化学发光法测定脑组织中-氧化氮合成酶活性

在NADPH等辅助因子的参与下，一氧化氛合成酶（NOS）能催化L一精氨酸生成一氧化氮（NO）。NO与过氧化氢反应生成过氧亚硝酸，过氧亚硝酸能与鲁米诺产生化学发光反应，当NO浓度为0.1～1000pmol／L时，发光强度与NO量成正比。根据这一原理，利用化学发光分析建立了一种新的NOS活性测定方法。用该方法测量10只大鼠脑组织中的NOS活性，其NOS活性为28．3±6．9pmolNO／mg蛋白／min。     

基于全自动管式化学发光免疫检测系统的人结核感染T细胞检测方法的建立

目的建立基于化学发光平台的人结核感染T细胞检测方法。方法将一株γ-干扰素单抗标记在磁微粒上,另一株γ-干扰素单抗标记在吖啶酯上,然后将检测体系与已有的细胞刺激培养体系相结合。结果本研究成功建立基于化学发光平台的人结核感染T细胞检测方法。以ELISA平台检测试剂的检测结果作为参考,该方法的灵敏度为98.3%,特异性为99.2%,总体符合率达到98.8%。结论该方法具有更高的分析灵敏度(可达0.27 pg/m L)、更宽的线性范围(1 pg/m L~5 000 pg/m L)、更好的重复性(批内与批间变异系数均<6.0%)及更易实现高通量检测,为临床诊断结核感染提供了有力的工具。     

一氧化氮光纤传感技术的研究

用塑料光纤将发光体系和发光仪的检测系统连接起来,通过光纤将反应的光传至化学发光仪,化学发光仪的检测系统可以灵敏地检出发光强度.在最佳工作条件下,NO浓度与相对化学发光强度之间有良好的线性关系,其线性范围为8.5×10-12mol/L至1.7×10-10mol/L,检出限为1.7×10-12mol/L.用该系统检测了加脂多糖、加N(G)-甲基-L-精氨酸、不加任何物质作对照三组培养细胞释放NO的水平.结果发现,NO水平由高到低依次为LPS组＞对照组＞L-NMMA组.     

一氧化氮与角质形成细胞凋亡的研究进展

一氧化氮(NO)是一种自由基,也是一种具有重要生理和病理功能的信使分子。广泛分布于生物体内各种组织之中,在皮肤、心、脑、肝和免疫调节等病理和生理过程中有着十分重要的生物学作用。近年来的研究显示NO能双向调节角质形成细胞(KC)的凋亡,对许多皮肤疾病的发生发展产生重要影响,然而该调节机制目前尚未完全阐明,本文将综述NO对KC凋亡的双向调节机制研究进展以及一些与NO调节失调相关的皮肤疾病。     

三氯乙烯对人角质形成细胞一氧化氮和一氧化氮合酶的影响

目的研究三氯乙烯(TCE)对体外培养的人角质形成细胞(KC)一氧化氮(NO)合成和一氧化氮合酶(NOS)表达及活力的影响,探讨TCE的皮肤细胞毒性机制。方法无血清培养的正常人KC与0.125、0.25、0.5、1.0、2.0mmol/L的TCE共培养4h,分别于染毒后12、24、48、72h测定培养液中NO含量和NOS活力,分析其时间—剂量—效应关系,并用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测诱导型NOS(iNOS)mRNA的表达情况。结果低剂量组(0.125和0.25mmol/L)NO含量与iNOS活力在染毒后各时点与对照组相比均无差异;0.5mmol/L组NO含量与iNOS活力均在染毒后48h开始升高,分别为(32.19±4.75)μmol/L[对照组:(23.70±3.11)μmol/L,P<0.05]和(1.15±0.02)×103U/L[对照组:(0.77±0.06)×103U/L,P<0.05],随着染毒浓度的升高,0.5～2.0mmol/L组NO量与iNOS活力呈上升趋势,而且上升出现的时间提前,1.0和2.0mmol/L组分别于染毒后24和12h出现升高;NO释放的增加总是与iNOS活力升高一致,而结构型NOS(cNOS)活力在各剂量组的各时点均无变化;RT-PCR结果显示TCE可以诱导iNOSmRNA转录水平增高。结论TCE可以诱导人角质形成细胞NO合成增加,大量产生的NO与iNOS基因的上调有关,这一机制可能参与了TCE的皮肤细胞毒性。     

化学发光法检测结核γ-干扰素释放试验的性能验证研究

目的对结核γ-干扰素释放试验(Tuberculosis Gamma Interferon Release Asay TB-IGRAs)进行方法学性能验证,评估其临床检测价值。方法参考临床实验室标准化协会(Clinical and Laboratory Standards institute, CLSI)推荐的方法,对Caris 200全自动化学发光分析仪检测TB-IGRAs的精密度、正确度、线性范围以及生物参考区间性能指标进行验证。结果TB-IGRAs高、低值校准物质批内精密度为2.68%和2.65%;批间精密度为3.13%和3.16%,均低于厂家标准要求的15.00%。正确度验证相对偏倚为1.00%,小于1/4TEA符合要求。线性回归方程为Y=1.015X-197.781(R2=0.9831),a值在0.97-1.03范围内,具有良好的线性关系。生物参考区间验证符合要求。结论 Caris200全自动化学发光分析仪检测TB-IGRAs的方法学性能符合要求,结果可靠,可应用于结核病的临床诊疗。     

小鼠滋养层细胞原代培养方法的优化

目的 建立一种简便、有效的小鼠滋养层细胞原代培养方法,为研究病理妊娠的发生机制奠定基础.方法 分别在K.Handschuh和Zhou WH方法的基础上进行改良,获取孕鼠滋养层细胞,进行原代培养,并应用细胞计数及免疫细胞化学法比较滋养层细胞数量和纯度.结果 K.Handschuh改良法和Zhou WH改良法获得滋养层细胞数目分别为(11.4±1.8)×104个/mL、(16.3±0.9)×104个/mL,纯度分别为95%、96%,在获得滋养层细胞数目方面Zhou WH改良法优于K.Handschuh改良法(P<0.05).结论 Zhou WH改良法可获得高纯度足量的小鼠滋养层细胞.     

一氧化氮检测技术的研究进展

以前 ,一氧化氮 (nitric oxide,NO)被认为是一种有害气体 ,因为它是机动车排放的尾气之一 ,能损害人和动物的血液、中枢神经系统 ,甚至可造成酸雾和化学烟雾。但是 ,自 1987年“内皮衍生性舒张因子 (endothelium- derived relaxingfactor,EDRF)”被证实为和 NO同质以后 ,人们对     

二硫化碳对大鼠视网膜组织诱导型一氧化氮合酶及细胞凋亡的影响

目的探讨二硫化碳（CS2）对大鼠视网膜组织诱导型一氧化氮合酶（iNOS）及细胞凋亡的影响。方法将24只SD雄性大鼠随机分为对照组、低剂量CS2染毒组和高剂量CS2染毒组，染毒结束后取视网膜组织制成切片，测量内视网膜厚度比率，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶染色（NADPH-NDP）法检测iNOS活力，原位缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡。结果（1）染毒组的内视网膜（包括内核层、内丛状层、节细胞层、神经纤维层和内界膜）厚度减小，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）；高剂量染毒组与低剂量染毒组之间差异亦有统计学意义（P〈0．05）。（2）染毒组视网膜iNOS表达增加，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）；高剂量染毒组与低剂量染毒组之间差异亦有统计学意义（P〈0．05）。（3）染毒组视网膜出现细胞凋亡，凋亡指数与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）；高剂量染毒组与低剂量染毒组之间差异亦有统计学意义（P〈0．05）。结论CS2能激活视网膜组织iNOS表达，由此产生的过量的NO可损伤视网膜细胞。同时，视网膜细胞凋亡也是CS2所致视网膜损害的机制之一。     

一氧化氮系统与高血压

生物信息分子一氧化氮（Nitric oxide，NO）兼有信息物质与神经递质的功能，参与多种细胞生理活动。一氧化氮在心血管疾病中发挥了重要作用，一氧化氮是在一氧化氮合酶（NOS）催化下生成的。三种不同的NON在心血管疾病中的作用各不相同，一氧化氮合酶／一氧化氮系统在高血压发生及发展中起重要作用。     

牙龈卟啉单胞菌对感染流感病毒肺上皮细胞一氧化氮合酶的影响

目的观察牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)对感染流感病毒(H1N1)肺上皮细胞一氧化氮合酶的影响,以期为探讨牙周病在肺疾病发病机制中的作用提供临床依据。方法利用不同MOI值P.gingivalis与MOI值为2的H1N1共同感染于肺上皮细胞,未感染的细胞作为阴性对照。利用硝酸还原酶法测定上清液中NO的浓度;Westernblot检测诱导型一氧化氮合酶(i NOS)表达水平。结果各组细胞在4 h、8 h、12 h、24 h内NO生成均有增加。4 h、8 h、12 h、24 h后E组NO的量分别为41.404±3.079、78.945±3.001、592.983±1.690、2360.660±4.199μmol/L,8 h、12 h、24 h与对照组比较差异有显著性(P0.05)。12 h、24 h P.gingivalis促进H1N1感染的肺上皮细胞i NOS蛋白水平的表达,与对照组相比差异有显著性(P0.05)。结论 P.gingivalis与H1N1共同作用于肺上皮细胞能够促进i NOS的表达,最终促进NO的生成。     

矽肺患者血清一氧化氮和一氧化氮合成酶的浓度变化的研究

目的：探讨一氧化氮（ＮＯ）和一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）在矽肺发病中的作用和意义。方法：用生化比色法测定９８例各期矽肺患者血清ＮＯ和ＮＯＳ浓度并与正常对照组比较。结果：矽肺患者血清ＮＯ和ＮＯＳ高于对照组（Ｐ〈０．０５）,且矽肺期数越高,血清ＮＯ和ＮＯＳ浓度越高。矽肺Ⅰ－Ⅲ期之间ＮＯ和ＮＯＳ也有差别（Ｐ〈０．０５）。结论：血清ＮＯ和ＮＯＳ水平上升可能参与矽肺的形成和进展,测定ＮＯ和ＮＯＳ的浓度对了解矽肺     

苯扎贝特逆转高甘油三酯血清下调内皮细胞一氧化氮合酶基因表达的机制探讨

目的研究苯扎贝特逆转高甘油三酯血清（HTS）下调原代牛主动脉内皮细胞（BVEC）一氧化氮合酶（eNOS）基因表达的可能机制。方法在前期研究证实HTS下调原代牛主动脉内皮细胞（BVEC）一氧化氮合酶（eNOS）蛋白质表达的基础上,采用Western印迹法检测苯扎贝特对HTS诱导的eNOS蛋白质表达水平下调的影响;在证实其效应的基础上研究其信号转导机制。结果发现苯扎贝特可以完全消除HTS对eNOS的抑制作用,经PPARα、PI3K、MAPKK和MAPK抑制剂预处理后,苯扎贝特逆转HTS下调eNOS的蛋白质表达的作用明显减弱。结论证实了苯扎贝特可以纠正HTS对eNOS的抑制作用,其效应的发挥既通过依赖于PPARα的方式,也可以经PI3K/MAPK/MAPKK信号通路介导。     

高甘油三酯血清对牛主动脉内皮细胞一氧化氮合酶基因表达的影响及其机制的研究

目的研究高甘油三酯血清(HTS)对原代牛主动脉内皮细胞(BVEC)一氧化氮合酶(eNOS)基因表达的影响及其可能机制。方法采用Western印迹法从蛋白质水平检测高甘油三酯血清对牛主动脉内皮细胞eNOS和一氧化氮(NO)活性的影响。在证实其效应的基础上,采用Western印迹法检测经HTS作用后,PKC-MAPK-MAPKK信号转导通路的改变。进一步从Ⅳ型高脂蛋白血症血浆提取极低密度脂蛋白(VLDL)(HTG-VLDL)并采用Western印迹法研究HTG-VLDL对eNOS的蛋白质表达的影响。结果HTS以浓度依赖的方式抑制eNOS的蛋白质表达,减少一氧化氮的产生,并以剂量和时间依赖的方式促进MAPK的磷酸化,而经PKC、MAPKK和MAPK抑制剂预处理后,HTS对eNOS的蛋白质表达的抑制作用更明显;另外发现HTG-VLDL可抑制eNOS的蛋白质表达水平。结论HTS抑制eNOS的蛋白质表达水平,可能部分通过HTG-VLDL对eNOS的影响,但未经PKC-MAPKK-MAPK通路,而且PKC-MAPKK-MAPK可能参与了eNOS正常的蛋白质表达,HTS增加MAPK的磷酸化水平有可能是一种细胞自身保护机制。     

锰致神经细胞损伤中诱导型一氧化氮合酶及其基因的变化

[目的]观察不同浓度锰对大鼠脑片神经细胞的损伤情况,探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在锰诱导神经细胞损伤中的变化. [方法]培养出生后4～7 d大鼠脑片,培养液为50％高糖杜尔伯科改良伊格尔培养基,25％Hank平衡盐溶液,24％热灭活马血清,1％青霉素和链霉素.待第15天脑片神经细胞生长状态最佳时加入0、25、100、400 μmol/L MnC12.培养24h后,测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,脑片细胞悬液中细胞凋亡率、一氧化氮生成量和iNOS活性,mRNA和蛋白表达水平. [结果]不同浓度锰处理脑片24h后,脑组织切片神经细胞发生明显损伤.随着锰处理浓度升高,LDH活性升高,100和400 μmol/L锰处理组是对照组的1.71、2.76倍.细胞凋亡率和一氧化氮生成量升高增加,25、100和400 μmol/L锰处理组分别是对照组的3.31、4.50和6.97倍和1.98、2.79和4.02倍.iNOS活性增强,100和400 μmol/L锰处理组分别是对照组的2.12和2.64倍.iNOS mRNA和蛋白表达水平明显升高,25、100和400 μmol/L锰处理组iNOS mRNA表达水平是对照组的1.27、1.43和1.86倍.100和400 μmol/L锰处理组iNOS蛋白表达水平分别是对照组的4.17和5.50倍. [结论]锰可致大鼠脑片神经细胞一氧化氮生成量和iNOS表达升高,进一步导致细胞凋亡率增加.     

Japanese Kampo Saireito Has a Liver‐Protective Effect Through the Inhibition of Inducible Nitric Oxide Synthase Induction in Primary Cultured Rat Hepatocytes

Background: Japanese herbal medicine, Kampo saireito, is used for treatments in patients with digestive diseases, including chronic hepatitis and cirrhosis. However, few studies demonstrate scientific evidence for liver‐protective effects of saireito. In inflamed liver, proinflammatory cytokines such as tumor necrosis factor (TNF)–α and interleukin (IL)–1β stimulate the induction of inducible nitric oxide synthase (iNOS) and nitric oxide (NO) production. Excessive levels of NO synthesized by iNOS have been implicated as one of the factors in liver injury, so it is essential to reduce the induction of iNOS for the prevention of liver injury. In this study, we examined IL‐1β–stimulated hepatocytes as a simple “in vitro injury model” to investigate liver‐protective effects of saireito. Method: Primary cultured rat hepatocytes were treated with IL‐1β in the presence or absence of saireito. The induction of NO production and iNOS and its signaling pathway were analyzed. Results: Saireito inhibited the production of NO dose and time dependently and reduced the expression of iNOS messenger RNA (mRNA) and its protein. Saireito had no effect on IκB degradation but inhibited the translocation of nuclear factor (NF)–κB to the nucleus and its DNA binding. Saireito also inhibited the activation of Akt, resulting in the reduction of type I IL‐1 receptor (IL‐1RI) mRNA and protein expression. Conclusion: These findings demonstrate that saireito suppresses iNOS gene expression through the inhibition of NF‐κB and IL‐1RI–dependent pathways, leading to the reduction of NO production. Saireito may have therapeutic potential for organ injuries, including liver.     

心房利尿钠肽基因多态性与冠心病关系的研究

[目的 ]探讨汉族人群心房利尿钠肽 (atrialnatriureticpeptide ,ANP)T2 2 3 8C基因多态性、血浆中的一氧化氮(nitricoxide ,NO)浓度、一氧化氮合酶 (nitricoxidesynthase ,NOS)活性与冠心病发病的关系。 [方法 ]采用病例 对照研究 ,应用聚合酶链 限制性片段长度多态性 (Polymerasechainrestrictionfragmentlengthpolymorphism ,PCR RFLP)方法检测 12 0例冠心病患者 (包括心绞痛与心肌梗死 )和 13 0名非冠心病对照人群ANPT2 2 3 8C基因多态性 ,应用试剂盒测定血浆中NO含量和NOS的活性。 [结果 ]总研究人群中ANPT2 2 3 8C基因多态性的A1和A2两种等位基因分布频率为 2 5 .46%和74.5 4% ,冠心病组A2A2基因型频率显著高于对照组 ;冠心病患者血浆NO和NOS水平均明显高于对照组 (P <0 .0 1)。在所研究的人群中 ,ANPT2 2 3 8C基因型的分布与血浆NO浓度及NOS活性无相关性。Logistic分析结果提示 ,性别、体重指数 (BMI)、高血压病史、糖尿病史、吸烟史、血浆总胆固醇、NO浓度、NOS活性 ,A2A2ANPT2 2 3 8C基因型为冠心病的独立危险因素。 [结论 ]ANPT2 2 3 8C基因多态性与冠心病发病显著相关 (P <0 .0 5 ) ,将成为冠心病的一种遗传易感性标志物 ,血浆NO和NOS水平与冠心病有密切的关系     

Ferulic Acid Derivatives and Avenanthramides Modulate Endothelial Function through Maintenance of Nitric Oxide Balance in HUVEC Cells

Wholegrain oats contain a variety of phenolic compounds thought to help maintain healthy vascular function, through the maintenance of local levels of the vasodilator nitric oxide (NO). Thus, the full molecular mechanisms involved are not yet clear. With this work we aim to understand the possible cellular mechanisms by which avenanthramides and ferulic acid derivatives, present in oats, may help maintain a healthy vascular function through the modulation of the NO pathway. Primary Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVEC) were exposed to ferulic acid, isoferulic acid, hydroferulic acid, ferulic acid 4-O-glucuronide, isoferulic acid 3-O-sulfate, dihydroferulic acid 4-O-glucuronide, avenanthramide A, avenanthramide B and avenanthramide C (1 μM) or vehicle (methanol) for 24 h. Apocynin and Nω-Nitro-L-arginine (L-NNA) were additionally included as controls. NO and cyclic GMP (cGMP) levels, superoxide production and the activation of the Akt1/eNOS pathway were assessed. The statistical analysis was performed using one-way ANOVA followed by a Tukey post-hoc t-test. Apocynin and all phenolic compounds increased NO levels in HUVEC cells (increased DAF2-DA fluorescence and cGMP), and significantly reduced superoxide levels. Protein expression results highlighted an increase in the Akt1 activation state, and increased eNOS expression. Overall, our results indicated that the glucuronide metabolites do not enhance NO production through the Akt1/eNOS pathway, thus all compounds tested are able to reduce NO degradation through reduced superoxide formation.