桥粒斑菲素蛋白3在乳腺癌中的表达及临床意义

目的:探讨桥粒斑菲素蛋白3(PKP3)在乳腺癌中的表达及预后的关系。方法:分析160例乳腺癌患者的组织芯片,采用免疫组织化学方法检测组织标本中PKP3的表达水平,应用 χ2检验和Fisher精确概率法分析PKP3高表达与低表达组间差异。采用Cox比例风险回归模型分析乳腺癌患者预后的危险因素,采用Kaplan...     

胰岛素样生长因子mRNA结合蛋白3在胰腺癌中的表达 及意义

目的:探讨胰岛素样生长因子m RNA结合蛋白3(IMP3)在胰腺癌组织中的表达及其临床意义。方法:用免疫组化法检测126例胰腺癌组织以及12例正常胰腺组织中的IMP3表达,分析IMP3表达与胰腺癌患者临床病理因素及预后的关系。结果:胰腺癌组织中IMP3的阳性表达率明显高于正常胰腺组织(93.65%vs.0.00%,P0.000)。IMP3的表达水平与胰腺癌患者的肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤侵袭深度、TNM分级有关(均P0.05);IMP3高表达患者的中位生存时间明显低于IMP3低表达患者(9.5个月vs.17.8个月,P=0.000)。结论:IMP3在胰腺癌组织中表达率增高,且其表达水平与胰腺肿瘤的发生、发展密切相关,IMP3高表达患者预后不良。     

维甲酸受体α和β在胰腺癌组织中的表达及意义

目的:探讨维甲酸受体-α、β在正常胰腺和胰腺癌组织中的表达及其临床意义,通过分析其表达了解维甲酸受体-α、β在胰腺癌发生发展中的作用。方法:采用免疫组织化学方法观察维甲酸受体-α、β在10例正常胰腺组织及30例胰腺癌组织中的表达情况,并分析其表达与胰腺癌临床病理特点之间的关系。结果:维甲酸受体-α在正常组织中的表达低于胰腺癌组织(P0.05),在胰腺癌组织中随临床病理分期的升高表达量增加,并且随着肿瘤组织分化程度的降低,表达量增加(P0.05),在远处转移和淋巴结转移的胰腺癌组织中的表达高于无转移组(P0.05),但与患者年龄无关(P0.05)。维甲酸受体-β在正常胰腺组织中的表达明显高于胰腺癌组织(P0.05),在胰腺癌组织中的表达与临床病理分期、肿瘤组织分化程度及年龄无关(P0.05),远处转移和淋巴结转移组中维甲酸受体-β的表达与未转移组差异亦无统计学意义(P0.05)。结论:维甲酸受体-α和维甲酸受体-β与胰腺癌发生相关;维甲酸受体-α高表达提示预后不良;维甲酸受体-β在胰腺癌中起抑癌基因的作用。     

SHH蛋白在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨胚胎发育信号通路蛋白SHH在胰腺癌组织及其临床意义。方法:用免疫组化法检测45例胰腺癌组织与30例胰腺良性病变组织中SHH的表达,并分析SHH表达与胰腺癌患者临床病理特征及预后的关系。结果:胰腺癌组织中的SHH蛋白阳性表达率明显高于胰腺良性病变组织(66.67%vs.0.00%,P0.05)。胰腺癌组织中的SHH蛋白的阳性表达与是否患者的淋巴节转移、肿瘤分化程度、TNM分期明显有关(均P0.05)。SHH表达阳性表达胰腺癌患者与SHH表达阴性患者的3年生存率及中位生存时间差异均无统计学意义(26.67%vs.20.00%;18.4个月vs.15.6个月,均P0.05)。结论:SHH在胰腺癌组织中的阳性表达率增高,其阳性表达可能与患者的疾病进展有关,但与患者的远期预后关系尚不明确。     

内质网氧化还原蛋白基因在胰腺癌组织中的表达及其与患者预后的关系

目的:探讨内质网氧化还原蛋白(ERO1L)在胰腺癌组织中的表达及临床意义。方法:用qRT-PCR技术检测ERO1L mRNA在82例胰腺癌组织以及12例胰腺癌旁组织中的表达,分析ERO1L mRNA表达水平与胰腺癌患者临床病理因素间以及无瘤生存期和总生存期的关系。结果:胰腺癌组织中ERO1LmRNA的相对表达量明显高于癌旁组织(2.63vs.1.12,P0.01);ERO1LmRNA表达与胰腺癌患者肿瘤分化程度、远处转移、临床分期和淋巴结转移有关(均P0.05),而与性别、年龄、肿瘤大小及部位无关(均P0.05);生存分析示ERO1LmRNA高表达患者1、3年无瘤生存率和总生存率均明显低于ERO1LmRNA低表达患者(P0.01);单因素和多因素分析显示,ERO1LmRNA表达量为胰腺癌患者术后无瘤生存和总生存的独立风险因素(均P0.05)。结论:ERO1L基因在胰腺癌组织中高表达,与胰腺癌的恶性临床病理特征密切相关,为胰腺癌患者预后的独立影响因子。     

MAP3K10在胰腺癌中的表达及其意义

目的:探讨丝裂原活化蛋白3激酶10（MAP3K10）在胰腺癌中的表达。
方法:应用免疫组织化学染色技术，Western blot及定量RT-PCR检测MAP3K10在胰腺癌及癌旁组织中的表达。
结果:(1)免疫组化染色阳性细胞计数显示MAP3K10在胰腺癌组织中的阳性细胞数（100%呈强阳性）明显多于癌旁组织（仅25%呈弱阳性）(P＜0.05)；(2)Western blot检测显示，在91.7%的胰腺癌组织中MPA3K10蛋白的表达量高于癌旁组织；(3)qRT-PCR检测显示，MAP3K10mRNA在胰腺癌及癌旁组织中均有表达，但前者的表达水平明显高于后者（P＜0.01）。
结论:MAP3K10在胰腺癌中存在异常激活，可能在胰腺癌的发生发展中起重要作用，有望成为胰腺癌新的治疗靶点

     

胰腺癌中CIP2A与p-Akt、N-cadherin、MMP-9的表达及其临床意义

目的:探讨胰腺癌组织中蛋白磷酸酶2A癌性抑制因子(CIP2A)、p-Akt、N-cadherin及MMP-9蛋白的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学法检测42例胰腺癌及癌旁组织中CIP2A、p-Akt、N-cadherin和MMP-9的表达情况,分析其与临床病理因素的关系。结果:CIP2A在胰腺癌及癌旁组织中的表达率分别为71.4%、7.7%,差异有统计学意义(P0.05);p-Akt在胰腺癌及癌旁组织中的表达率分别为66.7%、11.5%,差异有统计学意义(P0.05)。N-cadherin在胰腺癌及癌旁组织中的表达率分别为59.5%、7.7%,差异有统计学意义(P0.05)。MMP-9在胰腺癌组织及癌旁组织中的表达率分别为61.9%、15.4%,差异有统计学意义(P0.05)。CIP2A、p-Akt在胰腺癌组织中的表达与分化程度、TNM分期、淋巴结转移明显相关(均P0.05),N-cadherin、MMP-9在胰腺癌组织中的表达与分化程度、TNM分期、神经浸润、淋巴结转移明显相关(P0.05)。胰腺癌组织中,CIP2A和p-Akt、N-cadherin和MMP-9的表达均呈正相关(均P0.05);p-Akt与N-cadherin及MMP-9的表达均呈正相关(P0.05);N-cadherin与MMP-9的表达呈正相关(P0.05)。结论:CIP2A参与了胰腺癌恶性进展,可能通过PI3K/Akt信号通路诱导上皮间质转化,促进胰腺癌增殖、侵袭和转移。CIP2A有望成为治疗胰腺癌的一个靶向治疗基因。     

TAp63在胰腺癌中的表达及意义

目的:探讨TAp63在胰腺癌中的表达及其意义。方法:分别real-time PCR和Western blot检测TAp63 m RNA与蛋白在21例胰腺癌及其配对癌旁组织、3种胰腺癌细胞(PANC-1、CFPAC-1、Bx PC3)及正常胰腺细胞(HPDE6-C7)中的表达;用TAp63-si RNA转染PANC-1细胞后,观察TAp63 m RNA与蛋白表达的变化,并用MTT和Brd U法检测转染后PANC-1细胞的增值情况。结果:胰腺癌组织中TAp63 m RNA表达量明显低于癌旁正常胰腺组织(t=2.572,P=0.0158);TAp63m RNA与蛋白在3种胰腺癌细胞株中的表达量均明显低于正常胰腺HPDE6-C7细胞(均P0.05)。与未处理的PANC-1细胞比较,转染TAp63-si RNA后的PANC-1细胞TAp63 m RNA与蛋白明显降低,但细胞增殖与DNA合成能力均明显增强(均P0.05)。结论:TAp63在胰腺癌组织与细胞中表达降低,且表达量越低,细胞生长能力越强。     

YEATS域含蛋白质4在胰腺癌组织中的表达及预后意义

目的:探讨YEATS域含蛋白质4(YEATS4)胰腺癌组织中的表达及其与临床意义。方法:用手术切除且病理确诊的80例胰腺癌组织及对应癌旁组织标本构建组织芯片,利用免疫组织化学技术检测YEATS4在胰腺癌及癌旁组织中的表达情况。分析胰腺癌组织中YEATS4的表达与胰腺癌临床病理特征及胰腺癌患者预后的关系。结果:免疫组化结果显示,YEATS4在胰腺癌组织中的阳性表达率明显高于相应癌旁组织(56.25%vs.26.25%,P0.05)。YEATS4的阳性表达与胰腺癌患者的性别(P=0.037)、TMN分期(P0.001)、神经转移(P=0.006)、淋巴结转移(P0.001)以及脉管侵犯(P=0.042)明显有关。全组患者中YEATS4蛋白阴性表达患者生存率明显高于其阳性表达患者(χ~2=7.593,P=0.0059);亚组分析显示,YEATS4蛋白与不良预后的关系仅明显存在于TMN III/IV期、淋巴结转移、神经转移和脉管侵犯患者中(均P0.05)。YEATS4表达是胰腺癌患者预后的独立危险因素(HR=2.1,95%CI=1.1～4.2,P=0.026)。结论:YEATS4在胰腺癌中的表达量升高,可能参与了胰腺癌的进展,并可能是胰腺癌治疗的潜在预后标记和治疗靶点。     

长链非编码RNA01137在胰腺癌细胞生物学特性中的作用

目的探究Lnc01137对胰腺癌细胞生物学特性的影响。方法收集2021年6月至2021年9月贵州医科大学肝胆外科34例人胰腺癌组织及癌旁组织样本。通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Lnc01137在胰腺癌细胞系中和胰腺癌组织中的表达水平。在肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中提取胰腺癌组织与癌旁组织中Lnc01137的表达量, 提取胰腺癌患者总生存月数和无病生存月数并进行分析。RT-qPCR检测Lnc01137在细胞核和细胞质中的相对表达, 并进行RNA荧光原位杂交(FISH)定位。通过慢病毒转染在胰腺癌细胞中敲低Lnc01137的表达, 检测上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白的表达。采用通路富集分析(GSEA)在京都基因与基因组百科全书(KEGG)中进行基因富集分析, 组间比较采用t检验, 组内两两比较采用LSD-t检验。结果 Lnc01137在胰腺癌细胞系MIA PaCa-2和PANC-1中表达较高, 在胰腺癌组织中的表达明显高于胰腺癌癌旁组织, 并在细胞质中呈现高表达状态, 另外Lnc01137高表达与患者预后不良相关。功能试验显示敲低Lnc01137显著抑制胰腺癌...     

长链非编码RNA同源异形盒转录反义RNA通过微小RNA-520g-3p调控胰腺癌细胞增殖、迁移的实验研究

目的:探讨长链非编码RNA同源异形盒转录反义RNA(lncRNA HOTAIR)通过靶向微小RNA-520g-3p(miR-520g-3p)对胰腺癌细胞增殖、迁移能力的影响。方法:实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测胰腺癌细胞中miR-520g-3p、HOTAIR表达水平;转染HOTAIR小干扰RNA至SW19...     

微小RNA-618通过靶向羧基末端结合蛋白2抑制胰腺癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的:探讨微小RNA(miR)-618及羧基末端结合蛋白2(CtBP2)对胰腺癌增殖、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法:采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测胰腺癌细胞中miR-618的表达;分别转染miR-618 inhibitor和mimics后,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆集落形成及Tr...     

TPM4对人胰腺癌细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨原肌球蛋白4(TPM4)对人胰腺癌细胞侵袭和迁移的影响。方法 采用qRT-PCR检测人正常胰腺导管上皮细胞(HPDE)和人胰腺癌细胞系(ASPC-1、BXPC-3、MIA PaCa-2、PANC-1、SW1990)中TPM4 RNA表达量。采用siRNA或过表达慢病毒感染胰腺癌细胞(MIA PaCa-2、PANC-1),通过qRT-PCR、Western blotting检测各组细胞TPM4的表达,划痕实验及Transwell实验检测各组胰腺癌细胞侵袭和迁移能力。结果 GEPIA数据库中胰腺癌组织TPM4表达明显高于正常胰腺组织(P<0.05),qRT-PCR分析TPM4 RNA在胰腺癌细胞系中表达均高于HPDE(P<0.0001)。与对照组相比,在MIA Paca-2和PANC-1中过表达TPM4促进了胰腺癌细胞侵袭迁移能力(均P<0.01),而敲低TPM4胰腺癌细胞侵袭迁移能力则明显减弱(均P<0.01)。结论 TPM4在胰腺癌细胞中呈现高水平表达,可能在胰腺癌中发挥着癌基因的作用,其并可促进胰腺癌细胞迁移及侵袭能力。     

分选蛋白17对胰腺癌细胞生物学性状的影响

目的:探讨分选蛋白(SNX)17通过激活表皮生长因子受体(EGFR)影响胰腺癌细胞侵袭、增殖和迁移能力。方法:采集3例人胰腺癌组织及癌旁组织样本,自2021年1月至2021年3月收集于贵州医科大学附属医院肝胆外科,用免疫组织化学(IHC)染色检测癌组织与癌旁组织中SNX17的表达量。用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-...     

miR-567在胰腺癌细胞中的表达及其作用机制

目的:探讨miR-567在胰腺癌细胞中的表达及其作用。方法:采用qRT-PCR检测正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7及胰腺癌细胞系Panc-1、AsPC-1、HPAC、BxPC-3中miR-567表达。Panc-1细胞转染miR-567过表达慢病毒载体后,分别用CCK-8法、流式细胞术、划痕愈合实验、qRT-PCR、Western blot法检测细胞增殖、凋亡及迁移能力,以及KPNA4 mRNA与蛋白的表达、凋亡相关蛋白表达的变化。结果:miR-567在胰腺癌细胞系Panc-1、AsPC-1、HPAC、BxPC-3中的表达水平均明显低于正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7(均P0.05);miR-567慢病毒转染Panc-1细胞后,增殖能力明显减弱,凋亡率明显增加,划痕愈合率明显降低、KPNA4 mRNA与蛋白表达明显下调、而caspase-3及Bax蛋白表达明显上调(均P0.05)。结论:miR-567在胰腺癌细胞中表达降低,升高其表达可抑制胰腺癌细胞的生长与迁移能力,其机制可能与下调KPNA4并上调凋亡相关蛋白表达有关。     

长链非编码RNA XIST在胰腺癌中的表达及意义

目的:探讨长链非编码RNAXIST在胰腺癌组织中的表达及其作用。方法:实时定量PCR检测56对胰腺癌及癌旁正常胰腺组织标本中XIST的表达,以及XIST在人胰腺导管上皮细胞(HPDE)及7种胰腺癌细胞系(sPC-3、Bx PC-3、Capan-1、CFPAC-1、Hs766T、Panc-1、SW1990)中的表达,分析XIST表达与胰腺癌患者临床病理因素的关系;在XISTsi RNA干扰XIST高表达的胰腺癌细胞后,分别用MTT法和Brd U实验检测细胞的活力和增殖情况,Westernblot检测细胞中Ki-67、PCNA的蛋白的表达。结果:胰腺癌组织中XIST的表达量明显高于癌旁正常胰腺组织(2.452vs.0.9729,P0.001),且XIST高表达与胰腺癌患者的肿瘤分期(P=0.016)、淋巴结转移(P=0.032)有关。7种胰腺癌细胞系中XIST的表达量均明显高于HPDE细胞(均P0.05),其中SW1990细胞XIST表达量约为HPDE细胞的2.5倍。XISTsi RNA干扰SW1990细胞48h后,与未处理的SW1990细胞比较,细胞的活力(0.812vs.1.215)和增殖能力(0.708vs.1.007)均明显降低,Ki-67(0.467vs.1.027)与PCNA(0.600vs.0.997)的表达均明显下调(均P0.05)。结论:XIST在胰腺癌组织中表达升高,其高表达能促进胰腺癌细胞的生长,机制可能与其上调Ki-67、PCNA表达有关。     

miR-7856-5p通过靶向作用3对结直肠癌细胞SW480迁移和增殖的影响

目的探索微小RNA(miRNA,miR)-7856-5p对EPH受体A3(EPHA3)基因表达的调控作用及对结直肠癌细胞SW480迁移和增殖的影响。方法实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测结直肠癌组织和细胞系中miR-7856-5p的表达。脂质体转染法分别将miR-7856-5p模拟物和miR-NC转入结直肠癌细胞SW480,分别定义为miR-7856-5p组和miR-NC组。Real-time PCR检测转染效果。Transwell实验和CCK-8实验检测转染后细胞迁移和增殖能力。生物信息学软件预测和双荧光素酶报告基因系统验证miR-7856-5p的靶基因。Real-time PCR和Western blot检测转染后细胞中EPHA3的表达。符合正态分布的计量资料以均数±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果miR-7856-5p在结直肠癌组织的表达明显低于癌旁组织(P<0.01)。miR-7856-5p在结直肠癌细胞系的表达明显低于正常肠黏膜上皮细胞(P<0.05),在SW480细胞中表达最低(P<0.01)。miR-7856-5p组miR-7856-5p的表达明显高于miR-NC组,差异有统计学意义[(9.49±1.09)比(1.06±0.18),P<0.01]。miR-NC组和miR-7856-5p组迁移细胞数量分别为(125.70±14.05)个和(42.01±8.98)个,miR-7856-5p组细胞迁移能力明显下降(P<0.01)。与miR-NC组比较,miR-7856-5p组细胞增殖能力明显降低(P<0.05)。生物信息学软件显示miR-7856-5p的靶基因是EPHA3。双荧光素酶报告基因系统证实miR-7856-5p可靶向结合EPHA3基因(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-7856-5p组SW480细胞中EPHA3的表达明显降低(P<0.05)。结论miR-7856-5p可通过靶向调控EPHA3的表达,抑制结直肠癌细胞SW480的迁移和增殖能力。     

微小RNA-23a-5p/肿瘤蛋白53诱导的核蛋白1调控胰腺癌细胞吉西他滨耐药的实验研究

目的:探讨微小RNA(microRNA,miR)调控胰腺癌吉西他滨耐药的分子作用机制。方法:反转录聚合酶链反应(qPCR)检测来自桂林医学院附属医院2015年1月至2018年12月收治的胰腺癌患者的临床标本miR-23a-5p表达水平,细胞实验检测miR-23a-5p对吉西他滨处理下肿瘤蛋白53诱导的核蛋白1(TP53...     

miR-3126-5p靶向 LASP1抑制结直肠癌细胞的增殖和迁移的机制探讨

目的探讨微小RNA(miRNA)-3126-5p抑制靶基因LIM和SH3蛋白1(LIM and SH3 protein 1.LASP1)对结直肠癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测结直肠癌细胞株(HT-29、HCT116、LoVo、SW480)和正常肠黏膜上皮细胞(HIEC)中miR-3126-5p的表达水平。选择表达水平最低的细胞株作为实验对象,实验分为2组:阴性对照组(转染miR-NC)和miR-3126-5p组(转染miR-3126-5p),转染48 h后收集各组细胞。qRT-PCR法检测各组细胞miR-3126-5p的表达水平。采用MTS法和划痕愈合实验分别检测各组细胞的增殖水平和迁移能力。采用生物信息学软件microRNA.org和双荧光素酶报告基因实验分别预测和验证miR-3126-5p的靶基因。采用qRT-PCR和Western blot检测各组细胞靶基因的表达水平。计量资料以均数土标准差(Mean±SO)表示,两两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析结果与正常肠黏膜上皮细胞(HIEC)相比,结直肠癌细胞株miR-3126-5p的表达水平显著降低(P<0.05),表达水平最低的细胞株是HCT116细胞(P<0.01)。阴性对照组和miR-3126-5P组HCT116细胞中miR-3126-5p的表达分别为(1.05±0.16)和(7.91±1.26),差异具有统计学意义(t=5.40,P<0.01)。与阴性对照组相比,miR-3126-5p组HCT116细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),迁移能力显著下降(t=4.52,F<0.01)。microRNA.org显示miR-3126-5p与LIM和SH3蛋白1(LASP1)基因mRNA存在互补结合位点。miR-3126-5p和L4SP/mRNA能够靶向结合(P<0.01)。与阴性对照组相比,miR-3126-5p组H CT116细胞中L4SP/基因表达显著降低(t=4.56,P<0.01)。结论结直肠癌细胞株中miR-3126-5p呈低表达,miR-3126-5p能够通过抑制靶基因LASP1降低结直肠癌HCT116细胞的增殖和迁移能力。     

微小RNA-200c对人胰腺癌干细胞上皮-间充质转化的作用

目的观察微小RNA-200c(miR-200c)在人胰腺癌干细胞上皮-间充质转化(EMT)中的作用。方法应用流式细胞术(FACS)在人胰腺癌细胞株PANC-1中分选出以CD24⁺CD44⁺ESA+作为标志物的胰腺癌干细胞。将miR-200c前体片段和阴性对照片段分别转染到胰腺癌干细胞中。应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)和miR-200c的表达。Transwell试验检测细胞的侵袭能力。采用t检验。结果人胰腺癌细胞株PANC-1中分选出CD24⁺CD44⁺ESA+细胞(0.8%)。miR-200c在胰腺癌干细胞中的相对表达值(0.15±0.01)显著低于PANC-1细胞(1.00±0.09),差异有统计学意义(t=3.306,P<0.05)。胰腺癌干细胞平均穿膜细胞数[(321.00±7.62)个]明显高于PANC-1细胞[(70.00±16.47)个],差异有统计学意义(t=2.152,P<0.05)。转染miR-200c前体片段24 h后的胰腺癌干细胞中miR-200c的相对表达值(3.70±0.42)明显高于转染阴性对照片段的胰腺癌干细胞中miRNA-200c的相对表达值(0.22±0.21),差异有统计学意义(t=2.073,P<0.05)。E-cadherin、vimentin、ZEB1 mRNA在转染miRNA-200c前体片段的胰腺癌干细胞中的表达分别为(3.12±0.02)×10^-4、0.36±0.15、(0.38±0.07)×10^-4,在转染阴性对照片段的胰腺癌干细胞中的表达分别为(1.31±0.05)×10^-4、1.16±0.08、(1.13±0.03)×10^-4,两组比较差异有统计学意义(t=1.941、2.165、2.308,P<0.05)。转染miR-200c前体片段后的胰腺癌干细胞的平均穿膜细胞数[(80.00±5.35)个]明显低于转染阴性对照片段的干细胞[(310.00±19.41)个],两组比较差异有统计学意义(t=2.613,P<0.05)。结论miR-200c过表达可以抑制胰腺癌干细胞的上皮-间充质转化,逆转其侵袭能力。