磷脂酰肌醇蛋白多糖-3对Hippo信号通路的调控机制及其对肝癌Huh7细胞生物学行为的影响

目的探讨磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC3)对Hippo信号通路的调控机制及其对人肝癌Huh7细胞生物学行为的影响。方法分别构建4种靶向GPC3和YAP1基因的sh RNA序列,然后转染入肝癌Huh7细胞,并筛选稳定表达的细胞株。采用荧光定量PCR法和蛋白印迹法检测转染后的Huh7细胞中GPC3和YAP1的表达,以筛选有效沉默GPC3和YAP1的sh RNA。观察沉默GPC3和YAP1以及人重组YAP1(rh YAP1)对肝癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。GPC3 sh RNA转染实验分为6组:未转染组、空载体组、GPC3-714-sh RNA组、GPC3-647-sh RNA组、GPC3-1718-sh RNA组、GPC3-2134-sh RNA组。YAP1 sh RNA转染实验分为6组:未转染组、空载体组、YAP1-906-sh RNA组、YAP1-1363-sh RNA组、YAP1-1666-sh RNA组、YAP1-2895-sh RNA组。GPC3对YAP1的调控实验分为5组:未转染组、空载体组、GPC3-1718-sh RNA组、GPC3-1718-sh RNA+rh YAP1组、YAP1-1666-sh RNA组。结果 1成功构建了可有效沉默GPC3和YAP1表达的GPC3-1718-sh RNA和YAP1-1666-sh RNA质粒。2 GPC3sh RNA各转染组细胞中GPC3 m RNA和蛋白表达均明显低于未转染组(P0.05)和空载体组(P0.05),而GPC3-1718-sh RNA组又明显低于其他转染组(P0.05)。YAP1 sh RNA各转染组细胞中YAP1 m RNA和蛋白表达均明显低于未转染组(P0.05)和空载体组(P0.05),而YAP1-1666-sh RNA组又明显低于其他转染组(P0.05)。3 GPC3-1718-sh RNA组和YAP1-1666-sh RNA组细胞中YAP1 m RNA和蛋白表达均明显低于未转染组(P0.05)和空载体组(P0.05);而GPC3-1718-sh RNA+rh YAP1组细胞中YAP1 m RNA和蛋白表达明显高于GPC3-1718-sh RNA组(P0.05)和YAP1-1666-sh RNA组(P0.05)。4与未转染组和空载体组比较,GPC3-1718-sh RNA组和YAP1-1666-sh RNA组的细胞增殖和侵袭能力明显降低(P0.05),细胞凋亡明显增加(P0.05);而GPC3-1718-sh RNA+rh YAP1组细胞增殖、侵袭和凋亡均得到明显改善(P0.05)。结论 GPC3很有可能通过对Hippo信号通路YAP1的调控,实现其对人肝癌细胞Huh7生物学行为的影响。     

重组人干扰素α1b(运德素)联合胸腺肽α1(日达仙)治疗慢性丙型肝炎初探

目的:探索重组人干扰素α1b(运德素)与胸腺肽α1(日达仙)联合治疗慢性丙型肝炎抗丙肝病毒的效果.方法:选取慢性丙性病毒性肝炎30例,重组干扰素α1b联合胸腺肽α1(日达仙)组15例,单用重组干扰素α1b组15例,用药前、用药3月、6月后复查HCV RNA.结果:用药前2组HCV RNA水平比较无显著性差异(P＞0.05),用药3月后2组HCV RNA水平皆有明显下降,2组HCV RNA水平比较有显著性差异(P＜0.05),用药6月后2组HCV RNA水平有显著性差异,重组干扰素α1b+胸腺肽α1(日达仙)组HCV RNA水平低于单用重组干扰素组α1b (P＜0.05),用药3月后重组干扰素α1b+胸腺肽α1(日达仙)组HCV RNA转阴率40％,单用重组干扰素组HCV RNA转阴率为0,用药6月后重组干扰素α1b+胸腺肽α1(日达仙)组HCV RNA转阴率明显高于单用重组干扰素组(87 ％vs33％,P＜ 0.05).结论:重组干扰素α1b是一较好的抗HCV药物,无论单用或与胸腺肽α1(日达仙)合用在用药3～6月后皆使HCV RNA水平明显下降,但在与胸腺肽α1(日达仙)联用后使HCV RNA水平下降更加显著,特别是提高了HCV RNA转阴率,显示重组干扰素α1b与胸腺肽α1(日达仙)联用能增强抗丙肝病毒的效力,有助于病毒的清除.     

颈髓损伤后内皮素及其受体mRNA表达与血脊髓屏障损害的关系

目的 :为了探讨颈髓损伤后内皮素 - 1(ET- 1) m RNA、内皮素受体 - A(ETR- A) m RNA与血脊髓屏障损害的关系。方法 :应用逆转录多聚酶链反应 (RT- PCR)检测颈髓损伤后颈髓组织 ET-1m RNA、ETR- A m RNA表达 ,观察伤后血脊髓屏障通透性变化。结果 :伤后 6～ 72 h颈髓组织ET- 1m RNA、ETR- A m RNA均较对照组明显增高 (P<0 .0 1)。伤后 6～ 72 h颈髓组织伊文思蓝含量、水含量呈不同程度的增加 (P<0 .0 1)。结论 :颈髓损伤后 ET- 1m RNA、ETR- A m RNA表达水平增加与伤后血脊髓屏障损害的发生、发展密切相关 ,内皮素及其受体在颈髓损伤后血脊髓屏障损害的病理生理过程中起重要作用。     

人脾脏巨噬细胞总RNA的提取和产率研究

目的　探讨提取人脾脏巨噬细胞总RNA的方法并测算其产率。方法　收集 5例门静脉高压症脾亢患者的手术切除脾脏 ,经贴壁培养法分离纯化出巨噬细胞 (Mφ)后 ,采用TRIzol试剂一步法提取 5例脾脏Mφ样本的总RNA。分光光度法和琼脂糖凝胶电泳检测总RNA的产量和质量。最后计算出每 10 8个Mφ总RNA的产率。 结果　 5例样本Mφ总RNA的A2 60nm与A2 80nm比值平均为 1.83± 0 .13 ,提示总RNA纯度较高 ,电泳结果提示总RNA无降解。每 10 8个Mφ平均可抽提 (4 1.5 8± 2 3 .13 ) μg总RNA。 结论　采用TRIzol试剂一步法提取脾脏Mφ总RNA是可行的 ,收获的人脾脏Mφ总RNA纯度高、完整性好、量较多 ,可满足后续实验要求。     

ROCKⅠ/Ⅱ在转化生长因子β1诱导的主动脉平滑肌细胞表型转化中的作用

目的:探讨ROCKⅠ/Ⅱ在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人主动脉平滑肌细胞(HA-VSMC)表型转化中的作用。方法:将HA-VSMC分别转染ROCKI和ROCKII的si RNA后荧光显微镜观察转染情况,并用Western blot方法检测不同处理的HA-VSMC(ROCKI si RNA转染、ROCKII si RNA转染、+TGF-β1、ROCKI si RNA转染+TGF-β1、ROCKII si RNA转染+TGF-β1)中ROCKI和ROCKII蛋白的表达;分别用Western blot和RT-PCR方法检测不同处理的HA-VSMC(+TGF-β1、ROCKI si RNA转染+TGF-β1、ROCKII si RNA转染+TGF-β1、ROCK非特异性抑制剂Y-27632预处理+TGF-β1)中细胞收缩表型标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、平滑肌22α(SM22α)与合成表型标志物骨桥蛋白(OPN)的蛋白与m RNA表达,均以无处理的HA-VSMC为空白对照。结果:免疫荧光观察与Western blot检测表明两种si RNA均成功转染;TGF-β1处理后,HA-VSMC中ROCKI蛋白表达明显升高(P0.05),但ROCKII蛋白表达无明显变化(P0.05),ROCKI si RNA转染后TGF-β1上调ROCKI的作用被明显抑制(P0.05)。与空白对照组HA-VSMC比较,TGF-β1处理后的HA-VSMC中α-SMA、SM22α的蛋白和m RNA表达明显降低,而OPN蛋白与m RNA表达明显升高(均P0.05),ROCKI si RNA转染或Y-27632预处理后,TGF-β1的上述作用均明显减弱(均P0.05),ROCKII si RNA转染对TGF-β1的上述作用均无明显影响(均P0.05)。结论:TGF-β1可诱导HA-VSMC由收缩表型向合成型表型转化,ROCKI表达的升高可能在这一转化中起主要作用。     

甲状腺乳头状癌相关长链非编码RNA的研究进展

目的总结长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)与甲状腺乳头状癌相关性的研究进展。方法复习涉及甲状腺乳头状癌相关lnc RNA的文献,对lnc RNA与甲状腺乳头状癌的关系进行总结。结果 MAP激酶通路和生长抑制相关非编码RNA(NAMA)、甲状腺乳头状癌易感候选基因3(PTCSC3)、BRAF激活的非编码RNA(BANCR)、母系表达基因3(MEG3)、NONHSAT037832、GAS8-AS1等在甲状腺乳头状癌组织中呈低表达。ENST00000537266、ENST00000426615、XLOC051122、XLOC006074、HOX基因的反义基因间RNA(HOTAIR)、INK4位点反义非编码RNA(ANRIL)、转移相关肺腺癌转录本1(MALAT1)等在甲状腺乳头状癌组织中呈高表达。上述lnc RNA可能参与了甲状腺乳头状癌细胞的增殖、侵袭和凋亡。结论 lnc RNA可能为甲状腺乳头状癌发病的分子机制和基因靶向治疗提供新的依据,可能成为诊断甲状腺乳头状癌的新分子指标。     

非小细胞肺癌隐匿性淋巴结转移的基因诊断

目的　探讨非小细胞肺癌 (NSCL C)隐匿性纵隔淋巴结转移病灶的基因诊断方法。　方法　应用逆转录聚合酶链反应法 (RT- PCR) ,检测 30例 NSCL C患者 (实验组 ,N0 , a～ b期 )手术后病理诊断为阴性的 138枚纵隔淋巴结中 MU C1基因 m RNA的表达 ,并用 30枚肺良性疾病的局部淋巴结作阴性对照 (阴性对照组 ) ,用 30枚经病理证实有转移的 NSCL C纵隔淋巴结作阳性对照 (阳性对照组 )。对患者进行随访 ,用χ2 检验比较 MUC1基因 m RNA阳性者和阴性者的预后差别。　结果　阴性对照组 30枚肺良性疾病的局部淋巴结均无 MUC1基因 m RNA表达 (特异性为 10 0 % ) ,阳性对照组 30枚经病理证实有转移癌的肺癌纵隔淋巴结中 2 6枚检测到 MUC1基因 m RNA的表达 (敏感性为 87% )。实验组 9例患者的 11枚淋巴结中检测到 MU C1基因 m RNA表达 (检出率 8.0 % ) ,患者的分期上调为 a期。实验组中 MUC1基因 m RNA阳性患者预后不良 ,随访 2年有 4例复发、转移或死亡 ;MUC1基因 m RNA阴性者仅 1例转移 (P<0 .0 5 )。　结论　应用 RT- PCR法检测纵隔淋巴结中 MU C1基因 m RNA的表达可以诊断肺癌隐匿性淋巴结转移。     

水溶性纳米凝脂聚合物运载siRNA沉默PC12细胞N-甲基-D-天冬氨酸受体1基因的实验研究

目的 探讨离体条件下水溶性纳米凝脂聚合物(water-soluble lipopolymer,WSLP)运载小干涉RNA(small interference RNA,siRNA)沉默N-甲基-天冬氨酸受体1(N-methyl-D-aspartate receptor 1,NMDAR1)基因的可行性,为在体条件下研究W...     

BTB/POZ结构域蛋白7假基因1在肝细胞癌中的表达 及功能的初步研究

目的:探讨BTB/POZ结构域蛋白7(BTBD7)假基因1(BTBD7P1)在肝细胞癌(HCC)中的表达及功能。方法:检测106例配对的HCC组织与癌旁组织标本中BTBD7P1 m RNA的表达,分析BTBD7P1m RNA表达与HCC患者临床病理特征及预后的关系。用BTBD7P1过表达慢病毒载体转染HCC细胞系Bel7404后,检测细胞增殖率以及BTBD7 m RNA与蛋白的表达。结果:HCC组织中BTBD7P1相对表达量明显低于癌旁组织为(0.71 vs.2.14,P0.05);BTBD7P1m RNA低表达与肿瘤大小、卫星灶、分化程度、静脉血管侵犯、出血坏死、HCC分期明显有关(均P0.05);BTBD7P1 m RNA低表达患者的1、3、5年总体生存率及无瘤生存率均明显低于BTBD7P1m RNA高表达患者(均P0.05)。与转染空载体质粒的对照组Bel7404细胞比较,转染BTBD7P1过表达慢病毒载体的Bel7404细胞,细胞增殖能力明显减低,BTBD7 m RNA表达明显下调(均P0.05),但BTBD7蛋白表达无明显变化(P0.05)。结论:BTBD7P1可能在m RNA水平对亲本基因BTBD7表达进行调控,从而参与了HCC发生与发展。     

胫骨干骨折的手术治疗对策

目的：明确不同固定器械在胫骨干不同骨折类型固定中的特点，以指导临床应用。方法：68例胫骨干骨折，行加压钢板螺钉、交锁髓内钉、单侧外固定架固定后，作临床疗效分析。结果：加压钢板固定组42例，感染5例，骨不连1例，平均愈合时间3．8个月；交锁髓内钉固定组13例，无感染及骨不连，平均愈合时间5．4个月；单侧外固定架组13例，骨不连1例，踝关节背伸受限3例，平均愈合时间4．5个月。结论：胫骨骨折交锁髓内钉固定并发症少，功能恢复好，适用范围广，但要注意及时进行动力加压。加压钢板及外固定架固定应选择各自的最佳适应证，以达到理想的疗效。