人白介素-10腺病毒转染对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨静脉注射携带hIL-10基因腺病毒载体对大鼠肝常温缺血再灌注损伤的保护作用。方法经SD大鼠的尾静脉注射Ad-hIL10-EGFP 1×109PFU／ml。72 h后建立大鼠常温半肝缺血再灌注损伤模型(缺血60min,再灌注240min)。取血进行肝功能生化检测;HE染色观察肝组织形态变化;分别采用酶联免疫吸附法和免疫组化方法检测大鼠血清内及肝组织内hIL-10表达,用荧光显微镜观察肝脏冰冻切片中EGFP表达;Tunel法检测大鼠肝脏内细胞凋亡情况。结果治疗组大鼠肝功能较两对照组明显改善,肝细胞凋亡数量明显减少,(P<0．01);治疗组大鼠肝组织中可见EGFP表达及hIL-10染色;血清中hIL-10的表达量为(815．74±284．76)ng/ml。结论hIL-10腺病毒基因治疗可以减轻大鼠肝缺血再灌注损伤。     

羟丁酸钠对大鼠肝脏热缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨羟丁酸钠（γ-hydroxybutyrate,GHB）对肝脏热缺血再灌注损伤的保护作用.方法采用大鼠肝脏热缺血再灌注模型,观察肝脏组织形态学、酶学、脂质过氧化、细胞凋亡及血浆内皮素的变化.结果肝脏缺血再灌注损伤时,血清ALT、AST、LDH、血浆内皮素、TNF-α及肝组织MDA水平均显著增高,细胞凋亡增加,肝组织SOD明显减少.再灌注前使用GHB可以明显减轻上述改变,钠络酮可以部分阻断GHB的作用.结论GHB可能通过抗脂质过氧化,下调肝脏内皮素的表达,改善微循环,减少肝细胞凋亡,从而减轻热缺血再灌注对肝脏的损伤作用.     

肝缺血再灌注对肝硬化大鼠的损伤作用

目的 研究肝硬化大鼠肝缺血再灌注（hepatic ischemia reperfusion,HIR）损伤的机制和程度。方法 用60％四经碳（CCl4）溶液皮下注射方法制作肝硬化大鼠模型，肝硬化大鼠随机分为六组：A组：假手术组（6只）；B、C、D组：分别为肝门完全阻断20min、30min、40min（每组各16只）；E组“单纯肠系膜上静脉阻断（16只）;F组：肝门阻断＋门腔转流（16只）；另外，随机取10只正常肝脏大鼠组成G组，行肝门完全阻断30min。观察7天存活率、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、透明质酸（HA）、肿瘤坏死因子（TNF），以及肝、肺病理的变化。结果 B、C、D、E、F、G组的7天存活率分别为10／10只、6／10只、4／10只、5／10只、8／10只、6／10只；再灌注后4h血清TNF变化：后六组均明显高于术前，C、D组高于B、A组，E、F组也明显高于A组（P＜0.01）再灌注4h后HA变化：D组明显高于B、E组，F、C组明显高于A组（P＜0.05）；再灌注4h后D、C组的AST、ALT均明显高于B组、A组、D组的AST明显高于F组，F组的AST、ALT显著高于E组（P＜0.05）；C、G两组比较，上述指标的差异无显著性（P＞0.05）；肝、肺组织学检查可见肝、肺的病理损害，程度随缺血时间的延长而加重，E组损伤重于F组。结论 硬化肝脏肝缺血再灌注损伤涉及全身多个器官，门脉静淤血可能是损伤乃至死亡的主要原因；肝硬化大鼠耐受肝缺血的最大的时限在30min以内。     

缺血预处理对肝硬化大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨缺血预处理(IP)对硬化肝脏缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用.方法将采用四氯化碳复制的SD肝硬化大鼠随机按I/R前是否行IP分为预处理(IP组)和非预处理组(NIP组).比较两组大鼠肝I/R后肝功能、肝组织的抗氧化能力、能量代谢、NO含量与组织学变化及大鼠术后1周的存活率.结果与NIP组大鼠比较,IP组血清谷丙转氨酶,谷草转氨酶及乳酸脱氢酶活性显著降低(分别为P＜0.05,P＜0.001和P＜0.001);肝组织的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力明显提高(分别为P＜0.05和P＜0.01);脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量降低(P＜0.05);ATP含量与能荷值(EC)增高(分别为P＜0.01和P＜0.05);NO合成显著增加(P＜0.01);光镜和电镜检查显示肝损伤的组织形态学表现明显减轻.大鼠术后1周存活率虽有提高,但两组差别无统计学意义(P=0.069).结论 IP对肝硬化大鼠的肝I/R损伤具有明显的保护作用.     

黄腐酸钠对肝硬化大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用

目的　观察黄腐酸钠对肝硬化大鼠肝脏的缺血再灌注损伤的保护作用。方法　用四氯化碳橄榄油制作肝硬化大鼠模型后 ,术前 3d灌胃 2 %黄腐酸钠 10 0mg/ (kg·d) ,每天两次。两次肝门阻断后于下腔静脉取血 ,检测血清ET 1、TNF α、IL 6值 ,同时取肝左叶肝脏组织病理检查。结果　术后黄腐酸钠组血清ET 1、TNF α、IL 6值均较对照组降低。与对照组比较均有显著性意义 (P <0 0 5 )。光学显微镜检查 ,黄腐酸钠组的肝细胞病理损伤程度比对照组轻。结论　术前用黄腐酸钠对肝硬化大鼠的肝缺血再灌注损伤有明显的保护作用。     

肝细胞凋亡在肝硬化大鼠肝缺血再灌注损伤中的意义

目的 研究肝硬化大鼠肝缺血再灌注（I／R）损伤和硬化肝比正常肝更容易损伤的机制是否与肝细胞凋亡有关？方法 建立原位肝I／R模型，将肝硬化大鼠随机分为2组：A组：缺血时间（I）＝20min;B组：I＝30min;C组：正常大鼠，I＝30min，比较灌注前后各组血清AST、ALT的变化和肝细胞凋亡的百分数。结果 肝硬化大鼠肝I／R后，AST、ALT明显升高，以灌注后6h为高峰，灌注24、72h后逐渐下降。灌注6h后，B组的血清转氨酶为3组中最高（P＜0．05），说明B组肝损伤最严重。肝细胞凋亡在I／R后明显增多，以灌注后6h为高峰，随后逐渐下降，变化与转氨酶一致。灌注后6h，B、A、C组肝细胞凋亡的百分数分别为20．9％、13．5％和10．7％，B组明显高于A、C两组（P＜0．01）。再灌注72h内未见明显肝细胞坏死。结论 肝细胞凋亡是肝硬化大鼠I／R损伤肝细胞死亡的主要形式，肝细胞凋亡与肝缺血时间密切相关，肝硬化肝细胞比正常肝细胞容易发生凋亡是硬化肝对缺血敏感的重要原因。     

重组人白介素10抑制肝移植后再灌注损伤和排斥反应的探讨

肝移植后再灌注损伤和急性排斥反应时 ,中性粒细胞向肝组织内游走、浸润 ,引起组织破坏 ,是由于白介素 8(ＩＬ 8) [1] 中性粒细胞趋化因子作用的结果。我们采用抑制性细胞因子ＩＬ 10 ,通过大鼠原位肝移植探讨了重组人ＩＬ 10 (ｒｅ ｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ 10简称ｒｈＩＬ 10 )对再灌注损伤和急性排斥反应的影响。一、材料和方法1.实验动物和原位肝移植法 :供体为ＡＣＩ(ＲＴＩａ)大鼠 ,受体为ＬＥＷ (ＲＴ11)大鼠。用改良的Ｋａｍａｄａ法施行原位肝移植。2 .ｒｈＩＬ 10投予法 :ｒｈＩＬ 10治疗组分为ｒｈＩ…     

人肝细胞生长因子基因转染对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用

Objective To compare the efficacy of two hHGF gene electroporation methodologies(muscle and kidney) in order to reduce the deleterious effects induced by renal warm ischemia. Methods Thirty male SD rats were divided into three groups, 10 in each group. One group was warm ischemia without pretreatment as control. The other two groups received hHGF gene muscle injection and subsequent electroporation and hHGF gene kidney electroporation respectively 3 days before renal warm ischemia. Pharmacokinetic, function and histology were assessed in ischemic kidney. Scr levels were measured at day 1,3,5 after injury. Results Plasma hHGF levels and hHGF expression of renal tissue in kidney electroporation group were higher than those in muscle electroporation group（P<0.01）. Both treated groups showed lower Scr than control[(79.4±23.4), (109.7±18.6) vs (164.8±55.5) ?滋mol/L,P<0.05]. The kidney electroporation group showed faster recovery of renal function, with significantly lower Scr level compared to muscle electroporation group. The tubular necrosis score was lower in both HGF-treated groups(P<0.05). The tubular necrosis score of the hHGF gene kidney electroporation group(1.365±0.186) was lower than that of hHGF gene muscle electroporation group (1.864±0.389) (P<0.05). hHGF-treated groups had fewer macrophages and lymphocytes than control group, as well as lower values of MPO activity(P<0.01), but no significant difference was found between 2 hHGF-treated groups(P>0.05). Conclusion Kidney direct electrotransfer is shown to be more efficient not only in pharmacokinetic but also in therapy as compared to muscle electrotransfer, so it may become a clinically practical alternative in renal transplantation.     

在选择性肠缺血／再灌注损伤后的白介素（IL）-10增加

在缺血／再灌注损伤(I／R)中，有氧化应激和炎性基因产物的参与，其中已阐明NO、血红素氧合酶(HO）-1和转录因子NF-κB／Rel的作用。作者重点关注在肠I／R后免疫调控性细胞因子的作用。作实验如下：在Lewis鼠选择性钳夹肠系膜上动脉。在再灌注前静脉注入IL-2或IL-10。在再灌注后1、4和24小时处死动物，     

Genistein预处理对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨genistein预处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。
方法：54只SD大鼠完全随机分成3组。A组为I/R组:70%热缺血60 min及再灌注;B组为I/R
 genistein（GST）预处理组;C组为假手术组。于成模后2,6,12 h取大鼠血清和肝组织,检测血清AST,ALT浓度和肝组织MDA浓度,免疫组化法检测肝组织casepase-3蛋白的表达,光镜下观察肝脏组织病理变化。
结果：与I/R组相比,genistein预处理血清中AST及ALT浓度明显降低,肝组织病理损伤明显减轻。肝组织casepase-3蛋白表达及MDA浓度显著降低（均P＜0.05）。
结论：genistein预处理对大鼠肝脏热缺血再灌注具有保护作用,其机制与清除氧自由基,抑制细胞凋亡有关。     

携带大鼠白细胞介素-10基因重组腺病毒载体的构建及其在肝星状细胞中的表达

目的　构建载有白细胞介素 10 (IL 10 )基因的 ,能在肝星状细胞 (HSC)稳定表达的重组腺病毒载体 ,为将来的肝纤维化基因治疗提供基础。方法　将IL 10cDNA克隆于腺病毒穿梭质粒PAdTrack CMV ,得到重组质粒PadTrack CMV IL 10。采用电穿孔法将质粒PadTrack CMV IL 10与腺病毒骨架质粒PadEasy 1共转化E .coliBJ5 183细胞 ,通过在细胞内同源重组 ,生成带有IL 10基因的重组腺病毒载体。重组腺病毒质粒经过 2 93细胞的扩增及CsCl的纯化 ,感染HSC细胞。结果　经形态学、病毒DNA酶切、聚合酶链反应 (PCR)和逆转录 (RT ) PCR等方法的鉴定 ,证实了载体构建的正确性 ,经测定 ,病毒滴度为 2 .5× 10 10 efu/ml。结论　成功构建带有IL 10cDNA的重组腺病毒载体 ,所携带的IL 10载体能够转染大鼠HSC并在HSC中稳定表达 ,为进一步的研究打下了基础。     

苦参碱对大鼠肝缺血再灌注损伤的抑制作用及机制

目的:探讨苦参碱对大鼠肝缺血再灌注损伤的抑制作用及机制。方法:大鼠肝缺血再灌注损伤模型采用阻断肝血流60 min再灌注120 min诱导;将40只SD大鼠随机均分为假手术组、肝缺血再灌注损伤模型组(模型组)、低剂量苦参碱(25 mg/kg)预处理+肝缺血再灌注损伤模型组(低剂量苦参碱组)、高剂量苦参碱(50 mg/kg)预处理+肝缺血再灌注损伤模型组(高剂量苦参碱组),低、高剂量苦参碱组在肝缺血前30 min,经门静脉主干注入各自剂量的苦参碱溶液,假手术组与模型组大鼠则以相同的方式注入等体积的生理盐水;120 min再灌注结束后,收集各组大鼠血标本行血清转氨酶、炎症因子水平检测,收集肝组织标本行组织病理学、肝细胞凋亡检测,以及TRAIL、BAX、激活型caspase-3(cleaved caspase-3)蛋白表达检测。结果:组织病理学检测结果显示,除假手术组外,其余各组肝组织均有肝损伤表现,但损伤程度轻重不一(模型组低剂量苦参碱组高剂量苦参碱组)。与假手术组比较,其余各组血清转氨酶、炎症因子水平均明显升高,肝组织中肝细胞凋亡明显增加,TRAIL、BAX、cleaved caspase-3蛋白表达明显上调(均P0.05),但以上指标的变化程度在低、高剂量苦参碱组均明显小于模型组,且在高剂量苦参碱组更为明显(均P0.05)。结论:苦参碱对大鼠肝缺血再灌注损伤具有抑制作用,机制可能与其抑制TRAIL的表达,减少BAX与caspase-3的活化,从而抑制肝细胞凋亡有关。     

异氟醚预处理对大鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨异氟醚预处理对大鼠全脑缺血再灌注损伤的作用。方法 采用四动脉阻断法制作全脑缺血模型。选择雄性Wistar大鼠78只(250～300g)。随机分为四组:假手术组(SH,n=15)、缺血再灌注组(ISC,n=21)、缺血预处理组(IPC,n=21)、异氟醚预处理组(ISOPC,n=21)。每组按缺血后再灌注时间分为三个亚组:6h、24h、72h。脑组织标本切片后行HE染色观察海马CA1存活细胞数目、原位末端标记(TUNEL)法测定凋亡细胞。结果 HE染色:ISC组随再灌注时间延长CA1区存活的细胞数(个)由90±2(6h)减少至46±5(72h),P<0.01。与ISC组比较,IPC组和ISOPC组72h后CA1区大部分细胞存活,分别为82±4和80±5,P<0.01。TUNEL:ISC组再灌注6h后在CA1区起始段即开始有凋亡细胞,且数量随时间增加。而IPC组和ISOPC组在再灌注24h后出现少量凋亡细胞,再灌注72h后凋亡细胞百分数显著低于ISC组(P<0.01)。结论 异氟醚预处理通过抑制缺血诱导的神经细胞凋亡而产生保护作用。     

钙通道阻滞药对人肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察钙通道阻滞药维拉帕米对人肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法对切除肝叶或肝段的患者 ,肝门阻断前经胃网膜右静脉缓慢推注维拉帕米 5mg/ 2ml。结果术后实验组血清酶 (GPT、GOT)和血清吲哚氰绿滞留试验 (ICGR15)的升高幅度、以及动脉血酮体比值 (AKBR)的降低幅度均明显低于对照组 ,且复常时间早 ;肝门阻断后 ,对照组肝细胞内游离钙定量为 (2 99± 32 )nmol/L ,实验组为 (2 14± 41)nmol/L ,组间差异有非常显著意义 (P <0 0 1) ;光学显微镜检查 ,实验组肝细胞病理损伤程度比对照组轻。结论肝门阻断前经门静脉应用钙通道阻滞剂对人肝脏缺血再灌注损伤具有明显的保护作用     

白细胞介素12在大鼠肺缺血再灌注损伤中的作用

目的 评价白细胞介素12(IL-12)在大鼠肺缺血再灌注损伤中的作用.方法 健康成年雄性SD大鼠24只,8-10周龄,体重250-280 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组(n=8):假手术组(S组),肺缺血再灌注损伤组([/R组),IL-12单克隆抗体组(IL-12组).S组只分离肺门不夹闭；I/R组夹闭肺门60 min后,恢复灌注2 h；IL-12组于夹闭肺门前1h尾静脉注射IL-12单克隆抗体200μg/kg.于再灌注结束时采集血样和肺绀织,测定血浆TNF-α浓度、辅助性T细胞(Th)1和Th2水平、肺组织湿干重(W/D)比、髓过氧化物酶(MPO)活性、MDA含量及动脉血氧分压(PaO2)及二氧化碳分压(PaCO2).光镜下观察肺组织病理学改变.结果 与S组比较,I/R组和IL-12组肺组织W/D比、MDA含量、MPO活性、血浆TNF-α浓度升高,I/R组PaO2降低,PaCO2、Th1水平和Th1/Th2升高(P＜0.01),Th2水平差异无统计学意义(P＞0.05),IL-12组PaO2、PaCO2、Th1、Th2水平及Th1/Th2差异无统计学意义(P＞0.05)；与I/R组比较,IL-12组PaCO2、肺组织W/D比、MDA含量、MPO活性、血浆TNF-α浓度、Th1水平和Th1/Th2降低,Th2水平和PaO2升高(P＜0.01).I/R组肺组织损伤明显,IL-12组肺组织损伤程度明显减轻.结论IL-12通过使Tn1/Th2失衡而参与肺缺血再灌注损伤.     

氯胺酮对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨氯胺酮对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的影响.方法 健康雄性Wistar大鼠24只,随机分为4组(n=6):假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、氯胺酮2 ms/kg组(K_1组)及氯胺酮10 mg/kg组(K_2组).采用无创动脉夹夹闭左肾动脉45 min,再灌注6 h,制备大鼠肾脏缺血再灌注模型.K_(1,2)组于再灌注前5 min分别经尾静脉注射氯胺酮2、10 mg/kg.于再灌注6 h时取右心耳血样2 ml,测定血清肌酐(Cr)及尿素氮(BUN)的浓度;光镜下观察肾组织病理学结果 ;采用免疫组织化学法测定肾组织Fas或Caspase-3表达水平;采用TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡情况,并计算凋亡指数(AI).结果 与S组比较,其余3组血清Cr、BUN的浓度升高,肾组织Fas、Caspase-3的表达上调,AI升高(P<0.01);与IR组比较,K_(1,2)组血清Cr、BUN的浓度降低,肾组织Fus、Caspase-3的表达下调,AI降低(P<0.01);与K_1组比较,K_2组血清Cr、BUN浓度降低,肾组织Fas、Caspase-3的表达下调,AI降低(P<0.01).K_2组肾组织病理损伤较K_1组明显减轻.结论 氯胺酮可减轻肾脏缺血再灌注损伤,且呈剂量依赖性,可能与其抑制肾小管上皮细胞凋亡有关.     

Exogenous human recombinant interleukin-10 protects the kidney against hypoxia-induced renal injury in immature rats

AIM: The purpose of this study was to determine the effects of exogenous human recombinant interleukin-10 (rhIL-10) on hypoxia-induced renal injury in immature rats. METHOD: The study was performed on 1-day-old Sprague-Dawley rat pups. Group 1 (n = 8) served as non-hypoxic controls. Group 2 (untreated, n = 8) rats were subjected to hypoxia-reoxygenation (H/O) and were then returned to their mothers. Group 3 (rhIL-10 treated, n = 8) rats were subjected to H/O, were returned to their mothers, and were treated with rhIL-10 (75 microg/kg subcutaneously) for the next 3 days. All animals were killed on day 4 and renal specimens were obtained to determine the tissue level of malondialdehyde (MDA) and histological changes. RESULTS: In the untreated group, moderate or severe renal tubular necrosis was observed However, the tubular necrosis score was significantly less in the rhIL-10 treated rats than in the untreated rats (P < 0.05). In the untreated group, MDA levels were significantly increased compared with the control and rhIL-10 groups (P < 0.001 and P < 0.05, respectively). In the rhIL-10 treated group, MDA levels were not significantly different compared with the control group. CONCLUSION: RhIL-10 has a protective effect against hypoxia-induced renal injury in immature rats by depression of tissue MDA level and renal tubular necrosis score.     

硫化氢对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响

目的 评价硫化氢对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响.方法 健康雄性SD大鼠30只,体重220～250 g,采用随机数字表法,将其随机分为假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)和不同剂量硫化氢组(H2S1～3组),每组6只.S组仅暴露肝门,不夹闭动、静脉;IR组采用夹闭左、中叶肝蒂、门静脉和肝动脉支1h恢复灌注的方法制备大鼠肝缺血再灌注模型;H2S1～3组于再灌注前5min分别腹腔注射14、28、56 μmol/kg硫化氢钠.于再灌注6h时抽取下腔静脉血样并取肝组织,采用全自动生化分析仪测定血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性,采用二硫代二硝基苯甲酸法测定肝组织谷胱甘肽(GSH)含量,光镜下观察肝组织病理学结果.结果 与S组相比,IR组血清ALT和AST活性升高,肝组织GSH含量下降(P＜0.05);与IR组相比,H2S1～3组ALT和AST活性降低,肝组织GSH含量升高(P＜0.05);H2S1～3组肝病理学损伤较IR组明显减轻.结论 H2S可减轻大鼠肝缺血再灌注损伤.