中药有效成分保护脑缺血再灌注损伤的研究进展

<正>脑缺血再灌注损伤(CIRI)的机制主要是兴奋性氨基酸神经毒性、神经元超微结构的变化、氧化应激、炎症反应、钙离子超载等〔1,2〕。中药有效成分可从多个方面发挥保护脑缺血再灌注损伤的作用,其作用机制值得进一步研究。1抑制兴奋性氨基酸引起的神经毒作用兴奋性氨基酸(EAA)主要包括谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)和甘氨酸(Gly)。脑缺血再灌注损伤主要与Glu的大量     

脑海马脑片灌流液中谷氨酸与氨基丁酸含量测定

兴奋性神经递质谷氨酸(Glu)与抑制性神经递质γ-氨基丁酸(GABA)广泛分布于脑海马,但因其含量很低(pmol级),一般检测方法灵敏度不够.笔者用邻苯二甲醇、β-巯基乙醇柱衍生,反相梯度洗脱荧光检测法(HPLC/FD)测定Glu、GABA的递质含量,现介绍如下.     

兴奋性氨基酸与缺血性脑损害

导致脑缺血性损害的因子甚多。近年来研究表明,兴奋性氨基酸(EAAs)如谷氨酸(Glu)和门冬氨酸(ASP)等在其发生机制中可能起重要作用,已引起国内外学者的关注。本文就脑的兴奋性氨基酸及受体的分布在脑损害中的作用机制作一简述。 一、兴奋性氨基酸及其受体 具有神经递质的氨基酸根据其对触突后神经元兴奋或抑制作用,可分为兴奋性和抑制性两大类。前者主要以Glu和ASP为代表,后者主要是γ-氨基丁酸和甘氨酸等。EAAs的Glu是中枢神经系统中含量最多的氨基酸,以大脑皮层、尾状核、小     

石菖蒲挥发油对脑缺血-再灌注脑中氨基酸的影响

目的 通过研究石菖蒲挥发油对大鼠脑缺血—再灌注脑中谷氨酸(Glu)、天门冬氨酸(Asp)及γ—氨基丁酸(GABA)的影响，探讨其对脑缺血—再灌注的保护作用机制。方法 将SD大鼠随机分为石菖蒲挥发油高、低剂量组及醒脑静阳性对照组、模型组和假手术组。灌胃给药7d，建立两侧颈总动脉短时间闭塞模型，采用高效液相法测定大鼠脑中Glu、Asp、GABA的含量变化。结果 各药物组Glu、Asp、GABA的含量降低，与模型组比较P＜0．05。结论 石菖蒲挥发油可以有效抑制脑缺血—再灌注后G1u、Asp、GABA含量的异常升高，从而减轻上述物质在脑缺血—再灌注时对神经元的损害，进而起到脑保护的作用。     

活血开窍法对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织兴奋性氨基酸的影响

目的观察活血开窍法对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织兴奋性氨基酸(EAA)的影响。方法以大鼠局灶性脑缺血再灌注模型为研究对象,于缺血2h再灌注48h,取脑组织应用高效液相色谱法测定谷氨酸(Glu)、天门冬氨酸(Asp)的含量。结果缺血2h再灌注48h后,模型组、药物组与正常组大鼠比较,脑组织G1u及Asp含量升高(P0.01);与模型组大鼠比较,醒脑通脉大、小剂量组脑组织中Glu、Asp含量显著降低(P0.01)。结论活血开窍法抗缺血性脑损伤的作用机制可能与其对抗脑缺血再灌注后EAA的升高有关。     

脑梗死患者脑脊液兴奋性氨基酸含量的测定及其意义

目的探讨脑梗死患者脑脊液中兴奋性氨基酸含量测定的意义。方法采用高效液相色谱法检测46例脑梗死患者和30例正常对照者脑脊液中兴奋性氨基酸递质谷氨酸（Glu）、天门冬氨酸（ASP）水平及抑制性神经递质γ-氨基丁酸（GABA）含量。结果脑梗死发生12h～4天脑脊液中谷氨酸、天门冬氨酸显著性升高，恢复期降至正常水平；γ-氨基丁酸在脑梗死急性期也升高，恢复期下降。结论谷氨酸、天门冬氨酸在神经元缺血损伤中起重要作用。急性脑梗死患者脑脊液兴奋性和抑制性氨基酸递质可作为一个敏感指标，早期诊断脑缺血的发生，推测脑梗死的严重程度，具有重要的临床意义。     

调心方对氧化损伤型类AD大鼠脑组织兴奋性氨基酸毒性的影响

目的 探讨调心方对氧化损伤型类AD大鼠兴奋性氨基酸递质——谷氨酸(Glu)含量及其受体(NMDAR)之NRla、NR2a mRNA水平的影响。方法 采用二羟延胡索酸(DHF)加FeCl3-ADP左侧脑室注射法，造成氧化损伤型类AD大鼠模型，HPLC荧光法测定鼠脑氨基酸类神经递质含量，RT-PCR法检测鼠脑NRla、NR2a mRNA水平变化，以及调心方对上述各项指标的作用。结果 与对照组比较，AD模型鼠脑组织中的Glu含量及NRla、NR2a mRNA水平显著增高，调心方对此有明显的下调作用。结论 调心方能够通过下调AD鼠脑中G1u含量及其受体之NRla及NR2a mRNA水平，解除兴奋性氨基酸毒性，以达到防治AD的目的。     

加味脑泰方通过SIRT1途径减轻脑缺血再灌注损伤

目的 研究加味脑泰方通过沉默信息调节蛋白1(SIRTl)途径减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的作用及机制.方法 雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、加味脑泰方(JWF)组、JWF+EX527组,采用线栓法建立脑缺血再灌注损伤模型,JWF组给予加味脑泰方灌胃干预14天,JWF+EX527组给予加味脑泰方灌胃及SIRT1拮抗剂EX...     

局灶脑缺血再灌注脑温对抑制性氮基酸的影响

目的 研究轻度、亚低温对局灶脑缺血抑制性氨基酸的影响。方法 建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,诱导目标脑温,用HPLC荧光法检测脑组织GABA含量。结果 轻度高温组GABA短暂增高后下降,亚低温组GABA持续增高。结论 轻度高温使脑内GABA水平下调,在加重缺血神经元损伤方面起着不容忽视的作用：亚低温使GABA水平持续上调,在保护缺血神经元方面起重要作用。     

GABA与脑缺血再灌流后海马迟发性神经元损害

GABA 是海马主要抑制性神经递质。实验性脑缺血再灌流后海马 GABA 发生急剧升高,又显著降低于正常的双相改变;再灌流后海马 CA1区持续兴奋性增高、返回抑制减弱,齿状回和 CA3区却是兴奋性减低、返回抑制增强;若事先给一定剂量 GABA 能模拟剂能完全或部分保护 CA1区不受缺血损害;因而推测 GABA 改变、海马内原性抑制降低致兴奋—抑制失衡,可能是脑缺血再灌流后海马迟发性神经元损害的因素之一。     

脑缺血再灌注细胞外液兴奋性氨基酸与一氧化氮的变化及丹参的影响

目的　观察脑缺血再灌注细胞外液兴奋性氨基酸 (EAAs)与一氧化氮 (NO)的变化及丹参的影响。方法　采用沙土鼠全脑缺血再灌注模型 ,应用微透析技术及高压液相色谱测量方法 ,观察纹状体区细胞外液中EAAs及NO代谢产物变化。结果　在对照组 ,脑缺血 30min后 ,细胞外液中EAAs水平明显增加 ,随着再灌注时间延长EAAs水平逐渐接近正常 ,同时细胞外液中NO代谢产物也明显升高。L 精氨酸 (L Arg)组 ,EAAs及NO代谢产物水平均高于对照组 (P <0 .0 1) ;丹参组 ,EAAs及NO代谢产物水平均低于对照组 (P <0 .0 1) ,在丹参加L Arg组 ,EAAs及NO代谢产物水平与对照组差异无显著性意义。结论　脑缺血后 ,纹状体区细胞外液EAAs及NO代谢产物水平均明显增加 ,丹参不仅可降低EAAs及NO代谢产物水平 ,而且可逆转L Arg的损害作用     

促心肌素1-C端肽干预大鼠心肌缺血再灌注损伤的效果

目的观察不同的促心肌素1-C端肽（cardiotrophin-1 C-terminal peptides，CTIC）对大鼠心肌缺血再灌注损伤后组织损伤程度的影响。方法用结扎，松解大鼠冠状动脉左后降支制作模型。正常组5鼠；缺血与再灌注组6鼠，缺血30min后开始再灌注；缺血与再灌注后干预组8鼠，缺血30min后开始再灌注。并腹腔注射CTIC-100μg／kg；缺血与再灌注前干预组8鼠，腹腔注射CTIC 100μg／kg，7d后进行缺血与再灌注。实验结束前取血检测血浆一氧化氮、血清肌酸激酶和丙二醛。结果缺血与再灌注后，大鼠血一氧化氮降低（q=8．758，P〈0．01），血肌酸激酶（q=14．391，P〈0．01）和丙二醛浓度升高（q=11．015，P〈0．01）；缺血与再灌注后干预，大鼠血浆一氧化氮升高（q=14．197，P〈0．01），清肌酸激酶（q=10．649，P〈0．01）和丙二醛降低（q=6．167，P〈0．01），但仍高于正常组（P〈0．01）；缺血与再灌注前干预，大鼠血浆一氧化氮浓度高于正常组（q=9．595，P〈0．01），但低于后干预组（q=6．147，P〈0．01），血清肌酸激酶（q=6．147，P〈0．01）和丙二醛（q=10．551，P〈0．01）则高于缺血与再灌注组。结论CTIC再灌注早期短期作用能减轻心肌组织损伤及氧化损伤的程度；但使用较长时间后．大鼠对缺血与再灌注的耐受力降低，组织损伤及氧化损伤的程度明显加重。     

Development of brain damage after neonatal hypoxia-ischemia: Excitatory amino acids and cysteine

The aim of this study was to investigate the possible role of excitatory amino acids (EAAs) and cysteine in the development of brain damage after hypoxia-ischemia (HI) in neonates. In a rat model of neonatal HI, changes in extracellular (ec) amino acids in cerebral cortex were measured with microdialysis and correlated with the extent of brain damage at the site of probe placement. Extracellular concentrations of glutamate, aspartate and cysteine increased during HI and remained elevated during reperfusion. During HI the pattern of EAA changes was the same in the infarcted, undamaged and border zone regions. During reperfusion, however, the ec concentrations of glutamate, aspartate and cysteine were higher in infarcted and border zone areas compared to undamaged tissue. HI also produced a slight increase of tissue concentration of cysteine and decrease of tissue concentration of glutamate in parietal cortex of the HI hemisphere. The effect of cysteine on brain damage induced by HI and glutamate was also investigated. A subtoxic dose of cysteine potentiated glutamate toxicity in the arcuate nucleus and enhanced brain infarction after HI in neonatal rats. The results show that in neonatal HI the extracellular levels of EAAs during HI are not directly related to brain injury but the EAA levels during reflow predict the extent of infarction. Cysteine increases HI-induced brain injury and potentiates glutamate toxicity in neonatal rats. Speculatively, elevated level of cysteine during reperfusion may participate in the excitotoxic cascade leading to brain injury.     

缺血预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤神经细胞的保护作用

目的探讨大鼠局灶性脑缺血预处理对脑缺血再灌注损伤后神经元的保护作用。方法健康雄性SD大鼠60只,随机分为3组:假手术组、大脑中动脉缺血再灌注(MCAO)组、预处理(BIP)组,每组按照再灌注后12 h、1、2、3 d四个时间点平均分为4个亚组,制备缺血预处理模型,分别用流式细胞术和ELISA法观察脑缺血预处理对缺血再灌注大鼠缺血半暗带神经细胞凋亡率及血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)含量的影响。结果大鼠脑缺血再灌注后12 h,MCAO组细胞凋亡发生率及血清中NSE的含量较假手术组显著增加(P<0.01),1 d时达到高峰,以后时间点逐渐下降,但仍高于假手术组(P<0.01);BIP组各个时间点神经元凋亡发生率及血清NSE较MCAO组显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论大鼠局灶性脑缺血预处理对脑缺血再灌注神经元损伤有保护作用。     

谷氨酰胺心肌缺血再灌注损伤治疗中的效果与机制分析

目的：探讨谷氨酰胺心肌缺血再灌注损伤治疗中的效果与机制。方法：研究时间为2015年2月到2015年10月,选择清洁级SPF大鼠48只完全随机分为包括假手术组、缺血再灌注组和谷氨酰胺组,每组16只,建立心肌缺血再灌注损伤后,谷氨酰胺组给予腹腔注射谷氨酰胺治疗,观察三组心功能与炎症因子的表达变化情况。结果：缺血再灌注组和谷氨酰胺组都顺利建立心肌缺血再灌注损伤模型,表现为抬高的ST段逐步恢复,MAP逐步恢复,左心室颜色转红。同时心功能无明显变化,提示谷氨酰胺对心脏的无明显毒性。三组心率HR在缺血前无明显差异,但缺血再灌注组再灌注后有下降趋势,而再灌注30min后谷氨酰胺组HR较缺血再灌注组升高(P<0.05)。假手术组给药前后MAP无明显变化,缺血再灌注组与谷氨酰胺组在给药后出现轻度下降,不过对比差异无统计学意义(P>0.05)。谷氨酰胺组再灌30min的TNF-α与IL-6含量均明显低于缺血再灌注组(P<0.05),而与假手术组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论：谷氨酰胺可以对抗缺血再灌注损伤引起的心肌损伤,发挥心脏保护作用,其机制可能与抑制炎症反应有关。     

不同缺血后处理对缺血再灌注大鼠脑内IL-1β、IL-6表达的影响

目的对局灶性缺血/再灌注大鼠实施不同缺血后处理,观察其对大脑炎症介质释放的影响,为其对缺血性脑损伤的保护提供依据。方法成年SD大鼠25只,采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血/再灌注模型,随机分为5组,分别为假手术组、缺血再灌注组、缺血后处理组、远隔后处理组、延迟后处理组,术后48 h取脑组织,用免疫组化法观察缺血侧皮质和海马内IL-1β、IL-6表达及相同部位轴突形态。结果和缺血/再灌注组相比,缺血后处理和远隔后处理组损伤侧皮质和海马缺血范围减小,局部炎症反应减轻,轴突损伤减少。结论大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤后早期进行缺血后处理可显著减少大脑炎症反应,使轴突的损伤情况改善。     

脑心通胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤及MMP-2、MMP-9表达的影响

目的观察脑心通胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注脑组织病理变化及MMP-2、MMP-9表达的影响，并探讨其可能的保护机制。方法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，应用HE及S-P免疫组化法分别观察模型组及用药组大鼠全脑组织的病理改变及MMP-2、MMP-9表达的变化。结果假手术组大鼠脑组织形态结构正常，MMP-2、MMP-9见少量散在阳性表达或不表达；模型组大鼠大脑缺血再灌注区组织明显水肿、蜕变、坏死伴少量炎细胞浸润，对大脑相应区及双侧小脑轻度水肿，MMP-2、MMP-9表达较假手术组对应区显著升高（P〈0．01或P〈0．05），其中缺血侧大脑以坏死区边缘脑组织表达为甚，且较对侧大脑及双侧小脑明显升高（P〈0．05）；脑心通用药组大鼠大脑缺血区组织水肿、蜕变、坏死较模型组明显减轻，对侧大脑相应区及双侧小脑脑组织形态结构正常，MMP-2、MMP-9表达较模型组对应区显著降低（P〈0．05）。结论脑心通胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注后包括病灶在内的全脑损伤有保护作用，其作用机制可能与降低MMP-2、MMP-9表达有关。     

兴奋性氨基酸毒性与缺血性脑损伤

氨基酸作为重要的神经递质 ,对正常大脑的生理活动有调节作用。脑缺血时 ,神经元释放的谷氨酸是引起神经元死亡的重要原因。研究表明 ,除谷氨酸具有损伤效应外 ,甘氨酸 (Gly)也有协同作用 ,其释放增加能扩大脑缺血损害。γ 氨基丁酸 (GABA)能抑制兴奋性氨基酸释放或对抗氨基酸毒性。因为对神经元的作用各有侧重 ,所以综合分析它们的浓度变化和相互关系对缺血性脑损伤神经元死亡的本质将会有更进一步的认识 ,并为脑保护治疗的开辟新思路。     

Cerebral aminoacids in portal-systemic encephalopathy: Lack of evidence for altered γ-aminobutyric acid (GABA) function

Construction of an end-to-side portocaval anastomosis in the rat resulted, 4 weeks later, in sustained hyperammonemia and two- to threefold increases in brain ammonia. Measurement of cerebral amino acids using a sensitive double-isotope dansyl microtechnique revealed substantial increases in the glutamine content of cerebral cortex and brain stem. Glutamate levels were found to be concomitantly reduced in both brain regions compared to those of sham-operated controls. The -aminobutyric acid (GABA) content of cerebral cortex and brain stem was unaffected by portocaval shunting, as were activities of the GABA nerveterminal marker enzyme glutamic acid decarboxylase (GAD). These findings suggest that impaired GABA function may not play a major role in the pathogenesis of hepatic encephalopathy associated with portocaval shunts. Preliminary evidence suggests that decreased cerebral glutamate may reflect its loss from the releasable (neurotransmitter) pool.