肺炎链球菌性脑膜炎小鼠B7-H3蛋白对巨噬细胞炎性蛋白2 mRNA表达的影响

目的 探讨协同信号分子B7-H3对肺炎链球菌性脑膜炎小鼠模型中炎性趋化因子巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)mRNA表达的影响.方法 1.5 ～2.0个月健康雄性BALB/C小鼠48只,随机分为4组:9 g/L盐水组(NS组)、B7-H3蛋白组(B7-H3组)、肺炎链球菌组(SP组)、肺炎链球菌+B7-H3蛋白组(联合组),每组12只;经小鼠侧脑室穿刺分别注入9 g/L盐水、B7-H3蛋白、肺炎链球菌3型、肺炎链球菌3型+B7-H3蛋白建立动物模型.注射后6、24 h依据loeffler 5分制评分方法对各组小鼠进行神经行为评分,然后麻醉处死小鼠,取脑组织,用Real-time PCR方法检测小鼠脑组织内MIP-2 mRNA的相对表达量.应用SPSS 18.0软件进行统计学分析.结果 侧脑室穿刺注射6、24h后各组小鼠神经行为学评分结果:B7-H3组神经行为评分与NS组比较差异无统计学意义(P＞0.05);SP组评分较NS组明显降低,差异具有统计学意义(P＜0.05);联合组较SP组评分更明显降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).Real-time PCR方法检测结果:SP组在注射6h后MIP-2 mRNA的相对表达量较NS组升高[(1.210 ±0.932)比(1.000±0.008)],但差异无统计学意义(P＞0.05);在注射24 h后SP组MIP-2 mRNA的相对表达明显高于NS组[(12.880±7.792)比(1.000±0.091)],差异具有统计学意义(P＜0.05);联合组与SP组比较:6 h MIP-2相对表达量增高[(1.240±0.804)比(1.210±0.932)],但无统计学差异(P＞0.05),24h相对表达量明显升高[(38.760±6.061)比(12.880±7.792)],差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 在肺炎链球菌性脑膜炎模型中,协同信号分子B7-H3使炎性趋化因子MIP-2 mRNA的表达上调,促进病情进展.     

B7同源体3经Toll样受体2依赖性机制增强肺炎链球菌脑膜炎小鼠的炎性反应和病理损伤

目的 探讨B7同源体3(B7 - H3)对肺炎链球菌(SP)脑膜炎大鼠的炎性反应和血脑屏障完整性的影响及其机制.方法 经小鼠侧脑室穿刺注入SP悬液,制备脑膜炎模型.野生型鼠分5组,分别为PBS组、SP组、SP+B7 -H3组、SP+同型单抗组、SP+B7 - H3阻断性单抗组.Toll样受体2基因剔除(TLR2-KO)鼠分3组:PBS组、SP组、SP+ B7 - H3蛋白组.术后6h、18h、30 h,麻醉其下眼眶采血法收集血清,取脑组织,制备脑组织匀浆.ELISA检测其血清TNF-α、IL-6、IL-1β和单核细胞趋化因子蛋白-1(MCP-1)水平以及脑组织匀浆中血清蛋白( Albumin)和IgG水平.结果 1.ELISA检测野生型鼠血清SP组、SP+ B7 - H3组注射18 h后TNF-α、IL-6和MCP-1的表达及30 h后TNF-α、IL-6、IL-1β和MCP-1的表达均较PBS组显著升高(Pa＜0.05);SP+同型单抗组与SP组比较,各时间点各炎性因子的表达差异均无统计学意义(Pa＞0.05);SP +B7- H3组注射18h后MCP-1的表达及30 h后TNF-α和IL-6表达均显著高于SP组[(42.010±3.883) ng·L-1vs(29.620±3.830) ng· L-1;(37.550±3.232)ng· L-1vs (24.570±2.377) ng·L-1;(66.160±5.766) ng·L-1vs (48.630±4.418) ng·L-1,Pa＜0.05];SP+ B7 - H3阻断性单抗组注射30h后,TNF-α和IL-6的表达均显著低于SP组[(18.680±1.798) ng·L-1vs(24.570±2.377) ng·L-1;( 37.180±3.150) ng·L- 1vs (48.630±4.418) ng· L-1,Pa＜0.05].2.ELISA检测脑组织匀浆:SP组、SP+ B7 - H3组注射18h、30h后Albumin、IgG的表达较PBS组均显著升高(Pa＜0.05);SP+同型单抗组与SP组比较,各时间点Albumin、IgG的表达差异均无统计学意义(Pa＞0.05);SP+ B7 - H3组注射18 h、30 h后脑组织匀浆Albumin的表达及30 h后脑组织匀浆IgG的表达均显著高于SP组[(59.090±4.184) μg· g-1vs ( 35.450±4.256) μg·g-1;( 59.890±4.701)μg·g-1 vs (43.790±3.508) μg·g-1;(36.220±2.775)μg·g-1 vs(25.440±2.620)μg·g-1,Pa＜0.05].3.SP+ B7 - H3阻断性单抗组注射后18 h、30 h Albumin的表达及30 h IgG的表达显著低于SP组[(20.590±1.720) μg·g-1vs(35.450±4.256) μg·g-1;(28.650±3.063) μg· g-1vs(43.790±3.508)μg·g-1;(17.380±1.595) μg·g-1vs(25.440±2.620) μg·g-1,Pa＜0.05].3.TLR2-KO鼠血清和脑组织匀浆的ELISA检测显示:SP +B7-H3组较SP组各监测指标的表达在任何时间点的差异均无统计学意义(Pa＞0.05).结论 B7 - H3通过TLR2依赖性机制促进SP诱导的脑膜炎小鼠的炎性反应和血脑屏障的破坏.     

重组白细胞介素17F对肺炎支原体感染小鼠体内防御素β-2及巨噬细胞炎性蛋白表达的影响

目的观察重组白细胞介素17F(rIL-17F)对肺炎支原体(MP)感染小鼠体内防御素β-2(Defb-2)及巨噬细胞炎性蛋白(MIP)表达的影响,探讨rIL-17F防御MP感染的相关机制。方法 SPF级BALB/c小鼠随机分为感染组、干预组和对照组,以鼻腔接种的方式建立MP感染模型,以鼻腔黏膜免疫方式进行rIL-17F干预。采用荧光定量PCR法检测其肺组织Defb-2、MIP-1α、MIP-2βmRNA的表达水平,ELISA法检测其肺泡灌洗液(BALF)、脾脏及纵隔淋巴结细胞培养上清中MIP-1α、MIP-2β、IL-4、IFN-γ水平。结果 1.干预组MP菌落计数明显低于感染组,BALF中白细胞总数及中性粒细胞、巨噬细胞计数明显高于感染组,差异均有统计学意义。对照组无菌落生长。感染组BALF中白细胞总数及中性粒细胞、巨噬细胞计数明显高于对照组,差异均有统计学意义。2.干预组肺组织Defb-2、MIP-1α和MIP-2βmRNA表达水平均明显高于感染组,差异有统计学意义。3.干预组与感染组比较,MIP-1α水平在纵隔淋巴结细胞培养上清中明显升高,MIP-2β水平在BALF和纵隔淋巴结细胞培养上清中明显升高,差异均有统计学意义;IL-4水平在BALF中明显降低,在脾细胞培养上清中则明显升高,差异均有统计学意义;IFN-γ水平在脾细胞培养上清中明显升高,差异有统计学意义。感染组与对照组比较,MIP-1α水平在脾细胞及纵隔淋巴结细胞培养上清中均明显升高,差异有统计学意义;MIP-2β水平两组之间无显著差异;IL-4水平在BALF及脾细胞培养上清中均明显升高,差异有统计学意义;IFN-γ水平在BALF中明显升高,差异有统计学意义。结论 rIL-17F能促进Defb-2及MIP等炎性因子的表达,调节Th1/Th2平衡,增加感染部位中性粒细胞和巨噬细胞等炎性细胞的聚集,提高MP清除率,增强机体抗感染能力。     

细菌性脑膜炎患儿脑脊液和血清B7-H3、白细胞介素-1β水平变化及其临床意义

目的观察急性期细菌性脑膜炎(BM)和病毒性脑炎(VEM)患儿血清和脑脊液中可溶性协同刺激分子B7-H3(CD276)、IL-1β的水平变化,探讨其临床意义。方法收集2010年7月-2011年11月在本院神经内科住院的BM患儿17例、VEM患儿12例的急性期脑脊液和血清。采用双抗体酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组对象血清和脑脊液B7-H3和IL-1β水平,应用SPSS 17.0统计软件对各组进行分析,并对B7-H3和IL-1β进行相关性分析。结果 BM组患儿脑脊液中B7-H3与IL-1β水平均显著高于VEM组(P<0.01,0.05);BM组患儿血清中B7-H3水平明显高于VEM组(P<0.05)。BM组和VEM组血清IL-1β的变化无统计学差异(P>0.05)。BM组脑脊液中B7-H3与IL-1β水平变化呈正相关(r=0.526,P<0.05)。结论协同刺激分子B7-H3在脑脊液和血清中的水平测定具有急性期BM和VEM的鉴别诊断价值;B7-H3与IL-1β水平可以作为BM的早期诊断的参考指标之一。协同刺激分子B7-H3与炎症因子IL-1β参与了细菌性脑膜炎的急性期炎症反应过程。     

巨噬细胞炎性蛋白1α及其mRNA在哮喘小鼠气道炎症中的作用

目的探讨巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)及其mRNA在哮喘小鼠气道炎症中的作用.方法 70只二级雄性BALB/C小鼠随机分为2大组7小组(1)正常小鼠组,分成灌洗组(A24组)和未灌洗组(A0组);(2)哮喘小鼠组,分成灌洗组(根据末次激发时相不同分成B3组、B8组、B24组和B36组)和未灌洗组(B0组).对支气管肺泡灌洗液(BALF)进行嗜酸性粒细胞(EOS)计数和分类计数;应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法测定血清和BALF中MIP-1α的浓度;采用免疫组化法和原位杂交法检测MIP-1α蛋白和MIP-1α mRNA的表达.结果 (1)BALF和血清中MIP-1α的浓度B3组[(30.2±4.2)pg/ml,(30.8±4.6)pg/ml]、B8组[(35.3±4.9)pg/ml,(34.9±5.1)pg/ml]、B24组[(42.9±5.8)pg/ml,(41.7±6.3)pg/ml]和B36组[(37.8±4.7)pg/ml,(35.7±4.9)pg/ml]均高于A24组[(20.9±3.8)pg/ml,(22.4±4.3)pg/ml](P均<0.01); MIP-1α浓度3 h开始升高,24 h达峰值,36 h已下降;(2)免疫组化和原位杂交显示,B0组支气管MIP-1α蛋白和MIP-1α mRNA的阳性表达率[(26.4±6.2)%, (23.9±4.2)%]均高于A0组[(10.3±2.5)%, (8.7±1.8)%](P均<0.01),其表达的主要细胞是上皮细胞;(3)哮喘小鼠BALF中MIP-1α的浓度和EOS绝对值之间呈显著正相关(r=0.890, P＜0.01),MIP-1α的浓度和EOS占细胞总数百分比(EOS %)之间呈显著正相关(r=0.897, P＜0.01).结论哮喘小鼠MIP-1α蛋白和mRNA较强表达,上皮细胞是主要表达细胞,MIP-1α动力学特点为3 h开始升高,24 h达峰值,36 h已下降,并与EOS聚集密切相关.     

维生素D对肥胖幼鼠单核／巨噬细胞趋化因子及巨噬细胞浸润脂肪组织的影响北大核心CSCD

目的探讨肥胖幼鼠腹腔内脂肪系数、单核／巨噬细胞趋化蛋白表达和巨噬细胞浸润脂肪组织情况及维生素D（VitD）的干预作用。方法将45只3周龄sD雌幼鼠根据随机数字表法分为对照组、肥胖模型组、VitD干预组,每组15只。对照组予基础饲料喂养,肥胖模型组、VitD干预组予高脂饲料喂养;VitD干预组予VitD灌胃5μg／（kg·d）（相当于婴幼儿每天补充VitD 400 IU）,对照组和肥胖模型组予植物油灌胃,5mL／kg,1次／d,共6周。每周监测幼鼠体质量,计算Lee’s指数,6周后称量腹腔内脂肪重量;酶联免疫吸附法检测血清单核细胞趋化蛋白-1（MCP·1）和巨噬细胞炎性蛋白-1α（MIP-1α）表达水平;HE染色后,在显微镜下观察并计数脂肪细胞;免疫组织化学法测定脂肪组织中MCP-1、MIP-1α及F4／80蛋白表达;实时荧光定量PCR（qPCR）测定脂肪组织中MCP-1、MIP-1α及核因子（NF）-KBmRNA表达水平,同时与幼鼠体质量、腹腔内脂肪系数及Lee’s指数进行相关性分析。结果高脂饮食诱导幼鼠肥胖后,第6周肥胖模型组幼鼠体质量、腹腔内脂肪系数、血清MCP-1和MIP-10ll（244．1±16．2）g、（3．25±0．63）％、（2275．2±229．3）ng／L、（190．4±61．9）ng／L]均较对照组[（224．2±10．9）g、（2．43±0．47）％、（1522．1±577．1）ng／L、（63．6±31．6）ng／L1和VitD干预组[（214．0±12．5）g、（2．04±0．64）％、（1863．4＋-477．0）ng／L、（120．3±29．5）ng／L]增高,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。腹腔内脂肪组织HE染色示对照组和VitD干预组脂肪细胞排列较整齐,大小较均-;肥胖模型组脂肪细胞排列较紊乱,大小不一,脂肪细胞过度膨大和许多新生的小脂肪细胞并存。免疫组织化学染色示肥胖模型组脂肪组织中MCP-1、MIP—1α、F4／80蛋白表达（130944．5±10706．1、174354．8±65267．8、51701．9±50105．1）均较对照组（47394．5±9261．9、54376．7±36436．9、23370．3±16613．1）增高,差异均有统计学意义（均P〈0．01）;VitD干预组MCP-1、MIP-101、F4／80蛋白表达（102967．2±9329．3、48659．8±43553．8、25604．9±11411．6）均较肥胖组降低,差异均有统计学意义（均P〈0．01）。qPCR示肥胖模型组脂肪组织中MCP-1、MIP-1仅及NF—κBmRNA表达（2．78±0．90、7．104-1．85、1．504-0．16）均较对照组（0．88±0．18、0．99±0．80、1．00±0．28）增高,差异均有统计学意义（均P〈0．05）;VitD干预组脂肪组织中MCP-1、MIP—let及NF—KBmRNA表达（1．73±0．51、1．59±1．09、0．72±0．30）均较肥胖模型组下降,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。各组间Lee’s指数比较差异无统计学意义（F=0．351,P=0．711）。9周龄时,幼鼠脂肪组织中MCP-1、MIP-1饯、NF—KBmRNA表达水平与幼鼠体质量、腹腔内脂肪系数均呈正相关（r=0．738、0．517、0．762、0．693、0．519、0．557,均P〈0．05）;与Lee’s指数无相关性（r=0．322、0．317、-0．023,均P〉0．05）。结论VitD可抑制饮食诱导的幼年期肥胖,可能与VitD通过NF—κB信号通路抑制脂肪组织／巨噬细胞浸润及单核巨噬细胞趋化因子的表达有关。     

难治性肺炎支原体肺炎患儿肺泡灌洗液中sB7-H3及细胞因子表达

目的探讨难治性肺炎支原体肺炎(RMPP)患儿肺泡灌洗液(BALF)中sB 7-H3的表达水平,及其与各细胞因子的关系及临床意义。方法收集43例急性RMPP患儿纤维支气管镜检查时的BALF,其中13例仅在急性期灌洗1次(单次灌洗组),30例急性期后再次灌洗(再次灌洗组);以同期15例支气管异物患儿为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF中sB 7-H 3、IL-1β、IL-2、IL-36表达水平,并比较各组间的差异,以及RMPP患儿急性期BALF中sB 7-H3水平与IL-1β、IL-2、IL-36的相关性。结果再次灌洗组首次灌洗时BALF中sB 7-H3、IL-1β、IL-36水平显著高于单次灌洗组和对照组,单次灌洗组也均高于对照组,差异有统计学意义(P均0.05);再次灌洗组在第二次灌洗时BALF中sB 7-H3、IL-1β、IL-2、IL-36水平较首次灌洗时显著降低(P均0.05);再次灌洗组第二次灌洗时BALF中IL-1β、IL-36与对照组差异无统计学意义(P均0.05),sB 7-H3、IL-2水平仍高于对照组,差异有统计学意义(P均0.05)。RMPP急性期BALF中sB 7-H 3水平与IL-1β、IL-2、IL-36水平呈正相关(P均0.001)。结论 sB 7-H3可能通过调控IL-1β、IL-2、IL-36等炎症因子的分泌,参与RMPP的发生及发展。     

脐血S100B、巨噬细胞炎性蛋白-1α对母亲妊娠高血压病所生新生儿脑损伤的早期诊断价值

目的检测母亲妊娠高血压病(HDCP)新生儿脐血及脐带组织S100B、巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)的表达,探讨脐血S100B、MIP-1α对母亲HDCP新生儿脑损伤的早期诊断价值。方法将97例HDCP母亲所生新生儿纳入实验组,并根据其出生后7 d或纠正胎龄40周后7 d的20项新生儿神经行为测定(NBNA)评分分为2组:≤35分为脑损伤组(A组),>35分为非脑损伤组(B组);同时选取20例健康母亲所生健康新生儿作为健康对照组(C组)。免疫组织化学法检测其脐带组织S100B、MIP-1α表达;ELISA检测其脐血S100B蛋白、MIP-1α水平。评估脐血S100B、MIP-1α蛋白对母亲HDCP新生儿脑损伤的早期诊断价值。结果1.A、B、C组脐带组织S100B表达差异无统计学意义(P>0.05);A、B组脐血S100B蛋白水平均较C组增高(Pa<0.05)。2.A、B组脐带组织MIP-1α表达差异无统计学意义(P>0.05),但2组脐带组织MIP-1α表达与C组比较差异均有统计学意义(Pa<0.05);A、B组脐血MIP-1α水平均较C组增高(Pa<0.05)。3.A、B组脐血S100B蛋白水平、MIP-1α蛋白水平均与NBNA评分均呈负相关(Pa<0.05);脐血S100B蛋白水平与MIP-1α蛋白水平呈正相关(P<0.05)。4.脐血S100B蛋白ROC曲线下面积为0.992,以95.04 mg.L-1作为S100B的最佳截取值,诊断脑损伤的特异度为94.0%、灵敏度为95.7%;脐血MIP-1α蛋白ROC曲线下面积为0.928,以101.34 pg.L-1作为MIP-1α的最佳截取值时,诊断脑损伤的特异度为82.0%、灵敏度为87.2%。结论脐血S100B蛋白是母亲HDCP新生儿脑损伤早期诊断的可靠指标,且可反映脑损伤程度。MIP-1α对母亲HDCP新生儿脑损伤的早期诊断有一定意义。     

肺炎链球菌β-内酰胺类抗生素最小抑菌质量浓度与青霉素结合蛋白1A和2B变异的关系

目的探讨肺炎链球菌（Sp）β-内酰胺类抗生素最小抑菌质量浓度（MIC）与青霉素结合蛋白（PBP）1A和2B变异的关系。方法对55株Sp用E-test法进行7种β-内酰胺类抗生素进行药敏试验,并提取每株Sp的DNA,分别对其青霉素结合蛋白基因（pbp）1a和pbp2b中编码青霉素结合区域（PBD）进行套式PCR扩增和直接测序,并用Clustalx软件进行序列比对,分析PBP1A和PBP2BPBD保守序列的氨基酸置换。结果青霉素敏感株4株中发现PBP2B保守序列SSN后苏氨酸（Thr）445→丙氨酸（Ala）,Thr451→Ala和谷氨酸（Glu）481→甘氨酸（Gly）置换,其余6株PSSP未发现PBP1A和PBP2B保守序列氨基酸置换。4株青霉素中介株（PISP）（MIC0.19～0.38mg/L）PBP2BThr445→Ala,Thr451→Ala和Glu481→Gly置换,其中1株发现PBP2B保守序列SVVK后第431-432位点处脯氨酸（Pro）的插入,余3株存在谷氨酰胺（Gln）432→亮氨酸（Leu）置换。另16株PISP（MIC0.5～1.0mg/L）在此基础上出现PBP1ASRN后Pro432→Thr,STMK中Thr371→丝氨酸（Ser）/Ala和KTG附近的短镶嵌序列Thr574→天冬氨酸（ASn）Ser575→Thr,Gln576→Gly,苯丙氨酸（Phe）577→酪氨酸（Tyr）置换,且后二种变异存在于所有青霉素和头孢类中介和耐药株中。20/25株青霉素耐药株存在PBP2B保守序列KTG附近Ala624→Gly,包含Ala624→GlySp组青霉素、头孢呋新、阿莫西林等抗生素平均MIC值明显高于不包含这一置换的Sp组。在青霉素MIC≥0.5mg/L的菌株中均同时存在PBP1A和PBP2B的变异。结论β-内酰胺类抗生素对肺炎链球菌临床分离株MIC值与PBP1A和PBP2B编码青霉素结合活性区域的保守序列中或附近的氨基酸置换有关。     

肺炎链球菌青霉素结合蛋白2B、1 A、2X氨基酸置换对β内酰胺类抗生素最小抑菌浓度的影响

目的 分析肺炎链球菌(SP)青霉素结合蛋白(PBP)2B、1A、2X保守序列氨基酸置换对其β内酰胺类抗生素抗菌活性的影响.方法 用E-test法测定59株SP对6种β内酰胺类抗生素最小抑菌浓度(MIC),并埘其青霉素结合蛋白基因(pbp)2b、1a、2x的编码片段进行套式PCR扩增和基因测序,根据氨基酸置换类型进行分型.PBP2B分为:PBP2B I型(无变异);PBP2B Ⅱ型[谷氨酰胺432→亮氨酸和(或)苏氨酸445/451→丙氨酸/丝氨酸、谷氨酸481→甘氨酸,其中1株存在431/432脯氨酸的插入];PBP2B Ⅲ型(兼具PBP2BⅡ型变异及内氨酸624→甘氨酸).PBP1A编码基因变异分为:PBPIA I型(无变异);PBP1A Ⅱ型(苏氨酸574→天冬氨酸,丝氨酸575→苏氨酸,谷氨酰胺576→甘氨酸,苯丙氨酸577→酪氨酸,即574TSQF→NTGY);PBP1A Ⅲ型(574TSQF→NTGY及苏氨酸371→丙氨酸/丝氨酸、脯氨酸432→苏氨酸).PBP2X编码基因变异分为:PBP2X I型(无变异);PBP2XⅡ型(组氨酸394→亮氨酸或苏氨酸338→丙氨酸);PBP2X Ⅲ型(苏氨酸338→丙氨酸,异亮氨酸371→苏氨酸、精氨酸384→甘氨酸和亮氨酸546→缬氨酸);PBP2X IV型(兼具PBP2XⅢ型变异及蛋氨酸339→苯丙氨酸,蛋氨酸400→苏氨酸).分析各型氨基酸置换与抗生素MIC的关系.结果 59株SP对6种β内酰按类抗生素的药敏分布(敏感株、中介株、耐药株)分别为青霉素(12、29、18);阿莫西林(49、9、1);头孢呋辛(16、16、27);头孢曲松(47、1、11);头孢嚷肟(47、3、9);亚胺培南(49、10、0).PBP2BⅢ型、PBPlAⅢ型及PBP2XⅣ、PBP2X IV型SP对β内酰胺类抗生素的不敏感株(中介株+耐药株)明显增多,SP的β内酰胺类抗生素MIC_(50)明显升高.结论 PBP2B、1A、2X保守序列中或附近的氨基酸置换可明显升高SP的β内酰胺类抗牛素MIC值.     

重组融合蛋白IL-18对金黄色葡萄球菌感染小鼠免疫相关炎症因子表达的影响

目的观察重组融合蛋白IL-18对金黄色葡萄球菌(SA)感染后小鼠体内免疫相关炎症因子表达的影响,探讨IL-18在体内防御SA感染的可能机制。方法将40只SPF级雌性BLAB/c小鼠随机分为对照组、SA感染组、免疫组和干预组。采用鼻腔接种SA液建立SA感染小鼠模型,免疫组和干预组均在建模前以IL-18滴鼻,但免疫组不予SA接种,对照组以PBS进行替代处理。采用ELISA法测定各组小鼠血液及支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子(TNF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、Ig M的浓度。实时荧光定量PCR技术检测各组小鼠肺组织中巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1α和MIP-2βm RNA表达水平。结果与对照组相比,SA感染组和免疫组小鼠血清及BALF中IL-4、G-CSF、Ig M浓度,以及肺组织中MIP-1α、MIP-2βm RNA含量均升高(P0.05);SA感染组小鼠血清及BALF中IFN-γ水平降低,TNF水平升高(P0.05);免疫组小鼠血清及BALF中IFN-γ水平升高(P0.05)。与SA感染组相比,干预组小鼠血清及BALF中IL-4、IFN-γ、G-CSF、Ig M浓度,以及肺组织中MIP-1αm RNA含量均升高,血清及BALF中TNF水平,以及肺组织中MIP-2βm RNA含量均降低(P0.05)。除血清IFN-γ水平外,其余上述指标在干预组小鼠中均高于对照组(P0.05)。结论重组融合蛋白IL-18经黏膜免疫小鼠,可改变SA感染后小鼠血清及BALF中炎症因子,以及肺组织中MIP-1α、MIP-2βm RNA的表达水平,从而促进机体的抗感染免疫反应,增强了机体清除病原体的能力。     

骨形成蛋白4对单侧输尿管梗阻小鼠肾间质巨噬细胞聚集及核因子-κB信号通路的影响

目的 探讨骨形成蛋白4(bone morphogenetic proteins,BMP4)对单侧输尿管梗阻(uni-lateral ureteral obstruction,UUO)小鼠肾间质巨噬细胞聚集及核因子-κB信号通路的影响.方法 将雄性C57BL/6小鼠随机分为腹腔注射生理盐水假手术组(n=8)、腹腔注射生理盐水UUO组(n=8)、腹腔注射anti-BMP4假手术组(n=8)、腹腔注射anti-BMP4 UUO组(n=8).各组于手术日起每天给予anti-BMP4[200 μl/(g·体重)]或生理盐水腹腔注射.于术后7 d处死取材.免疫组织化学观察肾组织巨噬细胞标记物CD68、p-P65表达;Western印迹检测肾组织p-P65蛋白表达.结果 免疫组织化学显示,anti-BMP4-假手术组和生理盐水假手术组CD68、p-P65表达差异无统计学意义(P均>0.05);与生理盐水UUO组比较,anti-BMP4 UUO组CD68、p-P65表达均明显降低(P均<0.05).同样,Western印迹显示,anti-BMP4-假手术组和生理盐水假手术组p-P65蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);与生理盐水UUO组比较,anti-BMP4 UUO组p-P65蛋白明显降低(P<0.05).结论 BMP4参与梗阻性肾病肾间质炎症过程,这一过程可能通过激活核因子-κB信号通路起作用.     

不同剂量1,25-(OH)_2D_3对哮喘小鼠肺内高迁移率族蛋白B1及IL-17表达的影响

目的观察不同剂量1,25-二羟基维生素D3[1,25-(OH)2D3]对哮喘小鼠肺内高迁移率族蛋白B1(HMGB1)及IL-17表达的影响。方法将50只BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,每组10只。卵清蛋白混合液致敏并雾化吸入建立哮喘小鼠模型,低、中、高剂量组在每次激发前分别按1、4、10μg/kg给予腹腔注射1,25-(OH)2D3混合液,对照组和哮喘组以生理盐水替代。采用苏木精-伊红染色观察小鼠气道结构变化;免疫组化染色观察HMGB1、IL-17蛋白表达的变化,RT-PCR检测HMGB1及IL-17m RNA水平的表达变化。结果哮喘组气道壁厚度、HMGB1和IL-17的m RNA及蛋白表达水平均明显高于对照组(P0.05);低、中剂量组气道壁厚度、HMGB1和IL-17的m RNA及蛋白表达水平均明显低于哮喘组,且上述指标在中剂量组均明显低于低剂量组(P0.05);但高剂量组中气道壁厚度、HMGB1和IL-17的m RNA及蛋白表达水平均高于哮喘组(P0.05)。结论 HMGB1及IL-17可能参与哮喘气道重塑过程;适量1,25-(OH)2D3能改善哮喘小鼠气道重塑,大剂量1,25-(OH)2D3可加重气道重塑。     

吸入性糖皮质激素对哮喘小鼠肺组织HMGB1、IL-1β表达的影响北大核心CSCD

目的了解高迁移率族蛋白B1(HMGB1)及白介素-1β(IL-1β)在小鼠哮喘模型肺组织表达及分布以及吸入性糖皮质激素(ICS)对其影响。方法 SPF级雄性Balb/c小鼠随机分为对照组、哮喘组及布地奈德组,每组24只,分别于1、2、3、4周时每组各处死6只。RT-PCR法检测各组肺组织HMGB1 mRNA表达水平,免疫组化标记HMGB1、IL-1β在肺组织的分布,用Image-Pro Plus图像分析系统分析IL-1β的灰度值。结果 HMGB1在对照组小鼠肺组织呈低表达,哮喘组第2周出现高峰,而布地奈德组第1周出现高峰,各组小鼠之间以及在第1～4周不同时间点之间,HMGB1表达的差异均有统计学意义(P均<0.01);IL-1β的免疫组化标记在对照组小鼠肺组织中少,而哮喘组明显;布地奈德组则介于两者之间。肺组织IL-1β灰度值在哮喘组和布地奈德组小鼠中,从第1～4周,逐渐增加,各时间点差异有统计学意义(P均<0.05);两组在不同时间点均低于对照组,差异有统计学意义(P均<0.01);哮喘组在不同时间点又都低于布地奈德组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 HMGB1可能参与哮喘气道炎症,作用机制可能不同于IL-1β。     

缺氧缺血性脑病新生儿血清巨噬细胞炎性蛋白-1α水平变化的意义

目的 探讨巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)在缺氧缺血性脑病(HIE)新生儿发病机制中的作用.方法 HIE新生儿34例.分为轻度(18例)和中重度组(16例).分别于生后24、72 h及7 d取其静脉血2 mL,应用双抗体酶联免疫吸附试验(ABC-ELISA)测定其血清MIP-1α水平.对照组20例,生后24 h取血,同样方法测定其血清MIP-1α水平.采用SPSS 11.0软件进行处理.结果 出生24 h轻度HIE组血清MIP-1α水平[12.47±2.51) ng/L]明显高于对照组[8.63±2.63) ng/L] (t=2.19 P＜0.05);中重度24、72 h组血清MIP-1α水平明显高于轻度组(t=-3.52,-2.89 P＜0.01,0.05);生后72 h与对照组比较无显著差异(Pa>0.05).结论 MIP-1α作为趋化因子参与HIE的发病机制,检测血清MIP-1α有助于HIE的病情判断和预后评估.     

卡维地洛对体外柯萨奇病毒B3致心肌细胞凋亡与Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的探讨卡维地洛对体外柯萨奇病毒B3(CVB3)致心肌细胞凋亡的抑制作用及其机制。方法采用差速贴壁法培养原代Wistar乳鼠心肌细胞。实验分为正常对照组、病毒组、卡维地洛组及美托洛尔组。正常对照组仅加入不含血清的DMEM培养液,后3组于CVB3感染心肌细胞后分别加入不含血清的DMEM培养液、无血清培养基配制的卡维地洛、美托洛尔溶液。72h后在倒置相差显微镜下观察各组心肌细胞的形态、搏动速率;采用黄嘌呤氧化酶法测定其心肌细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法测定其心肌细胞培养液中丙二醛(MDA)水平,流式细胞术检测其心肌细胞凋亡率,免疫细胞化学法检测其心肌细胞内Bcl-2及Bax蛋白表达水平。结果1.与病毒组比较,卡维地洛组心肌细胞搏动速率明显提高(P<0.05)、凋亡率明显降低(P<0.05),心肌细胞培养液中SOD活性显著升高(P<0.05)、MDA水平明显降低(P<0.05);美托洛尔组与病毒组比较,心肌细胞搏动速率、凋亡率、心肌细胞培养液中SOD活性、MDA水平均无统计学差异(Pa>0.05);2.与病毒组及美托洛尔组比较,卡维地洛组心肌细胞内Bcl-2蛋白表达增多,而Bax蛋白表达减...     

水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物对脂多糖诱导小鼠巨噬细胞核因子-κB活化及核因子-κB抑制蛋白α磷酸化的影响

目的研究水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物(SPC)对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞核因子-κB(NF-κB)活化及NF-κB抑制蛋白α(IκBα)磷酸化的影响。方法提取健康6~8周龄昆明种小鼠腹腔巨噬细胞,培养成活后调细胞水平为2×105mL-1,对照组加入等量9g/L盐水,LPS组加入LPS,使其终水平10μg/mL,LPS刺激细胞24h,SPC干预组加入不同水平SPC,干预细胞2h后加入终水平为10μg/mLLPS刺激24h。免疫细胞化学法观测NF-κB激活、IκBα磷酸化的表达。结果对照组小鼠巨噬细胞细胞核内NF-κBp65水平很低,LPS组细胞核NF-κBp65水平显著高于对照组(P<0.01),不同水平SPC干预组小鼠巨噬细胞NF-κBp65水平降低,即NF-κBp65表达减少,且呈水平依赖性降低(P<0.01)。细胞质内磷酸化的IκBα表达同胞核NF-κBp65水平变化基本一致。结论SPC抑制LPS诱导的小鼠巨噬细胞内NF-κB活化,可能是通过抑制IκBα磷酸化及降解途径完成。     

含jumonji结构域的蛋白2B和缺氧诱导因子1α在儿童非霍奇金淋巴瘤组织中的表达及意义北大核心CSCD

目的探讨含jumonji结构域的蛋白2B(jumonji domain-containing protein 2B,JMJD2B)和缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-lα)在儿童非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma,NHL)组织中的表达和意义。方法应用免疫组化检测46例NHL儿童(观察组)和24例反应性增生儿童(对照组)淋巴结组织标本中JMJD2B和HIF-1α的表达,分析JMJD2B和HIF-1α与NHL患儿临床病理特征和预后的关系,以及在NHL组织中JMJD2B和HIF-1α表达的相关性。结果观察组JMJD2B(87%vs 21%)和HIF-1α(83%vs 42%)表达阳性率均高于对照组(P<0.05)。JMJD2B和HIF-1α表达与NHL患儿血清乳酸脱氢酶水平和国际预后指数危险度相关(P<0.05)。JMJD2B与HIF-1α在NHL患儿组织中的表达呈正相关(rs=0.333,P=0.024)。结论JMJD2B和HIF-1α在儿童NHL组织中表达增高,二者在儿童NHL发生发展过程中可能起协同作用;JMJD2B可作为儿童NHL辅助诊断、评估病情、指导治疗、评估预后的新指标.     

透明质酸酶对早产兔生发基质-脑室内出血后神经胶质抗原2及髓鞘碱性蛋白表达的影响北大核心CSCD

目的探讨透明质酸酶(HAase)对生发基质-脑室内出血(GM-IVH)早产兔脑组织的神经保护作用。方法将80只孕29 d新生新西兰大白兔采用随机数字表法分为正常组、GM-IVH对照组、HAase治疗组。GM-IVH对照组和HAase治疗组予50 g/L丙三醇腹腔注射,诱发GM-IVH;对照组予同等剂量9 g/L盐水。颅脑超声筛查GM-IVH情况。HAase治疗组经前囟侧脑室注射透明质酸酶,GM-IVH对照组予同等剂量9 g/L盐水。分别于出生3、7、14 d处死并留取脑组织。采用免疫组织化学方法检测神经胶质抗原2(NG2)的表达,蛋白印记法检测髓鞘碱性蛋白(MBP)的表达。结果3组早产兔随着时间的推移,NG2的表达水平逐渐降低[正常组、GM-IVH对照组、HAase治疗组NG2在第3、7、14天依次为(62.65±33.58)×10^4、(15.61±4.22)×10^4、(13.54±4.51)×10^4;(54.58±25.48)×10^4、(48.91±22.49)×10^4、(7.18±2.28)×10^4;(148.13±27.30)×10^4、(88.38±14.55)×10^4、(77.98±18.96)×10^4],同一时间点NG2表达水平HAase治疗组均高于GM-IVH对照组,3组在任何时间点两两比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。3组新生早产兔MBP表达水平随日龄增加而增加[正常组、GM-IVH对照组、HAase治疗组MBP在第3、7、14天依次为(0.30±0.22)×10^3、(1.91±0.43)×10^3、(5.67±2.14)×10^3;(0.87±0.12)×10^3、(1.15±0.22)×10^3、(2.54±0.69)×10^3;(0.91±1.01)×10^3、(2.25±0.66)×10^3、(3.40±1.10)×10^3],其中正常组、HAase治疗组在出生后任何时间点两两比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论经HAase治疗后,可在一定程度上提高早产兔NG2、MBP的表达,促进少突胶质细胞发育和髓鞘形成。     

3T3-L1脂肪细胞分化中促酰化蛋白对脂肪因子肾上腺髓质素mRNA表达的影响

目的 研究3T3-L1脂肪细胞分化过程中脂肪因子肾上腺髓质索(AM)mRNA表达变化及促酰化蛋白(ASP)对细胞分化过程中AM mRNA表达的影响,探讨ASP在脂肪代谢中的作用.方法 1.应用反转录(RT) -PCR法检测诱导分化4个时点(0d、1d、2d、3d)的3T3-L1脂肪细胞中AM mRNA的表达水平;2.对诱导分化过程中不同时间点(0h、12 h、24h、48 h)的3T3-L1脂肪细胞给予适合浓度的ASP处理,并设立相应空白对照,应用RT-PCR法检测细胞中AM mRNA的表达.结果 (1)脂肪细胞诱导分化各时间点(0d、1d、2d、3 d)AM mRNA均明显表达,且表达水平呈时间依赖性递减;(2)0 h、12 h和24h3个时点ASP组细胞中AMmRNA表达水平较空白对照组均显著下降(P＜0.05,0.01),而48 h时间点ASP组细胞中AM mRNA表达水平与空白对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 ASP促成脂作用可能与其调节脂肪细胞分化过程中脂肪因子AM mRNA表达密切相关.