H2O2诱导建立HTR-8/SVneo胎盘滋养细胞氧化应激模型

目的通过观察不同浓度过氧化氢(H2O2)对人胎盘滋养层细胞HTR-8/SVneo处理不同时间后的氧化应激状态,探讨建立H2O2诱导HTR-8/SVneo胎盘滋养细胞氧化损伤模型的最佳条件。方法2017年11月至2018年2月于西安交通大学第一附属医院进行实验研究。将HTR-8/SVneo细胞实验组分别给予不同终浓度的H2O2(50、150、300、500μmol/L),同时设立对照组,相同实验条件下分别继续培养1、3、6、12h,随后对此进行细胞存活率、细胞形态学观察,对超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化氢酶(CAT)测定,流式细胞仪分析活性氧自由基(ROS)水平和细胞凋亡的水平。结果与对照组比较,300μmol/L 3h经H2O2处理后可降低HTR-8/SVneo细胞的存活率(P=0.00<0.01),而且提高了LDH的释放,促使了SOD、CAT活性的下降和MDA含量的增加(P=0.00<0.01)。300μmol/L3h经H2O2处理后增加了细胞的凋亡率(P=0.00<0.01)及细胞内ROS水平(P=0.00<0.01)。同时,300μmol/L3h经H2O2处理后可明显促进细胞的形态学改变。结论通过H2O2可以成功建立HTR-8/SVneo氧化应激损伤细胞模型,最佳实验条件为300μmol/L H2O2处理3h。     

铁路危险品货运站空气颗粒物诱导肺细胞氧化应激损伤

[目的 ]探讨铁路危险品货运站空气污染颗粒提取物诱导大鼠肺细胞氧化应激损伤作用的机制。 [方法 ]应用滤膜法采集铁路危险品货运站空气颗粒提取物。常规分离与原代培养大鼠肺Ⅱ型细胞 ,以N 乙酰半胱氨酸 (NAC)、维生素E(VitE)、维生素C(VitC)和甘露醇 (MT)等不同作用位点的抗氧化剂预处理 3 0min后 ,加入空气颗粒提取物染毒 2 4h。采用四氮甲基唑蓝比色法、溴乙锭荧光法检测肺细胞的生长情况和DNA交联的形成。 [结果 ]在 1 0 2～ 8 13mg/ml浓度范围内 ,铁路危险品货运站空气颗粒提取物对大鼠肺细胞有明显的细胞毒性和致DNA交联作用。加入NAC、VitE、VitC和MT可有效地减低铁路危险品货运站空气污染颗粒提取物所致的细胞毒性 ,VitE、VitC则具有减低铁路危险品货运站空气污染颗粒提取物所致的DNA损伤作用。 [结论 ]铁路危险品货运站空气污染颗粒提取物对大鼠肺细胞具有氧化应激作用 ,其可能途径是产生活性氧自由基、羟自由基或导致细胞过氧化等     

十溴联苯醚诱导小鼠海马神经元细胞氧化应激和凋亡的机制

目的探索十溴联苯醚(PBDE-209)诱导小鼠海马神经元细胞凋亡的潜在机制。方法原代海马神经元细胞和海马神经元细胞系HT-22用0、6.25、12.5、25、50和100μg/mL PBDE-209处理24 h。检测原代海马神经元细胞SOD活性,MDA、NO和GSH的含量,用Annexin V/PI双染法检测海马神经元细胞系HT-22细胞凋亡情况,用免疫蛋白印迹Western blot检测Bax、Bcl-2、CHOP、GRP78、PERK和Caspase-12蛋白表达水平。结果染毒组原代海马神经元细胞和HT-22细胞系细胞存活率显著降低(P0.05)。原代海马神经元细胞MDA、NO含量显著升高(P0.05),GSH含量、SOD活性显著降低(P0.05);原代海马神经元细胞的Bax/Bcl-2比值、CHOP、Caspase-12蛋白表达水平升高(P0.05)。HT-22细胞系GRP78、PERK、Caspase-12表达水平和细胞凋亡率升高(P0.05)。结论氧化应激和内质网应激可能参与PBDE-209诱导的海马神经元细胞凋亡过程。     

H_2O_2诱导大鼠原代海马神经细胞建立氧化损伤细胞模型

目的以H2O2诱导大鼠原代海马神经细胞建立氧化损伤细胞模型。方法取新生大鼠海马神经细胞,培养至第5天,加入终浓度为50、100、150、200和250μmol/L的H2O2,培养12、24和48 h后,观察细胞形态,通过MTT法测定细胞存活率,CCK-8法测定细胞损伤率,LDH酶标法测定上清液LDH活性,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡率,确定出细胞损伤的最佳浓度时间。结果 H2O2可诱导神经细胞损伤且呈时间浓度依赖性。150μmol/L H2O2作用24 h时,MTT法测得细胞存活率为(70.18±4.66)%;CCK-8法测得细胞损伤率为(28.30±6.72)%;LDH酶标法测得LDH活性为(208.81±12.24)U/L;流式细胞术测得细胞早期凋亡率为(11.53±2.53)%,晚期凋亡率及坏死率为(13.75±2.22)%。结论 150μmol/L的H2O2作用24 h,可成功构建海马神经细胞氧化损伤模型。     

硫酸镍对大鼠睾丸细胞氧化应激效应的影响

目的观察硫酸镍(NiSO4)亚慢性染毒后对大鼠睾丸细胞的氧化作用。方法健康雄性Wistar大鼠32只,随机分为4组:生理盐水(NS)组,硫酸镍(NiSO4)1.0,2.0,4.0 mg/kg组。腹腔注射染毒,0.2 ml/100(g.bw),1次/d,连续30 d。制备睾丸组织匀浆,采用分光光度法检测睾丸组织中脂质过氧化物(LPO)、总抗氧化能力(T-AOC)、抗-活性氧(anti-ROS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平的变化。结果染毒组与对照组比较,大鼠睾丸脏器系数无明显变化(P>0.05)。镍可诱导睾丸组织中LPO含量升高,2.0,4.0 mg/kg NiSO4组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);2.0,4.0 mg/kg NiSO4组anti-ROS和GSH-Px活性低于对照组(P<0.01);各染毒组T-AOC均低于对照组(P<0.01)。结论镍对大鼠生殖系统的损伤可能与其所致的睾丸细胞氧化损伤有关。     

螺内酯对醛固酮诱导的大鼠肾小球系膜细胞氧化应激的影响

目的 观察螺内酯对醛固酮诱导的大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cells,MCs)氧化应激的影响,探讨其肾脏保护机制.方法 体外培养大鼠MCs,设正常对照组、醛固酮(10-7 mol/L)刺激组、不同浓度螺内酯(10-7、10-8、10-9mol/L)干预组.以2',7'-二氯双氢荧光素二乙酸酯(2',7'-dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA)为细胞内H2O2的荧光探针标记细胞,采用流式细胞术检测系膜细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;采用比色法检测培养细胞上清液中丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性.结果 与正常对照组比较,醛固酮刺激系膜细胞48 h后,细胞内ROS水平明显增加,上清液中MDA含量增高、SOD活性下降,差异均有统计学意义(均有P＜0.05).螺内酯干预可明显抑制醛固酮刺激下的系膜细胞的上述反应,差异均有统计学意义(均有P＜0.05),且呈浓度依赖性.结论 螺内酯可呈浓度依赖性地抑制醛固酮诱导的大鼠MCs氧化应激,该作用可能是其肾脏保护机制之一.     

卵泡发育和闭锁与卵巢细胞凋亡的研究进展

近年来对卵巢细胞凋亡的胞内机制研究取得了很大的进展,已知卵巢体细胞和生殖细胞的凋亡参与了卵泡的发育和闭锁,体细胞（主要指颗粒细胞）的凋亡决定于Bcl-2家族,Caspases家族和Apaf-1三大类基因表达产物的相互作用与平衡,其中Bcl-2家族又分为三个亚家族,对凋亡分别有着抑制或促进的作用,它们之间亦保持着平衡,Caspases家族成员又有不同的分工,分别在凋亡的起始和效应阶段发挥作用,Apaf-1则是连接上游调控因子（如Bcl-2家族）和下游效应分子（如Caspases家族）的重要的中间蛋白质,颗粒细胞的凋亡主要在发育晚期的卵泡闭锁中起主导作用,而卵细胞的凋亡主要在发育早期的卵泡闭锁中起主导作用。     

原代睾丸支持细胞分离纯化及双室培养模型的建立

[目的]通过建立双室培养模型,为探讨毒物或药物对睾丸支持细胞作用机制提供一个合适的体外研究方法。[方法]18d龄雄性SD大鼠,脱颈椎处死后,无菌条件下取睾丸组织,经胰蛋白酶和胶原酶二步消化后获得支持细胞,经接种、纯化和鉴定,获得纯度>95%支持细胞。培养液A为DMEM培养基和F12培养基按照1:1比例用去离水配制,每升培养基中含有20万单位青霉素和0.2g链霉素,用2%的碳酸氢钠调整pH值为7.2左右。培养液B为培养液A中加入维生素A、E(200ng/ml)和胰岛素(2μg/ml)。培养液C为B培养液中再加入卵泡刺激素(100ng/ml)和睾丸酮(10-8mol/L)。将制备好的支持(Sertoli)细胞混悬液按2.5×106个/ml浓度接种于24孔培养板内,培养条件为35℃(睾丸细胞的适宜温度),2%CO2恒温静止培养。测定3种不同培养液中培养的支持细胞形成的跨细胞上皮电阻值(transep-ithelialelectricalresistance,TER)。[结果]培养液加入维生素A、E和胰岛素后,支持细胞形成的TER有所升高,而培养液在加入睾丸酮和卵泡刺激素后,Sertoli细胞形成的TER则显著升高。培养第1天3种培养液中培养的Sertoli细胞形成的TER分别为33.85、31.38和34.26Ω/cm2,培养第13天分别为198.53、289.91和707.50Ω/cm2。[结论]Sertoli细胞双室培养模型可模拟体内状态的“血睾屏障”,为体外研究雄性生殖毒性机制提供一个合适模型。     

MIS,IGF-Ⅱ对人卵巢黄素化颗粒细胞分泌功能的影响

目的:探讨MIS,IGF-Ⅱ对人卵巢黄素化颗粒细胞分泌雌激素的影响。方法:体外受精-胚胎移植(IVF-ET)患者经阴道超声引导下取卵,剥离卵母细胞周围的颗粒细胞作体外培养,培养48h后更换无血清培养基,在有或无卵泡刺激激素(FSR)的作用下,分别加入基因重组人苗勒氏管抑制因子(rhMIS)及人胰岛素样生长因子Ⅱ(rhIGF-Ⅱ)作用于颗粒细胞,于培养后第4、6、8、10天收集培养液测定雌二醇(E2),观察rhMIS及rhIGF-Ⅱ对体外培养的颗粒细胞分泌E2的影响。结果:在无FSH作用下,rhMIS对颗粒细胞分泌E2无明显影响(P>0·05),rhIGF-Ⅱ刺激颗粒细胞分泌E2量增加(P<0·05);加入FSH后,rhMIS的明显抑制颗粒细胞E2分泌量(P<0·05),rhIGF-Ⅱ明显增加颗粒细胞E2的分泌(P<0·05)。结论:MIS和IGF-Ⅱ可单独或协同FSH刺激颗粒细胞甾体激素的分泌,对卵泡的生长发育及卵母细胞的分化成熟起着微观调控作用。     

2,2',4,4'-四溴联苯醚对原代新生大鼠海马细胞氧化应激、DNA损伤和凋亡的影响

目的 探讨2,2',4,4'-四溴联苯醚(2,2',4,4'-tetrabromodiphenyl ethers,PBDE-47)对原代新生大鼠海马细胞氧化应激、DNA损伤和凋亡的影响.方法 原代培养的新生大鼠海马细胞暴露于10、20、40μg/ml PBDE-47,每组3个平行样,24h后,检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,细胞内丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、活性氧(ROS)水平以及DNA损伤和细胞凋亡情况.结果 与对照组比较,20和40μg/ml组LDH漏出率升高,差异有统计学意义(P＜0.05).各染毒组MDA含量均高于对照组,GSH-Px活力均低于对照组,且20和40μg/ml组与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);10、20、40μg/ml组GSH含量和SOD活力均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),但各染毒组之间差异无统计学意义(P＞0.05);20和40μg/ml组细胞内ROS水平高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).10、20、40μg/ml组尾部DNA百分率和Oliver尾矩均高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);20和40μg/ml组细胞凋亡率均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),且呈上升趋势.相关分析表明,海马细胞DNA损伤、凋亡百分率与ROS水平呈正相关(r值分别为0.982,0.998,P＜0.05),细胞凋亡百分率与DNA损伤呈正相关性(r=0.967,P＜0.05).结论 PBDE-47可致原代新生大鼠海马细胞氧化应激和诱导细胞DNA损伤和凋亡,呈现一定的神经毒性.     

过氧化氢诱导TM3细胞氧化应激模型建立

目的构建过氧化氢(H₂O₂)诱导小鼠睾丸间质细胞(TM3)氧化应激模型, 为肥胖相关雄性生殖功能低下机制研究提供参考。方法分别以不同浓度H₂O₂处理TM3细胞4 h, 采用噻唑蓝法测定细胞活力, 酶联免疫吸附试验检测睾酮水平, 比色法测定细胞内活性氧(ROS)含量、总抗氧化能力(TAOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和过氧化氢酶(CAT)活性。结果300、600 μmol/L H₂O₂组细胞存活率[(86.7±4.3)%、(46.3±2.0)%]均低于对照组[(100.0±1.7)%](P<0.05);与对照组[(250.09±26.70)pg/mL]比较, 150、300、600 μmol/L H₂O₂组TM3细胞睾酮水平[(188.93±7.06)、(179.23±6.66)、(131.59±11.26)pg/mL]均明显降低(P<0.05);与对照组比较, 150、300、600 μmol/L H₂O₂组TM3细胞SOD和CAT活性[分别为(2.42±0.17)、(2.69±0.30)、(0.44±0.41)和(56.76±12.17)、(23.45±2.17)、(24.55±18.05)U/mg protein]均明显下降(P<0.05)。结论成功构建以H₂O₂为诱导剂的TM3细胞体外氧化应激模型。     

Dual effects of molybdenum on mouse oocyte quality and ovarian oxidative stress

A sub-acute toxicity test was performed to investigate the effects of molybdenum (Mo) on ovarian function. ICR adult female mice were exposed to Mo by free access to distilled water containing the Mo at 5, 10, 20, and 40?mg/L for 14 days. Compared to the control group, M?II oocyte morphology, ovary index, and ovulation improved within the 5?mg/L Mo group, but were negatively affected by Mo at 40?mg/L. Morphologically abnormal ovarian mitochondria were observed at?≥?20?mg/L. These alterations accompanied the changes in superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidise (GPx), and malondialdehyde (MDA) levels in ovaries. In conclusion, Mo affects oocyte quality possibly through regulating ovarian oxidative stress in a dose-dependent manner. It appears that Mo may improve ovarian function at a suitable concentration, which might be a candidate for the treatment of female infertility.     

Protective effect of Cymbopogon citratus on hydrogen peroxide-induced oxidative stress in the reproductive system of male rats

Cymbopogon citratus (C. citratus) has antioxidant, anti-inflammatory, and chemoprotective properties. This study was conducted to evaluate the protective effect of C. citratus aqueous extract against hydrogen peroxide (H₂O₂)–induced oxidative stress and injury in the reproductive system of male rats. The twenty-five rats used in this study were divided into five groups, comprised of five rats each. The control group received standard food and drink. The H₂O₂ group received standard food and water with 0.5% H₂O₂. The rats in the H₂O₂?+?C. citratus group and H₂O₂?+?vitamin E group received standard food, H₂O_2, and C. citratus [100?mg·kg^?1 body weight (bw)], or vitamin E as an antioxidant reference (500?mg·kg^?1 bw), respectively. The C. citratus group was given C. citratus (100?mg·kg^?1 bw) in addition to the standard food and drink. The treatments were administered for 30 days. The H₂O₂ treatment significantly (P?<?0.05) decreased body, testicular, and epididymal weight, as well as glutathione (GSH) level, but markedly increased malonaldehyde (MDA) in serum and testes homogenates. The rats treated with H₂O₂ exhibited testicular degeneration and significant reduction in sperm viability, motility, count, and rate of normal sperm. The C. citratus, vitamin E, and H₂O₂ treatment significantly (P?<?0.05) increased the body, testicular, and epididymal weight, testosterone level, the values of the various sperm characteristics, and GSH. However, this treatment markedly reduced MDA in serum and testes homogenates, as well as testicular histopathological alterations in the H₂O₂-treated rats. The C. citratus aqueous extract reduced oxidative stress and protected male rats against H₂O₂-induced reproductive system injury.     

草苁蓉多糖对张氏肝细胞氧化损伤保护作用

目的 探讨草苁蓉多糖对过氧化氢（H₂O₂）致张氏肝细胞氧化损伤的保护作用及机制。方法 以张氏肝细胞为研究对象,用H₂O₂诱导建立细胞氧化应激损伤模型,噻唑蓝法检测细胞存活率;分光光度法测定细胞外液中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、乳酸脱氢酶（LDH）及细胞中丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）和超氧化物歧化酶（SOD）含量。结果 与对照组比较,模型组肝细胞存活率[（52.5±1.2）%]下降,细胞外液中ALT、AST、LDH活力[分别为（23.5±2.9）、（29.4±2.9）、（595.4±5.6）U/L]升高,细胞中SOD活性和GSH含量[分别为（163.1±6.1）U/mg prot、（8.91±1.26）mg/g prot]下降,丙二醛含量[（12.6±2.6）nmol/mg prot]升高;与模型组比较,50 mg/L草苁蓉多糖组肝细胞存活率[（79.0±5.5）%]升高,细胞外液中ALT、AST、LDH活力[分别为（10.4±2.9）、（14.4±3.2）、（374.4±12.5）U/L]降低,细胞中SOD活性和GSH含量[分别为（323.6±17.3）U/mg prot、（15.4±0.52）mg/g prot]升高,细胞MDA含量[（6.93±0.75）nmol/mg prot]降低。结论 草苁蓉多糖对H₂O₂所致张氏肝细胞损伤具有一定保护作用,其机制可能与提高细胞抗氧化能力有关。     

PUFA and oxidative stress. Differential modulation of the cell response by DHA

Although an increased dietary intake of long-chain n-3 PUFA is considered an effective preventive strategy, a theoretical concern related to the possible increase of lipid peroxidation induced by a PUFA-rich diet still remains a problem. In this study, the effects of different PUFA (linoleic, α-linolenic, arachidonic, eicosapentaenoic and docosahexaenoic acid) on cytotoxicity, lipid oxidation, and modulation of antioxidant defenses were evaluated in HepG2 cells submitted to an oxidative stress (H₂O₂). Results clearly evidenced that all supplemented PUFA, but DHA, enhanced cell susceptibility to H₂O₂. Overall, our results underline that PUFA cannot be considered as a single category but as individual compounds, and research on mechanisms of action and preventive effects should deal with the individual fatty acids, particularly in the case of DHA.     

Effect of oxidative stress on fluoride-induced apoptosis in primary cultured Sertoli cells of rats

This study examined the effect of oxidative stress on the apoptosis of Sertoli cells induced by sodium fluoride (NaF). Cell viability, reactive oxygen species, malondialdehyde content, superoxide dismutase activity, mitochondrial membrane potential, and apoptosis were measured after the rat Sertoli cells were exposed to various concentrations of (0, 6, 12, and 24?μg/ml) sodium fluoride in the presence and absence of 2?mM N-acetylcysteine (NAC) for 24?h. The present study showed that decrease in cell viability and excessive oxidative stress were observed in NaF-treated cells. The treatment with NAC restored the decreased cell viability and excessive oxidative stress. Moreover, fluoride exposure decreased mitochondrial membrane potential and increased apoptosis in Sertoli cells. NAC was also found to suppress a loss of mitochondrial membrane potential and the percentage of apoptosis in NaF-treated Sertoli cells. This study proved that oxidative stress probably play a major role in NaF-induced apoptosis of Sertoli cells.     

高血压与细胞氧化损伤

高血压是心血管病中发病率最高及致死率亦最高的疾病,大量研究表明,氧化损伤可导致高血压大鼠肾脏损伤、血管内皮功能障碍、平滑肌细胞增殖、心肌纤维化等。而导致这些氧化损伤的活性氧主要是由细胞内NADPH氧化酶产生。通过抗氧化治疗可缓解由氧化损伤引起的血压升高。本文基于近期研究对细胞氧化损伤在高血压疾病中的作用做一小结。     

线粒体损伤和氧化应激的关系

线粒体是细胞供能代谢中心,同时也是众多环境化学外源物毒害作用的优先靶标。线粒体损伤包括形态结构破坏、线粒体DNA突变、ATP合成受限、钙稳态失衡、氧化应激产物积聚及代谢功能障碍。线粒体呼吸链已经被广泛证实是活性氧产生的最主要来源,过多产生的超氧化物若未被内源性抗氧化剂或相关酶清除,便会导致线粒体的氧化应激损伤和功能障碍,从而引发细胞死亡等多种病变。     

视网膜色素上皮氧化损伤SIRT1表达改变

目的明确氧化应激对视网膜色素上皮细胞(RPE)中去乙酰化酶1(SIRT1)表达的影响。方法以人RPE细胞为实验对象,不同浓度H_2O_2(0、200、300μmol/L)处理RPE细胞,观察处理后24 h细胞形态的改变情况,检测处理后24 h与72 h细胞中SIRT1的mRNA与蛋白表达情况。结果 H_2O_2作用后,随H_2O_2浓度的增加,RPE细胞的形态受损,有凋亡小体的出现;在氧化应激24 h后细胞内SIRT1的转录水平增加,而在氧化应激72 h后SIRT1的蛋白表达显著下降。结论氧化应激可导致RPE细胞形态改变,SIRT1在RPE细胞内维持着氧化与抗氧化应激系统平衡,因此将SIRT1可作为临床上年龄相关性黄斑变性病(AMD)治疗的靶点。