以金色分枝杆菌为模式菌株筛选抗结核活性化合物可行性研究

目的 评估以金色分枝杆菌作为结核分枝杆菌模式菌株筛选抗结核抑制剂的可行性.方法 以结核分枝杆菌标准菌株H37Rv建立细胞水平的抑制剂高通量筛选模型,对本单位化合物库部分样品进行筛选,获得具有抗结核活性的化合物;进一步比较模式菌株金色分枝杆菌、耻垢分枝杆菌、海分枝杆菌及谷氨酸棒状杆菌对具有较强抗结核活性样品的敏感性差异....     

刃天青法检测青蒿琥酯对耐药结核分枝杆菌药物敏感性初步研究

目的 了解青蒿琥酯(artesunate,ASN)单独或联合利福平(rifampicin,RFP)、异烟胼(isoniazid,INH)、链霉素(streptomycin,SM)、氧氟沙星(ofloxacin,OFLX)等抗结核药物对耐药结核分枝杆菌的抑制作用,为耐药结核的治疗寻找新的有效药物提供依据.方法 采用刃天青法检测ASN对耐药结核分枝杆菌的抑制作用,并采用ASN联合RFP、INH、OFLX、SM对耐药结核分枝杆菌抗结核药物MIC研究.结果 本研究测试的14株耐药菌株中,7株MIC值为256μg/mL,6株MIC值为128μg/mL,1株MIC为512μg/mL,MIC50为256μg/mL,MIC90为256μg/mL.16株敏感株中,MIC50为128μg/mL,MIC90为256μg/mL.两者差异无统计学意义(P＞0.05).此外,当ASN终浓度为32 ～ 128μg/mL时,能明显改善耐药MTB对RFP、INH、OFLX、SM等抗结核药物的敏感性.结论 ASN对抗耐药结核分枝杆菌作用可能甚微,但其能协同或逆转抗结核药物改善耐药MTB的药物敏感性,可能成为耐多药结核治疗备选新药.     

微量铁元素在结核病发病机制中作用的研究进展

巨噬细胞的铁代谢与结核分枝杆菌的生长繁殖有密切的关系。结核分枝杆菌感染宿主后,主要在宿主巨噬细胞内生长繁殖,巨噬细胞为其生长提供所需要的铁元素,而未被机体免疫系统清除的结核分枝杆菌必须依靠巨噬细胞提供铁元素才能维持其活性和生存。巨噬细胞内转铁蛋白受体1(TfR1)不仅维持巨噬细胞内铁元素的动态平衡,影响胞内结核分枝杆菌生存,而且诱导巨噬细胞自身凋亡,最终杀伤结核分枝杆菌。近年来,有研究表明铁元素与结核分枝杆菌耐药相关。研究铁元素在结核病的发生、发展机制以及结核病耐药机制中的作用,对进一步明确结核病的发病机制,开创治疗结核病的新方法有重要意义。     

髋关节广泛耐药性结核分枝杆菌感染诊治1例

髋关节广泛耐药性结核菌感染临床少见,其确诊所需时间较长,往往确诊时已为晚期,对髋关节的结构和功能已造成巨大破坏,治疗复杂,给患者造成了沉重的负担.中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院收治的1例以左髋关节疼痛为首发症状的年轻患者,初步考虑为左髋关节结核,经一期骨水泥旷置术及规律抗结核治疗5个月后感染复发,二次旷置并行基...     

自噬基因多态性与机体对结核病的敏感性

结核分枝杆菌是胞内病原体,主要感染巨噬细胞.最近的研究显示,自噬参与了胞内杀死结核分枝杆菌的过程.胞内结核分枝杆菌的存活与自噬的抑制有关,而自噬和自噬相关基因缺失鼠更容易受结核分枝杆菌感染.据报道,在一些地区,自噬基因IRGM的高多态性与保护人们抵抗结核分枝杆菌的感染有关.此外,R2RX7也与结核病相关.     

结核分枝杆菌耐药株和敏感株菌体碱性蛋白的比较蛋白质组学研究

目的研究结核分枝杆菌耐多药菌株与敏感菌株菌体碱性蛋白的蛋白质表达差异。方法运用双向电泳技术（2-DE）比较8株耐多药菌株与9株敏感菌株的菌体碱性蛋白表达图谱差异，差异蛋白进行胶内酶切，肽混合物使用基质辅助激光解吸一电离飞行时间质谱仪（MALDI—TOF-MS）进行质谱分析，将肽质量指纹谱数据输入互联网上的蛋白质数据库进行检索。结果比较发现重复性较好的差异蛋白质斑点10个，获得5个明确的肽质量指纹谱，鉴定5个蛋白分别为：NADH-CoQ氧化还原酶B链（NuoB，Rv3146）、乙酰羟酸合成酶小亚基（HvN，Rv3002c）以及3个假定蛋白，分别由Rv2159c、Rv0068、Rv0992编码。结论上述蛋白的鉴定在深入研究结核分枝杆菌耐药形成机制，筛选具有潜在价值的结核药物靶位和耐多药结核病诊断的分子标志物方面具有参考价值。     

以丙氨酸消旋酶为靶点的高通量抗结核药物筛选模型的建立及应用

目的建立以结核分枝杆菌丙氨酸消旋酶为靶点的新型高通量抗结核药物筛选模型,筛选丙氨酸消旋酶的抑制剂,获得以丙氨酸消旋酶为靶点的新型抗结核药物先导物。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,pET28a表达质粒为载体,将alr基因克隆至pET28a,构建pET28a::alr重组表达质粒,表达并纯化得到重组结核分枝杆菌丙氨酸消旋酶;通过测定反应产物NADH在340 nm处光密度变化速率,检测酶反应活性,构建并优化该酶抑制剂的高通量筛选模型;应用该模型对化合物库进行筛选;测定活性化合物IC50以及对结核分枝杆菌的MIC。结果成功构建了结核分枝杆菌alr基因的表达载体;得到了纯度较高的重组丙氨酸消旋酶,测得该酶的比活力为13.53 kU/mg;所建立的丙氨酸消旋酶高通量筛选模型稳定性高,符合高通量筛选的要求;通过对70 000个化合物进行筛选,得到了5个活性较高的化合物,其中,IMB-XZ5对结核分枝杆菌的MIC为4~8μg/ml,且对结核分枝杆菌的作用具有较高的特异性。结论建立了稳定性好、灵敏度较高的结核分枝杆菌丙氨酸消旋酶抑制剂高通量筛选模型,应用该模型筛选得到了具有较好抗结核活性的丙氨酸消旋酶抑制剂。     

转染抗mdr-1核酶基因逆转肿瘤细胞耐药性的研究

目的　研究转染抗mdr 1核酶基因能否实现对乳腺癌细胞多药耐药 (MDR)的持久逆转。方法　构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)为报告基因的核酶表达质粒并转染耐阿霉素的人乳腺癌细胞株MCF 7/ADR和敏感株MCF 7,激光共聚焦显微镜观察EGFP的表达 ,流式细胞术检测细胞转染率和P 糖蛋白含量 ,逆转录 (RT) 聚合酶链反应 (PCR)检测细胞的mdr1mRNA ,罗丹明 12 3(Rh12 3)外排实验检测细胞的P 糖蛋白转运功能。加入阿霉素 4 8h后 ,常规MTT法检测细胞存活率。结果　转染抗mdr 1核酶质粒RZ196和RZ179后 ,两组实验细胞的mdr 1指数由 2 2 0分别降为 0 76和 1 4 0 ,P 糖蛋白表达率由 5 5 0 %降为 4 6 %和 18 2 % ,Rh12 3荧光强度由 2 2 0 %升为 4 6 2 %和 70 1% ,细胞存活率由 75 %降为 2 8%和 4 3%。并且核酶质粒可在细胞内稳定表达 ,转染RZ196、RZ179的实验细胞经G4 18筛选完成 2个月后 ,细胞质中仍可见明显的EGFP表达 ,细胞的mdr 1指数分别为 0 81、4 17,P 糖蛋白表达率分别为 5 2 %、19 5 % ,Rh12 3荧光强度分别为 5 1 4 %、71 6 % ,与刚完成筛选时的差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　转染抗mdr 1核酶质粒RZ196和RZ179均可持久逆转肿瘤细胞MDR ,其中RZ196的逆转效果更好     

抗持留性结核分枝杆菌的药物研究

结核病是除AIDS外引起死亡最高的感染性疾病 ,是严重的全球性健康问题。抗结核药物是结核病化学治疗的基础 ,结核病的化学治疗是人类控制结核病的主要手段。目前 ,结核病治疗的两大难题在于结核分枝杆菌的持留性和耐药性 ,使得结核病不能得到快速而有效的治疗。因此 ,随着人们对结核分枝杆菌认识的逐步深入 ,发现新的药物作用靶点 ,研究和开发靶向持留态结核分枝杆菌的新型抗结核化疗药物 ,对控制和治疗结核病具有重大意义。本文就结核分枝杆菌持留性及抗持留态结核分枝杆菌的药物研究情况做如下综述 :1　持留性结核分枝杆菌　　在上世纪…     

结核分枝杆菌Ag85A质粒DNA疫苗治疗小鼠耐药结核病的效果研究

目的 研究结核分枝杆菌Ag85A质粒DNA疫苗治疗小鼠耐药结核病的效果.方法 用结核分枝杆菌高耐利福平低耐异烟肼临床分离株HB361尾静脉注射17～19 g的6～8周龄雌性BALB/c小鼠后,将小鼠随机均匀地分为6组,感染后第3天开始,分别用生理盐水(A组)、pVAX1空载体(B组)、利福平(C组)、微卡菌苗(D组)、Ag85A质粒DNA疫苗(E组)、利福平和Ag85A质粒DNA疫苗(F组)治疗60d,每组10只小鼠.治疗结束后3周,分别取肺和脾观察病理改变,称取重量做菌落计数.结果 治疗结束后3周,与对照组比较,D组、E组和F组肺脏病变有不同程度减轻,病变局限,病变范围分别为50%、20%、20%,2/3区域可见正常的肺泡结构,肺泡轮廓相对清晰,细胞分布均匀.与A组相比,D组、E组和F组肺脏菌落数分别减少了52%、68%、78%;脾脏菌落数依次减少了48%、65%、79%.结论 与对照组相比,Ag85A质粒DNA疫苗单独应用或与利福平联合应用治疗小鼠耐药结核病均显示疗效.     

结核分枝杆菌的分子免疫学进展

结核分枝杆菌 (H37Rv)全基因组测序的完成有力地支持了人们对其毒力基因和保护性抗原的寻求与研究。本文就结核杆菌的致病和在体内巨噬细胞中长期存活的机制、参与免疫应答的几类T细胞的作用及其调节机制等方面的研究进展作一综述 ,以期为抗结核新型疫苗的设计提供参考     

人红白血病转基因多药耐药细胞K562／MDR耐药性的逆转及机制的研究

本实验旨在研究川芎嗪(tetramethylpyrazine，TMP)与环孢菌素(cyclosporinA，CsA联合逆转通过基因转移技术获得的仅具有经典MDR表型的人红白血病多药耐药细胞K562／MDR的多药耐药性，并进一步探讨其耐药逆转机制。通过基因转移方法获得仅有Pgp高表达、具经典MDR表型的K562／MDR细胞，作为本研究模型来研究白血病细胞MDR的逆转机制。     

结核病中外泌体的研究进展

结核病是目前全球严重危害人民健康的传染性疾病之一。外泌体是多种细胞分泌的细胞外囊泡,拥有双层脂质结构,在细胞间信息传递、机体免疫等生理过程发挥着重要作用。外泌体能呈递表面抗原,激活多种细胞免疫因子,介导巨噬细胞杀伤结核分枝杆菌的细胞免疫反应。本综述旨在总结近几年结核病中的外泌体研究进展,为结核病的发病机制的揭示及新型疫...     

胃癌原位肝转移裸鼠模型的耐药性和机制研究

目的 探索同时及异时性胃癌原位移植裸鼠肝转移模型的原发灶细胞和肝转移灶肿瘤细胞对化疗敏感性和相关信号通路蛋白的表达。方法 建立原位移植裸鼠模型,不同时间取材,体外培养肝转移胃原发灶肿瘤细胞和肝转移灶肿瘤细胞,采用SRB法测定肿瘤细胞对多种化疗药物的体外敏感性;穿梭小室实验检测细胞的侵袭转移活性变化;免疫组化检测相关蛋白MMP2和MMP9的水平;Western blot法检测Wnt1,β-catenin,Pgp、GST-π、ToPo Ⅱ蛋白在不同时期的表达情况。结果 成功建立裸鼠原位移植胃癌转移模型,肝转移率82%;五种化疗药物VCR,5-FU,CDDP,MTX和eADM中,胃癌肝转移细胞的肿瘤抑制率显著低于原发灶肿瘤细胞移植率;肝转移灶组织肿瘤细胞侵袭转移能力高于原发灶,呈现一定时间依赖性;肝转移灶组织中MMP2和MMP9的表达均高于胃原发灶组织;P-gp、GST-π、ToPo Ⅱ蛋白在肝转移组织中比原位组织中均出现表达上调,随肿瘤体内生长时间的延长而上调。结论 胃癌原位移植裸鼠的肝转移灶细胞比原发灶细胞耐药性显著提高,同时发现多药耐药现象的出现与Wnt/β-catenin,P-gp、...     

妊娠期间的女性可以安全治疗多药耐药性结核

据6月1日《临床感染性疾病》杂志（Clin Infect Dis，2005；40：1689—1692）上的一项报告，多药耐受性结核（MDR-TB）的女性患者在怀孕期可以安全治疗。     

结核病免疫应答中自噬现象的分子机制和意义

越来越多的证据表明,自噬是结核免疫反应的重要组成部分.自噬可以杀灭结核分枝杆菌、调节促炎细胞因子的分泌、增加抗原递呈功能.自噬与其他抗菌途径如维生素D3、炎性体、泛素系统存在协同作用.另一方面,结核分枝杆菌可以调控巨噬细胞的自噬.目前,自噬已成为临床重要的诊疗靶点.其能诱导自噬的药物,可以作为佐剂治疗耐药性结核;能有效诱导自噬的疫苗,可能提供更好的免疫保护作用.     

靶向 MRP1 基因的shRNA稳定逆转肺癌的多药耐药性

目的:利用短发夹RNA(shRNA)表达载体逆转肺癌细胞株(A549/DDP)的多药耐药性。方法:构建2个多药耐药相关蛋白1(MRP1)基因特异的shRNA表达载体pSilencer2.1-U6neo-MRP1,稳定电转染A549/DDP细胞,实时荧光定量PCR分析MRP1mRNA的表达,免疫荧光检测细胞MRP1蛋白的表达,流式细胞术检测细胞内罗丹明123(Rho123)的潴留情况。MTT法检测细胞活力。结果:成功构建了shRNA表达载体pSilencer2.1-U6neo-MRP1,稳定转染sh-MRP1-2.1-1和sh-MRP1-2.1-2后,A549/DDP细胞MRP1mRNA和蛋白表达均显著降低,细胞内Rho123相对荧光强度由16.93%±0.58%分别升高至89.02％±0.59%和82.56%±1.37%;A549/DDP亲本细胞顺铂的IC50分别由(101.45±0.64)μmol/L降至(38.06±0.05)μmol/L和(53.72±0.36)μmol/L,5-氟尿嘧啶的IC50分别由(263.20±2.00)μmol/L降至(98.82±1.16)μmol/L和(141.81±0.49)μmol/L。结论:shRNA干扰表达载体pSilencer2.1-U6neo-RMP1能够稳定、持久地抑制MRP1基因,有效地逆转了A549/DDP细胞的多药耐药性。     

二硫键稳定的抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体稳定性研究

目的:研究二硫键稳定的抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体(Diabody)在体外和体内的稳定性.方法:将抗CD3/抗Pgp Diabody置于37℃含0.2%人血清白蛋白(human serum albumin,HSB)的PBS中,孵育不同时间后,用流式细胞术(FACS)检测其结合活性.建立K562/A02裸鼠移植瘤模型,用Cy5荧光标记试剂盒标记抗CD3/抗Pgp Diabody,通过尾静脉注射给荷瘤裸鼠,在小动物活体成像系统上动态观察荧光信号.结果:二硫键稳定的抗CD3/抗Pgp Diabody (Ds-diabdoy)体外孵育72小时后活性无明显下降,而改造前Diabody孵育1小时后活性即开始下降,24小时后活性完全丧失.Ds-diabdoy注射后72小时仍能在肿瘤部位检测到荧光信号,而改造前Diabody在注射后24小时肿瘤部位荧光信号消失. 结论:Ds-diabdoy较改造前Diabody稳定性大大提高.     

治疗耐药结核病的药物选择和药物研究进展

结核病是古老的传染性疾病,疫情在引入有效化疗药物的化疗时代得到了有效控制。但是,近十几年来,由于耐药,尤其是多药耐药性结核病的发生和迅速传播等原因,全球结核病疫情急剧恶化。人类进入21世纪后的今天,结核病仍然是严重威胁人民生命和健康的重要公共卫生问题,耐药、耐多药结核病的控制是其中的重要挑战和核心课题之一。本文仅就耐药结核病的治疗药物选择和药物研究予以讨论。     

乳腺癌多药耐药性机制及逆转方法研究近况

乳腺癌严重威胁着女性健康,化学药物治疗在乳腺癌的治疗中起着举足轻重的作用,但临床治疗中常因乳腺癌细胞产生多药耐药性而导致化学药物治疗的失败。笔者就乳腺癌细胞多药耐药性的相关蛋白及基因、酶类等多药耐药性相关机制进行了详细论述．并介绍了化学药物、基因技术、中药、药物载体在逆转乳腺癌多药耐药性中的应用及目前研究进展。