在黑色素瘤组织中免疫细胞的形态学观察

目的　探讨肿瘤浸润树突状细胞 (tumorinfiltratingdendriticcell,TIDC)和肿瘤浸润淋巴细胞(tumorinfiltratinglymphocyte ,TIL)的形态学特征。 方法　采用光镜、透射电镜和免疫组织化学方法观察 9例人皮肤黑色素瘤中TIDC和TIL的分布及形态。结果　TIDC主要分布在乳头层和癌周区及癌巢内 ,病变早期TIDC浸润比晚期明显 (P <0 0 1)。电镜下 ,TIDC体积大 ,形态不规则 ,表面有许多树枝状突起 ,核不规则 ,有切迹。胞浆内有丰富的线粒体、核糖体、内质网。TIDC具有两种形态 ,一种表现为突起多 ,细胞器丰富 ,另一种表现为突起较少 ,细胞器也较少。TIDC与肿瘤细胞、TIDC与TIL、TIL与肿瘤细胞之间存在多种接触形式。同时可见TIL与TIL ,TIDC与TIDC之间也有密切接触。还可见树突状细胞 淋巴细胞环 ,淋巴细胞环绕癌细胞。结论　TIDC和TIL存在于黑色素瘤组织 ,TIDC有两种类型。     

皮肤肿瘤组织中类高内皮微静脉的形态学研究

目的：探讨人黑色素瘤组织中类高内皮微静脉与肿瘤浸润淋巴细胞（tumor infiltrating lymphocyte，TIL）的形态特征。方法：采用光镜和透射电镜观察了lO例手术切除的人皮肤黑色素瘤组织中的类高内皮微静脉和TIL的分布和超微结构。结果：类高内皮微静脉主要分布于乳头层和癌周围。病变早期其内皮高大，胞浆突起增多，核大，细胞器丰富，有大量淋巴细胞穿越管壁；病变晚期，内皮细胞核不规则，出现大量齿状切迹，细胞质内出现大量微丝和质膜小泡，线粒体多出现肿胀、扩张，基膜不连续，少见淋巴细胞穿越。TIL多存在于癌周围区，活化淋巴细胞较多。随着病程的进展，淋巴细胞数世减少：结论：1．皮肤黑色素瘤组织中部分血管可演变为类高内皮微静脉，是淋巴细胞向癌组织浸润（淋巴细胞定向归巢）的重要场所：2．肿瘤组织中的淋巴细胞归巢与抗肿瘤密切相关。     

人胃癌肿瘤浸润树突状细胞的形态学观察

目的　探讨人胃癌肿瘤浸润树突状细胞 (TIDC)的形态学特征。方法　应用免疫组织化学、光镜和电镜的方法观察人胃癌TIDC的分布和形态学变化。结果　TIDC主要分布癌周区 ,病变早期TIDC比病变晚期数量 (P <0 0 1)。电镜下 ,TIDC体积较大 ,形态不规则 ,表面有许多树突状突起 ,细胞核不规则 ,可见核仁 ,胞质内有丰富的线粒体、核糖体、高尔基复合体和内质网。TIDC与肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)和肿瘤接触方式和形式上呈多样性 ,一对一 ,一对多 ,或形成簇的接触方式 ,有紧密膜接触、指状膜接触和球状膜接触形式。结论　本实验提示TIDC数量多少与肿瘤的进展有关 ,TIDC与肿瘤浸润淋巴细胞和肿瘤细胞之间关系密切。     

人直肠癌肿瘤浸润树突状细胞的形态学观察

目的　探讨人直肠癌肿瘤浸润树突状细胞 ((TIDC)的形态学特征。　方法　通过免疫组织化学、光镜和电镜的方法观察人直肠癌TIDC的分布和形态学变化。　结果　TIDC主要分布在癌周区 ,病变早期TIDC比病变晚期数量多 (P <0 0 1)。电镜下 ,TIDC形态不规则 ,细胞表面有许多树枝状突起。TIDC与肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)和肿瘤细胞之间接触密切。有一对一、一对多或TIL环绕TIDC形成簇。TIDC与TIL接触之间有糖原颗粒簇。　结论　TIDC数量多少与肿瘤的进展相关 ,TIDC与TIL及肿瘤细胞之间关系密切。     

透明质酸对树突状细胞肿瘤抗原提呈效应的调节

目的观察透明质酸负载的树突状细胞(DC)肿瘤抗原提呈的生物学行为的变化,探索透明质酸对DC肿瘤抗原提呈效应的调节。方法构建B16黑素瘤鼠模型,随机分成3组,即生理盐水组,DC悬液组和由透明质酸介导的DC组。小鼠股骨骨髓干细胞用GM-CSF和IL-4诱导形成DC,实验组用透明质酸孵育24 h。随后将单纯生理盐水、未处理的DC和用透明质酸孵育的DC(HA-DC)悬液(注射前1 d均加入BrdU,并调整细胞密度为1×106/mL),注射到小鼠移植瘤周围皮下。利用阳性胶体铁染色法,检测蛋白多糖在不同处理组中的表达;利用免疫组织化学法,观察HA-DC和DC在肿瘤组织中的分布及对肿瘤细胞的杀伤作用。结果 HA-DC组比DC治疗作用更明显(瘤体缩小)。BrdU标记的HA-DC细胞主要分布于癌巢边缘区,局部淋巴结的被膜下窦和副皮质区,HA-DC组蛋白多糖的表达明显高于对照组和DC组(P0.05)。结论骨髓干细胞来源的DC细胞负载透明质酸后大量增殖,抗原呈递能力增强,调节淋巴细胞的增殖活化,激发CTL免疫应答。     

诱导实体瘤细胞生成具有树突状细胞样的抗原提呈细胞

目的　探讨体外用细胞因子诱导实体瘤细胞生成具有树突状细胞样的抗原提呈功能。方法　以人肝母细胞瘤为研究模型 ,用人胰岛素样生长因子 (IGF 1)、人重组粒细胞单核细胞集落刺激因子 (GM CSF)、人重组白细胞介素 4 (IL 4 )及肿瘤坏死因子α(TNF α)诱导培养瘤细胞 2周 ,用流式细胞仪及MTT法检测诱导前后瘤细胞表型及抗原提呈功能。结果　用细胞因子处理瘤细胞后 ,树突状细胞样的特异性标志CD1a和CD83表达阳性率显著上调 ;MHCⅡ、B7 1、B7 2、ICAM 1和CD4 0表达水平显著增加。同时 ,瘤细胞能显著刺激同种异体淋巴细胞增殖 ,促进IL 12的产生 ,明显提高细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)对瘤细胞的杀伤活性。结论　初步实验结果提示 ,体外用IGF 1、GM CSF、IL 4及TNF α等细胞因子能诱导肝母细胞瘤细胞生成具有树突状细胞样特征的抗原提呈细胞。     

人肿瘤浸润性树突状细胞的表型分析及原因探讨

目的：树突状细胞作为抗原提呈细胞在机体的抗肿瘤免疫反应中起重要作用,对肿瘤浸润性树突状细胞的研究有助于揭示肿瘤免疫逃兔机制,方法：采用酶消化,细胞分离,流式细胞仪分析等方法研究了１４例胃肠道肿瘤患者肿瘤浸润性树突状细胞的表型,并用ＲＴ－ＰＣＲ检测了ＩＬ－１０,ＶＥＧＦ和ＴＧＦ－β１,３种免疫抑制因子在１４例肿瘤细胞中的表达,结果：肿瘤浸润性单核细胞中有ＣＤ１ａ的树突状细胞存在,该类细胞的表面分子如     

人黑色素瘤抗原-3冲击的树突状细胞诱导抗肿瘤免疫应答

目的:观察经MAGE-3蛋白抗原冲击的树突状细胞在体外诱导抗肿瘤免疫应答的能力。方法:用粒-巨噬细胞集落刺激因子和白介素-4从人外周血分化、诱导树突状细胞,经MAGE-3蛋白冲击后,与T淋巴细胞共培养7d,收集T淋巴细胞进行免疫应答及肿瘤细胞杀伤试验。结果:与MAGE-3冲击后的树突状细胞共培养的T淋巴细胞在体外能有效地杀伤MAGE-3阳性的靶细胞。结论:经MAGE-3蛋白抗原冲击的树突状细胞,在体外能有效提呈抗原,激活抗原特异性CTL,诱导特异性抗肿瘤免疫应答。     

树突状细胞在胆囊癌组织内浸润的研究

目的通过对胆囊癌组织中树突状细胞浸润情况的研究,阐述树突状细胞与肿瘤免疫之间的关系。方法采用免疫组化SP法。结果树突状细胞在胆囊癌组织的浸润程度与年龄、性别和病理组织学类型无关,与病理分化程度呈负相关关系(P<005)。结论树突状细胞在胆囊癌组织的浸润程度与病理分化程度、Nevin分期、肝浸润及淋巴结转移存在密切的关系。树突状细胞的定量检测可作为估计胆囊癌预后的标志。     

早、晚期胃癌肿瘤浸润免疫细胞的形态学研究

目的　探讨人早、晚期胃癌肿瘤浸润免疫细胞的形态学特征。方法　通过免疫组织化学、光镜和电镜的方法观察人早、晚期胃癌肿瘤浸润免疫细胞的分布和形态学变化。结果　肿瘤浸润树突状细胞 (TIDC)主要分布在癌周区 ,病变早期TIDC比病变晚期数量多 (P <0 .0 1)。肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)主要分布在癌交界区和癌周组织 ,病变早期TIL比病变晚期数量多 (P <0 .0 1)。电镜下 ,TIDC体积较大 ,形态不规则 ,表面有许多树枝状突起 ,细胞核不规则 ,可见核仁 ,胞质内有丰富的线粒体、核糖体、高尔基复合体和内质网。TIDC与TIL和肿瘤细胞接触方式和形式上呈多样性。一对一 ,一对多 ,或形成簇的接触方式。有紧密膜接触、指状膜接触和球状膜接触形式。结论　本实验提示TIDC和TIL数量多少与肿瘤的进展有关 ,TIDC与TIL和肿瘤细胞之间关系密切     

Identification of Pancreatic Cancer-Associated Tumor Antigen from HSP-Enriched Tumor Lysate-Pulsed Human Dendritic Cells

Purpose

Vaccine strategies utilizing dendritic cells (DCs) to elicit anti-tumor immunity are the subject of intense research. Although we have shown that DCs pulsed with heat-treated tumor lysate (HTL) induced more potent anti-tumor immunity than DCs pulsed with conventional tumor lysate (TL), the underlying molecular mechanism is unclear. In order to explore the molecular basis of this approach and to identify potential antigenic peptides from pancreatic cancer, we analyzed and compared the major histocompatibility complex (MHC) ligands derived from TL- and HTL-pulsed dendritic cells by mass spectrophotometry.

Materials and Methods

Human monocyte-derived dendritic cells were pulsed with TL or HTL prior to maturation induction. To delineate differences of MHC-bound peptide repertoire eluted from DCs pulsed with TL or HTL, nanoflow liquid chromatography-electrospray ionization-tandem mass spectrometry (nLC-ESI-MS-MS) was employed.

Results

HTL, but not TL, significantly induced DC function, assessed by phenotypic maturation, allostimulation capacity and IFN-γ secretion by stimulated allogeneic T cells. DCs pulsed with TL or HTL displayed pancreas or pancreatic cancer-related peptides in context of MHC class I and II molecules. Some of the identified peptides had not been previously reported as expressed in pancreatic cancer or cancer of other tissue types.

Conclusion

Our partial lists of MHC-associated peptides revealed the differences between peptide profiles eluted from HTL-and TL-loaded DCs, implying that induced heat shock proteins in HTL chaperone tumor-derived peptides enhanced their delivery to DCs and promoted cross-presentation by DC. These findings may aid in identifying novel tumor antigens or biomarkers and in designing future vaccination strategies.     

不同取材部位的TIL得率及活力研究

为了获得更多，活力更强的ＴＩＬ细胞本实验就实体瘤肝癌，肺癌及卵巢癌取材部位进行闻取自肝癌，肺癌组织的浸润结节，交界组织，实质部位，中心及坏死区域的得率与活力，结果发现，坏死部位的细胞得率与活力最差，淋巴细胞得率也最差，肝癌，肺癌组织分别为４．０５×１０＾４／ｇ、５．５×１０＾４／ｇ；中心部位较差，分别为３．６×１０＾５／ｇ、４．１９×１０＾５／ｇ；实质部位的细胞得率最高，淋巴细胞得率，最多，肝癌，     

人外周血树状突细胞在体外对LAK杀伤活性的影响

本文采用三因素不同水平的析因设计，研究了人外周血树状突细胞在体外对ＬＡＫ抗肿瘤作用的影响。结果显示，３种浓度的树状突细胞均能增强ＬＡＫ的杀伤活性（Ｐ＜０．００１），以中等浓度的树状突细胞作用最为明显。加入ＩＬ－２后，树状突细胞对ＬＡＫ抗肿瘤活性的增强程度进一步提高。     

激活的脐血树突状细胞对肿瘤细胞的直接杀伤作用

探索脐血树突状细胞 (DC)在γ干扰素 (IFN γ )及细菌脂多糖 (LPS )激活前后对肿瘤细胞杀伤活性的差异。分离健康脐血单核细胞 ,用重组粒单细胞集落刺激因子 (GM CSF )、白介素 4 (IL 4 )和α肿瘤坏死因子α (TNF α )诱导为DC。于诱导第11天在合成培养基中加入LPS或IFN γ继续培养 12h ,将其激活。用流式细胞仪检测DC表面共刺激分子的改变 ,以明确LPS或IFN γ对DC的不同刺激作用 ;同时 ,以恶性血液病细胞株Jurkat及Daudi为靶细胞 ,以不同效靶比 (E∶T )与DC共同培养 18h ,采用51Cr释放试验检测DC激活前后抗肿瘤活性的差异。结果 (1)LPS及IFN γ可不同程度地上调DC表面CD86、CD80、CD83及CD1a的表达 ,尤以LPS刺激组明显 ;(2 )DC在未加刺激因子前能有效杀伤Jurkat细胞 ,在效靶比为 2 0∶1时 ,LPS或IFN γ可使其杀伤活性进一步提高至 5 0 0 %、 36 9% ,均与未加刺激因子前有显著差异 (P <0 0 0 1,P <0 0 2 5 ) ;(3)在效靶比为 2 0∶1时 ,LPS可使DC对Daudi的杀伤率提高至 19 8% (P <0 0 2 5 ) ,而未加刺激因子组及IFN γ刺激组DC对Daudi在任何效靶比均未显示明显的杀伤作用。LPS或IFN γ激活的脐血DC对Jurkat及Daudi细胞具有选择性杀伤作用     

Antigen Presenting Cells in Human Decidual Tissue: III. Role of Accessory Cells in the Activation of Suppressor Cells

ABSTRACT: Human decidual antigen presenting cells (DAPCs) exposed to fetal cells in vitro induce generation of suppressor T cells among a population of peripheral blood lymphocytes. Human lymphocyte antigen (HLA)-class II positive antigen presenting cells were isolated from early normal human decidual tissue and from peripheral blood (PAPCs) by adhering Ficoll-Pa-que separated cell suspensions to fibronectin. In contrast to PAPCs, DAPCs pulsed with fetal antigens induced a radio-sensitive, Leu 1,2-positive T suppressor cell population. A nylon wool adherent B cell population is required during the in vitro induction of the suppressor cells. These suppressor cells impair primary mitogen and mixed lymphocyte culture (MLC) responses, generation of anti-trinitrophe-nyl (TNP) cytotoxic T lymphocytes, and antibody response of autologous and allogeneic lymphocytes. Only intact viable embryonic cells can effectively confer upon DAPCs the ability to induce T suppressor cells. The T suppressor cell induction by DAPCs primed with fetal antigens is restricted by the major histocompatibility complex. Our results show that the HLA-DR molecules are the most prominent restriction elements.     

脐血来源的树突状细胞增强CIK细胞的杀伤作用

为确认体外诱导出的成熟脐血来源树突状细胞 (CBDC )可以引发强大抗肿瘤免疫反应 ,CBDC培养 12d后用电镜分析形态 ,用流式细胞仪检测其表型。在不同培养时间 ,用3 H TdR掺入法检测CBDC和细胞因子诱导杀伤细胞 (CIK )的扩增功能 ;用MTT法检测被CBDC激活的CIK抗肿瘤活性。结果表明 ,体外诱导出形态典型的DC ,高表达主要组织相容性抗原I、II类分子、CD5 4 ,也表达CD80、CD83、CD1a,不表达CD6 8。体外培养 12d成熟的CBDC ,能使CIK以最高的比率扩增 ,2种细胞最佳混合比为 1∶10时被激活的CIK杀伤BEL 74 0 2肝癌细胞的功能最强 ,最佳效靶比为 80∶1