缺氧条件下中介素和系膜细胞对内皮细胞血管生成的影响

目的探讨缺氧条件下,中介素(IMD)和肾小球系膜细胞(HMC)对内皮细胞的影响。方法内皮细胞分为4组:(1)内皮细胞与系膜细胞共培养,加IMD处理作为HEMI组;(2)内皮细胞与系膜细胞共培养,无处理作为HEM组;(3)内皮细胞加IMD处理作为HEI组;(4)内皮细胞无处理作为HE组;将各组细胞在1%O2、94%N2、5%CO2条件下缺氧培养12 h后,蛋白质印迹法(Western blot)、免疫细胞化学技术检测相关蛋白表达,实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测相关基因mRNA相对表达量,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血管内皮生长因子A(VEGFA)含量,体外血管形成实验检测内皮细胞的成管分支数。实验结果两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果上皮型钙黏分子(VE-cadherin)表达量HEMI(1.629±0.197、1.557±0.066、10.552±0.523)高于HEM(1.116±0.118、1.340±0.161、8.128±0.542)、HEI(1.278±0.096、1.078±0.088、7.523±1.211)、HE组(1.000±0.000,F=0.734、1.244、6.134,P<0.05),差异有统计学意义;血小板内皮细胞黏附分子(PECAM-1/CD31)表达量HEMI(1.309±0.234、1.203±0.105、1.654±0.462)高于HEM(1.067±0.379、1.038±0.035、1.601±0.397)、HEI(1.225±0.091、1.101±0.038、1.605±0.207)、HE组(1.000±0.000),差异无统计学意义(F=5.083、5.434、6.428,P>0.05);VEGF表达量HEMI(0.904±0.005、1.922±0.457)高于HEM组(0.690±0.071、1.000±0.000,F=8.307、10.896,P<0.01),ELISA中加入IMD组(1.018±0.319)VEGFA浓度比值高于对照组(0.921±0.294,F=0.132,P<0.05),差异有统计学意义;体外血管形成中HEMI(22.289±0.131)、HEM(21.318±0.594)、HEI(21.533±0.867)、HE(20.755±1.798)高于NE组(18.731±0.525,F=5.926、0.030、1.033,P<0.05;F=6.753,P>0.05)。结论缺氧条件下,IMD可以直接或通过系膜细胞间接双重影响内皮细胞,促进血管形成。     

雷公藤多甙对肾小球系膜细胞细胞因子生成的影响

雷公藤多甙（TW）对大鼠肾小球系膜细胞（GMC）具有抑制增殖的作用[1],但TW对GMC细胞因子生成的影响尚未见报道。我们利用小鼠GMC体外培养技术,除采用直接加药方法外,还采用多氯联苯诱导的大鼠肝匀浆（S9）-多种功能氧化酶代替体内的代谢活化系统与药物共同孵育后[2],加入细胞培养体系中。在模拟体内药理效应的前提下,观察TW对GMC细胞因子生成的影响。     

低密度脂蛋白对大鼠系膜细胞产生血管内皮生长因子的影响

高脂血症可致血管内皮损伤，增加肾小球滤过膜通透性，导致蛋白尿、肾小球局灶节段硬化等肾损伤。血管内皮生长因子(vEGF)是特异性促进血管内皮细胞有丝分裂作用的生长因子，具有增加血管通透性等功能，在一些原发性肾小球疾病及代谢性疾病等所致的肾脏病变的发生过程中起一定作用…，但VEGF是否在高脂血症造成的肾脏损害中起重     

细胞间粘附分子对肾小球系膜细胞增殖的影响

近年来免疫病理学研究已证实细胞间粘附分子-1(ICAM-1)作为细胞粘附分子中免疫球蛋白超家族成员之一,通过与炎性细胞表面同族型配体之间相互作用形成粘附,在免疫监督、炎症反应和动脉粥样硬化等过程中起着重要的作用。因此,有关ICAM-1与肾小球系膜细胞增殖的相关研究对进一步阐明肾小球炎性疾病的发病机理及治疗的进展具有重大意义。 一、材料与方法 1.按经典方法培养、鉴定C57BL/6小鼠肾小球系膜细胞及巨噬细胞,选取第4～6代细胞用于本实验。 2.取系膜细胞,胰酶消化后,将制成的浓度为1.0×10~4/L细胞悬液加入24孔培养板内,正常对照组和     

地塞米松对肾小球系膜细胞表达细胞间粘附分子的影响

细胞粘附分子是近年免疫学研究最有活力的领域之一,其介导的细胞与细胞、细胞与基质粘附作用在免疫炎症反应等多种病理过程中起着关键性作用。目前知道,肾小球系膜细胞(MC)表面低表达细胞间粘附     

肝素对肾小球系膜细胞和细胞外基质的影响

肝素对肾小球系膜细胞和细胞外基质的影响王宗谦周希静近年来，单纯肝素或肝素并用激素治疗肾病综合征获良好疗效。Ｐｕｒｋｅｒｓｏｎ等报道，Ｎ－Ｄｅｓｕｌｆａｔｅｄ／ＡｃｅｔｙｌａｔｅｄＨｅｐａｒｉｎ可能延缓肾衰进程，但机理尚未明。我们通过观察肝素对体外培养...     

细胞因子对肾小球肾炎中系膜细胞的作用

肾小球肾炎发病过程中，系膜细胞占有重要位置。体外研究表明系膜细胞是一代谢活性细胞，能分泌一系列细胞因子。这些细胞因子也可由肾小球内浸润的单核／巨噬细胞所分泌。本文综述了这些细胞因子在肾炎动物模型和人类肾脏病中参与的证据。这些细胞因子主要包括基底成纤维细胞生长因子、血小板源性生长因子、β－转化生长因子、集落刺激因子－１、肿瘤坏死因子、白介素－１和白介素－６。     

中医药对肾小球系膜细胞作用机理的探讨

肾小球系膜细胞 (GMC)属于肾脏血管周固有细胞 ,在正常情况下 ,GMC的数量、形态和位置均保持相对稳定 ,其合成基质的能力也较小 ;但在异常时 ,GMC是肾小球肾炎发生发展过程中的主要靶细胞[1,2 ] ,GMC异常增生是多种肾脏疾病的主要形态表现和核心病理环节。随着分子生物学技术在中医药学中的深入研究 ,现已证实某些中药对GMC的异常增殖有抑制作用 ,这为中医药治疗以GMC增生为主要病理改变的肾小球疾病提供了理论依据。现将中医药对GMC的作用机理探讨如下。　　 1　调控GMC的基因表达GMC增殖时存在着bcl- 2、ICE两种基因的异常表…     

肾小球系膜细胞内皮素受体的研究

内皮素(endothelin,ET)是一种生物学作用广泛而强烈的缩血管物质,除心血管系统外,肾脏也是重要的效应器官。肾小球系膜细胞(MC)是最活跃的固有细胞,已经证明ET对MC有明显的致收缩和促增殖作用。根据一般规律,MC可能有ET受体(ET-R)。为了证实这一点,我们用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)及Northern印迹杂交法,检测ET-R在MC的表达。 一、材料和方法 1.动物:6～8周龄,体重150～200g SD雄性大鼠。2.MC培养与鉴定:按本实验室已     

缬沙坦对人肾系膜细胞清道夫受体表达的影响

目的 探讨缬沙坦对人肾小球系膜细胞（HMC）表达清道夫受体（SR）水平的影响。方法 应用流式细胞仪和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测体外培养HMC在佛波酯（PMA）刺激后缬沙坦对HMCSR的mRNA的表达。结果 体外培养的HMC在PMA刺激下能大量表达SRmRNA，呈剂量依赖性，其基因序列测定结果与巨噬细胞所表达的SR完全相同。缬沙坦能抑制PMA诱导的HMCSR表达，且呈剂量及时间依赖性。结论 矍有表达SR的潜力，缬沙坦能明显抑制HMCSR在PMA诱导下的表达。这可能是其发挥治疗作用的机制之一。     

The interaction of glomerular mesangial cells and epithelial cells

The interaction of cells within the glomerulus plays an important role in the development and progression of glomerular disease. To investigate the interaction of glomerular mesangial cells (GMC) and epithelial cells (GEC), and mediator(s) of this interaction, we investigated the effect of Adriamycin (doxorubicin hydrochloride)-induced (ADR) rat GMC-conditioned medium (GMC-CM) on the incorporation of ³⁵S, ³H-leucine, and ³H-thymidine in normal rat GEC, as well as ³H-thymidine uptake by normal rat GMC in response to ADR-rat GEC-CM. In addition, changes in the responsiveness to interleukin-6 (IL-6) and the products of IL-6 were assessed in ADR-rat GMC. The results showed that: (1) GMC-CM of ADR-rat with heavy proteinuria stimulated GEC proliferation and the synthesis of sulfated compounds and protein, while the GEC-CM of ADR-rat from the same nephrotic period increased GMC proliferation; (2) the ADR-rat GMC had altered responsiveness to IL-6 and its products. The stimulation index results demonstrated the interaction of GMC and GEC in the ADR-induced rat model, and that this interaction related closely to the degree of proteinuria and was mediated by soluble products of the damaged glomerular cell. Received March 29, 1996; received in revised form July 1, 1997; accepted July 2, 1997     

脂蛋白（a）对肾小球系膜细胞的作用

目的探讨脂蛋白（ａ）［Ｌｐ（ａ）］对肾小球系膜细胞（ＧＭＣ）的作用。方法将体外培养的系膜细胞，加脂蛋白（ａ）刺激后，测定细胞生长率和细胞上清中血小板活化因子（ＰＡＦ）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）及纤维连结蛋白（ＦＮ）水平，并以未经刺激者作对照。结果经脂蛋白（ａ）刺激４８小时，在终浓度５～２０ｍｇ／Ｌ时细胞生长率轻度增加，而在５０～４００ｍｇ／Ｌ时细胞生长率明显下降。刺激１８小时，细胞上清中ＰＡＦ的水平明显高于对照，且与脂蛋白（ａ）浓度呈明显正相关（ｒ＝０．９３７，Ｐ＜０．０１）；Ｌ９２９细胞的杀伤率有所增加，但未达５０％；ＬＤＨ的水平在脂蛋白（ａ）１００ｍｇ／Ｌ以下时有所增加；刺激１８、４８、７２小时后的细胞上清纤维连结蛋白均为阴性。结论脂蛋白（ａ）对系膜细胞体外增殖有低浓度轻度促进、高浓度抑制的双向作用，对细胞ＰＡＦ的产生具有浓度依赖的促进作用，并能增加细胞上清中ＬＤＨ及ＴＮＦ水平，因而可通过多种途径介导肾小球损伤。     

胰岛素诱导Zucker肥胖大鼠肾小球系膜细胞核因子-κB活性的变化

目的 研究胰岛素(INS)对体外培养的Zucker大鼠肾小球系膜细胞(GMC)核因子κB(NF-κB)活化的影响,以及INS诱导的NF-κB活性的变化与Zucker大鼠年龄(即病程)以及基因型的相关性。方法 (1)分别取Zucker肥胖大鼠(3月龄和10月龄)和Zucker瘦型大鼠(3月龄和10月龄)4组大鼠的GMCs(O_(3m),O_(10m),L_(3m),L_(10m))进行传代培养。(2)凝胶迁移率实验(EMSA)和超迁移率实验(GSA)检测不同浓度及不同时相INS对Zucker大鼠肾小球系膜细胞NF-κB活性的影响,以及NF-κB二聚体中p50和p65成分的变化。(3)应用Western印迹检测胞浆和胞核内NF-κB p65水平。结果 (1)INS诱导后,4组GMC内NF-κB活性均较对照组明显增强(F=219.65,P<0.01);(2)随着INS刺激浓度增加和时间的延长,GMC内NF-κB活性相应增强,0.5 mg/L的INS刺激24h时,NF-κB活性强度达最高峰;INS刺激浓度升为5 mg/L,则15h达最高峰;(3)INS主要激活NF-κB二聚体成份中的p65;(4)O_(3m)组NF-κB的活性显著高于O_(10m)组(P<0.01),L_(3m)组NF-κB的活性显著高于L_(10m)组(P<0.01),O_(3m)组显著高于L_(3m)组(P<0.01),O_(10m)组显著高于L_(10m)组(P<0.01)。(5)INS可呈剂量依赖性地降低胞浆内的p65的蛋白水平和上调胞核内p65水平。结论 INS可诱导Zucker大鼠GMC内NF-κB活化,其活化方     

精甘天丝四肽对人肾小球系膜细胞肌动蛋白及凋亡的影响

观察精-甘-天-丝(RGDS)四肽对肾小球系膜细胞肌动蛋白及凋亡的影响,以探讨细胞外基质(ECM)-整合素-细胞骨架的相互作用机制。方法 共聚焦显微镜观察肾小球系膜细胞肌动蛋白微丝的变化;以流式细胞仪和DNA电泳方法检测细胞凋亡。结果 用RGDS肽处理2小时后,系膜细胞开始由梭形变为圆形或卵圆形,同时细胞质的肌动蛋白微丝亦由弥漫分布变为聚集成团,居于细胞质一侧,形成着边现象,这些细胞继而脱壁、悬浮于培养上清中,脱落细胞经碘化丙啶染色见细胞核固缩、破碎。至第10小时RGDS处理组的系膜细胞大都脱壁,脱落细胞的DNA电泳呈现梯形条带,流式细胞仪分析显示处理组系膜细胞中出现了低二倍体细胞群(A_0峰),证实处理组的脱落细胞发生了细胞凋亡。在实验观察期间对照组的系膜细胞始终呈贴壁状态生长,细胞质肌动蛋白微丝呈弥漫分布。结论 RGDS肽可以使肾小球系膜细胞细胞骨架肌动蛋白微丝分布异常,导致肾小球系膜细胞变形、脱壁和凋亡。     

内皮素对人肾小球系膜细胞表达细胞粘附分子的影响

目的 探讨内皮素-1(ET1-1)对体外培养的人肾小球系膜细胞表达细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)的调节作用。方法 利用Northern杂交技术和细胞ELISA方法分别从mRNA和蛋白质两个水平观察ICAW-1和VCAM-1的变化。结果 在正常培养条件下,人肾小球系膜细胞仅低水平表达一定量的ICAM-1、VCAM-1的mRNA和蛋白质;ET-1(10~(-7)mol)刺激后,这两种细胞粘附分子的mRNA表达迅速上调,且随后其相应蛋白质表达也显著增加并呈时间依赖性。结论 提示ET-1对粘附分子表达的促进作用可能在传小球疾病的发生中具有重要意义。     

TRPC1通道参与调节肾小球系膜细胞的收缩

目的探讨离体和在体情况下TRPC1通道是否参与肾小球系膜细胞的收缩。方法通过计算细胞表面积来观察肾小球系膜细胞的收缩情况。分别利用荧光标记的菊粉和对氨基马尿酸（PAH）的血浆清除率计算大鼠肾小球滤过率（GFR）和肾血浆流量。结果在肾小球系膜细胞的培养液中加入血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）10min后，细胞表面积减少（37．2％±4．0％），系膜细胞的收缩反应可因TRPC1基因敲除而受到显著抑制（20．1％±3．0％）。给大鼠注射AngⅡ（1．7ng·min^-1·100g^-1BW）可引起GFR下降，注射TRPC1抗体（300μg／L）显著抑制AngⅡ引起GFR下降（P〈0．05）。但与TRPC1抗体相同浓度的免疫球蛋白，不能抑制AngⅡ引起的GFR下降。另外，TRPC1抗体不影响AngⅡ引起的血压改变和肾血流量的下降。结论本实验表明TRPC1通道在调节肾小球系膜细胞收缩功能方面发挥了重要的作用。     

Shiga toxin-1 affects nitric oxide production by human glomerular endothelial and mesangial cells

Acute renal failure hallmarks the pathogenesis of the epidemic form of hemolytic uremic syndrome (D+HUS), which is caused by E. coli strains that produce Shiga-like toxin (Stx). In this study, we investigated the influence of Stx-1 on nitric oxide (NO) production by human glomerular microvascular endothelial cells (GMVEC) and human mesangial cells. NO synthesis by human mesangial cells is in the micromolar range and that of GMVEC in the picomolar range. Stx-1 reduced NO production in non-stimulated GMVEC (5 nmol/l Stx-1 required) without inhibition of protein synthesis. In non-stimulated and TNFα-pretreated mesangial cells, NO production was reduced with a maximal reduction at 10 fmol/l shiga toxin. The cellular iNOS antigen content in mesangial cells was reduced in a concentration-dependent way (10 fmol/l-100 pmol/l), while partial inhibition of protein synthesis required 10 nmol/l Stx-1 in these cells. Our in vitro data suggest that Stx may reduce NO synthesis during the course of HUS development, contributing to the aggravation of the thrombotic microangiopathy and renal failure as observed in HUS.     

Effect of intermedin on microvascular injury of unilateral ureteral obstruction rats

Objective To observe the effect of intermedin(IMD) on microvascular injury of renal fibrosis in unilateral ureteral obstruction (UUO) rat model. Methods Seventy-two male Wistar rats were randomly divided into two groups: the sham - operation group (n=24) underwent the left ureteral dissection, the other 48 rats were made as unilateral ureteral obstruction models and sub - divided into model group(UUO, n=24) and IMD group (n=24). At the 7, 14, 21, 28 day after the operation, 6 randomly - selected rats from each of the three groups respectively were blooded by abdominal arotic and their obstructive kidneys were taken out. The renal histopathological changes were observed through HE and Masson staining, the contents of BUN, Scr and cystatin C (CysC) of the obstructive kidneys were determined, the expressions of transforming growth factor - β1 (TGF - β1), α-SMA, bone morphogenetic protein-7 (BMP-7), E-cadherin, thrombospondin 1 (TSP-1) and vascular endothelial growth factor (VEGF) were detected by RT - PCR and immunohistochemistry. Results Compared with the sham-operated group, the pathological changes of kidney in the model group showed that the degree of fibrosis was obvious, tubular interstitial damage aggravated, the levels of BUN, Scr, CysC in the model group increased (P＜0.05), the mRNA expression and protein content of TGF-β1, α-SMA, TSP-1 increased (P＜0.05), while the levels of BMP-7, E-cadherin and VEGF decreased (P＜0.05). Compared with the UUO group, renal tubular damage, interstitial fibrosis in the IMD group were lighter, the levels of BUN, Scr, CysC in the IMD group were lower (P＜0.05), the mRNA expression and protein content of TGF-β1, α-SMA,TSP-1 were down-regulated (P＜0.05), while the levels of BMP-7, E-cadherin and VEGF were up-regulated (P＜0.05). Conclusion IMD can ameliorate the renal interstitial fibrosis, and the mechanism may be related to the fact that VEGF mediated by IMD can reduce vascular injury.