隐丹参酮通过TLR4/NF-κB/JNK信号通路减轻脂多糖对肺泡上皮细胞炎性损伤的作用研究

目的 本研究旨在探讨隐丹参酮(CTS)对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞(MLE-12)的影响。方法 通过CCK-8法检测细胞活力,酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量PCR(q-PCR)检测IL-1β、IL-6、TNF-α含量及基因表达水平,筛选出具有最佳造模效果的LPS浓度;之后通过CCK-8考察CTS对细胞的非毒性剂量范围;将试验分为对照组、LPS组和CTS+LPS组3个组,ELISA检测细胞上清中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量,qPCR检测细胞内IL-1β、IL-6、TNF-α、Bax和Bcl-2基因表达水平,Western Blot检测Bax、Bcl-2、TLR4、p-p65和p-JNK蛋白水平。结果 与对照组相比,LPS浓度≥1.0μg/mL时细胞活力显著下降(P<0.01);2.0和5.0μg/mL LPS组IL-1β、IL-6和TNF-α含量及基因表达水平显著上升(P<0.05);CTS浓度为0～5.0μM时,细胞活力无显著变化(P>0.05),即药物的无毒范围。与LPS组相比,CTS+LPS组IL-1β、IL-6和TNF-α含量及基...     

miR-127-5p靶向IRAK4对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症因子表达的影响

目的探究miR-127-5p靶向白细胞介素1受体相关激酶4(IRAK4)对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症因子表达的影响方法首先分为对照组和感染组,感染组用肺炎链球菌感染A549细胞,感染组细胞分别转染miR-127-5p mimic、si-IRAK4及阴性对照质粒,qRT-PCR检测A549细胞中miR-127-5p的表达水平,western blot检测IRAK4、Bax、Bcl-2蛋白水平,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,ELISA检测白介素-10(IL-10)、白介素-6(IL-6)水平,双荧光素酶报告基因检测miR-127-5p与IRAK4的靶向关系。结果与对照组比较,肺炎链球菌感染后A549细胞中miR-127-5p、Bcl-2、IL-10水平显著降低,细胞凋亡率、IRAK4、Bax、IL-6水平显著升高(P<0.05);与感染+miR-NC组比较,过表达miR-127-5p后,A549细胞中miR-127-5p、Bcl-2、IL-10水平显著升高,细胞凋亡率、IRAK4、Bax、IL-6显著降低;与感染+si-NC组比较,抑制IRAK4表达后,A549细胞中细胞凋亡率、IRAK4、Bax、IL-6水平显著降低,Bcl-2、IL-10水平显著升高;双荧光素酶报告基因及Western blot结果显示,miR-127-5p可通过与IRAK4特异性结合负向调控IRAK4的表达;与感染+miR-127-5p+pcDNA组比较,感染+miR-127-5p+pcDNA-IRAK4组A549细胞中凋亡率、IRAK4、Bax、IL-6水平显著升高,Bcl-2、IL-10水平显著降低(P<0.05)。结论miR-127-5p靶向IRAK4调控肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症因子IL-10、IL-6的表达。     

NF-κB通过调控人食管癌ET-10细胞miR-21表达抑制凋亡的机制研究

目的 研究食管癌中NF-κB通过影响miR-21的表达对食管癌细胞系ET-10凋亡的作用。方法 使用shRNA下调NF-κB p65的表达,使用脂多糖(LPS)激活NF-κB,并使用qRT-PCR检测NF-κB p65的表达情况。使用CCK-8细胞增殖检测试剂盒,检测NF-κB p65对于细胞增殖活力的影响。使用流式细胞术检测NF-κB p65对于ET-10细胞凋亡的影响,使用qRT-PCR检测对于miR21表达的作用,并使用Western blotting检测对于凋亡调控蛋白PTEN以及凋亡执行蛋白cleaved caspase3表达的调控作用。结果 本课题所构建的shRNA载体可显著下调ET-10细胞中NF-κB p65的表达,并显著抑制ET-10细胞的增殖活力,而NF-κB激动剂LPS可以促进ET-10细胞的增殖活力。流式细胞术结果显示(Annexin-V/PI染色法),敲低NF-κB的表达可促进ET-10细胞的凋亡,并促进凋亡执行蛋白cleaved caspase3的表达,而LPS并不影响ET-10细胞的凋亡。进一步试验发现,敲低NF-κB可下调miR-21的表达并抑制PTEN...     

miR-615-5p在高血压患者血清中表达及其调控Akt/eNOS信号通路的机制

目的 探讨miR-615-5p在高血压患者血清中表达及其潜在的调控机制。方法 100例患有至少10年高血压患者为观察组和100例非高血压患者(骨质疏松18例、前列腺增生10例、慢性肠炎15例、胃食管反流12例、甲状腺结节23例、轻度贫血8例、胃炎胃溃疡14例)为正常组。运用定量实时逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测mRNA表达。HMEC-1细胞用于体外模型,再转染miR-615-5p和simiR-615-5p调控miR-615-5p表达和细胞活性。结果 与正常组比较,miR-615-5p在高血压患者血清中的表达被上调,miR-615-5p与右心室收缩压(RVSP)及[右心室肥厚指数RV/(LV+S)]正相关。上调miR-615-5p抑制血管内皮细胞增殖,增加5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(Edu)细胞比例。下调miR-615-5p促进血管内皮细胞增殖,减少Edu细胞比例。上调miR-615-5p激活caspase-3/9活性表达水平,下调miR-615-5p抑制caspase-3/9活性表达水平。蛋白激酶B(Akt)是miR-615-5p调节血管内皮细胞的靶点,上调miR-615...     

miR-187-3p调控FOXK1/NF-κB信号通路影响破骨细胞增殖、凋亡及分化的分子机制

目的 探讨miR-187-3p对破骨细胞增殖、凋亡、分化的影响及其对叉头框转录因子(FOX)K1/核因子(NF)-κB信号通路的调控作用。方法 选取49例骨质疏松(OP)患者为OP组,同时选取绝经后骨质疏松性无骨折患者49例为control组;18只SPF级雌性大鼠,分为正常组与模型组,每组9只;原代分离培养OP大鼠破骨细胞,miR-NC、miR-187-3p mimics、pcDNA-NC、pcDNA-FOXK1、miR-187-3p mimics与pcDNA-NC、miR-187-3p mimics与pcDNA FOXK1转染入破骨细胞;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与Western印迹分别检测OP患者血清与破骨细胞中miR-187-3p、FOXK1的表达量;采用qRT-PCR法检测破骨细胞中耐酒石酸酸性磷酸酶(Acp)-5、基质金属蛋白酶(MMP)9、组织蛋白酶(Cathepsin K)、整合素(Integrinαv)的表达量;采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因实验检测miR-187-3p与FOXK1的靶向关系;W...     

过表达miR-182-5p对克罗恩病大鼠的保护作用及机制研究

目的 探究过表达miR-182-5p对克罗恩病(CD)大鼠的保护作用及机制研究.方法 将32只大鼠随机分为4组:正常组、模型组、对照组和过表达组,每组各8只.正常组不予处理,模型组给予T NBS/50％ 乙醇溶液灌肠处理,对照组在模型组基础上给予尾静脉注射含空载质粒的慢病毒,过表达组在模型组基础上给予尾静脉注射含过表达...     

miR-212-5p调控NF-κB影响CSE诱导的MRC-5细胞炎症因子释放和凋亡

目的 研究miR-212-5p对香烟烟雾提取物(CSE)诱导的人胚肺成纤维细胞(MRC-5)炎症因子释放和凋亡的影响和机制。方法 MRC-5分成对照(Control)组、CSE(CSE诱导)组、CSE+miR-NC(转染mimics control, CSE诱导)、CSE+miR-212-5p(转染miR-212-5p mimics, CSE诱导)组,实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测miR-212-5p表达,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,用CCK-8法检测细胞增殖活性,用流式细胞术检测细胞凋亡变化,用Western印迹方法检测细胞中C-半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、核因子(NF)-κB p65蛋白表达。用NF-κB信号激活剂和miR-212-5p mimics联合处理经CSE诱导的MRC-5,同样测定细胞中炎症因子分泌、细胞增殖、凋亡和C-Caspase-3、NF-κB p65蛋白表达。结果 与Control组比较,CSE组MRC-5中miR-212-5p表达水平明显降低,细胞分...     

榭皮黄酮通过抑制Traf6/NF-κB信号转导通路增强5-氟尿嘧啶对HepG2的化疗作用

目的 研究榭皮黄酮（quercetin,Qu）影响肝癌细胞HepG2对5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）的敏感性及Traf6/NF-κB信号转导通路。方法 体外培养HepG2细胞,取对数期细胞进行后续实验,将细胞分为对照组（不含任何药物的培养基孵育细胞24 h）、单独Qu组（含40μg/ml Qu的培养基孵育细胞24 h）、单独5-FU组（含50μmol/L 5-FU的培养基孵育细胞24 h）、Qu+5-FU联合处理组（含40μg/ml Qu和50μmol/L 5-FU的培养基共同孵育细胞24 h）、单独Traf6抑制剂C25-140组（2μmol/L C25-140的培养基孵育细胞8 h）、C25-140+Qu+5-FU组（C25-140预处理细胞8 h,然后含40μg/ml Qu和50μmol/L 5-FU的培养基共同处理细胞24 h）。采用CCK8法检测细胞活力,采用倒置显微镜记录细胞克隆数,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Western blot检测剪切的半胱氨酸蛋白酶-7(cleaved-caspase 7,Cle-caspase 7)、Clecaspa...     

基于AMPK/eNOS/NF-κB信号通路探讨虾青素对脑梗死大鼠的影响及作用机制

目的基于AMPK/eNOS/NF-κB信号通路探讨虾青素对脑梗死大鼠的影响及作用机制。方法采用改良的Longa法建立脑梗死大鼠模型,取50只造模成功的SD雄性大鼠随机分为模型对照组、阳性对照组、虾青素低、中、高剂量组,每组10只,另外未造模的10只作为空白对照组。空白对照组与模型对照组均给予等体积生理盐水,阳性对照组给予20 mg/(kg·d)尼莫地平,虾青素低、中、高剂量组分别给予10、20、30 mg/(kg·d)虾青素,连续给药14天。检测大鼠神经功能变化;氯化三苯基四氮唑染色法检测脑梗死面积;酶联免疫吸附法检测白细胞介素10(IL-10)、IL-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平; TUNEL法检测脑皮质缺血半影区的细胞凋亡情况;反转录-聚合酶链反应检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、核因子κB(NF-κB) m RNA表达水平; Western blot检测p-AMPK、AMPK、p-eNOS、eNOS、NF-κB蛋白表达。结果虾青素可明显改善脑梗死大鼠的神经功能及脑梗死面积(P0.01);抑制促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α表达,促进抗炎因子IL-10表达(P0.05);降低皮质缺血半影区细胞凋亡率(P0.01);下调NF-κB m RNA和蛋白表达,促进AMPK和eNOS磷酸化(P0.05),但AMPK、eNOS m RNA和蛋白表达无显著差异(P0.05)。结论虾青素能明显改善脑梗死大鼠神经功能、脑梗死面积、皮质缺血半影区细胞凋亡率及血清细胞因子,其作用机制可能与AMPK/eNOS/NF-κB信号通路密切相关。     

高糖环境对肾系膜细胞NF-κB/IκB通路的影响及其调控机制

探讨高糖对肾系膜细胞IκB-α mRNA和IKB-α、NF-κB p65蛋白表达和NF-κB p65核转位的影响及作用途径.结果发现高糖促进IκB-α蛋白降解和NF-κB p65核转位,特异性泛素-蛋白酶体阻断剂MG132可明显逆转高糖导致的IκB-α蛋白降解和NF-κB p65核转位,提示高糖可通过泛素-蛋白酶体途径导致NF-κB信号通路的活化.     

lncRNA XIST靶向miR-30b-5p调控高糖条件下肾小管上皮细胞损伤的机制

目的 探讨lncRNA XIST对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响及潜在的作用机制.方法 肾小管上皮细胞HK-2分为对照组、高糖组、高糖+si-NC组、高糖+si-XIST组、高糖+miR-NC组、高糖+miR-30b-5p组、高糖+si-XIST+anti-miR-NC组、高糖+si-XIST+anti-miR-3...     

沙利度胺对肺泡上皮细胞上皮-间质转分化的作用

目的探讨沙利度胺对A549上皮-间质转分化的作用,阐明其抗肺纤维化的机理。方法 A549细胞分为3组,A:对照组;B:TGF-β1+DMSO组;C:TGF-β1+沙利度胺组。通过免疫印迹法检测A549细胞磷酸化p38 MAPK和JNK的蛋白,以及间质表型蛋白和上皮表型蛋白的表达;实时荧光定量PCR方法检测A549细胞p38 MAPK和JNK mRNA的表达。结果沙利度胺显著抑制(P0.05)TGF-β1诱导的A549细胞间质表型蛋白表达增加,可阻止(P0.05)A549细胞上皮表型蛋白表达的减少,显著减少活性MAPK蛋白及mRNA的表达(P0.05)。结论沙利度胺可能通过p38MAPK和JNK信号通道,从而抑制肺泡上皮细胞的上皮-间质转分化过程而发挥抗纤维化作用。     

miR-7-5P在口腔鳞癌中表达及其调控CDK-10信号通路对细胞增殖、凋亡与周期的影响

目的 探索miR-7-5P在口腔鳞癌的表达及其调控CDK-10信号通路对口腔鳞癌细胞增殖、凋亡与周期的影响。方法 收集癌旁组织和癌组织样本,免疫组化染色和PCR检测CDK-10和miR-7-5P的表达。SCC-25细胞作为体外模型,检测miR-7-5P对SCC-25细胞增殖、LDH及CDK-10等的影响。结果 在腔鳞癌患者中miR-7-5P呈低表达,CDK-10高表达,miR-7-5P与CDK-10成负相关性。miR-7-5p过表达可降低口腔鳞癌CDK-10和Bcl2蛋白表达水平,提高Bax、LDH、caspase-3/8/9水平,促进细胞凋亡。抑制MiR-7-5p表达可提高CDK-10和Bcl2蛋白表达水平,降低Bax、LDH、caspase-3/8/9水平,抑制细胞凋亡。结论 miR-7-5p能够通过调控CDK-10表达抑制口腔鳞癌细胞增殖,促进凋亡,miR-7-5p对口腔鳞癌的诊断和治疗具有潜在的价值,提示miR-7-5p有希望成为口腔鳞癌分子标志物。     

miR-145抑制NF-κB p65表达促进ROS产生诱导卵巢癌细胞凋亡的机制

目的探讨微小RNA-145(miR-145)诱导卵巢癌细胞凋亡的潜在作用机制。方法收集卵巢癌临床组织样本,采用RT-qPCR法检测miR-145表达。体外培养OVCAR3人卵巢癌细胞,使用活性氧(ROS)试剂盒、脂质氧化产物丙二醛(MDA)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、流式细胞仪、Western印迹检测细胞中ROS、MDA、SOD水平,细胞凋亡和B-淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bax、含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3蛋白表达。Targetscan在线预测、双荧光素酶报告基因和Western印迹法验证miR-145和核因子(NF)-κB p65的靶向关系。抑制或激活NF-κB信号通路,检测细胞中ROS、MDA、SOD水平和细胞凋亡。结果 miR-145在卵巢癌组织中的表达低于显著癌旁组织(P0.05)。在OVCAR3细胞中过表达miR-145,ROS和MDA水平显著升高(P0.05),SOD水平显著降低(P0.05),细胞凋亡率显著增加(P0.05),Bcl-2/Bax比值显著降低(P0.05),Caspase-3蛋白表达显著上调(P0.05)。miR-145可靶向调控NF-κB p65蛋白表达。抑制NF-κB信号通路,ROS和MDA水平显著升高(P0.05),SOD水平显著降低(P0.05);细胞凋亡率显著增大(P0.05);激活NF-κB信号通路可减弱miR-145对OVCAR3细胞凋亡的诱导作用(P0.05)。结论 miR-145能够通过抑制NF-κB信号通路,上调ROS水平从而诱导卵巢癌细胞凋亡。     

远志皂苷通过TLR4/NF-κB信号通路对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的机制

目的 探讨远志皂苷(Ten)对高糖诱导的人肾小管上皮HK-2细胞损伤的影响及其对Toll样受体(TLR)4/核转录因子(NF)-κB信号通路的调控机制。方法 高糖诱导HK-2细胞糖尿病肾病模型,不同浓度Ten处理HK-2细胞,噻唑蓝(MTT)法筛选Ten适宜浓度;实验分为NG组、HG组、HG+Ten组、HG+Ten+pcDNA组、HG+Ten+TLR4组;流式细胞术检测凋亡率;试剂盒检测丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)水平与超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;Western印迹检测TLR4、p-p65、p65、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达量。结果 MTT检测结果显示,选用Ten 150μmol/L进行后续实验;与NG组比较,HG组凋亡率、TLR4、Bax、TLR4、p-p65蛋白、MDA、ROS水平明显升高,Bcl-2蛋白水平、SOD、GSH-Px活性明显降低(P<0.05);与HG组比较,HG+Ten组凋亡率、Bax、TLR4、p-p65蛋白、MDA、ROS水平明显降低,Bcl-2蛋白水平、SOD、GSH-Px活...     

miR-16-5p下调ACE对高糖作用的肾小管上皮细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨miR-16-5p对高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖、凋亡的影响及作用机制.方法 培养人肾小管上皮细胞,分为对照组和高糖组,对照组用葡萄糖浓度为5.5 mmol/L的培养液培养,高糖组用葡萄糖浓度为25 mmol/L的培养液培养;将miR-NC组(转染miR-NC)、miR-16-5p组(转染miR-16-5p ...     

唐草片对大鼠肝纤维化及NF-κB P65/IκBα信号通路的影响

目的:研究唐草片对肝纤维化大鼠的保护作用并探讨其对NF-κB P65/IκBα信号通路的影响。方法:采用四氯化碳(CCl₄)联合猪血清的方法建立大鼠肝纤维化模型,72只SD大鼠按体重随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组(0.12 mg/kg)、唐草片高中低剂量组(2,1,0.5 g/kg)。造摸第5周后,秋水仙碱组大鼠和唐草片组大鼠以体重按照剂量灌胃相应的药物,正常组大鼠和模型组大鼠灌胃同等容积的纯净水,持续8周后处死,取血和肝脏,苏木精-伊红和马松染色观察肝脏组织病理学改变;免疫组化染色法检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA);全自动生化仪检测血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT),Elisa法检测透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原蛋白(PCⅢ)、Ⅳ型胶原蛋白(Ⅳ-C)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;Western blot检测各组肝组织核转录因子(NF-κB P65)、核因子κB抑制蛋白(IκBα)。结果:与正常组比较,模型组大鼠肝组织出现明显肝纤维化,肝板结构排列紊乱,肝组织α-SMA,AST、ALT...     

TNFα/NF-κB信号通路调控非酒精性脂肪性肝病的研究现状

TNFα可诱导肝脏炎症反应,促进肝细胞变性、坏死。核因子-κB(NF-κB)作为重要的转录调控因子,在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中起着促进肝脏脂肪变性的重要作用。TNFα/NF-κB信号通路在各种信号刺激的条件下促进了NAFLD的发展。主要讨论了TNFα/NF-κB信号通路在NAFLD中的作用机制,旨在为NAFLD患者提供新的治疗靶点。     

miR-423-5p通过调控UCHL1表达对H2O2诱导的人晶状体上皮细胞损伤的影响

目的探讨miR-423-5p对过氧化氢(H₂O₂)诱导的人晶状体上皮细胞损伤的影响及作用机制。方法采用H₂O₂诱导人晶状体上皮细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞中miR-423-5p和泛素羧基末端水解酶(UCH)L1 mRNA表达水平,Western印迹检测UCHL1、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平,酶联免疫吸附试验检测细胞培养上清液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽还原酶(GSH-Px)水平,流式细胞仪检测细胞凋亡。转染miR-423-5p抑制剂或UCHL1过表达载体至人晶状体上皮细胞,上述相同方法检测干扰miR-423-5p表达或UCHL1过表达对H₂O₂诱导的人晶状体上皮细胞氧化应激及凋亡的影响。双荧光素酶报告基因实验验证miR-423-5p与UCHL1靶向关系。结果H₂O₂诱导可促进人晶状体上皮细胞凋亡、MDA和miR-423-5p表达及Bax蛋白表达(P<0.05),抑制细胞SOD和GSH-Px表达、UCHL1 mRNA和蛋白表达及Bcl-2蛋白表达(P<0.05)。干扰miR-423-5p或过表达UCHL1均可抑制人晶状体上皮细胞凋亡、MDA和Bax表达(P<0.05),促进细胞SOD和GSH-Px表达及Bcl-2蛋白表达(P<0.05)。miR-423-5p靶向负调控UCHL1表达,抑制UCHL1表达逆转了干扰miR-423-5p表达对人晶状体上皮细胞凋亡、MDA和Bax表达的抑制作用及对SOD、GSH-Px和Bcl-2蛋白表达的促进作用。结论miR-423-5p可能通过抑制UCHL1表达促进H₂O₂诱导的人晶状体上皮细胞氧化应激和凋亡,保护人晶状体上皮细胞免受H₂O₂损伤。