miR-26b-5p靶向VEGF抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的 探讨miR-26b-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法 培养人正常肺上皮细胞BEAS-2B和非小细胞肺癌细胞A549,通过qPCR检测BEAS-2B和A549细胞中miR-26b-5p和VEGF mRNA的表达水平。通过Western Blot检测BEAS-2B和A549细胞中E-cadherin、Vimentin和VEGF蛋白的表达水平。生物信息学预测VEGF与miR-26b-5p的靶向关系。使用脂质体法将NC-mimic和miR-26b-5p-mimic转染A549细胞,通过CCK8法、EDU实验检测miR-26b-5p对细胞生长的影响;通过划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-26b-5p对细胞迁移和侵袭的影响;通过Western Blot检测对E-cadherin、Vimentin和VEGF蛋白表达的影响。结果 与BEAS-2B细胞相比,在A549细胞中,miR-26b-5p表达水平显著下降(P<0.05),VEGF的mRNA和蛋白表达水平显著上升(P<0.05),E-cadherin蛋白的表达水平显著下降(P<0....     

miR-302a靶向E2F1抑制胃癌BGC-823细胞EMT并降低细胞侵袭和迁移能力的实验研究

目的探讨miR-302a对胃癌BGC-823细胞上皮间质转化(EMT)、侵袭和迁移能力的影响和机制。方法在胃癌BGC-823细胞中转染miR-302a mimics,CCK-8测定细胞增殖变化,Transwell小室测定迁移和侵袭,Western blotting检测E-cadherin、Vimentin、N-cadherin蛋白表达。靶基因预测软件预测E2F1可能为miR-302a的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在胃癌BGC-823细胞中共转染pcDNA 3.1-E2F1和miR-302a mimics,按照上述方法测定细胞增殖、侵袭、迁移和E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、E2F1蛋白表达水平。结果miR-302a mimics降低胃癌BGC-823细胞增殖、侵袭和迁移能力,下调细胞中Vimentin、N-cadherin蛋白表达水平,促进细胞中E-cadherin蛋白表达。miR-302a靶向负调控E2F1表达。pcDNA 3.1-E2F1能够提高miR-302a mimics条件下胃癌BGC-823细胞中E2F1蛋白表达水平,促进细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞中Vimentin、N-cadherin蛋白表达,减少细胞中E-cadherin蛋白表达。结论miR-302a靶向E2F1抑制胃癌BGC-823细胞EMT并降低细胞侵袭和迁移能力。     

miR-127-3p在动脉粥硬化中的表达及干扰miR-127-3p对PDGF-BB处理的HAoSMC增殖迁移的影响

目的探讨miR-127-3p对血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)诱导的人主动脉平滑肌细胞(HAoSMC)增殖、迁移的影响。方法收集动脉粥硬化患者及正常者血清,将HAoSMC分为对照组(未作任何处理)、模型组(25μg/L PDGF-BB)、anti-miR-NC组(转染miR-127-3p抑制剂对照+25μg/L PDGF-BB)、anti-miR-127-3p组(转染miR-127-3p抑制剂+25μg/L PDGF-BB)。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-127-3p和NF-κB mRNA表达水平;流式细胞仪检测细胞周期;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖活力;Transwell检测细胞迁移;蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞增殖核抗原Ki67(Ki67)、神经钙粘蛋白(N-cadherin)、上皮钙粘蛋白(E-cadherin)的表达。结果与正常对照组相比,动脉粥硬化患者血清中miR-127-3p表达水平升高(P<0.05)。与对照组相比,模型组miR-127-3p表达水平升高,G0-G1期细胞所占比例降低,S期细胞所占比例升高,细胞OD值升高,迁移细胞数增加,Ki67、N-cadherin表达水平升高,E-cadherin表达水平降低(P<0.05)。与antimiR-NC组相比,anti-miR-127-3p组miR-127-3p表达水平降低,G0-G1期细胞所占比例升高,S期细胞所占比例降低,细胞OD值降低,迁移细胞数减少,Ki67、N-cadherin表达水平降低,E-cadherin表达水平升高,NF-κB mRNA表达水平降低(P<0.05)。结论干扰miR-127-3p表达可抑制PDGF-BB处理的HAoSMC增殖、迁移,其机制可能与NF-κB信号通路有关。     

水通道蛋白4对肺癌细胞A549迁移能力的影响及其作用机制研究

目的探讨水通道蛋白4(AQP4)对肺癌细胞迁移能力的影响。方法选取肺癌A549细胞株,采用AQP4小干扰RNA(siRNAs)进行转染,采用Transwell法检测肿瘤细胞迁移能力,采用蛋白质印迹(Western blotting)法检测上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)表达水平,同时分析其对上皮间质转化(EMT)的影响。结果敲降AQP4可抑制肺癌细胞A549迁移能力及EMT,上调E-cadherin表达水平并下调N-cadherin和Vimentin表达水平(P0.05)。结论抑制AQP4表达可有效降低肺癌细胞A549迁移能力并抑制EMT,推测促进EMT可能是AQP4的主要分子作用机制。     

miR-9-5p通过靶基因ADAMTS18调控肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的分子机制

目的研究miR-9-5p对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响和潜在的分子机制。方法 qRT-PCR检测ADAMTS18和miR-9-5pmRNA的表达,Western印迹检测ADAMTS18蛋白表达水平,四氮唑蓝(MTT)法测定A549细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告系统验证miR-9-5p与ADAMTS18的调控关系。结果与人正常支气管上皮细胞HBE相比,在肺癌细胞A549组中ADAMTS18的mRNA和蛋白表达量显著下降(P0.05),miR-9-5p表达量显著上升(P0.05);抑制miR-9-5p可以抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭;双荧光素酶报告系统结果表明,miR-9-5p靶向负调控ADAMTS18的表达;过表达ADAMTS18可抑制肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭;抑制ADAMTS18逆转了下调miR-9-5p对A549细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-9-5p通过靶向ADAMTS18基因抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭,miR-9-5p是肺癌分子诊断和治疗的潜在靶点。     

MicroRNA-21在胃癌细胞中促进上皮-间质转化的研究

目的探讨MicroRNA-21在胃癌细胞上皮-间质转化中的作用及其机制。方法利用Lipofectamine 2000脂质体将miR-21 mimics、miR-21 inhibitor转染入AGS细胞中;Real-time聚合酶链反应(RT-PCR)法测定AGS细胞内miR-21的表达;采用划痕法、Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blotting方法检测上皮-间质转化(EMT)相关蛋白表达的表达变化。结果 AGS细胞转染miR-21 mimics后,细胞的迁移和侵袭能力均高于对照组(P<0.05),Western blot结果显示E-Cadherin、PTEN表达下降,Vimentin表达升高;AGS细胞转染miR-21 inhibitor后,细胞的迁移和侵袭能力均低于对照组(P<0.05);E-Cadherin、PTEN表达升高,Vimentin表达降低。结论 miR-21可以诱导AGS胃癌细胞迁移和侵袭。E-cadherin和PTEN表达下调和上调Vimentin可能是miR-21作用的分子机制。miR-21在胃癌肿瘤转移中可能起着重要作用,可能成为胃癌治疗的一个潜在靶点。     

姜黄素对肺癌A549细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨姜黄素对肺癌A549细胞侵袭迁移力的影响及其机制。 方法利用不同浓度姜黄素处理正常肺上皮细胞,台盼蓝法检测药物细胞毒性;不同浓度的姜黄素作用于A549细胞,MTT法测定A549细胞增殖水平;细胞划痕实验和Transwell实验分别测定药物处理后A549细胞的迁移和侵袭能力变化情况;Werstern blot测定A549细胞中于侵袭迁移有关的表皮生长因子受本(EGFR)、E-型钙黏蛋白(E-cadherin)、N-型钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白的表达。 结果姜黄素浓度在0～40 μg/ml时正常肺上皮病死率低,差异无明显统计学差异(P>0.05),表明姜黄素对正常肺上皮细胞的不良反应小;MTT实验结果显示姜黄素以浓度依赖的方式抑制A549细胞的增殖,各组与对照组相比均具有统计学意义(P<0.01);细胞划痕实验显示姜黄素以浓度依赖的方式抑制A549细胞的迁移能力,各组与对照组相比均具有统计学意义(P<0.01);Transwell实验显示姜黄素以浓度依赖的方式抑制A549细胞的侵袭能力,各组与对照组相比均具有统计学意义(P<0.01);Western blot显示姜黄素处理A549细胞后EGFR蛋白(P<0.01)和N-cadherin蛋白表达降低(P<0.01),E-cadherin蛋白表达升高(P<0.01)。 结论一定浓度内姜黄素细胞毒性低,姜黄素能够抑制A549的增殖、迁移和侵袭,可能是通过调节EGFR、N-cadherin、E-cadherin蛋白从而逆转上皮间质转化过程。     

miR-215对胃癌细胞侵袭转移能力的影响及机制

目的探讨miR-215对胃癌细胞侵袭转移能力的影响及作用机制。方法通过RT-PCR检测miR-215在高转移胃癌细胞株NCIN87,BGC-823,RF-48及低转移细胞株HGC-27及MKN-28中的表达;Transwell迁移及侵袭实验检测miR-215抑制剂对胃癌细胞迁移及侵袭能力的影响;Western印迹检测miR-215抑制剂对胃癌细胞活化白细胞黏附分子(ALCAM),基质金属蛋白酶(MMP)-2,MMP-9,上皮细胞-间充质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏附素(E-cadherin),波形蛋白(Vimentin)表达量的影响。结果 RT-PCR结果证实miR-215在高转移胃癌细胞株中的表达高于低转移胃癌细胞中的表达,且miR-215在BGC-823细胞中的表达最高,因此选用BGC-823作为后续实验细胞株。miR-215抑制剂转染BGC-823细胞48 h后,发现下调miR-215表达能显著抑制BGC-823细胞迁移及侵袭能力,并能下调ALCAM,MMP-2,MMP-9及Vimentin表达,上调E-cadherin表达。结论miR-215低表达能显著抑制胃癌细胞BGC-823侵袭及转移能力,与下调MMPs及抑制EMT生成有关。     

lncRNA LOXL1-AS1通过靶向miR-142-5p/PIK3CA调控胃癌细胞侵袭、迁移能力

目的探讨lncRNA LOXL1-AS1对胃癌细胞侵袭、迁移的影响及其作用机制。方法 Transwell小室法检测上调或敲低LOXL1-AS1表达后对胃癌细胞侵袭、迁移能力的影响,生物信息学方法预测LOXL1-AS1和miR-142-5p的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验验证两者靶向关系,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测上调或敲低LOXL1-AS1表达对miR-142-5p表达的影响;免疫印迹法检测EMT标志物蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、ZO-1)表达和PIK3CA表达。结果敲低LOXL1-AS1表达可抑制胃癌细胞侵袭、迁移能力,并抑制胃癌细胞EMT;双荧光素酶实验证实LOXL1-AS1直接靶向作用于miR-142-5p;LOXL1-AS1负调控miR-142-5p表达与活性,并通过miR-142-5p正调控PIK3CA表达;过表达LOXL1-AS1可促进胃癌细胞侵袭和迁移,miR-142-5p可逆转LOXL1-AS1过表达对胃癌细胞侵袭和迁移的促进作用。结论 LOXL1-AS1靶向miR-142-5p/PIK3CA调控胃癌细胞侵袭和迁移能力。     

硝呋齐特对A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其作用机制

目的探讨硝呋齐特(nifuroxazide)对A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其可能的作用机制。方法用不同浓度(2.5、5、10μmol/L)的nifuroxazide处理肺腺癌A549细胞,采用甲基噻唑基四唑(MTT)法观察nifuroxazide对细胞增殖的影响;流式细胞术观察nifuroxazide对细胞凋亡的影响;采用Transwell小室观察nifuroxazide对细胞迁移及侵袭的影响。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测nifuroxazide对微小RNA-219-5p(miR-219-5p)表达的影响;观察抑制miR-219-5p表达对细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)蛋白表达。结果nifuroxazide处理A549细胞后细胞增殖能力受到明显抑制(P<0.05),随浓度增加其抑制作用逐渐增强(P<0.05);nifuroxazide作用于A549细胞后,细胞凋亡率显著增加(P<0.05),迁移与侵袭细胞数显著减少(P<0.05),miR-219-5p与Bax的表达水平显著升高(P<0.05),而Bcl2表达水平显著降低(P<0.05);抑制miR-219-5p的表达可逆转nifuroxazide对A549细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的作用。结论硝呋齐特可通过上调miR-219-5p的表达诱导A549细胞凋亡,抑制细胞增殖、迁移及侵袭。     

LMO4基因沉默对Snail诱导的非小细胞肺癌A549细胞上皮—间质转化的影响研究

目的探讨LMO4基因沉默对Snail诱导的非小细胞肺癌A549细胞上皮-间质转化(EMT)的影响。方法体外培养非小细胞肺癌A549细胞,取对数生长期细胞进行实验,根据转染慢病毒分为sh-NC组(转染sh-NC慢病毒)、sh-LMO4组(转染sh-LMO4慢病毒)、Snail组(转染Snail慢病毒)和Snail+sh-LMO4组(转染Snail慢病毒和sh-LMO4慢病毒)。采用实时定量RT-PCR检测sh-NC组和sh-LMO4组LMO4 mRNA相对表达量,采用Western Bloting法检测sh-NC组和sh-LMO4组LMO4蛋白相对表达量及4组N-cadherin、Vimentin、E-cadherin蛋白相对表达量,采用Transwell实验检测4组细胞侵袭个数,采用细胞划痕实验检测4组细胞迁移距离。结果 sh-LMO4组LMO4 mRNA相对表达量和LMO4蛋白相对表达量均低于sh-NC组(P0.05)。Snail组侵袭细胞个数多于sh-NC组,sh-LMO4组侵袭细胞个数少于sh-NC组,Snail+sh-LMO4组侵袭细胞个数少于Snail组、多于sh-LMO4组(P0.05)。培养24 h后Snail组细胞迁移距离长于sh-NC组,sh-LMO4组细胞迁移距离短于sh-NC组,而Snail+sh-LMO4组细胞迁移距离短于Snail组、长于sh-LMO4组(P0.05)。Snail组N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达量高于sh-NC组,E-cadherin蛋白相对表达量低于sh-NC组(P0.05);sh-LMO4组N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达量低于sh-NC组,E-cadherin蛋白相对表达量高于sh-NC组(P0.05);Snail+sh-LMO4组N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达量低于Snail组,E-cadherin蛋白相对表达量高于Snail组(P0.05);Snail+sh-LMO4组N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达量高于sh-LMO4组,E-cadherin蛋白相对表达量低于sh-LMO4组(P0.05)。结论 LMO4基因沉默可逆转Snail诱导的非小细胞肺癌A549细胞EMT。     

槐角黄酮通过调控miR-188-5p/PRMT5基因表达对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制

目的研究槐角黄酮对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响和潜在的分子机制。方法 qRT-PCR检测蛋白质精氨酸甲基转移酶(PRMT)5和miR-188-5p mRNA的表达,Western印迹检测PRMT5、增殖相关蛋白细胞周期蛋白(Cyclin)D1和p21、迁移侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达水平,四氮唑蓝(MTT)法测定A549细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告系统验证miR-188-5p与PRMT5的调控关系,流式细胞术检测细胞凋亡。结果槐角黄酮可抑制肺癌细胞A549的侵袭、迁移和增殖,且呈显著的剂量依赖性;槐角黄酮可以促进A549细胞中miR-188-5p表达,抑制PRMT5表达;双荧光素酶报告系统实验结果表明,miR-188-5p靶向调控PRMT5的表达;过表达miR-188-5p和抑制PRMT5均可抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭;抑制miR-188-5p逆转了槐角黄酮对A549细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论槐角黄酮通过miR-188-5p靶向PRMT5基因抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭。槐角黄酮对肺癌具有潜在治疗作用。     

沉默HIF-1α调控MAPK/ERK信号通路抑制NSCLC转移的分析

目的探讨HIF-1α在体内及体外对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞转移的影响及其作用机制。 方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测HIF-1α在癌旁正常组织、肺鳞癌组织(LUSC)、肺腺癌组织(LUAD)、A549细胞和HEB细胞中的表达量。上调HIF-1α表达后,通过MTT、细胞侵袭和Western blot实验检测过表达HIF-1α对A549细胞增殖、侵袭和EMT的影响。下调HIF-1α表达后,Western blot检测A549细胞ERK和p-ERK蛋白的表达量。THBQ激活MAPK/ERK通路后,分析A549细胞增殖、侵袭和EMT能力。将细胞株植入裸鼠体内,构建移植瘤模型,最后测量裸鼠移植瘤的体积和重量。 结果HIF-1α在NSCLC组织的表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.05)。A549细胞中HIF-1α表达水平明显高于HEB细胞(P<0.01),过能够促进A549细胞的增殖和侵袭,N-cadherin蛋白表达量明显上升,E-cadherin蛋白表达量明显下降。下调HIF-1α能够抑制A549细胞内MAPK/ERK通路,且抑制了A549细胞的增殖、侵袭和EMT。下调HIF-1α使裸鼠移植瘤的重量和体积明显减小。 结论沉默HIF-1α通过MAPK/ERK信号通路在体内及体外抑制NSCLC转移。     

普鲁卡因通过miR-15a-5p/PI3K-AKT3途径调控乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制

目的探讨普鲁卡因对乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法以不同浓度(0.5、1.0、2.5、5.0、10.0 mmol/L)普鲁卡因处理MCF-7细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;5.0 mmol/L普鲁卡因处理MCF-7细胞48 h后,Transwell法检测迁移和侵袭,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-15a-5p的表达。转染miR-15a-5p mimic至MCF-7细胞,检测细胞增殖、迁移和侵袭。靶基因预测软件预测miR-15a-5p和AKT3靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测二者靶向关系。转染miR-15a-5p inhibitor至MCF-7细胞,并用5.0 mmol/L普鲁卡因处理48 h,检测细胞增殖、迁移和侵袭,Western印迹检测蛋白激酶B(AKT)3的表达。结果与Con组相比,普鲁卡因能明显抑制MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.001),促进细胞中miR-15a-5p的表达(P<0.01)。过表达miR-15a-5p可抑制MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.001,P<0.01,P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-15a-5p和AKT3的靶向结合有关。抑制miR-15a-5p表达减弱了普鲁卡因对MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭及AKT3表达的抑制作用(P<0.05)。结论普鲁卡因能够抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与调控miR-15a-5p/磷脂酰肌激-3-激酶(PI3K)-AKT3途径有关。     

紫花牡荆素对宫颈癌HeLa细胞上皮间质转化、侵袭和迁移作用的影响

目的 探讨紫花牡荆素(CAS)对宫颈癌HeLa细胞上皮间质转化(EMT)、侵袭和迁移作用的影响及其可能机制.方法 将体外培养的HeLa细胞用不同浓度的人转化生长因子β1处理,倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化;用HE染色法观察不同浓度CAS对间质转化的HeLa细胞形态学的影响;用Transwell法检测细胞侵袭、迁移能力;用Westem blot分析细胞E-cadherin、N-cadherin和Twist蛋白表达情况.结果 CAS能抑制HeLa细胞向间质细胞形态转化,并下调N-cadherin蛋白的表达及上调E-cadherin蛋白的表达;与对照组相比,CAS作用72 h后能抑制宫颈癌HeLa细胞的侵袭和迁移能力,并下调Twist蛋白的表达.结论 CAS能抑制宫颈癌HeLa细胞EMT、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与其下调Twist蛋白表达相关.     

LncRNA MCM3AP-AS1靶向调控miR-16-5p表达对肺癌细胞增殖、迁移侵袭的影响及机制

目的研究LncRNA MCM3AP-AS1对肺癌细胞增殖、迁移侵袭的影响和潜在机制。方法以BEAS-2B为对照组,实时荧光定量(qRT)-聚合酶链反应(PCR)检测MCM3AP-AS1和miR-16-5p RNA的表达,四氮唑蓝(MTT)法测定A549细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,Western印迹检测增殖蛋白CyclinD1、p21和p27及迁移蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和MMP-14,双荧光素酶报告系统验证MCM3AP-AS1和miR-16-5p的关系。结果与对照组相比,肺癌细胞系A549、SPC-A1和NCI-H460中MCM3AP-AS1表达量均显著升高(P0.05),miR-16-5p表达量显著下降(P0.05);抑制MCM3AP-AS1表达和过表达miR-16-5p均可抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭;MCM3AP-AS1靶向负向调控miR-16-5p的表达;抑制miR-16-5p表达逆转了下调MCM3AP-AS1表达对A549细胞增殖、迁移、侵袭的作用。结论 LncRNA MCM3AP-AS1通过靶向miR-16-5p调控肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭。MCM3AP-AS1是肺癌潜在分子靶点。     

SNHG3调控miR-186-5p/ZEB1促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化的机制研究

［摘要］　目的　探究SNHG3调控miR-186-5p/E盒结合锌指蛋白1（ZEB1）促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化（EMT）的机制。方法　在HepG2细胞中转染siRNA干扰片段敲除SNHG3、转染pcDNA3.1(+)/SNHG3使SNHG3过表达,通过实时荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）检测是否转染成功。克隆形成实验检测HepG2细胞增殖,细胞划痕实验检测HepG2细胞迁移率,Transwell小室实验检测HepG2细胞侵袭数量,双荧光素酶活性检测验证SNHG3与miR-186-5p、miR-186-5p与ZEB1的靶向关系,FQ-PCR和Western blot法检测SNHG3、ZEB1、E-cadherin、N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9、Snail的表达水平。结果　肝癌组织中SNHG3表达量高于正常组织,SNHG3表达量低/中的肝癌患者的生存预后优于SNHG3表达量高的肝癌患者,差异有统计学意义（P<0.05）。克隆形成实验结果显示,与pcDNA3.1(+)组相比,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞增殖数量显著增加（P<0.05）。细胞划痕实验结果显示,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞迁移率显著高于pcDNA3.1(+)组（P<0.05）。Transwell小室实验结果显示,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞侵袭数量显著高于pcDNA3.1(+)组（P<0.05）。双荧光素酶活性检测结果显示,miR-186-5p mimic和pGL6-SNHG3-WT共转染后,荧光素酶活性低于其他组,miR-186-5p mimic和pGL6-ZEB1-WT共转染后,荧光素酶活性低于其他组,差异有统计学意义（P<0.05）。FQ-PCR和Western blot检测结果显示,当SNHG3过表达时,E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量显著下调,N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9和Snail mRNA和蛋白相对表达量以及ZEB1蛋白相对表达量显著上调;当SNHG3敲除后,E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量显著上调,N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9和Snail mRNA和蛋白相对表达量以及ZEB1蛋白相对表达量显著下调,差异有统计学意义（P<0.05）。结论　SNHG3调控miR-186-5p/ZEB1可促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,表明SNHG3是肝癌潜在的治疗靶点。     

miR-18a-5p调控PSORS1C1对类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞迁移、侵袭及炎症反应的影响

目的探讨微小RNA-18a-5p(miR-18a-5p)对类风湿关节炎成纤维细胞(SFs)样滑膜细胞迁移、侵袭及炎症反应的影响及其作用机制。方法体外培养人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MH7A,分为miR-18a-5p组、miR-NC组、si-PSORS1C1组、si-NC组、miR-18a-5p+pcDNA3.1-PSORS1C1组、miR-18a-5p+pcDNA3.1组。qRT-聚合酶链反应(PCR)检测miR-18a-5p表达;分别采用Transwell小室法检测细胞迁移及侵袭的情况。双荧光素酶报告基因实验检测miR-18a-5p与PSORS1C1的靶向关系;Western印迹检测PSORS1C1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、钙黏附蛋白-E(E-cadherin)蛋白表达;测定细胞上清液中白细胞介素(IL)-1、IL-2水平。结果 miR-18a-5p在MH7A细胞中的表达水平显著降低(P<0.05),miR-18a-5p过表达可明显抑制MH7A细胞迁移及侵袭能力,IL-1水平与MMP-2表达水平显著降低(P<0.05),而IL-2水平与E-cadherin表达水平均...     

慢病毒载体介导的miR-342-3p对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭迁移的影响研究

目的探讨miR-342-3p对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭迁移的影响及分子机制。方法用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测非小细胞肺癌组织及细胞中miR-342-3p和NUCKS1的表达水平;构建慢病毒介导的miR-342-3p过表达载体(LV-miR-342-3p),将LV-miR-342-3p和阴性对照空病毒载体(LV-NC)转染至肺癌细胞A549、H1299中,采用蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达,双荧光素酶报告实验检测miR-342-3p和NUCKS1的靶向关系,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖活力,Transwell检测细胞迁移和侵袭。结果肺癌组织及肺癌细胞A549和H1299中miR-342-3p表达水平降低,NUCKS1表达水平升高(P0.05)。miR-342-3p靶向调控NUCKS1。miR-342-3p过表达后,细胞活力降低,迁移和侵袭细胞数降低,NUCKS1表达水平降低(P0.05)。结论 miR-342-3p通过靶向下调NUCKS1抑制非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭迁移。     

穿心莲内酯对IL-6诱导的非小细胞肺癌细胞侵袭转移的影响及机制

目的探讨穿心莲内酯(AD)对白细胞介素(IL)-6诱导的非小细胞肺癌细胞侵袭转移的影响及机制。方法采用MTT法检测不同浓度AD和IL-6对人肺腺癌A549细胞增殖活性的影响;Transwell小室实验检测AD对IL-6诱导的A549细胞侵袭的影响;Western印迹检测A549细胞中转移相关蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-9、上皮间质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及核因子(NF)-κB信号通路相关蛋白磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκBα)、IκBα的表达。结果 0.5μmol/L、1.0μmol/L和3.0μmol/L低浓度AD和20μg/L、50μg/L和100μg/L IL-6对A549细胞的增殖的无明显影响。给予20μg/L浓度的IL-6处理后,A549细胞的侵袭能力明显增强,A549细胞中MMP-9、Vimentin、p-IκBα蛋白表达升高,而E-cadherin和IκBα蛋白表达降低;而给予0.5μmol/L、1μmol/L和3μmol/L AD处理后,IL-6对A549细胞的上述作用明显减弱,且呈现一定的浓度依赖性。结论 AD可抑制IL-6诱导的非小细胞肺癌细胞侵袭转移,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路的活化有关。