行性和优越性.方法 将羊膜和纤维蛋白胶粘合制备成胶联羊膜,使用光镜和扫描电镜进行形态学观察,随机选取制备好的12片胶联羊膜在电子万能试验机上进行单向拉伸性能测试,以单层羊膜和双层羊膜作对照,得出抗拉强度、断裂伸长率、弹性模量等.结果 胶联羊膜厚度较单层羊膜明显增加,胶联羊膜组织切片示羊膜与胶粘合紧密,层间无间隙.胶联羊膜组的抗拉强度为(0.727 4±0.142)MPa,断裂伸长率为(24.130±4.523)%,弹性模量为(1.283±0.482)MPa.胶联羊膜的抗拉强度较单层羊膜和双层羊膜明显增加(P＜0.01),断裂伸长率最高(P＜0.01),弹性模量小于单层羊膜和双层羊膜(P＜0.01).结论 胶联羊膜复合材料具有良好的生物力学特性,其柔韧性和可塑性优于单层羊膜和双层羊膜,作为眼表移植材料有更大的优越性.     

张应力作用下体外细胞培养膜上应力分布的三维有限元分析

在自行研制细胞张应力施加装置的基础上，建立细胞张应力施加装置中生物膜三维有限元模型，模拟施加不同大小的静水压力，采用有限元应力分析的方法计算生物膜（硅胶膜）上的张应力及位移分布及其规律，为相关的细胞力学实验提供理论依据。     

Cytocompatibility of poly(acrylonitrile-co-N-vinyl-2-pyrrolidone) membranes with human endothelial cells and macrophages

Polyacrylonitrile modified with N-vinyl-2-pyrrolidone (NVP) shows good hemocompatibility. This work, which aims to evaluate the cytocompatibility of membranes fabricated from poly(acrylonitrile-co-N-vinyl-2-pyrrolidone) (PANCNVP), studied the adhesion of macrophages and endothelial cell (EC) cultures. It was found that PANCNVP membranes with higher NVP content decreased the adhesion of both macrophages and ECs. Compared with polyacrylonitrile and tissue culture polystyrene control, however, these PANCNVP membranes promoted the proliferation of ECs. Furthermore, the viability of ECs cultured on the PANCNVP membrane surfaces was also relatively competitive. Both static and dynamic water contact angle measurements were conducted to explain the nature of cell adhesion to the PANCNVP membranes. On the basis of these results and the phenomena of water swelling and water states reported previously, it was presumed that the coexistence of large amounts of bound water and free water induced by NVP moieties are responsible for the lower adhesion and better function of cells adhering to the PANCNVP membranes.     

Cytocompatibility study of NHLBI primary reference materials using human endothelial cells

Four different materials, low density polyethylene (LDPE), polydimethylsiloxane (PDMS), polyvinylcholoride (PVC) and cellulose, were selected by the Devices and Technology Branch of the National Heart Lung and Blood Institute (NHLBI) as primary reference materials for blood contacting. Among the wide variety of tests proposed to assess hemocompatibility of short-term blood contacting catheters, it was desirable to rule out whether these materials could release toxics for vascular cells of the physiological environment. Thus, the cytocompatibility of these materials have been checked towards human umbilical vein endothelial cells: the method used avoids direct contact between cells and materials but evaluates the effect of possible toxic substances leached from materials. These substances were obtained under defined conditions according to a standard. The results show that the extracts of cellulose and LDPE provoke an important cytotoxic effect on the endothelial cell cultures, while the extracts of PDMS and PVC allow the obtention of endothelial cell lining of the reference surface, with a correct global metabolic activity and the intracellular presence of von Willebrand factor.     

改良羊水细胞培养方法在产前诊断中的应用研究

目的研究改良羊水细胞培养法在产前诊断中的应用。方法采用改良多种处理方式的经典羊水细胞培养法和原位培养法对280例孕16-32周的孕妇进行羊水产前诊断。结果成功率99.7%,培养收获时间5-7天,最短收获5天,最长7天。有效的细胞染色体核型>60个/例,发现异常核型15例,染色体异常检出率5.4%。结论两种改良羊水细胞培养技术,培养成功率高,细胞培养时间短,可供分析染色体核型多,培养适用范围宽,可满足临床产前诊断的需要。     

纯镁超声微弧氧化-硅烷-黄芪甲苷复合处理层的 细胞相容性

目的 为了调节纯镁的降解性与提高生物活性,对其表层采取超声微弧氧化（UMAO）、硅烷化、载黄芪甲苷复合处理方法,分析各种处理方法对成骨细胞生物相容性的影响大小。方法 以纯镁微弧氧化UMAO为对照组（A组）,纯镁微弧氧化UMAO-硅烷（B组）,纯镁微弧氧化UMAO-硅烷-100 μg/ml黄芪甲苷（C组）为实验组,通过Cell Counting Kit（CCK-8）试剂盒、扫描电镜、激光共聚焦显微镜等方式检测不同处理膜层细胞相容性。结果 CCK-8粘附与增殖实验测定的吸光率C组超过B组,B组超过A组,膜层表层细胞粘附及增殖随着时间的推移呈现出不断增加的趋势,其中纯镁微弧氧化UMAO-硅烷-100 μg/ml黄芪甲苷复合膜层具有最优的成骨细胞活性,并具有统计学意义（P＞0.05）。结论 纯镁微弧氧化UMAO-硅烷-100 μg/ml黄芪甲苷复合处理后膜层的细胞相容性最好,纯镁微弧氧化UMAO-硅烷处理次之,纯镁UMAO组最低。     

新型可降解聚合物聚乙二醇对苯二甲酸酯/聚对苯二甲酸丁二醇酯的细胞相容性研究

目的：研究新型可降解聚合物聚乙二醇对苯二甲酸酯／聚对苯二甲酸丁二醇酯(PEGT／PBT)的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)相容性，对其在组织工程血管中的应用进行探讨。方法：对PEGT／PBT进行细胞毒性评价。观察并检测HUVEC在PEGB／PBT、Ⅰ型胶原改性(Col-)的PEGT／PBT、纤维连接蛋白改性(Fn-)的PEGT／PBT上的粘附和增殖，对细胞在粘附过程中的粘着斑蛋白进行免疫荧光染色观察。结果：PEGT／PBT细胞毒性不大于1级，能支持脐静脉内皮细胞的粘附和增殖。纤维连接蛋白和Ⅰ型胶原处理可促进HLIVEC在PEGT／PBT膜上的增殖，而且纤维连接蛋白可增加HUVEC在PEGT／PBT上20min、2h的粘附率，并促进细胞形成局部粘附结构。结论：新型可降解聚合物PEGT／PBT具有良好的血管细胞相容性，对其在组织工程血管中的应用值得进一步开发研究。     

羊膜带综合征伴多发畸形一例并文献复习

目的探讨羊膜综合征的诊断及临床特征。方法对1例羊膜带综合征病例进行分析，结合文献讨论该综合征的临床表现、临床特点。结果本例主要表现颅骨缺损，重度唇腭面裂，脊柱侧弯，腹壁缺损但无内脏彭出，肢体截断等畸形。结论羊膜带综合征的特点为多发畸形，每例均有不尽相同的临床表现。     

酪氨酸和米非司酮对大鼠颗粒细胞膜流动性及线粒体膜电位的影响

应用小剂量孕马血清促性腺激素ＰＭＳＣ处理未成年雌性大鼠建立的卵泡闭锁模型,应用荧光分光光度计和流式细胞仪测定了大鼠颗粒细胞膜流动性、丙二醛（ＭＤＡ）含量和线粒体膜电位：在此基础上,进一步观察酪氨酸（Ｔｙｒ）、米非司酮对它们的影响。结果表明：与发育中的卵泡相比,卵泡闭锁时,颗粒细胞膜流动性明显降低（Ｐ＜０．００２）、膜ＭＤＡ水平明显升高（Ｐ＜０．００１）,线粒体膜电位明显下降（Ｐ＜０．００１）。与实验组相比,酪氨酸使膜流动性升高,ＭＤＡ水平下降,线粒体腹电位升高,但都无统计学意义（Ｐ＞０．０５）;而米非司酮使膜流动性明显下降（Ｐ＜０．０１）,ＭＤＡ水平明显升高（Ｐ＜０．０５）,线粒体膜电位进一步下降（Ｐ＜０．０１）。研究结果表明,颗粒细胞膜ＭＤＡ水平是影响膜流动性的一个重要因素,膜脂质过氧化及线粒体膜电位下降在卵泡闭锁中也起着重要的作用。