钙敏感受体对乳鼠心肌细胞凋亡的诱导作用

探讨在缺氧/复氧所诱导乳鼠心肌细胞凋亡中,钙敏感受体（calcium - sensing receptor,CaSR）对Fas/Fas配体（Fas L）途径的影响。方法对8只2日龄Wistar大鼠心肌细胞进行原代培养,后随机分为三组：(1)对照组：细胞不经缺氧/复氧处理,在其他组复氧开始时培养基内加入与用药组等体积的生理盐水;(2)缺氧/复氧组：心室肌细胞缺氧2h/复氧24h,细胞培养基内于复氧开始时加入与用药组等体积的生理盐水;(3) CaSR激动剂氯化钆(GdCl3)组：细胞培养基内于复氧开始时加入300μmol/L CaSR激动剂GdCl3。流式细胞仪分析细胞凋亡率,透射电镜观察细胞超微结构,蛋白印迹法检测CaSR、Fas和FasL蛋白的表达。结果流式细胞仪检测显示,缺氧/复氧组心肌细胞凋亡为12.18％±1.54％,与对照组相比,心肌细胞凋亡明显增加(P＜0.01)。CaSR激动剂GdCl3使心肌细胞凋亡进一步增加至20.25％±2.87％ (P＜0.01)。透射电镜下可见线粒体絮状变、线粒体嵴溶解、空泡样变;CaSR激动剂使CaSR、Fas和FasL表达进一步上调,明显高于缺氧/复氧组(P＜0.05)。结论CaSR激活参与了缺氧/复氧所诱导的乳鼠心肌细胞凋亡,CaSR可通过激活Fas/FasL死亡受体途径导致乳鼠心肌细胞凋亡。     

钙敏感受体参与乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的机制研究

目的 观察钙敏感受体(CaSR)对缺氧/复氧(A/R)乳鼠心肌细胞内钙的影响,探讨CaSR参与缺氧/复氧乳鼠心肌细胞损伤的机制及信号传导途径.方法 原代培养乳鼠的心肌细胞,建立A/R乳鼠心肌细胞模型(采用95%N2+5%CO2饱和2 h的低糖、无血清DMEM液孵育60 min,再更换成正常氧合细胞培养液孵育30 min的方法).心肌细胞随机分为6组:(1)正常对照组;(2)A/R组;(3)A/R+GdCl3组:在复氧开始时给予GdCl3(CaSR激动剂)300 μmol/L;(4)A/R+NiCl2+CdCl2+GdCl3组:在复氧时细胞培养液内加入10 mmol/L NiCl2(Na+-Ca2+交换阻断剂)和200 μmol/L CaCl2(L-Ca2+阻断剂)孵育10min,再加入300/μmol/L GdCl3;(5)A/R+U73122+GdCl3组:在复氧时细胞培养液内加入10μmol/L磷脂酶C(PLC)阻断剂U73122孵育10 min,再加入300μmol/L GdCl3;(6)A/R+thapsigargin+GdCl3组:在复氧时细胞培养液内加入10μmol/L肌浆网三磷酸肌醇(IP3)敏感Ca2+泵阻断剂thapsigargin孵育10 min,再加入300μmol/L GdCl3.应用Fluo-3/AM荧光指示剂负载心肌细胞,激光共聚焦显微镜连续观察细胞内钙荧光强度的动态变化.结果 A/R使心肌细胞内钙离子浓度([Ca2+];)增加,GdCl3使A/R乳鼠心肌细胞[Ca2+]?I进一步增加;NiCl2和CdCl2对GdCl3引起的心肌细胞[Cd2+]I增加无影响;而U73122和thapsigargin则抑制了GdCl3引起的心肌细胞[Ca2+]I增加.结论 CaSR通过磷脂酶C-三磷酸肌醇途径参与了A/R所致心肌细胞钙超载.     

落新妇甙对心脏移植排斥反应中活化T细胞蛋白激酶C信号传导通路的影响

目的用小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型,探讨落新妇甙对心脏移植排斥反应中活化T细胞蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)信号传导通路的影响。方法分离BALB/C小鼠心肌细胞(2×10~5/ml)和C57BL/6小鼠的脾细胞(1×10~6/ml),前者做刺激细胞,后者做反应细胞,进行混合细胞培养,建立小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型。实验分4组:对照组,心肌细胞与脾细胞混合培养;落新妇甙组,在对照组基础上加入落新妇甙(15μg/ml);落新妇甙加PKC激动剂组,在对照组基础上加入落新妇甙(15μg/ml)和PKC激动剂PMA(10nmol/L);落新妇甙加PKC抑制剂组,在对照组基础上加入落新妇甙(15μg/ml)和PKC抑制剂CHE(10μmol/L)。TUNEL法检测T淋巴细胞凋亡情况。RT-PCR和Western blot法检测T细胞PKC、NF-κB,caspase-3和Bcl-2表达情况。结果落新妇甙组T细胞凋亡指数和caspase-3明显高于对照组(P<0.01),PKC、NF-κB和Bcl-2表达显著低于对照组(P<0.01)。落新妇甙加PKC抑制剂组T细胞凋亡指数和caspase-3显著高于落新妇甙组,PKC、NF-κB和Bcl-2表达显著低于落新妇甙组(P<0.01)。落新妇甙加PKC激动剂组T细胞凋亡指数,caspase-3、PKC、NF-κB和Bcl-2表达与对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。结论落新妇甙诱导心脏移植排斥反应中活化T细胞凋亡与其抑制PKC信号传导通路有关。     

存活素蛋白在病毒性心肌炎中的表达及作用

目的探讨病毒性心肌炎(VMC)中存活素蛋白的表达变化及可能机制。方法以柯萨奇病毒B3(CVB3)感染SD乳鼠原代心肌细胞复制VMC细胞模型,在CVB3感染后0、12、24、36、48、60 h观察心肌细胞形态及搏动情况,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验评估心肌细胞损伤程度,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡,采用Western blot技术检测抗凋亡蛋白存活素及凋亡酶cleaved-caspase-3的表达。结果 CVB3感染48 h后,乳鼠原代心肌细胞开始出现团缩变圆,搏动减弱、不规则,至60 h时大部分细胞停止搏动,细胞脱壁、溶解。CVB3病毒感染至细胞凋亡在60 h时至高峰(35.85±3.76)%。感染CVB3后,心肌细胞存活素蛋白表达明显增加,12 h即至最高峰(1.88±0.39),为正常组的1.88倍;随后存活素蛋白表达逐渐减少,60 h时至最低点(0.47±0.41)。CVB3病毒感染激活心肌细胞cleaved-caspase-3表达,60 h时至高峰(3.46±0.16)。心肌细胞存活素蛋白表达量与细胞凋亡率及cleaved-caspase-3表达量均存在显著负相关(r=-0.727、-0.677,P0.01)。结论 VMC时存活素蛋白表达增加,可能在早期参与抗心肌细胞凋亡作用。     

天麻对病毒性心肌炎实验小鼠心肌细胞凋亡的影响

目的 研究天麻对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡及caspase-3蛋白表达的影响,探讨天麻治疗病毒性心肌炎的作用及机制.方法 给Balb/c小鼠接种柯萨奇B3病毒制作病毒性心肌炎模型,感染病毒72 h后将仔活小鼠分为模型组、天麻组、氯沙坦组,并以未感染小鼠为正常对照组.大麻组、氯沙坦组分别予以相应药物干预7 d后,4组小鼠采用原位末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡及Western blotting法检测caspase-3蛋白表达.结果 正常组未见到心肌细胞凋亡,模型组心肌细胞大量凋亡,凋亡率较正常组显著增加(P＜0.01),天麻组和氯沙坦组凋亡率较模型组显著降低(P＜0.05).模型组caspase-3蛋白表达较正常组显著增多(P＜0.01),天麻组和氯沙坦组较模型组显著降低(P＜0.05).结论 天麻能够抑制病毒性心肌炎心肌细胞的凋亡,通过caspase-3通路的调节,对心肌细胞起到保护作用.     

Omi/HtrA2在缺氧复氧后人近曲肾小管上皮细胞中的表达及促红细胞生成素对其表达的影响

目的 探讨缺氧复氧(H/R)后人近曲肾小管上皮细胞内Omi/HtrA2的表达变化及促红细胞生成素(EPO)干预的影响.方法 以人近曲肾小管上皮细胞株(HK-2细胞)为研究对象,将其分为对照组、H/R组及EPO干预组.对照组常规培养;H/R组缺氧24h后复氧6 h;EPO干预组在H/R前加入5 000 U·L-1EPO预处理.倒置显微镜观察细胞形态,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫组织化学检测细胞内Omi/HtrA2表达变化.结果 与对照组比较,H/R组细胞数量减少,细胞形态发生改变,细胞活力下降,细胞凋亡率显著增加,细胞内Omi/HtrA2表达增强,差异均有统计学意义(Pa＜0.05);而与H/R组相比,EPO干预组细胞数量增多,细胞形态明显改善,细胞活力增加,细胞凋亡率下降,Omi/HtrA2表达减弱,差异均有统计学意义(Pa＜0.05).但各指标均未恢复至对照组水平.结论.H/R可通过上调Omi/HtrA2表达而促进肾小管上皮细胞凋亡,EPO对H/R肾小管上皮细胞具有保护作用,其机制可能与抑制Omi/HtrA2表达、减少细胞凋亡有关.     

缺氧及肺动脉高压患儿左心室心肌细胞凋亡及凋亡相关基因的表达

目的研究慢性缺氧性疾病及肺动脉高压(PAH)患儿左心室心肌细胞凋亡及相关基因的表达。方法以因缺氧性疾病而死亡的新生儿为研究对象,以交通意外死亡儿童为正常对照组。慢性缺氧性疾病患儿入院后多普勒超声测肺动脉收缩压(PASP)和肺动脉平均压,根据PASP分为单纯缺氧组和缺氧-PAH组(PASP>4.0 kPa为PAH)。患儿死亡后取左心室心肌组织采用Tunnel末端标记法检测细胞凋亡指数,用原位杂交法及SP免疫组化法测定Fas、FasL、bax、bcl-2、caspase-3凋亡相关基因的mRNA和蛋白表达。结果(1)单纯缺氧组和缺氧-PAH组心肌细胞凋亡指数高于正常对照组(P<0.01),但单纯缺氧组和缺氧-PAH组之间无差异;(2)缺氧组和缺氧-PAH组心肌细胞Fas、FasL、bax、caspase-3的mRNA和蛋白表达均高于正常对照组(P均<0.01),bcl-2的mRNA和蛋白表达稍高于对照组,但无统计学意义;各基因mRNA和蛋白表达在单纯缺氧组和缺氧-PAH组之间无差异;(3)缺氧-PAH组PASP与心肌细胞凋亡指数呈正相关(r=0.478,P<0.05)。结论各种小儿疾病所致缺氧可致左心室心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达改变,PAH可致凋亡加重。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠心肌细胞凋亡及凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达的变化

目的 了解缺氧缺血性脑损伤新生大鼠心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2蛋白表达的变化.方法 通过结扎7 日龄新生大鼠一侧颈总动脉,吸入低浓度氧复制缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的动物模型,并没假手术对照(NC)组,两组分别于HIBD后1 h、4 h、12 h、24 h、48 h、72 h、7 d取心脏组织,应用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,SP法检测心肌细胞Bax、Bcl-2蛋白的表达.结果 NC组偶见心肌阳性凋亡细胞1～4个/mm~2,各时间点阳性细胞数差异无统计学意义(F=0.5,P>0.05).HIBD组12 h心肌阳性凋亡细胞开始增多,为(14.40±3.21)个/mm~2;72h达高峰,为(26.80 ±2.28)个/mm~2,12～72 h各时间点阳性凋亡细胞明显高于NC组(P<0.05);7 d阳性细胞数减少,但仍高于NC组.NC组大鼠心肌组织Bax呈阳性表达,Bcl-2呈弱阳性表达.HIBD组Bax于24 h开始增高.72 h表达最明显,7 d时表达有所降低,24 h～7 d表达高于NC组(P<0.05);Bel-2于24 h表达开始增高,以后缓慢增高,72 h达高峰,24 h～7 d较NC组表达增高,差异有统计学意义(P<0.05).HIBD组Bcl-2/Bax比值逐渐降低.Bax、Bcl-2的表达与凋亡细胞数之间均星直线正相关(r=0.921、0.980,P均<0.01).Bcl-2/Bax的比值与凋亡细胞数无相关性(r=0.702,P>0.05).结论 HIBD新生大鼠心肌细胞存在凋亡,心肌细胞Bax、Bcl-2蛋白表达增加,且与心肌细胞凋亡有关.     

钙敏感受体在新生小鼠持续性肺动脉高压中的作用

目的探讨钙敏感受体(CaSR)激动剂及抑制剂在新生小鼠持续性肺动脉高压(PPH)模型中对CaSR的表达影响,明确其在新生小鼠PPH模型中的作用。方法将49只新生小鼠随机分为对照组(n=10)、PPH组(n=11)、激动剂组(n=13)和抑制剂组(n=15);将PPH组、激动剂组和抑制剂组小鼠暴露在12%的氧浓度中,对照组小鼠暴露在空气中。激动剂组和抑制剂组每日分别给予GdCl3(16 mg/kg)、NPS2390(1 mg/kg)腹腔注射1次,低氧组和对照组每日以生理盐水替代,共持续14 d。采用苏木精-伊红染色和免疫组化检测肺血管的变化;采用激光共聚焦技术观察CaSR在新生小鼠肺组织中的表达位置及含量;qRT-PCR技术检测新生小鼠肺组织中CaSR mRNA表达;Western blot法检测新生小鼠肺组织中CaSR蛋白的表达。结果与对照组相比,PPH组肺小动脉血管壁厚度(WT%)及右心室与左心室壁厚度比(RV/LV)均较对照组明显增大(P0.05),模型验证成功。与对照组相比,PPH组CaSR mRNA和蛋白表达水平明显增加(P0.05),激动剂组表达水平增加更加明显(P0.05),而抑制剂组表达减少(均P0.05)。结论 CaSR参与了低氧诱导的新生小鼠PPH,可能发挥重要作用。     

γ干扰素与阿霉素联用对成神经细胞瘤细胞生长及凋亡的影响

目的探讨γ干扰素(IFN-γ)对阿霉素抗人成神经细胞瘤细胞作用的影响,并探讨其影响机制。方法应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)分析和流式细胞仪,研究IFN-γ与化疗药阿霉素联合应用前后人成神经细胞瘤细胞SH-SY5Y的存活率及凋亡率;免疫组化方法检测IFN-γ作用前后半胱氨酸蛋白酶-8(caspase-8)蛋白的表达。结果阿霉素(0.03,0.10,0.30μg/ml)单独作用24h后,SY5Y细胞的存活率分别为(95.62±13.03)%,(82.62±7.94)%和(64.84±9.19)%,各组间差异显著。IFN-γ(10,100,1000U/ml)单独作用48h后,SY5Y细胞的存活率分别为(98.37±11.25)%,(97.15±5.36)%和(98.84±7.41)%,各组间差异无显著性。IFN-γ(1000U/ml)与不同浓度的阿霉素(0.03,0.10,0.30μg/ml)联合作用后,SY5Y细胞的存活率同单独应用阿霉素组比较明显下降,差异有显著性;阿霉素(0.30μg/ml)单独作用24h,SH-SY5Y的凋亡率为(22.00±6.55)%,IFN-γ(1000U/ml)单独作用48h,凋亡率为(8.22.±4.00)%。二者联合作用后,凋亡率较单用阿霉素组比较明显升高,差异有显著性;免疫组化方法发现SH-SY5Y细胞株不表达caspase-8,IFN-γ作用48h后caspase-8表达阳性。结论阿霉素对成神经细胞瘤细胞SH-SY5Y具有抑制增殖和诱导凋亡的作用,IFN-γ可以使其作用明显增强。其发生机制可能是通过IFN-γ上调caspase-8蛋白的表达而实现的。     

钙敏感受体对持续性肺动脉高压新生小鼠内皮型一氧化氮合酶及一氧化氮的影响

目的 探讨钙敏感受体（CaSR）在持续性肺动脉高压（PPH）新生小鼠模型中对内皮型一氧化氮合酶（eNOS）表达及一氧化氮（NO）浓度的影响。方法 将80只新生C57BL/6小鼠随机分为对照组、PPH组、激动剂组和抑制剂组。对照组小鼠暴露于空气中,PPH组、激动剂组和抑制剂组小鼠暴露于12%的氧浓度中。激动剂组和抑制剂组分别腹腔注射CaSR激动剂（GdCl₃）16 mg/kg、CaSR抑制剂（NPS2390）1 mg/kg,PPH组和对照组以生理盐水替代,共14 d。采用苏木精-伊红染色检测各组小鼠肺泡和肺血管变化;采用Westernblot、qRT-PCR和免疫组化检测各组小鼠肺组织中eNOS蛋白、mRNA的表达;采用ELISA法分别检测肺组织匀浆中脑利钠肽（BNP）及NO的含量。结果 与对照组相比,PPH组和激动剂组肺泡平均内衬间隔、肺小动脉血管壁厚度、右心室与左心室壁厚度比（RV/LV）及BNP浓度均明显增大,径向肺泡计数明显减少（P < 0.05）;除RV/LV外,上述指标在抑制剂组均较PPH组和激动剂组有所改善（P < 0.05）。与对照组相比,eNOS蛋白、mRNA表达量及NO浓度在PPH组明显增高,在激动剂组中表达水平进一步增加,而在抑制剂组中表达减少（P < 0.05）。结论 CaSR可能通过影响eNOS的表达和NO浓度在新生小鼠PPH发病中发挥重要作用。     

新生鼠坏死性小肠结肠炎肠上皮细胞Bax表达与细胞凋亡的初步研究

目的探讨新生鼠坏死性小肠结肠炎（necrotizingenterocolitis,NEC）时肠上皮细胞Bax表达与凋亡相关性。方法出生当日48只清洁级SD新生鼠采用奇、偶数方法随机分为对照组和NEC模型组,每组24只。对照组由母鼠喂养。模型组与母鼠分开,通过代乳品人工喂养＋缺氧一复氧一冷刺激建立新生鼠NEC动物模型。分别于实验开始后24h、48h、72h留取大鼠回盲部近段回肠组织行免疫组织化学法检查肠上皮细胞Bax表达,原位末端标记法检测肠上皮细胞凋亡率。结果与对照组[（666．55±15．77）IOD;（4．73±0．04）％]相比,NEC模型组新生鼠肠上皮细胞Bax表达和细胞凋亡率在实验开始后24h开始升高[（1005．06±11．96）IOD;（15．04±0．24）％]（P〈0．01）,72h后达到高峰[（3340．66±68．72）IOD;（35．65±0．61）％]（P〈0．01）。NEC模型组新生鼠肠上皮细胞凋亡率与肠上皮细胞Bax表达量呈正相关（r=0．94,P〈0．01）。结论新生鼠NEC肠上皮细胞凋亡与Bax表达有明确相关性。新生鼠NEC肠上皮细胞可能通过高表达Bax导致肠上皮细胞凋亡。     

Apoptosis in the small intestine of neonatal rat using blue light-emitting diode devices and conventional halogen-quartz devices in phototherapy

Phototherapy is the most frequently used treatment for the neonatal jaundice. However, recent papers report that phototherapy increased apoptosis in peripheral mononuclear leukocytes in vivo and in mouse lymphoma cell line in vitro. We have investigated the cytotoxicity of phototherapy on the small intestine of neonatal rat using conventional halogen-quartz device (conventional device) and blue light-emitting device (LED device) by measuring apoptotic cells. Four-day-old male Wistar rats were divided into three groups as follows: group 1, exposure to conventional device for 72 h; group 2, exposure to LED device for 72 h; and group 3, control (without phototherapy). After light exposure, the small intestine was examined for apoptosis. Apoptotic cells were detected by the TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling) assay, by immunohistochemistry for caspase-3 and by transmission electron microscopy. The proportion of positive cells by the TUNEL method in the epithelium of the small intestine was 6.2, 3.1 and 1.7% in the conventional device group, the LED device group and the control group, respectively. The apoptotic cells of the conventional device group is significantly higher than the LED device group (P < 0.01) and that of the LED device group was higher than that of the control group (P < 0.05). We suspected that phototherapy induced apoptosis in neonatal small intestine and the conventional device introduces more apoptosis than the LED device.     

Insulin-like growth factor attenuates apoptosis and mucosal damage in hypoxia/reoxygenation-induced intestinal injury

OBJECTIVE: Necrotizing enterocolitis (NEC) is a potentially lethal disease among premature infants. The aim of the present study was to investigate whether hypoxia-reoxygenation (H/R)-induced intestinal injury was due to increased apoptosis of the intestinal mucosa in young mice and whether pre-treatment of the animals with recombinant human insulin-like growth factor-I (IGF-I), a known anti-apoptotic factor, could protect the intestinal cells from H/R-induced apoptosis or intestinal injury. STUDY DESIGN: Young mice were divided into three groups: group 1 mice (H/R) were hypoxia-reoxygenation; group 2 mice (H/R + IGF-I) were treated with recombinant human IGF-I by intraperitoneal injection (1 mug/g b.w. once daily) for 7 days, and group 3 mice served as control. Hypoxia was induced by placing young mice in a Plexiglas chamber consisting of 10% oxygen for 60 min. After hypoxia, the young mice were reoxygenated for 10 min with 100% oxygen. Intestinal generation of substances reactive to thiobarbituric acid (TBARS) and active caspase-3 were measured in H/R-induced intestinal injury. RESULTS: Increased numbers of apoptotic cells (apoptotic index) across the villi in young mice subjected to H/R were observed with the TUNEL reaction whereas few apoptotic cells existed in the control animals. In addition, H/R-induced intestinal damage in the H/R + IGF-I group was greatly attenuated, with necrosis limited partially to the mucosa. Tissue-active caspase-3 levels in the H/R group were found to be significantly higher when compared with that of the H/R + IGF-I group of mice and control. However, TBARS concentrations in the intestine were similar in H/R groups when compared to the intestine of control animals. CONCLUSION: The present study suggests that both necrosis and apoptosis, via mechanisms occurring due to oxygen-derived free radicals and activation of caspase-3, play a role in the pathogenesis of H/R-induced bowel injury. We also show that IGF-I protect intestinal mucosa from necrosis and apoptosis from intestinal H/R injury.     

高氧对新生大鼠肺caspase-3和p53基因表达及肺细胞凋亡的影响

目的探讨高氧对新生大鼠肺caspase3和p53基因表达及肺细胞凋亡的影响。方法采用SpraqueDawley新生大鼠95%氧气暴露建立高氧肺损伤模型。应用RTPCR技术检测肺组织caspase3mRNA和p53mRNA水平,凝胶电泳条带用成像系统照相分析结果。计算目的基因PCR产物条带与内参照βactin条带光密度值的比值,作为p53基因的相对表达量,结果以x±s标记,而caspase3mRNA表达量则以阳性表达或阴性表达为标记。应用脱氧核糖核酸转移酶介导的细胞凋亡标记技术(TUNEL)原位检测细胞凋亡。光镜下随机计算5个视野中500个肺细胞中的阳性细胞数,结果以x±s标记。结果新生大鼠暴露于95%氧浓度环境中24h后肺组织中p53mRNA表达中度增加(q=3.2305,P>0.05),48h后表达显著增加,与空气对照组相比差异有统计学意义(q=7.2941,P<0.05)。新生鼠高氧处理72h、96h后,肺组织p53mRNA表达又恢复到正常水平。在各空气对照组和各高氧处理组中个别新生鼠肺的caspase3mRNA有微量表达,绝大多数新生鼠肺的caspase3mRNA没有表达,差异无统计学意义。95%氧暴露7天的新生鼠肺细胞凋亡水平明显高于空气暴露组新生鼠肺细胞凋亡水平,两者比较差异有极显著的统计学意义(F=100,P<0.001)。结论在高浓度供氧下,肺组织通过暂时上调p53基因的表达,介导细胞周期停滞,阻止G0/G1期细胞进入S期,抑制细胞分裂、增殖,同时p53促进细胞凋亡,从而导致肺生长发育受阻和肺损伤。新生鼠暴露于95%氧环境中,肺组织caspase3基因基本上不表达,因此推测高氧肺细胞凋亡可能存在不经过caspase3的凋亡途径。     

维生素E拮抗邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯尿道发育毒性的实验研究

目的 探寻维生素E(Vitamin E,VitE)对邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[Di(2-ethylhexy1)phthlate,DEHP]所致大鼠尿道发育毒性的拮抗作用及其可能机制.方法 GD12(gestation day12)SD孕鼠随机分为4组,每组20只:玉米油对照组、DEHP组(500 mg·kg-1·d-1)、DEHP(500mg·kg-1·d-1)+VitE(200mg·kg-1·d-1)组和VitE组(200mg·kg-1·d-1).各组分别于母鼠孕期12～19d(GD12～19)持续经口灌注给药.各组分别留取10只孕鼠让其正常分娩,出生第一天,即对新生大鼠计数,并在解剖显微镜下测量雄性新生鼠的肛门生殖器距离(anal genital distance,AGD)并称体重;雄性仔鼠70日龄时逐个检查尿道下裂的发生情况.余孕鼠在GD19d行破宫产取仔代鼠,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测胎鼠阴茎TGF-β1,TGF-βR3 mRNA的表达水平.DNA末端原位标记染色法(TUNEL法)检测胎鼠阴茎尿道上皮细胞凋亡情况.结果 各组TGF-β1mRNA表达水平分别为:正常组为0.63±0.07、DEHP组为0.96±0.12、DEHP+VitE组为0.65±0.07、VitE组为0.62±0.06,DEHP组表达明显较其他各组增高(P＜0.05).各组TGF-βR3mRNA表达水平分别为:正常组为0.47±0.10、DEHP组为0.75±0.10、DEHP+VitE组为0.49±0.09、VitE组为0.46±0.09,DEHP组表达明显较其他各组增高(P＜0.05).各组胎鼠阴茎凋亡指数分别为:正常组为(30±2.0)%、DEHP组为(8.8土1.1)%、DEHP+VitE组为(28.9±1.6)%、VitE组为(29.6±2.0)%,DEHP组凋亡细胞数较其他各组相比明显减少,差异有统计学意义(P＜0.01).导致大鼠尿道下裂的发生.VitE可降低DEHP上调的胎鼠阴茎TGF-β1,TGF-βR3 mRNA表达水平,恢复胎鼠阴茎尿道上皮细胞的凋亡水平.结论 VitE对DEHP所致尿道发育毒性具有拮抗作用,其机制可能与调控TGF-βs及胎鼠阴茎尿道上皮细胞的凋亡有关.

Abstract：

Objective To study the therapeutic effects of Vitamin E (VitE) on urethral development toxicity induced by di(2-ethylhexyl) phthalate (DEHP). Methods From gestational day 12 to gestational day 19 (GD 12-19) , the timed-pregnant Sprague-Dawley (SD) rats were fed with the eiwith 20 in each group: DEHP group, DEHP + VitE group, and VitE group. The control rats were fed with corn oil. Ten pregnant rats of each group delivered full-term infant rats. The male infant rats were counted, and the anal genital distance (AGD) and body weight were measured. Hypospadias morbidity was also counted on male rats after 17 postnatal days. In the rest 10 pregnant rats of each group, fetuses were harvested on GD19. Semi-quantitive RT-PCR was used to measure mRNA expression of TGF-β1 and TGF-βR3. TUNEL staining was used to measure cell apoptosis in the fetus' genital tubercles. Results Hypospsdias was observed in male rat after 17 postnatal days. The TGF-β1 mRNA of the control group, DEHP group, DEHP + VitE group, and VitE group is 0. 63 ± 0. 07,0. 96±0. 12, 0. 65 ±0. 07, and 0. 62± 0. 06, respectively. The TGF-βR3 mRNA of the control group,DEHP group, DEHP + VitE group, and VitE group was 0. 47 ± 0. 10, 0. 75 ± 0. 10, 0. 49 ± 0. 09,and 0. 46 ± 0. 09, respectively. The TGF-β1 mRNA and TGF-βR3 mRNA was up-regulated in the fetus of DEHP group (P＜0. 05). Cell apoptosis rate in fetus' genital tubercles on GD19 of the control group, DEHP group, DEHP + VitE, and VitE group was 30% ± 2. 0%, 8. 8% ± 1.1%, 28. 9% ±1.6%, and 29. 6% ± 2. 0%, respectively. Cell apoptosis rate was significantly reduced in the fetus of DEHP group (P＜0. 01). In the GD19 fetus treated with VitE, hypospadias morbidity, the TGF-β1 and TGF-βR3 mRNA expressions were significantly decreased. And cell apoptosis rate was significantly increased. Conclusions Vitamin E ameliorates the urethral development toxicity induced by DEHP via regulating TGFβs expression and cell apoptosis in rat fetus.     

亚低温减轻新生大鼠缺氧缺血脑细胞凋亡的作用及机制研究

目的：细胞凋亡在新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)的发病机制中起重要作用,亚低温治疗是HIE最有前途的治疗方法之一。通过观察缺氧缺血后凋亡通路上关键成分的变化,探讨亚低温减轻新生大鼠脑细胞凋亡的作用及机制。方法：采用7日龄SD清洁级大鼠, 建立新生大鼠HIBD标准模型。模型动物随机分为常温缺氧缺血组 (IN, 肛温=37℃)和亚低温缺氧缺血组 (IH,肛温=33℃)。采用TUNEL结合苏木素-伊红染色、神经元Nissl染色等方法检测脑细胞凋亡;Western blotting加免疫组织化学法观察线粒体及胞浆细胞色素C蛋白改变;分别用RT-PCR和显色底物法检测caspase-3 mRNA表达及其酶活性改变。结果：IN组海马CA1区TUNEL阳性锥体细胞明显增多,DNA电泳梯状条带明显;72 h亚低温治疗显著降低脑细胞凋亡发生率,与常温比较差异有显著性（6.4±1.7 vs 25.3±1.5,P<0.01）。IN组胞浆Cyt c水平6 h开始明显升高,72 h达高峰,而线粒体内Cyt c水平则出现相应的下降;亚低温治疗组胞浆Cyt c水平降低和对应线粒体Cyt c水平的升高,以24 h、48 h和72 h最为明显,与IN组比较差异有显著性（P＜0.05）。HIBD后24 h组结扎侧脑组织caspase-3 mRNA表达明显增加,亚低温治疗显著降低caspase-3 mRNA表达水平,以48 h、72 h 治疗组最明显（P＜0.05）,而caspase-3酶活性却在24 h达高峰,亚低温治疗可明显降低HIBD 后24 h 的caspase-3酶活性,与常温比较差异有显著性（2.42±0.5 RFU vs 34.7±3.2 RFU ,P＜ 0.01)。结论：亚低温治疗能够显著降低HIBD后细胞凋亡发生率,其机制可能作用于凋亡通路的多个部位：减少Cyt c释放,减轻或抑制caspase-3表达及其蛋白酶活性等。［中国当代儿科杂志,2007,9（1）：37-41］