白藜芦醇对糖尿病大鼠心脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨白藜芦醇(RSV)对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注(MI/R)损伤的保护作用及其机制。方法通过腹腔注射链脲佐菌素诱导2型糖尿病大鼠模型。2周后糖尿病大鼠随机分为假手术(Sham)组、MI/R组和白藜芦醇(RSV)组。通过结扎左冠状动脉前降支诱导MI/R损伤模型。测定各组大鼠乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、心肌梗死面积、心脏收缩和舒张功能;TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数;Western blot检测沉默信息调节因子1(SIRT1)、p53、乙酰化p53(Acetyl-p53)、Bcl-2、Bax以及细胞浆和线粒体细胞色素C(Cyt C)和凋亡诱导因子(AIF)的表达;HE染色检测心肌损伤评分。结果与Sham组相比,MI/R组心肌梗死面积、心肌损伤评分、心肌LDH、CK、cTnI、Acetyl-p53、Bax、细胞浆Cyt C和AIF表达以及心肌细胞凋亡指数均明显增加,而心脏收缩和舒张功能明显降低,Bcl-2和SIRT1表达以及线粒体Cyt C和AIF表达明显减少。与MI/R组相比,RSV组心肌梗死面积、心肌损伤评分、心肌LDH、CK、cTnI、Acetyl-p53、Bax、细胞浆Cyt C和AIF表达以及心肌细胞凋亡指数均明显降低,而心脏收缩和舒张功能明显改善,Bcl-2和SIRT1表达以及线粒体Cyt C和AIF表达明显增加。3组之间p53表达无差异。结论白藜芦醇可通过抗凋亡作用减轻糖尿病大鼠MI/R损伤,其作用机制与SIRT1/p53信号通路相关。     

软脂酸对HIT—T15细胞线粒体形态功能和胰岛素分泌的影响

目的观察软脂酸（PA）对HIT-T15细胞凋亡、线粒体结构和功能及胰岛素分泌的影响并探讨可能的机制。方法试验分对照组、0．5 mmol／LPA和1．0 mmol／LPA组,透射电镜观察细胞及线粒体形态,流式细胞仪（FC）和原位末端标记法（TUNEL）检测凋亡率,高效液相色谱法（HPLC）检测细胞ATP／ADP,RT—PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1（PGC-1）和核呼吸因子1（NRF-1）mRNA,放免法测基础和葡萄糖刺激后胰岛素分泌（GSIS）。结果PA能使线粒体肿胀、嵴破坏;细胞的凋亡率增加,且FC检测高浓度PA组凋亡率增加更显著;ATP／ADP比率下降;PGC-1mRNA和NRF-1mRNA表达增加,高浓度PA组增加更显著;GSIS下降（P均〈0．05）。结论PA导致HIT-T15细胞的线粒体结构和功能的损害及GSIS下降,可能与PGC-1和NRF-1的调节作用有关。     

人工虫草对糖尿病大鼠足细胞上皮间质转分化影响的研究

目的 探讨人工虫草(金水宝)对糖尿病大鼠肾脏足细胞数目及转分化的影响.方法 利用链脲佐菌素诱导建立糖尿病大鼠模型,SD大鼠按随机数字表法分为3组:对照组、糖尿病模型组和人工虫草治疗组.干预8周后检测各组大鼠肾小球足细胞数目、nephrin、desmin及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平.结果 与对照组比较,糖尿病模型组大鼠足细胞数目、nephrin水平明显下降(P＜0.05),desmin及MCP-1均明显升高(均P＜0.05).与糖尿病模型组相比,人工虫草治疗组足细胞数目、nephrin表达水平均明显增加,desmin和MCP-1的含量明显下降(均P＜0.05).结论 人[虫草对糖尿病大鼠足细胞转分化有明显的改善作用,并且能显著增加足细胞数目.     

糖尿病肾病足细胞损伤的表观遗传调控

表观遗传修饰是糖尿病肾病的重要机制之一,足细胞损伤是疾病进展的核心事件。不同表观遗传修饰方式可通过单独作用或交叉对话,改变足细胞结构和功能、促进足细胞凋亡及上皮间充质转化、影响足细胞自噬,以及参与足细胞内质网应激和线粒体功能障碍等过程,参与足细胞损伤。表观遗传是可逆的,通过治疗干预改变表观遗传修饰可能是防治糖尿病肾病的一个重要方向。     

新诊断1型糖尿病患者外周血自然杀伤细胞的变化特点

目的 探讨新诊断1型糖尿病患者外周血自然杀伤细胞数目和功能的变化情况.方法 收集2009年到2011年瑞金医院收治新诊断1型糖尿病患者外周全血标本43份,同时收集性别、年龄匹配的正常对照健康志愿者外周全血标本21份,2型糖尿病对照组14例,Ficoll方法分离外周血单个核细胞( PBMC),流式细胞术(FACS)测定PBMC主要细胞亚群比例,流式细胞分选仪分离正常人和1型糖尿病患者自然杀伤细胞.实时荧光定量PCR检测自然杀伤细胞激活的主要效应分子γ-干扰素(IFN-γ)、perforin 及自然杀伤细胞激活性受体NKp46、NKp30基因mRNA表达水平.结果 与正常对照相比,自然杀伤细胞是1型糖尿病患者所有细胞亚群中改变最明显的一群细胞,细胞数目明显降低[( 102±86)/μl对(355±264)μl,P＜0.01];与正常对照自然杀伤细胞相比,1型糖尿病患者的自然杀伤细胞NKp46、perforin基因表达明显下调(P＜0.05),NKp30、IFN-γ基因在1型糖尿病患者的自然杀伤细胞中表达无明显改变(P＞0.05).结论 新诊断1型糖尿患者存在自然杀伤细胞数目和功能明显下降,自然杀伤细胞介导的免疫功能障碍可能在1型糖尿病的病程中发挥着非常重要的作用.     

褪黑素通过沉默信息调节因子1减轻线粒体氧化应激对脑缺血-再灌注小鼠的作用

目的探讨褪黑素通过沉默信息调节因子1(SIRT1)减轻线粒体氧化应激机制对脑缺血-再灌注(IR)小鼠的作用。方法通过线栓法建立小鼠短暂性大脑中动脉阻塞(MCAO)IR模型,对190只小鼠经腹腔注射褪黑素和侧脑室注射SIRT1抑制剂EX527,剔除死亡小鼠30只,按随机数字表法分为IR组、褪黑素组、褪黑素+EX527组、EX527组各40只,通过2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定脑梗死体积、干湿比重法测定脑水肿并进行神经功能缺损评分。通过Western blot检测线粒体和胞质SIRT1、Ac-P53、Ac-核因子κB(Ac-NF-κB)、BCL2、BAX蛋白以及细胞色素C蛋白表达。多组间比较采用单因素方差分析。结果 (1)4组间脑梗死体积、神经功能障碍评分和脑水肿的差异均有统计学意义(F值分别为16.452、23.622和18.786,均P0.05)。4组SITR1、Ac-P53、Ac-NF-κB、BCL2、BAX表达差异均有统计学意义(F值分别为2 348.158、1 434.841、7 042.563、14 627.128和691.475,均P0.05)。4组小鼠线粒体膜电位、线粒体活性氧和复合体Ⅰ活性差异有统计学意义(F值分别为28.454、33.728和29.716,均P0.05)。(2)与IR组相比,褪黑素组的脑梗死体积缩小(32±5)mm~3比(57±5)mm~3,P0.05);神经功能障碍评分降低(2.4±0.3比3.5±0.3,P0.05);脑水肿减轻(80.2±0.9)%比(83.9±1.2)%,P0.05);SIRT1和抗凋亡蛋白BCL2的表达增加(P0.05);促凋亡蛋白BAX和Ac-P53、Ac-NF-κB的表达减少(P0.05);线粒体膜电位、线粒体复合体Ⅰ活性和细胞色素C水平提高(P0.05);胞质活性氧产物和细胞色素C水平降低(P0.05)。(3)与褪黑素组相比,褪黑素+EX527组的脑梗死体积增大[(42±5)mm~3比(32±5)mm~3,P0.05];神经功能障碍评分增高(3.2±0.3比2.4±0.3,P0.05);脑水肿加重[(83.4±0.8)%比(80.2±0.9)%,P0.05];SIRT1和抗凋亡蛋白BCL2的表达减少(P0.05);促凋亡蛋白BAX和Ac-P53、Ac-NF-κB的表达增加(P0.05);线粒体膜电位、线粒体复合体Ⅰ活性和细胞色素C水平降低(P0.05);胞质活性氧产物和胞质细胞色素C水平提高(P0.05)。结论在缺血性卒中模型小鼠中,褪黑素通过激活SIRT1信号通路,减轻线粒体氧化应激损伤和细胞死亡,从而发挥脑保护作用。     

线粒体分裂相关蛋白高表达参与阿霉素大鼠肾病模型蛋白尿的发生

目的:探讨肾小球线粒体动力相关蛋白1(Drp1)、P-Drp1(Ser616)和线粒体分裂蛋白1(Fis1)表达与足细胞损伤及蛋白尿发生的关系。方法:建立阿霉素大鼠肾病模型,用免疫组化和western blot检测肾小球和肾皮质Drp1、P-Drp1(Ser616)及Fis1的表达,分析上述蛋白表达与蛋白尿及足细胞线粒体形态的相关性。在小鼠足细胞系MPC5过表达Drp1,分析对凋亡和线粒体形态的影响。结果:肾小球和肾皮质Drp1在阿霉素大鼠肾病模型4周和6周时表达增强,肾小球P-Drp1(Ser616)在6周时表达增强,肾小球Fis1在2周和6周时增强。肾小球和肾皮质Drp1、肾小球P-Drp1(Ser616)和Fis1表达与24h尿蛋白正相关。肾小球Drp1表达量与足细胞线粒体胞浆密度和线粒体细胞密度呈负相关。肾小球P-Drp1(Ser616)与足细胞线粒体最大长宽比呈负相关。肾小球Fis1与足细胞线粒体面积和周长呈负相关。过表达Drp1致小鼠足细胞凋亡显著增多,线粒体片段化。结论:肾小球Drp1、P-Drp1(Ser616)与Fis1高表达参与阿霉素大鼠肾病模型蛋白尿的发生,Drp1高表达致线粒体片段化和足细胞凋亡。     

抗增殖蛋白1与炎症性肠病

抗增殖蛋白1(PHB1)是一种在进化上高度保守的多功能蛋白,其在亚细胞层面主要定位于线粒体内,主要功能是稳定线粒体膜结构,维持线粒体的正常功能.PHB可减少活性氧的产生,降低氧化应激反应,抑制通过线粒体信号途径启动的炎性反应.调节PHB1水平可能是治疗炎症性肠病(IBD)的潜在靶点.此文就PHB1在IBD的发病机制中的...     

SIRT1与糖尿病相关肿瘤的关系

糖尿病不仅增加肿瘤的患病风险,而且促进肿瘤的复发和转移.沉默信息调节因子1(SIRT1)是机体的能量感受器,具有调节糖、脂代谢,抑制慢性非特异性炎性反应,改善胰岛素抵抗等作用,其表达及活性异常参与了糖尿病及其并发症的发生.同时近期研究发现SIRT1也与肿瘤的发生、发展密切相关.通过去乙酰化调节机制SIRT1可调控大量转录因子及组蛋白的活性,从而参与染色质沉默、细胞凋亡、自噬途径及DNA损伤修复的调控,是联系细胞能量代谢与染色质结构的关键蛋白,因而可能是联系糖尿病及糖尿病相关肿瘤的重要中介.积极干预糖尿病患者中SIRT1信号途径异常,可能具有降低肿瘤风险的作用.     

经SDF-1转染的间充质干细胞对高糖所致足细胞损伤的修复作用

目的体外研究经基质细胞衍生因子(SDF)-1转染的间充质干细胞(MSCs)是否更容易向损伤足细胞迁移并修复损伤足细胞。方法高糖诱导建立肾小球足细胞损伤模型。MSCs与肾小球足细胞用Transwell小室共培养,做迁移实验,检测SDF-1转染的MSCs是否更容易迁移至损伤足细胞侧。并检测足细胞中胰岛素样生长因子(IGF)-1、转化生长因子(TGF)-β、半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3的表达水平。结果经SDF-1转染的MSCs更易迁移至受损足细胞侧,且可下调受损足细胞中IGF-1、TGF-β、caspase-3表达。结论经SDF-1转染的MSCs能够更容易迁移到受损的足细胞侧,且对高糖所致足细胞损伤有修复作用。     

虾青素对碘海醇诱导的大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的观察虾青素(AST)对碘海醇(I)诱导的大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法大鼠肾小管上皮细胞株(NRK-52E)正常培养生长80%后,随机分为空白对照(Control)组、溶剂对照(DMSO)组、I组、AST预处理(AST+I)组、AST预处理+沉默信息调节因子2相关酶(SIRT)1抑制剂烟酰胺(AST+I+NA)组,I+SIRT1抑制剂(I+NA)组。不同因素干预细胞后,采用4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色检测细胞凋亡的形态学变化;膜联蛋白(Annexin)-V-FITC/碘化丙啶(PI)双标流式细胞仪检测细胞凋亡率;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)荧光探针检测线粒体膜电位;Western印迹检测SIRT1、P53、Bax和Bcl-2蛋白表达。结果 AST能显著减轻I诱导的大鼠肾小管上皮细胞凋亡,稳定线粒体膜电位,显著上调SIRT1蛋白表达,显著减少线粒体凋亡相关蛋白P53、Bax表达,显著增加Bcl-2表达(均P0.05)。结论 AST可能通过上调SIRT1蛋白表达,稳定线粒体膜电位,调控细胞凋亡相关蛋白表达对I诱导的大鼠肾小管上皮损伤发挥保护作用。     

线粒体糖尿病合并腺垂体功能减退症一例临床分析及文献复习

对1例合并腺垂体功能减退症的线粒体糖尿病患者的临床资料进行分析, 应用芯片捕获高通量测序对患者线粒体基因进行检测, 并对国内外相关文献进行回顾性分析。结果显示, 该患者MT-TL1基因上存在m.3243 A>G变异, 临床特征符合线粒体糖尿病及腺垂体功能减退症。     

线粒体分裂对胰岛β细胞功能的影响

目的 探讨线粒体分裂对胰岛β细胞功能的影响.方法 通过可诱导表达野生型动力相关蛋白1(Drp-1 WT)基因和突变型Drp-1(Drp-1K38A)基因的大鼠INS-1 β细胞,分析不同葡萄糖条件下,线粒体分裂对胰岛β细胞功能的影响.结果 在高糖条件下,强力霉素诱导后的Drp-1WT细胞线粒体分裂过程增强,网络状结构部分断裂,多呈点状结构,细胞胰岛素分泌功能降低(P<0.01),线粒体膜电位降低(P<0.05),细胞内ATP含量减少(P<0.05),细胞色素C表达增加,而在Drp-1K38A细胞中,上述变化明显减轻.结论 线粒体分裂增强可抑制胰岛β细胞功能.

Abstract：

Objective To investigate the effect of mitochondrial fission on the function of pancreatic β cells.Methods INS-1 stable cell lines allowing inducible expression of either wild-type dynamin-related protein 1 (Drp-1 WT)or its dominant-negative mutant(Drp-1 K38A)were used.The effect of mitochondrial fission on the function of pancreatic β cells were investigated under different concentrations of glucose.Results There were increased mitochondrial fission and disintegration of the mitochondrial reticulum into multiple punctiform organelles in Drp-1 WT cells induced with doxycycline under high glucose condition.Insulin secretion(P<0.01),mitochondrial membrane potential(P<0.05),and ATP content(P<0.05)were decreased and cytochrome C expression was increased after the expression of Drp-1 WT under high glucose condition while these changes were markedly mild in Drp-1 K38A expression cells.Conclusion The increased mitochondrial fission inhibits pancreatic β cell function.     

哺乳动物Ste20样激酶1在糖尿病心肌病发病中的作用机制研究进展

糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)是一种严重不可逆的心血管并发症,其临床表现主要为左心室肥厚、心肌纤维化和舒张功能受损。研究显示,线粒体过度分裂、自噬紊乱、细胞凋亡、氧化应激、炎症反应和心肌纤维化等均参与糖尿病心肌病的发病。近年来,有研究表明,哺乳动物Ste20样激酶1(Mst1)可能与糖尿病心肌病的发生和发展密切相关。本文主要围绕Mst1在糖尿病心肌病发展中的作用进行论述。     

母系遗传性糖尿病伴耳聋发病机制及诊治

母系遗传性糖尿病伴耳聋(MIDD)是一种线粒体疾病,在糖尿病患者中约占1％.其中tRNALeu(UUR) A3243G突变引起胰岛β细胞胰岛素分泌功能障碍是其致糖尿病的主要原因,但具体机制仍不明确.近年EndoC-βH1细胞系的建立为研究其机制提供了途径.尿道上皮细胞与线粒体疾病表型相关性最好,尿液可作为临床诊断和检测线粒体DNA异质性首选的样本,而MIDD的治疗仍以抗氧化剂和预防糖尿病并发症为主.A3243G突变的临床表型和MIDD突变的组织异质性仍是研究的热点,其研究对MIDD的诊断和治疗具有重要的指导意义.     

糖尿病冠状动脉平滑肌细胞大电导钙离子激活钾通道开放概率及蛋白表达的变化

目的研究糖尿病对冠状动脉平滑肌细胞大电导钙离子激活钾通道(BK通道)开放概率(NP0)及蛋白表达的影响,探讨糖尿病冠状动脉损伤的分子机制。方法采用链脲霉素腹腔内注射建立糖尿病大鼠动物模型,成功建立20只糖尿病大鼠动物模型作为糖尿病组;对照组(n=20)相应注射生理盐水。酶消化法分离冠状动脉平滑肌细胞,单通道膜片钳实验技术记录大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流;采用Western blot实验方法测定大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道亚基的蛋白表达。结果在电极外液钙离子浓度为1μmol/L,刺激电位为0,20,40,60,80,100和120 mV条件下,糖尿病组冠状动脉平滑肌细胞BK通道NP0明显低于对照组(P<0.05)。如刺激电位为120 mV时,对照组和糖尿病组大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道NP0分别为1.210 5±0.048 1(n=5)和0.5217±0.1346(n=5);与对照组比较,糖尿病组BK通道α亚基蛋白表达无差异(P>0.05),但β1亚基蛋白表达下降了63%(P<0.05)。结论糖尿病冠状动脉平滑肌细胞BK通道β1亚基表达下调、BK通道NP0降低可能是糖尿病冠状动脉功能损伤的重要原因。     

PGC-1的研究进展

过氧化物酶体增生激活受体γ协同刺激因子 (PGC) 1是一种近年来发现的转录协同刺激因子 ,被认为与内分泌疾病密切相关。PGC 1能够调节适应性产热及线粒体的生成而影响肥胖的发生 ,还通过增加葡萄糖转运体(GLUT) 4的表达增强葡萄糖的转运及激活糖异生的关键酶 ,与糖尿病的发生、发展密切相关。故通过调节其生理功能来治疗肥胖及糖尿病已成为研究热点     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子-1基因与糖尿病

过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子(PGC)-1基因作为一个细胞核转录因子,在许多基因转录及转录后的剪接修饰中起重要作用,尤其与能量代谢关系密切。 PGC-1富含于肝脏、骨骼肌和棕色脂肪组织,调节糖、脂代谢及线粒体生物合成,并参与脂质分化及适应性产热过程。本文着重对PGC-1调控基因表达的分子机制及其在糖尿病发病中的作用作一综述。     

白细胞介素-1受体相关激酶1在脂多糖诱导的足细胞损伤中的作用及其机制

目的 探讨白细胞介素(IL)-1受体相关激酶1(IRAK1)在脂多糖(LPS)诱导的足细胞损伤中的作用及其机制。方法 将体外培养的永生化人足细胞分为5组：正常对照组(control组)、LPS组、LPS+空载转染组(LPS+si-NC组)、LPS+IRAK1干扰质粒转染组(LPS+si-IRAK1组)、LPS+肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)干扰质粒转染组(LPS+si-TRAF6组)。采用蛋白质免疫印迹法(Western Blot)及实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测5组足细胞IRAK1和TRAF6蛋白及其mRNA的相对表达水平;采用免疫荧光检测5组足细胞紧密连接蛋白(ZO)-1、结蛋白(Desmin)的定位及相对表达水平;采用Western Blot检测5组足细胞IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、人核因子(NF)-κB抑制蛋白(IKB)α、NF-κB(p65)、磷酸化NF-κB(p-p65)蛋白的相对表达水平;采用免疫共沉淀(Co-IP)实验检测IRAK1和TRAF6结合情况。结果 LPS组足细胞IRAK1、TRAF6蛋白及mRNA相对表达水平...     

低氧诱导因子-1与糖尿病并发症

糖尿病并发症的发病机制涉及多个因素,与遗传易感性、糖代谢紊乱、氧化应激等密切相关,但具体机制尚未明确.近年研究发现其发病过程与低氧密切相关,而低氧诱导因子-1(HIF-1)是缺氧时重要的转录调控因子,可通过对下游基因的转录调控参与血管发生、能量代谢、细胞凋亡等病理生理过程,以适应低氧环境.探讨HIF-1结构和功能的调节及其在糖尿病并发症中的作用,研究如何维持HIF-1的适度表达,为防治糖尿病并发症提供了新的思路.