银杏总黄酮通过调节自噬减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤

摘要 目的:探讨银杏总黄酮是否可以通过调节自噬减轻心肌缺血再灌注（I/R）损伤以及可能的机制。方法：采用大鼠心肌I/R模型（缺血30min,再灌注4h）,雄性SD大鼠30只随机分为三组：假手术组(SO组,n=10)、缺血再灌注组（I/R组,n=10）和银杏总黄酮治疗组（YLTF I/R组,n=10,Yinxing leaf total flavonoid: 100mg/kg,造模前灌胃7天）。检测心肌损伤标记物肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）和肌钙蛋白I（cTnI）;检测氧化应激水平（丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）水平）;检测自噬蛋白beclin-1和LC3水平。结果：与SO组比较,I/R可诱导心肌损伤标记物（CK、LDH和cTnI）表达升高,氧化应激水平的增加（MDA表达增加,SOD表达降低）和自噬的过度激活（LC-3-II/I比值增加,beclin-1表达增加）;与I/R比较,银杏总黄酮可显著的降低心肌损伤标记物（CK、LDH和cTnI）的表达、氧化应激水平（MDA表达降低,SOD表达增加）和自噬的过度激活（LC-3-II/I比值降低,beclin-1表达减低）。结论：1）银杏总黄酮可以通过抑制过度自噬减轻心肌I/R损伤,这可能与其抑制氧化应激作用有关。     

HIF-1α在七氟烷预处理减轻大鼠心肌缺血-再灌注损伤中的作用

目的 研究低氧诱导因子1α(HIF-1α)在七氟烷预处理减轻离体大鼠心脏缺血再灌注(I-R)损伤中的作用.方法 84只雄性SD大鼠随机均分为七组:假手术组(Sham组)、I-R组、七氟烷预处理组(S组)、七氟烷预处理十二甲氧乙二酰甘氨酸(DMOG)组(S+D组)、七氟烷预处理+3-(5 '-羟基甲基-2’-呋喃基)-1-苯基吲哚(YC-1)组(S+Y组)、DMOG组(D组)和YC-1组(Y组).应用Langendorff离体心脏灌流装置建立大鼠心肌I-R损伤模型,连续测定心功能指标,并取心肌测HIF-1α及半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达水平及HIF-1α目的基因的表达水平.结果 与I-R组相比,S组、S+D组和S+Y组I-R损伤心功能的各项指标明显改善(P＜0.05),HIF-1α表达水平显著升高(P＜0.05),Caspase-3蛋白表达水平显著下降(P＜0.05).结论 HIF-1α促进七氟烷预处理对离体大鼠心脏I-R损伤的保护作用.     

基于细胞自噬的荭草苷抗心肌缺血/再灌注损伤的机制研究

目的本研究主要探讨荭草苷抗心肌缺血/再灌注损伤的保护作用与细胞凋亡和细胞自噬的关系。方法采用Langendorff法,建立大鼠离体心脏缺血/再灌注模型,缺血30min,再灌注120 min;随机将Wistar大鼠分为正常对照组、模型组、不同剂量荭草苷组(1.0、2.0、4.0 mg·kg~(-1))、自噬抑制剂组(2.0 mg·kg~(-1)荭草苷+渥曼青霉素)以及阳性对照药白藜芦醇组;采用多道生理记录仪采集血流动力学指标,全自动生化仪检测灌流液中心肌酶活性,电镜观察大鼠心肌细胞超微结构改变及自噬体,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,Western blot法检测心肌细胞中自噬相关蛋白LC3和Beclin1水平。结果与模型组比较,荭草苷可明显改善大鼠血流动力学指标,降低乳酸脱氢酶和肌酸激酶水平,明显改善大鼠心肌细胞超微结构变化,同时能降低心肌细胞凋亡水平,增加细胞内自噬体数量以及自噬相关蛋白LC3Ⅱ和Beclin 1表达水平。结论荭草苷对大鼠心脏缺血/再灌注损伤具有明显保护作用,其机制可能与降低心肌细胞凋亡及增强细胞自噬有关。     

白藜芦醇预处理对心肌缺血/再灌注损伤的保护作用

目的:观察白藜芦醇预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用.方法:45只雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌组及白藜芦醇预处理组,结扎左冠状动脉制作心肌缺血再灌注模型,比较各组左室最大收缩压(LVSP)、左室等容收缩/舒张期压力上升最大速率(LVdP/dtmax),心肌一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量变化及心肌梗死范围.结果:白藜芦醇预处理组LVSP、LVdP/dtmax较缺血再灌组显著升高,心肌NO含量显著升高、MDA含量则显著降低,心肌梗死范围明显减小.结论:白藜芦醇预处理对心肌缺血再灌注损伤有明显保护作用,其机制与白藜芦醇抗氧化、清除自由基及增加NO合成有关.     

小檗碱对心肌缺血再灌注损伤大鼠线粒体自噬及对PINK1/Parkin通路的影响

目的 探讨小檗碱对心肌缺血再灌注损伤大鼠线粒体自噬及PTEN诱导激酶1(PTEN induced putative kinase 1,PINK1)/帕金森病蛋白(Parkin)通路的影响.方法 建立心肌缺血再灌注损伤大鼠模型,随机分组为模型组、小檗碱低、高剂量(75、150 mg/kg)组,自噬抑制剂三甲基腺嘌呤(3-...     

表没食子儿茶素没食子酸酯调控自噬抗心肌缺血再灌注损伤

目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)调控自噬抗心肌缺血再灌注损伤的作用。方法64只SD大鼠随机分为假手术、模型、3-甲基腺嘌呤(3-MA,15 mg·kg-1)、EGCG(20 mg·kg-1)四组(n=8),各组于造模前20 min舌下静脉给予相应试剂,采用左冠状动脉前降支结扎法制备大鼠心肌缺血再灌注模型,按试剂盒说明书检测缺血30 min及缺血30 min-再灌注1 h各组肌酸激酶同工酶(CK-MB)、总抗氧化力(T-AOC)、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)的含量,以Western-blot法检测心肌微管相关蛋白轻链3蛋白-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、Beclin-1、雷帕霉素靶蛋白(m TOR)的表达。结果自噬在心肌缺血期即发生,再灌注时进一步加强;与模型组相比,EGCG组心肌缺血-再灌注不同时段的T-AOC能有效提高,CK-MB及i NOS的含量降低,LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达下调,m TOR蛋白表达上调(P<0.05);与3-MA组相比,EGCG组大鼠血清i NOS及CK-MB降低,T-AOC含量提高,LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达下调,m TOR蛋白量上调(P<0.05)。结论 EGCG对心肌的保护作用可能与提高抗氧化力,降低i NOS有关;EGCG预处理可能通过短暂诱导心肌缺血期自噬发生,抑制再灌注时段自噬过度表达而减轻心肌缺血再灌注损伤。     

盐酸纳美芬对心肌缺血再灌注大鼠缺氧诱导因子 1α/B细胞淋巴瘤 -2/E1B-19kDa相互作用蛋白 3通路及心肌自噬的影响

目的 探讨盐酸纳美芬对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠缺氧诱导因子1α(Hif-1α)/B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)/E1B-19kDa相互作用蛋白3(BNIP3)通路及心肌自噬的影响.方法 2020年3—4月采用结扎冠状动脉左前降支法复制心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠模型,将造模成功的大鼠使用随机数字表法分成模型组、盐酸纳美芬低、中、高(10μg/kg、15μg/kg、20μg/kg)剂量组和氯喹组(阳性对照,0.02 g/kg),每组15只,另取15只假手术组大鼠作为对照.模型组和假手术组给予等剂量生理盐水,其余各组给予相对应剂量药物,每天1次,连续3 d.给药结束24 h后,氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测心肌梗死面积;苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织病理学变化;二氯荧光素双醋酸盐(DCFH-DA)法检测心肌组织中活性氧水平;蛋白质印迹法(Western blotting)检测心肌组织中自噬相关蛋白Beclin1、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ及通路蛋白Hif-1α、BNIP3表达水平.结果 假手术组大鼠心肌组织结构完整,无明显病理变化.与假手术组相比,模型组大鼠心肌组织结构异常、心肌细胞坏死、心肌损伤严重,心肌梗死面积、活性氧水平、Beclin1、LC3-Ⅱ、Hif-1α、BNIP3蛋白表达水平和LC3-Ⅱ/Ⅰ比值显著升高(P<0.05),其中Hif-1α和BNIP3蛋白表达水平分别为0.92±0.11和0.96±0.12,显著高于假手术组的0.10±0.02和0.08±0.01;与模型组相比,盐酸纳美芬低、中、高剂量组大鼠心肌组织病理损伤依次减轻,心肌梗死面积、活性氧水平、Beclin1、LC3-Ⅱ、Hif-1α、BNIP3蛋白表达水平和LC3-Ⅱ/Ⅰ比值依次降低(P<0.05),其中盐酸纳美芬高剂量组Hif-1α和BNIP3蛋白表达水平分别为0.17±0.03和0.12±0.03,显著低于盐酸纳美芬中剂量组的0.29±0.04和0.31±0.05,盐酸纳美芬中剂量组显著低于盐酸纳美芬低剂量的0.58±0.07和0.52±0.08.盐酸纳美芬高剂量组与氯喹组大鼠各项指标差异无统计学意义(P>0.05).结论 盐酸纳美芬可能通过抑制Hif-1α/BNIP3通路,减弱MIRI大鼠心肌自噬,缓解心肌损伤.     

丹参酮ⅡA治疗肾缺血-再灌注损伤及对缺氧诱导因子-1α表达的影响

目的探讨丹参酮ⅡA治疗肾缺血-再灌注损伤及其对缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达的影响。方法选用Wistar大鼠66只,随机分为正常组、缺血组、缺血-再灌注组（1h、3h、5h）、丹参酮ⅡA组（1h、3h、5h）及假手术组（1h、3h、5h）。每组6只。各组均先切除右肾,取左肾研究。取左肾部分皮髓质用4%的多聚甲醛固定,进行切片HE染色及免疫组化检测各组肾HIF-1α蛋白的表达水平,另一部分采用荧光定量PCR检测各组肾HIF-1α mRNA的表达水平。取左肾后立即通过下腔静脉采血,检测MDA、TNF-α、Urea及Scr。结果 （1）Urea、HIF-1α蛋白及HIF-1α mRNA分别在假手术组1h、3h、5h增高,与正常组比较,差异有显著意义（P〈0.05）。（2）Urea、Scr、MDA、TNF-α分别在正常组、缺血组、缺血-再灌注组（1h、3h、5h）增高（P〈0.05）。HIF-1α mRNA在缺血组呈高表达,缺血-再灌注组（1h、3h、5h）呈低表达。HIF-1α蛋白在缺血组和缺血-再灌注组（1h、3h、5h）均呈高表达。（3）Urea、Scr、MDA、TNF-α、HIF-1α蛋白表达水平在丹参酮ⅡA组（1h、3h、5h）均较缺血-再灌注组降低（P〈0.05）,而HIF-1α mRNA表达水平在丹参酮ⅡA组（1h、3h、5h）增高（P〈0.05）。（4）HE染色：与正常组比较,假手术组、缺血组变化不明显,其余各组均有不同程度肾小球、肾间质充血,肾小管上皮细胞水肿、细胞内玻璃样变及脂肪变性。缺血-再灌注组肾小管腔内蛋白管型明显。丹参酮ⅡA组仅个别标本存在蛋白管型,水肿减轻。结论丹参酮ⅡA可减轻肾缺血-再灌注损伤,可增强HIF-1α mRNA的表达和降低HIF-1α蛋白的表达。     

缺氧诱导因子-1在宫颈癌发病机制中的作用

缺氧诱导基因所表达的中心调节为缺氧诱导因子-1（HIF-I）,HIF-1与肿瘤有密切关系,主要因其表达受多种因素的调节,尤其是缺氧、肿瘤基因等,其可调控多种靶基因的转录,如肿瘤血管生成、糖类代谢等,促进肿瘤的浸润、生长及转移。近年来,在肿瘤学研究中,HIF-1成为研究的一个热点。本文将妇科肿瘤——宫颈癌中HIF-1发病机制的作用及其与宫颈癌关系的研究现状作一概述。     

银杏总黄酮通过调节自噬减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的研究

目的 探讨银杏总黄酮是否可以通过调节自噬减轻心肌缺血再灌注(I/R)损伤以及可能的机制。方法 采用大鼠心肌I/R模型(缺血30 min,再灌注4 h),雄性SD大鼠30只随机分为三组:假手术组(SO组,n=10)、缺血再灌注组(I/R组,n=10)和银杏总黄酮治疗组(YLTF+I/R组,n=10,100 mg·kg-1,造模前灌胃7 d)。检测心肌损伤标记物肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)和肌钙蛋白I(cTnI);检测氧化应激水平,即丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平;检测自噬蛋白beclin-1和LC3水平。结果 与SO组比较,I/R可诱导心肌损伤标记物(CK、LDH和cTnI)表达升高,氧化应激水平的增加(MDA表达增加,SOD表达降低)和自噬的过度激活(LC3-Ⅱ/Ⅰ比值增加,beclin-1表达增加);与I/R比较,银杏总黄酮可显著的降低心肌损伤标记物(CK、LDH和cTnI)的表达、氧化应激水平(MDA表达降低,SOD表达增加)和自噬的过度激活(LC3-Ⅱ/Ⅰ比值降低,beclin-1表达减低)。结论 银杏总黄酮可以通过抑制过度自噬减轻心肌I/R损伤,这可能与其抑制氧化应激作用有关。     

重组人脑利钠肽对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌自噬的影响

目的 研究重组人脑利钠肽(rhBNP)对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌自噬和Toll样受体-4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路的影响。方法 将SD大鼠随机分为对照组、模型组和实验组,每组10只。模型组和实验组大鼠采用冠状动脉前降支结扎法构建MIRI大鼠模型。实验组大鼠在建模前1 d尾静脉注射1.5μg·kg^-1rhBNP,模型组和对照组大鼠在相同时间尾静脉注射等量生理盐水。用超声仪检测大鼠心功能指标左心室射血分数(LVEF)和左心室短轴缩短率(LVFS),用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)法检测大鼠心肌梗死面积,用试剂盒检测大鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,用蛋白质印迹(Western blot)法检测心肌组织中微管相关蛋白1轻链3(LC3)、TLR4和NF-κB蛋白表达水平。结果 对照组、模型组和实验组大鼠LVEF水平分别为(79.95±5.74)%,(47.68±3.17)%,(62.74±4.69)%,LVFS水平分别为(52.30±3.88)%,(31.75±2.01)%,(41.88±3...     

缺氧诱导因子-1/2在肝细胞癌中的研究进展

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是全球范围内高发性恶性肿瘤之一,目前对于肝癌的临床治疗非常的有限.仅有的一线治疗药物索拉菲尼(Sorafenib)和乐伐替尼(Lenvatinib)也未能显著的延长患者生存期.因此,寻找新的治疗靶点尤为迫切.大量数据表明,缺氧是实体瘤的一个重要特征,在...     

肾交感消融通过抑制氧化应激和过度自噬减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的探讨肾交感神经消融(RSD)对大鼠心肌缺血再灌注(IR)损伤的影响及可能机制。方法 18只雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组(SO组,n=6),IR组(n=6)和RSD+IR组(n=6)。Elisa法检测心肌组织去甲肾上腺素(iNE)浓度和心肌损伤标记物肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、肌钙蛋白I(cTnI);生化法检测心肌超氧化物歧化酶(SOD)活性、总抗氧化能力(T-Aoc)和丙二醛(MDA)表达;WB法检测自噬蛋白Beclin-1和LC3-Ⅱ。结果与SO组比较,IR组中iNE浓度显著增加、心肌损伤标记物CK-MB、cTnI显著增加,心肌组织MDA表达显著增加,SOD、T-Aoc活性减低,自噬蛋白Beclin-1和LC3-Ⅱ表达显著增加。与IR组比较,RSD可以显著抑制心肌组织iNE表达、减轻心肌损伤、降低氧化应激水平、增加抗氧化能力、抑制心肌细胞过度自噬。结论 RSD是心交感消融的有效方法,可以通过抑制氧化应激和自噬,减轻心肌IR损伤。     

自噬在肠缺血再灌注损伤中的研究进展

肠缺血/再灌注损伤(intestinal ischemia reperfusion injury, Ⅱ/RI)是临床常见的病理过程,缺血再灌注导致肠黏膜及远隔器官损伤,诱发全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome, SIRS)和多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome, MODS)。自噬是机体应激条件下的防御调控机制,具有维持细胞质、蛋白质和细胞器稳态的功能。自噬机制复杂,由进化上保守的自噬相关基因(autophagy-related gene, ATG)编码的蛋白质复合物以及多种信号分子、通路协同调控。研究发现,自噬参与肠缺血再灌注损伤的过程,因此,揭示自噬在Ⅱ/RI中的作用机制,可为Ⅱ/RI的防治提供依据。     

内质网应激相关细胞自噬与心肌缺血再灌注损伤的研究现状

自噬是细胞对自身长寿命蛋白、冗余蛋白或破坏的细胞器进行降解并再利用的过程。内质网应激是细胞的一种适应性机制,通过未折叠蛋白反应等细胞活动来维持内质网的稳态。这两者都具有双刃剑的作用:即适度的激活可以保护细胞;但过度激活则导致细胞死亡。内质网应激可以诱导细胞自噬,且与心肌缺血再灌注损伤关系密切。本文对内质网应激相关自噬在心肌缺血再灌注损伤中的作用机制及研究进展进行综述。     

巯基氧化在心肌缺血再灌注损伤中的作用

心肌缺血再灌注时，氧自由基的生成量远远超过了机体抗经防御系统的清除能力，氧自由基对各种钙离子调节蛋白的疏基具有氧化修饰作用，使心肌钙离子的正常膜转运过程遭到破坏，含巯基化合物如还原性谷胱甘肽、二硫代苏糖醇、Ｎ－乙酰半胱氨酸等具有直接清除氧自由基的作用，也是各种膜结合酶蛋白巯基和通道蛋白巯基的良好保护剂，是一类具有研究价值的新型抗心肌缺血药物。     

菠萝蛋白酶预处理对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的保护作用

目的 探讨菠萝蛋白酶(Br)对大鼠心肌缺血-再灌注(I-R)损伤的保护作用.方法 32只雄性SD随机均分4组:A组假手术对照;其他3组开胸穿线阻断左前降支(LAD)冠状动脉30min后再灌注2 h建立心肌I-R损伤模型.B组缺血前连续15 d腹腔注射磷酸盐缓冲液(PBS)预处理;C组改用含Br的PBS腹腔注射预处理;D组仅结扎LAD 30min,I-R 2 h.连续心电图监测ST段改变,再灌注2 h末抽血检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)与乳酸脱氢酶(LDH),用伊文思蓝及2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)双重染色方法测定心肌梗死(MI)及缺血面积,TUNEL法测心肌细胞凋亡指数(AI),Western blot法检测磷酸化蛋白激酶B(P-AKT)表达.结果 C组CK-MB、LDH、MI面积和心肌细胞AI明显小于B、D组,而P-AKT的表达高于B、D组(P<0.01).结论 Br预处理可通过增加P-AKT的磷酸化而对I-R心肌起保护作用.     

原花青素对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的保护作用

目的探讨原花青素对大鼠心肌缺血-再灌注损伤引起的氧化应激损伤的保护作用。方法建立心肌缺血-再灌注模型。再灌注结束后采血,测定丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH),测量心肌梗死面积。结果原花青素能明显降低血浆中MDA、AST和LDH的含量(P<0.05),提高SOD活性(P<0.05),减少心肌梗死面积(P<0.05)。结论原花青素对大鼠心肌缺血-再灌注损伤引起的氧化应激损伤的有保护作用。     

银杏叶提取物对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的保护作用

目的探讨银杏叶提取物对大鼠心肌缺血-再灌注损伤引起的氧化应激损伤的保护作用。方法将SD大鼠随机分为3组,假手术(Sham)组、缺血-再灌注损伤(MIR)组和银杏叶提取物组,每组10只。建立心肌缺血-再灌注模型。银杏叶提取物在造模前给药14d。再灌注结束后采血,测定丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、乳酸脱氢酶同工酶1(LDH1),测量心肌梗死面积。结果银杏叶提取物能明显降低血浆中AST、LDH、LDH1和MDA的含量,提高SOD活性,减少心肌梗死面积。结论银杏叶提取物对大鼠心肌缺血-再灌注损伤引起的氧化应激损伤的有保护作用。     

氯化锂对大鼠急性心肌缺血-再灌注损伤的保护作用

目的 探讨氯化锂(LiCl)对大鼠急性心肌缺血-再灌注(I-R)损伤的保护作用.方法 60只SD大鼠随机平均分为4组:假手术(A)组,I-R(B)组.LiCl干预(C)组,L-精氨酸甲酯(L-NAME)+LiCl干预(D)组.实验前7 d开始,D组腹腔注射L-NAME 30 mg·kg-1·d-1.经左侧肋间切口进胸.C和D组术前经颈静脉置管注射LiCl 15 mg/kg,B、C、D组行冠状动脉左前降支(LAD)结扎术.缺血60 min,再灌注240 min.记录心率和心电图变化,实验结束时检测血浆肌酸激酶同工酶(CK-MB)、羟丁酸脱氢酶(HBDH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)活力及心肌组织中MDA含量、SOD活力;在光镜和电镜下比较组织形态学变化.结果 与B组相比,C组SOD活力显著增高,MDA含量、再灌注心律失常发生及血HBDH CK-MB水平显著降低(P<0.05)}光镜和电镜下C组心肌病理损害较B组明显减轻.结论 LiCl可能通过减轻氧化应激途径对大鼠心肌急性I-R损伤起保护作用.