辛伐他汀通过NF-κB p65通路影响食管癌细胞增殖

目的:探究辛伐他汀(SIM)通过NF-κB p65通路对食管癌Eca109细胞增殖的影响。方法:采用不同浓度(2、4、8、16和32μmol/L)SIM处理食管癌Eca109细胞,MTT法检测食管癌Eca109细胞活力的变化,平板集落形成实验检测食管癌Eca109细胞平板集落形成率,Western blot法检测食管癌Eca109细胞增殖相关蛋白细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、c-Myc及NF-κB p65通路中p65和IκB-α蛋白的表达水平,ELISA法检测食管癌Eca109细胞培养上清液中NF-κB p65通路下游调控因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的水平。结果:与对照组比较,2、4、8和16μmol/L SIM对食管癌Eca109细胞活力的抑制呈浓度及时间依赖性(P<0.05),同一时点,16和32μmol/L SIM对食管癌Eca109细胞活力的抑制率无显著性差异(P>0.05)。16μmol/L SIM作用48 h时对食管癌细胞活力的抑制率为50.61%,接近半数抑制量IC50,因此采用该浓度及时间用于下游实验。与对照组比较,8...     

虫草素增强顺铂诱导的食管癌细胞系Eca109凋亡

目的研究虫草素与顺铂联合用药对食管癌细胞Eca109凋亡的影响及其作用机制。方法将食管癌细胞Eca109分为对照组、不同浓度虫草素处理组、不同浓度顺铂处理组和虫草素(70μg/m L)与顺铂(0.8μg/m L)联合处理组。MTS法检测Eca109细胞增殖;Hoechst 33258染色法及流式细胞术检测Eca109细胞凋亡;Western blot法检测细胞核内NF-κB P65及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达水平;ELISA法检测细胞核内NF-κB P65与DNA的结合活性。结果虫草素与顺铂联合应用使顺铂对Eca109细胞的抑制率由29.30%增加至70.41%(P0.05),增强了顺铂对Eca109的敏感性;与顺铂单独用药相比,联合用药能够显著增加顺铂诱导的细胞凋亡(P0.05);与对照组相比顺铂能够增加细胞核内NF-κB P65的活性,而虫草素却能抑制NF-κB P65的活性,联合用药后NF-κB P65的活性下调;与虫草素和顺铂单独用药相比,联合用药组能够使抗凋亡蛋白Bcl-2的表达显著降低(P0.05),而促凋亡蛋白Bax表达则显著增高(P0.05)。结论虫草素可能通过抑制NF-κB途径,调节下游信号分子Bcl-2和Bax的表达,增强顺铂对Eca109的凋亡诱导效应。     

ERK1/2MAPK通路在Eca109细胞体外增殖和迁移中的作用及其机制

目的观察ERK1/2 MAPK通路在食管鳞状细胞癌(ESCC)Eca109细胞系增殖和迁移中的作用并探讨其作用机制。方法使用MAPK(ERK1/2)抑制剂U0126处理Eca109细胞;细胞计数检测细胞增殖;倒置显微镜下观察细胞形态;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ERK1/2 mRNA;Western blot检测总ERK1/2(t-ERK1/2)和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2);MTT和细胞划痕实验检测细胞增殖和迁移能力;qRT-PCR检测MicroRNA-21(miR-21)。结果20μmol/L浓度的U0126可抑制Eca109细胞生长(P<0.05),破坏细胞正常形态,ERK1/2 MAPK通路的活化在蛋白质水平被抑制(P<0.05),Eca109细胞增殖和迁移明显减弱(P<0.05),显著下调miR-21的表达(P<0.05)。结论ERK1/2 MAPK信号通路抑制可减弱Eca109细胞增殖和迁移,其可能的作用机制之一与其抑制miR-21表达有关。     

诱导细胞凋亡青蒿琥酯抗食管癌作用机制研究

 [摘要] 目的 研究青蒿琥酯诱导食管癌细胞凋亡作用及探讨青蒿琥酯抗食管癌作用机制。方法 不同浓度的青蒿琥酯(Artesunate, Art)(0、10、20、40μg/ml) 作用Eca109细胞24h,流式细胞术（Flow cytometry, FCM）方法检测细胞凋亡、周期及细胞中bcl-2和bax蛋白的表达量。结果 青蒿琥酯作用Eca109细胞24h后,与对照组相比,细胞凋亡率显著增高P<0.05,且具有剂量依赖性。青蒿琥酯组与对照组相比,Eca109细胞中bcl-2蛋白表达水平及细胞增殖指数显著降低P<0.05,而bax蛋白表达量显著增高P<0.05,且具有剂量依赖性。结论 青蒿琥酯可以通过调节Eca109细胞中bcl-2、bax蛋白表达水平和细胞增殖,从而诱导Eca109细胞产生凋亡,起到抗食管癌作用。     

Smac基因过表达增强顺铂对食管癌Eca109细胞化疗的敏感性

目的:探讨Smac基因过表达对食管癌细胞株Eca109顺铂化疗敏感性的影响。方法:脂质体介导将带有GFP的pcDNA3.1-Smac重组体及带有GFP的pcDNA3.1空白载体转染入食管癌细胞株Eca-109,G418筛选阳性克隆,荧光显微镜下观察转染效率,Western blot检测转染前后细胞内Smac蛋白表达水平的变化。顺铂处理组(1、5、10 mg/L)和顺铂未处理组分别处理转染前后的食管癌细胞株Eca109,Annexin V/PI双染法经流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:分别建立稳定表达Smac基因+GFP基因,新霉素抗性基因(neo)+GFP基因的食管癌亚克隆细胞株Eca109/Smac,Eca109/neo。Eca109/Smac的Smac蛋白表达水平明显高于Eca109/neo和Eca109(P<0.05)。在顺铂未处理组,Eca109/Smac、Eca109/neo和Eca109的细胞凋亡率组间无明显统计学差异。在顺铂处理组,顺铂浓度分别为1 mg/L、5 mg/L、10 mg/L,Eca109/Smac的细胞凋亡率明显高于Eca109/neo和Eca109,组间具有统计学差异(P<0.05),且随着顺铂浓度的升高,Eca109/Smac细胞凋亡率随之升高(P<0.05)。Eca109/neo和Eca109组间无明显统计学差异。结论:Smac基因转染未经顺铂处理的Eca109细胞株中不诱发凋亡,在顺铂处理组其过表达能增强Eca109对顺铂的化疗敏感性。     

探讨SPC在诱肝癌HepG2细胞凋亡中的作用机制

目的 研究水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物(Silybin-phosphatidylcholine Compound,SPC)诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用及其机制.方法 不同浓度SPC处理肝癌HepG2细胞.通过MTT法、细胞形态学观察、流式细胞仪和激光共聚焦显微镜观察SPC时HepG2细胞的生长抑制作用及其细胞凋亡的影响.结果 SPC可抑制HepG2细胞的增殖.其GI50为46.8μg/ml;50μg/ml的SPC作用HepG2细胞24h后,细胞出现早期调亡的形态;75μg/ml、100μg/ml的SPC对HepG2细胞凋亡率分别为(17.22±3.45)%和(25.50±5.72)%;50μg/ml、75μg/ml、100μg/ml的SPC作用于HepG2细胞24h后,细胞内的Ca2+浓度显著升高(P<0.05,P<0.01).结论 SPC能够诱导肝癌细胞系HepG2细胞凋亡,其机制与SPC升高细胞内Ca2+浓度有关.     

不同浓度不同时间的纳米钴对小鼠成纤维细胞的遗传毒性的研究

目的探讨同一粒径、不同浓度的纳米钴在4h、24h和48h对鼠成纤维细胞的遗传毒性效应。方法分别用含有1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml浓度的30nm的钴悬液处理培养的鼠成纤维细Balb/c3T3,4h、24h、48h后,采用单细胞凝胶电泳实验方法检测DNA损伤,评价遗传毒性效应。结果与对照组比较,30nm的钴颗粒,当浓度大于1μg/ml时均可对细胞产生遗传毒性效应,差异及显著(P0.01),且随着浓度和时间的增加毒性作用增强。结论纳米钴对小鼠成纤维细胞具有遗传毒性作用,且遗传毒性与纳米钴浓度呈剂量依赖效应和时间依赖效应。     

不同浓度不同粒径的纳米钴对小鼠成纤维细胞的遗传毒性的研究

目的探讨不同粒径、不同浓度的纳米钴对鼠成纤维细胞的遗传毒性效应。方法分别用含有1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml浓度的30nm、50nm和100nm的钴悬液处理培养的鼠成纤维细Balb/c3T3,24h后,采用单细胞凝胶电泳实验方法检测DNA损伤,评价遗传毒性效应。结果与对照组比较,30nm、50nm和100nm的钴颗粒,当浓度大于1μg/ml时均可对细胞产生遗传毒性效应,差异及显著(P0.01),且随着浓度的增加毒性作用增强。结论纳米钴对小鼠成纤维细胞具有遗传毒性作用,且遗传毒性与纳米钴浓度呈剂量依赖效应。     

P162对食管癌细胞株Eca109的放射增敏作用及其对p75NTR表达的影响

 目的：研究靶向Ras-GTP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白(G3BP)的新药P162对人食管癌细胞株Eca109的放射增敏作用及其对p75神经营养因子受体(p75NTR)表达的影响。方法：CCK-8法检测P162对食管癌细胞株Eca109增殖抑制的影响;集落形成实验检测P162对Eca109细胞的放射增敏效应,单击多靶模型拟合细胞存活曲线并计算放射增敏比;倒置显微镜观察细胞形态学改变;流式细胞术检测p75NTR的表达。结果：P162对食管癌细胞株Eca109有增殖抑制作用,且呈时间和剂量依赖性,2.5、5.0、10 μmol/L P162对Eca109细胞的放射增敏比分别为1.54、2.35和2.33。随着照射剂量的增加,食管癌细胞中p75NTR的表达增加,经5 μmol/L P162处理的实验组中p75NTR的表达明显低于未经处理的对照组。结论：P162对Eca109细胞有放射增敏作用,并且能抑制食管癌干细胞p75NTR的表达。P162的增敏作用可能与抑制食管癌干细胞有关。     

IL-27基因修饰Eca109细胞的体外体内凋亡作用的研究

目的 研究IL-27基因转染人食管癌Eca109细胞株后在体外和体内对细胞凋亡的影响,从而探讨其抗肿瘤作用及其机制.方法 基因转染的方法 建立稳定表达IL-27基因的人食管癌细胞株(Eca109/IL-27),观察Eca109/IL-27细胞生长情况、移植瘤的生长情况及生存期,用流式细胞技术检测体外和体内的细胞凋亡率和Fas的表达,采用Western blot检测Survivin 的表达.结果 成功建立稳定转染的Eca109/IL-27细胞株,RT-PCR示Eca109/IL-27细胞中有mIL-27 p28和EBI3亚基基因表达,而Eca109/LXSN和Eca109细胞中未见表达(P＜0.01),IL-27基因转染不影响人食管癌细胞株的体外生长和细胞凋亡,Fas和Survivin的表达无变化(P＞0.05);但体内Eca109/IL-27移植瘤生长较Eca109和Eca109/LXSN滞后,生存时间延长(P＜0.05),肿瘤组织细胞凋亡率增高(P＜0.05),细胞表面Fas的表达增加(P＜0.05),Survivin表达降低(P＜0.05).结论 IL-27在体外不影响细胞凋亡,体内可能通过降低Survivin的表达,上调Fas的表达,诱导细胞凋亡产生抗肿瘤作用.     

转染IL-27基因的食管癌细胞在裸鼠体内的抗肿瘤作用

目的将小鼠IL-27基因转染人食管癌细胞株,研究其在裸鼠体内的抗肿瘤活性.方法以逆转录病毒为载体,将IL-27基因转染人食管癌细胞株Eca109,获得表达IL-27的阳性细胞克隆(Eca109/IL-27),用ELISA法检测细胞IL-27的分泌.将Eca109/IL-27移植裸鼠腹腔,观察瘤细胞的成瘤性和裸鼠的生存期.用RT-PCR检测IL-27基因在裸鼠体内瘤组织中的表达,用流式细胞仪检测CD204表达、细胞周期和细胞凋亡变化.结果成功建立了表达IL-27基因的人食管癌细胞株Eca109/IL-27,该细胞培养上清中IL-27含量为(137.73±7.00)pg/ml,而Eca109/LXSN和Eca109细胞培养上清中未检出IL-27(P＜0.01),但Eca109/IL-27与Eca109/LXSN和Eca109细胞周期和细胞凋亡率无明显差异(P＞0.05).将Eca109/IL-27、Eca109/LXSN 和Eca109细胞分别接种裸鼠腹腔15天后,各组裸鼠均于腹腔形成多数瘤结节,Eca109/IL-27组明显少于Eca109/LXSN 和Eca109细胞组(P＜0.05);Eca109/IL-27组裸鼠的生存期(35天时均无死亡)明显长于Eca109/LXSN 和Eca109细胞组[分别为(23.33±1.52)、(24.00±1.37)天](P＜0.01);Eca109/IL-27组肿瘤组织中有p28和EBI3亚基基因表达,而Eca109/LXSN 和Eca109细胞组瘤组织中未见表达(P＜0.01);其CD204表达水平、细胞凋亡率也明显高于接种Eca109/LXSN与Eca109细胞组(P＜0.05);G0/G1和G2/M期细胞增多,S期细胞明显减少,与接种Eca109/LXSN和Eca109细胞组比较均有显著差异(P＜0.05).结论IL-27可于体内促进肿瘤细胞凋亡,阻滞细胞周期发展,提高CD204的表达,延长生存期,发挥抗肿瘤免疫活性.     

体外MTT法对灵芝酸抗人乳腺癌细胞株MCF-7作用的评估

目的：初步探讨灵芝酸对乳腺癌的抗肿瘤作用。方法用不同浓度(μg/ml)的灵芝酸溶液分别与MCF-7细胞共育24、48、72h后进行形态学观察,同时MTT法测定灵芝酸的细胞毒作用。结果在100μg/ml时共育72h后,对MCF-7细胞的生长具有显著抑制作用(<0.01)。在200μg/ml时共育24h后,对MCF-7细胞的生长具有明显抑制作用(P<0.05),72h后抑制作用更为显著(<0.01)。随药物浓度增加,对MCF-7的作用呈增长趋势,形态学观察,在400μg/ml和800μg/ml对MCF-7细胞以毒杀作用为主。结论灵芝酸对乳腺癌细胞有明显抗肿瘤作用,且机制复杂。     

中华眼镜蛇毒C组分对U251胶质瘤细胞的增殖抑制

目的探讨中华眼镜蛇毒C组分(FC)对胶质瘤细胞株(U-251细胞株)的抑制作用。方法应用MTT法,观察NajaNajaAtraVenom(NNAV)FC对人胶质细胞瘤株U-251的细胞毒作用、量效关系等,并与vm-26对上述细胞的细胞毒作用进行比较。结果FC对人胶质瘤细胞有明显的抑制作用,其24h及48h的IC50分别为5.76μg/ml和7.19μg/ml,且呈良好的量效关系。结论FC能有效抑制胶质瘤细胞株的生长,抑制作用与浓度呈正相关,与卫萌相比较,FC是有效的、能抑制胶质瘤细胞生长的药物。     

丙泊酚影响视网膜母细胞瘤细胞生长和干样特性的机制研究

目的探究丙泊酚影响视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)细胞生长和干样特性的调控机制。方法选取RB细胞系Y79为研究对象,利用CCK-8法进行浓度梯度实验确定后续实验浓度,利用克隆形成实验和流式细胞术分析丙泊酚处理对Y79细胞的生长率及凋亡率的影响,利用干细胞成球实验分析丙泊酚处理对Y79细胞干样特性的影响;Western印迹检测分析丙泊酚处理后干细胞特性蛋白S0X2、OCT4、CD44以及AMPKα1、p-Nrf2、Nrf2、HO-1蛋白的表达水平。结果CCK-8梯度浓度试验发现丙泊酚浓度从5μg/ml开始对Y79细胞活性产生了明敁抑制作用(P<0.05),后续以2.5、5、10μg/ml为试验浓度;与无药处理的对照组相比,5、10μg/ml丙泊酚干预后克隆形成率、干细胞成球率、成球直径、S0X2、0CT4、CD44、AMPKα1、p-Nrf2/Nrf2、HO-1表达水显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05)。结论丙泊酚可以在体外抑制AMPK/Nrf2/HO-1信号通路激活,降低RB细胞抗氧化应激能力,抑制其生长及干细胞特性的维持而发挥抗癌作用.     

盐酸克伦特罗对人类诱导多能干细胞来源心肌细胞的毒性作用

目的:探讨盐酸克伦特罗对人类诱导多能干细胞(iPSC)来源心肌细胞的毒性作用。方法:将人皮肤来源的iPSC成功定向分化为心肌细胞,加入不同浓度盐酸克伦特罗,使之分为对照组(0μg/ml)、1μg/ml组、10μg/ml组、20μg/ml组、50μg/ml组、100μg/ml组等6组(n均=3),相同条件共培养7天后,观察盐酸克伦特罗对心肌细胞形态大小、搏动频率及凋亡率的影响。结果:不同浓度盐酸克伦特罗均可使心肌细胞缩小(P0.05),50-100μg/ml盐酸克伦特罗可致心肌细胞骨架断裂,甚至呈颗粒状。各种浓度盐酸克伦特罗均致心肌细胞搏动频率加快(P0.05),且有浓度越高搏动越快的趋势。10μg/ml组和50μg/ml组所致心肌细胞凋亡率显著高于对照组(P0.05)。结论:盐酸克伦特罗对人类皮肤来源iPSC分化的心肌细胞有毒性作用。     

虫草素对胶质瘤细胞的增殖及侵袭作用的影响及机制研究

目的:探讨虫草素对胶质瘤细胞增殖及侵袭作用的影响,并初步探讨其机制。方法:将虫草素配置成不同浓度(100、200和400μg/ml)作用于胶质瘤细胞,对照组不加入药物。使用CCK8法检测细胞不同时间点和不同药物浓度增殖情况,采用Transwell实验检测不同药物浓度作用下细胞侵袭情况,通过Western blot和q-PCR法检测Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Ezrin蛋白和mRNA的表达水平。结果:100μg/ml虫草素对U87细胞增殖和侵袭无明显影响(P 0. 05)。200和400μg/ml虫草素可明显抑制U87细胞增殖,呈剂量和时间依赖性(P0. 05)。200和400μg/ml虫草素可明显抑制U87细胞侵袭,呈剂量依赖性(P0. 05)。U87细胞经不同浓度虫草素(100、200、400μg/ml)处理24 h后,发现200和400μg/ml虫草素处理后Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Ezrin蛋白和mRNA水平明显降低(P0. 05),100μg/ml虫草素处理后对Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Ezrin蛋白和mRNA水平的抑制作用不明显(P 0. 05)。结论:虫草素能抑制U87细胞的增殖和侵袭,其机制可能与下调Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Ezrin的表达有关。     

探讨SPC在诱肝癌HepG2细胞凋亡中的作用机制

目的研究水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物（Silybin-phosphatidylcholine Compound,SPC）诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用及其机制。方法不同浓度SPC处理肝癌HepG2细胞,通过MTT法、细胞形态学观察、流式细胞仪和激光共聚焦显微镜观察SPC对HepG2细胞的生长抑制作用及其细胞凋亡的影响。结果 SPC可抑制HepG2细胞的增殖。其GI50为46.8μg/ml;50μg/ml的SPC作用HepG2细胞24h后,细胞出现早期调亡的形态;75μg/ml、100μg/ml的SPC对HepG2细胞凋亡率分别为（17.22&#177;3.45）%和（25.50&#177;5.72）%;50μg/ml、75μg/ml、100μg/ml的SPC作用于HepG2细胞24h后,细胞内的Ca2＋浓度显著升高（P〈0.05,P〈0.01）。结论 SPC能够诱导肝癌细胞系HepG2细胞凋亡,其机制与SPC升高细胞内Ca2＋浓度有关。     

比较细胞松弛素A与B在胞质分裂阻断法微核试验中的应用

目的比较细胞松弛素A(Cyto A)及细胞松弛素B(Cyto B)对微核试验常用细胞系——中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)毒性及对体外微核试验结果的影响。方法在荧光显微镜下观察由微丝组成的应力纤维结构,并使用CHL开展胞质分裂阻断法微核试验,比较两者对多核细胞率及含微核双核细胞率的影响。结果不同浓度的Cyto A和Cyto B与细胞作用24 h后,与对照组(26%±7%)比较均可诱导多核细胞形成率的显著升高(Cyto A及Cyto B 3.0μg/ml浓度组分别为58%±12%和72%±9%,P 0.001),且Cyto A在3.0μg/ml浓度条件下诱导的平均多核细胞率与1.5μg/ml浓度组比较有所降低。Cyto A处理组在MMC浓度分别为0、0.1和0.3μg/ml时的微核率分别为0.25%±0.16%、 1.98%±0.59%和3.80%±0.90%;而Cyto B处理组在相同MMC浓度时的微核率分别为0.32%±0.16%、2.50%±0.61%和5.05%±1.09%。结论虽然Cyto B的多核细胞造模效果略优于Cyto A,两者均可有效用于胞质分裂阻断法微核研究。研究结果将为相关领域研究者提供可借鉴的实际经验。     

药物抗CBV3及ECHO11的体外实验研究

目的 寻找抗肠道病毒（EV）感染的安全有效的药物。方法 采用细胞形态观察、MTT法经色检测利巴韦林、双黄连、大蒜素的细胞毒性,并以观察CPE、MTT法比色及蚀斑抑制实验判断其抗CBV3和ECHO11的活性和进行三者间及后二者病毒吸附前后的药效比较。结果 ①利巴韦林TC50为2mg/ml,在1mg/ml-1.5mg/ml时有抑制CBV3和ECHO11的活性。②双黄连TC50为5mg/ml,在0.5mg/ml时即有抑制CBV3和ECHO11的活性,且与药物浓度呈正相关。③大蒜素TC50为12.5μg/ml,在2.5μg/ml-7.5μg/ml时有抑制CBV3和ECHO11的活性。④1.5mg/ml利巴韦林对CBV3及ECHO11的蚀斑抑制率分别为43.2%和37.2%,2.5mg/ml双黄连为81.1%和88.0%,5μg/ml大蒜素为66.2%和77.4%。⑤双黄连在病毒吸附前用药蚀斑抑制率高于吸附手用药（P＜0.05）;大蒜素的差异则不显著（P＞0.05）。结论 三种药物均有体外抗CBV3、ECHO11的作用,但双黄连、大蒜素优于利巴韦林。三种药物中以双黄连毒性最小,抑制病毒活性最高。双黄连在病毒吸附前用药抗病毒活性优于病毒吸附后,有一定预防作用。     

红细胞分化调节因子对体外培养的L929和KB细胞的生长抑制作用

从兔网织红细胞提纯的红细胞分化调节因子(erythroid differentiation factor,EDF),能对体外培养的自发转化成纤维细胞系L929及人鼻咽癌细胞系KB产生作用。当EDF剂量为0.10μg/ml时,可引起L929细胞形态发生改变,并有细胞核固缩现象。第2d的细胞生长抑制率为64.86％,软琼脂集落形成率为0;第5d时细胞增殖为负值。~3H-TdR掺入率明显降低。EDF剂量为0.15μg/ml时,对KB细胞生长已有抑制作用。EDF剂量达0.30μg/ml时,生长抑制明显。以上结果证明了EDF对恶性细胞具有增殖抑制作用。这种作用对不同种类细胞敏感性不同,并且与剂量呈正相关。