硝呋齐特对A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其作用机制

目的探讨硝呋齐特(nifuroxazide)对A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其可能的作用机制。方法用不同浓度(2.5、5、10μmol/L)的nifuroxazide处理肺腺癌A549细胞,采用甲基噻唑基四唑(MTT)法观察nifuroxazide对细胞增殖的影响;流式细胞术观察nifuroxazide对细胞凋亡的影响;采用Transwell小室观察nifuroxazide对细胞迁移及侵袭的影响。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测nifuroxazide对微小RNA-219-5p(miR-219-5p)表达的影响;观察抑制miR-219-5p表达对细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)蛋白表达。结果nifuroxazide处理A549细胞后细胞增殖能力受到明显抑制(P<0.05),随浓度增加其抑制作用逐渐增强(P<0.05);nifuroxazide作用于A549细胞后,细胞凋亡率显著增加(P<0.05),迁移与侵袭细胞数显著减少(P<0.05),miR-219-5p与Bax的表达水平显著升高(P<0.05),而Bcl2表达水平显著降低(P<0.05);抑制miR-219-5p的表达可逆转nifuroxazide对A549细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的作用。结论硝呋齐特可通过上调miR-219-5p的表达诱导A549细胞凋亡,抑制细胞增殖、迁移及侵袭。     

姜黄素对肺癌A549细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨姜黄素对肺癌A549细胞侵袭迁移力的影响及其机制。 方法利用不同浓度姜黄素处理正常肺上皮细胞,台盼蓝法检测药物细胞毒性;不同浓度的姜黄素作用于A549细胞,MTT法测定A549细胞增殖水平;细胞划痕实验和Transwell实验分别测定药物处理后A549细胞的迁移和侵袭能力变化情况;Werstern blot测定A549细胞中于侵袭迁移有关的表皮生长因子受本(EGFR)、E-型钙黏蛋白(E-cadherin)、N-型钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白的表达。 结果姜黄素浓度在0～40 μg/ml时正常肺上皮病死率低,差异无明显统计学差异(P>0.05),表明姜黄素对正常肺上皮细胞的不良反应小;MTT实验结果显示姜黄素以浓度依赖的方式抑制A549细胞的增殖,各组与对照组相比均具有统计学意义(P<0.01);细胞划痕实验显示姜黄素以浓度依赖的方式抑制A549细胞的迁移能力,各组与对照组相比均具有统计学意义(P<0.01);Transwell实验显示姜黄素以浓度依赖的方式抑制A549细胞的侵袭能力,各组与对照组相比均具有统计学意义(P<0.01);Western blot显示姜黄素处理A549细胞后EGFR蛋白(P<0.01)和N-cadherin蛋白表达降低(P<0.01),E-cadherin蛋白表达升高(P<0.01)。 结论一定浓度内姜黄素细胞毒性低,姜黄素能够抑制A549的增殖、迁移和侵袭,可能是通过调节EGFR、N-cadherin、E-cadherin蛋白从而逆转上皮间质转化过程。     

肺腺癌合并脑转移患者血清S100B蛋白表达水平及其介导的生物学功能初步研究

目的:探讨肺腺癌合并脑转移患者血清S100B蛋白表达水平及其介导的生物学功能。方法:采集38例未发生脑转移的肺腺癌患者(非脑转移组)和25例肺腺癌合并脑转移患者(脑转移组)血液样本,采用酶联免疫吸附试验检测血清S100B蛋白含量;将质粒载体pcDNA3.1-S100B转染至肺腺癌细胞株A549,RT-PCR检测细胞S100BmRNA表达,免疫印迹试验检测细胞S100B蛋白表达,MTT比色法检测细胞增殖能力,Transwell小室检测细胞的迁移能力。结果:脑转移组血清S100B蛋白水平(48.14±4.39)ng/L显著高于非脑转移组(15.37±1.43)ng/L(t=42.841,P=0.000)。转染S100B后A549细胞形态明显拉伸延长,并出现侵袭性伪足。阳性对照组S100BmRNA表达量为(0.743 8±0.174 1),显著高于空白对照组(0.379 5±0.070 1)和阴性对照组(0.399 1±0.083 5)(P0.05);阳性对照组S100B蛋白表达量为(1.403 7±0.209 3),显著高于空白对照组(0.791 4±0.094 3)和阴性对照组(0.809 3±0.102 7)(P0.05)。3组细胞增殖能力均随时间延长逐渐增加,其中第2、3、4、5、6、7、8天阳性对照组细胞增殖能力显著高于空白对照组和阴性对照组,各组间比较差异有统计学意义(P0.05)。转染S100B后,A549细胞迁移至细胞培养下室的数量明显增多,提示A549细胞细胞迁移能力显著升高;阳性对照组细胞迁移能力显著高于空白对照组和阴性对照组,各组间比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:肺腺癌合并脑转移患者血清S100B蛋白显著升高,转染S100B蛋白的A549细胞增殖能力和迁移能力显著提高,S100B蛋白与肺腺癌脑转移等恶性生物学行为有关。     

剑叶凤尾蕨乙醇提取物调控LOXL1-AS1抑制肺癌细胞增殖、迁移、侵袭

目的探讨剑叶凤尾蕨乙醇提取物对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响和分子机制。方法采用不同浓度(3、6、12 mg/ml)的剑叶凤尾蕨乙醇提取物处理A549细胞,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖活力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、E钙黏附蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶(MMP)-2的表达水平;qRT-PCR检测类赖氨酰氧化酶1反义RNA1(LOXL1-AS1)的表达水平。将LOXL1-AS1小干扰RNA(si-LOXL1-AS1)转染A549细胞,抑制LOXL1-AS1表达后,采用上述方法检测细胞增殖活力和迁移侵袭能力变化。将LOXL1-AS1过表达载体(pcDNA3.1-LOXL1-AS1)转染A549细胞,经6 mg/ml的剑叶凤尾蕨乙醇提取物处理后,采用上述方法检测细胞活力和迁移侵袭能力变化。结果剑叶凤尾蕨乙醇提取物可抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力,抑制LOXL1-AS1、CyclinD1和MMP-2表达,促进p21和E-cadherin表达(P<0.05),并呈一定的剂量依赖性(均P<0.05)。抑制LOXL1-AS1表达可抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制CyclinD1和MMP-2表达,促进p21和E-cadherin表达(P<0.05)。过表达LOXL1-AS1可逆转剑叶凤尾蕨乙醇提取物对A549细胞的增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论剑叶凤尾蕨乙醇提取物通过下调LOXL1-AS1抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

慢病毒介导siRNA干扰尿路上皮癌相关基因1表达对人肺腺癌细胞系A549恶性行为的影响

目的探究干扰尿路上皮癌相关基因(UCA)1的表达对人肺腺癌细胞系A549恶性行为的影响。方法实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测人肺腺癌细胞系A549、H358、H1299、H460及人支气管上皮细胞系HBE中UCA1的表达情况;慢病毒转染表达针对UCA1的小干扰RNA(siRNA)的载体,同时转染空白载体于A549细胞中,分别作为干扰组及对照组细胞,RT-PCR检测两组细胞UCA1的表达情况,MTS实验检测两组细胞0、12、24、48及72 h的增殖能力,Transwell侵袭及迁移实验检测两组细胞转移能力,免疫印迹实验检测上皮间充质转化(EMT)相关分子E-钙黏蛋白(cadherin)及波形蛋白(Vimentin)的表达。结果 A549、H358、H1299、H460细胞系中UCA1的表达均显著高于HBE细胞系,差异有统计学意义(P0.05),且A549细胞系表达高于其他肺腺癌细胞系。干扰组细胞UCA1的表达显著低于对照组(P0.05),干扰效率73.2%。干扰组细胞48及72 h增殖能力显著低于对照组细胞(P0.05)。干扰组侵袭及迁移细胞数均显著低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。干扰组细胞E-cadherin表达相比对照组显著上调,而Vimentin表达相比对照组显著下调,差异有统计学意义(P0.05)。结论体外干扰UCA1的表达可通过下调A549细胞EMT进程抑制增殖及转移能力,UCA1可能是潜在的肺腺癌靶向治疗位点。     

尼古丁对人A549细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的 观察烟草烟雾中的主要有害成分尼古丁对人A549细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响,探讨尼古丁致病的可能机制.方法 以一定浓度尼古丁刺激体外培养的人A549细胞,应用CCK-8法、Transwell法和细胞划痕实验分别检测A549细胞的增殖、侵袭及迁移能力.Western blot检测α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nAChR)、血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白的表达.结果 与空白对照组比较,10-6 mol/L尼古丁处理A549细胞后,促进人A549细胞增殖(t=7.920,P<0.05);使穿过基质胶的细胞数增多,侵袭能力增强(t=5.298,P<0.05);使细胞迁移率增加,迁移能力增强(P<0.05).与空白对照组比较,10-6 M尼古丁处理A549细胞24 h后,α7 nAChR、VEGF和MMP-2蛋白表达上调,差异有统计学意义(t值分别为5.800、4.074、6.851,P值均<0.05).结论 尼古丁通过其特异性受体α7 nAChR可增强人A549细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其机制可能与VEGF和MMP-2蛋白表达上调有关.     

重楼皂苷Ⅶ对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的抑制作用

目的探讨重楼皂苷Ⅶ对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的抑制作用。方法 MTT法测定重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞的细胞凋亡率及细胞周期时相分布的影响。结果重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞的增殖有明显抑制作用,抑制率随药物浓度增加而增高,具有明显的量-效关系(P<0.05)。同时发现,重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞作用48 h及72 h组与24 h组比较细胞增殖抑制率均明显提高(P<0.05),但72 h组与48 h组比较,无统计学意义(P>0.05)。流式细胞仪分析显示,浓度为50μmol/L及100μmol/L的重楼皂苷Ⅶ作用A549/DDP细胞24 h后,与阴性对照组比较早期凋亡细胞比例明显增高;且对细胞周期时相分布影响明显,细胞阻滞G2期。结论重楼皂苷Ⅶ对人肺腺癌A549/DDP细胞的增殖具有明显抑制作用,并呈明显的浓度依赖性,与时间有一定相关性。重楼皂苷Ⅶ可引起早期凋亡细胞比例明显增加,并明显影响A549/DDP细胞周期时相分布。     

FOXC2对肺腺癌细胞恶性增殖及侵袭迁移能力的影响

目的探究叉头框C2蛋白(FOXC2)对肺腺癌细胞恶性增殖及侵袭迁移能力的影响。方法利用慢病毒转染的方法在人肺腺癌细胞系A549中构建过表达FOXC2细胞(实验组)及相应对照细胞系(对照组),Western印迹检测两组细胞FOXC2及干性相关分子Oct4、Sox2及Nanog的表达水平,MTT法检测两组细胞0、24、48、72、96 h的恶性增殖能力,Transwell侵袭及迁移实验检测两组细胞侵袭迁移能力。结果与对照组细胞比较,实验组细胞FOXC2、Oct4、Sox2及Nanog表达水平均显著上调(P<0.05),细胞恶性增殖能力在48、72及96 h出现显著升高(P<0.05),细胞侵袭及迁移能力均显著上调(P<0.05),差异均有统计学意义。结论 FOXC2可促进肺腺癌细胞恶性增殖及侵袭迁移能力,其机制与介导肿瘤细胞干细胞特性形成有关。     

苦参碱对人肺腺癌A549细胞增殖及HIF-1α、VEGF表达的影响

目的探讨苦参碱对人肺腺癌A549细胞增殖的影响及作用机制。方法将0、5、50、100、250、500μg/mL质量浓度的苦参碱分别作用于体外培养的处于对数生长期的A549细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,RT-PCR法检测细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达。结果苦参碱呈时间、剂量依赖性抑制A549细胞生长(P<0.05);呈时间、剂量依赖性降低HIF-1α、VEGF mRNA表达(P<0.05);HIF-1α和VEGF之间表达呈正相关(r=0.994,P<0.01)。结论苦参碱能抑制人肺腺癌A549细胞的增殖,其机制可能为降低HIF-1α和VEGF表达,从而抑制肺癌组织血管生成。     

miR-9-5p通过靶基因ADAMTS18调控肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的分子机制

目的研究miR-9-5p对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响和潜在的分子机制。方法 qRT-PCR检测ADAMTS18和miR-9-5pmRNA的表达,Western印迹检测ADAMTS18蛋白表达水平,四氮唑蓝(MTT)法测定A549细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告系统验证miR-9-5p与ADAMTS18的调控关系。结果与人正常支气管上皮细胞HBE相比,在肺癌细胞A549组中ADAMTS18的mRNA和蛋白表达量显著下降(P0.05),miR-9-5p表达量显著上升(P0.05);抑制miR-9-5p可以抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭;双荧光素酶报告系统结果表明,miR-9-5p靶向负调控ADAMTS18的表达;过表达ADAMTS18可抑制肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭;抑制ADAMTS18逆转了下调miR-9-5p对A549细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-9-5p通过靶向ADAMTS18基因抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭,miR-9-5p是肺癌分子诊断和治疗的潜在靶点。     

骨髓间充质干细胞对高低转移潜能肝癌细胞影响的实验研究

目的观察人骨髓间充质干细胞(hMSC)对高低转移潜能肝癌细胞(MHCC97-H和MHCC97-L)侵袭能力和增殖能力的影响。方法 Transwell法检测hMSC对高低转移潜能肝癌细胞侵袭能力的影响,下室加入培养基和hMSC,上室加入高低转移潜能肝癌细胞悬液,共培养36 h,酶标仪吸光度(optical density,OD)值检测及细胞计数法观察侵袭能力的变化。CCK-8法检测hMSC对高低转移潜能肝癌细胞增殖能力的影响。PCR检测共培养前后转移相关因子骨桥蛋白(OPN)、唾液酸蛋白(BSP)、α-V基因、增殖相关基因TGFβ1和PDCD4的表达差异。结果 (1)侵袭能力检测结果:与对照组比较,镜下观察实验组高低转移潜能肝癌细胞迁移数量明显减少,OD值两组比较差异有统计学意义(P0.05)。MHCC97-H与hMSC共培养后OPN、BSP表达明显下降(P0.05),而α-V表达无明显变化(P0.05)。MHCC97-L与hMSC共培养后OPN、BSP、α-V表达均显著下降(P0.05)。(2)增殖能力检测结果:与对照组比较,实验组高低转移潜能肝癌细胞OD值明显增高(P0.05),实验组TGFβ1基因表达上调(P0.05),而PDCD4基因表达在两组间差异无统计学意义(P0.05),在MHCC97-L实验组PDCD4基因表达上调(P0.05)。结论 hMSC使高低转移潜能肝癌细胞的侵袭能力下调,增殖能力增强。     

CD4+ CD25+ CD127dim/-调节性T淋巴细胞对肝星状细胞增殖及功能的影响

目的 了解CD4+ CD25+ CD127dim/-调节性T淋巴细胞在体外对肝星状细胞(HSC)增殖以及功能的影响,初步探讨调节性T淋巴细胞促肝纤维化的机制。方法传代培养HSC LX-2,将免疫磁珠细胞分选(MASC)法分离所得慢性乙型肝炎患者调节性T淋巴细胞与HSC LX-2按不同方式共培养5d,以单独培养的HSC作为对照,细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测共培养HSC增殖情况,ELISA法检测上清液中转化生长因子(TGF)β1含量,放射免疫法检测HSC分泌HA、PCⅢ水平。统计学处理采用LSD-t检验。结果 5例调节性T淋巴细胞与HSC比例为1.5∶1时HSC增殖最为明显,10例直接接触共培养与使用Transwell系统共培养调节性T淋巴细胞与HSC吸光度值分别为(0.713±0.032)、(0.735±0.028) cpm,均较对照组的（0.677±0.029）cpm增殖明显(t=5.4003,8.7878;均P＜0.01)。10例直接接触共培养与Transwell组细胞上清液中TGFβ1浓度分别为(781.59±76.45)、（813.53±60.62）pg/mL,显著高于对照组的(722.51±59.66) pg/mL（t=4.0014,6.1653;均P＜0.01）;HA浓度分别为（433.57±27.90）、（445.40±23.73）ng/mL,显著高于对照组的（415.83±19.44）ng/mL（t=3.3124,5.5231;均P＜0.01）;PCⅢ浓度分别为(21.93±1.71)、(23.12±1.87) ng/mL,显著高于对照组的（20.10±1.49）ng/mL(f=4.8082,7.9436;均P＜0.01)。且Transwell组各项结果均显著高于直接接触组(t=3.3875,2.1639,2.2107,3.1354;均P＜0.05)。结论CD4+ CD25+ CD127dim调节性T淋巴细胞可促进共培养的HSC增殖及其HA、PCⅢ的分泌。体外实验证明,CD4+ CD25+ CD127dim/-调节性T淋巴细胞具有促进肝纤维化的重要作用。     

酸性成纤维细胞因子对下肢动脉硬化闭塞症患者内皮祖细胞的影响

目的 探讨酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对下肢动脉硬化闭塞症(LEASD)患者外周血内皮祖细胞(EPCs)增殖与凋亡的影响.方法 选择LEASD患者36例,取外周血20 ml,获取单个核细胞,培养7d,细胞传至第3代,分为对照组,加aFGF 1、2和5 μg/L,依次为低、中、高浓度组,每组9例,各组干预6、12、...     

微小RNA-190低表达调控肺癌A549细胞增殖、侵袭和凋亡的实验研究

目的 探讨微小RNA(miR)-190对肺癌A549细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制.方法 将体外培养的A549细胞分为对照(Ctrl)组、抑制剂阴性对照(anti-miR-NC)组和miR-190抑制剂(anti-miR-190)组,转染miR-190抑制剂及其阴性对照后,采用实时荧光定量PCR检测检测A549细胞...     

调节性T细胞对肝星状细胞增殖及透明质酸分泌的影响

目的研究CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)对肝星状细胞(HSC)增殖及透明质酸(HA)分泌的影响。方法 MASC法分离慢性乙型肝炎患者血中CD4+CD25+Treg细胞;传代培养人HSC LX-2(空白组),不同比例CD4+CD25+Treg细胞与HSC直接共培养(共培养组),不同剂量的重组人转化生长因子(TGF)β1和HSC共培养(对照组);使用CCK-8法检测HSC增殖、放射免疫法检测HA分泌情况。组间比较采用单因素方差分析。结果共培养组与空白对照组(0.6623±0.02702)相比,在比例为2.5∶1时HSC增殖最为明显(0.6836±0.00560),比例为1∶1、5∶1及7.5∶1时HSC增殖均明显减少,且随着比例升高其增殖水平逐渐降低,各组与空白对照组相比有统计学差异(F=11.421,5.272,84.514,490.639;均P<0.05)。不同浓度TGFβ1对照组的HSC均比空白对照组(0.3883±0.00189)细胞增殖明显(0.6720±0.00753,0.6773±0.00585,0.5373±0.00387),并于8 ng/μl时增殖达到高峰,各亚组与空白组相比有统计学差异(F=196.175,799.624,236.461;P<0.01)。共培养组与对照组中细胞上清液中HA浓度与HSC增殖呈正相关(r=0.661、0.871,均P<0.01)。结论 CD4+CD25+Treg细胞促HSC增殖并促进其分泌HA,并在体外证实CD4+CD25+Treg细胞在慢性乙型肝炎进展过程中发挥重要作用。     

胰岛素抵抗的慢性丙型肝炎患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的数量及其功能

目的 了解胰岛素抵抗的慢性丙型肝炎患者外周血CD4 +CD25+调节性T细胞(Treg)数量和功能的变化.方法 筛选40例HLA-A2+慢性丙型肝炎患者(其中20例合并胰岛素抵抗),流式细胞仪检测患者CD4+CD25+Treg细胞占外周血中CD4+T细胞的频率,液闪计数仪检测对HCV特异性CD8+T细胞增殖的抑制作用,ELISA法检测IFN-y水平.统计学处理采用t检验.结果 胰岛素抵抗的慢性丙型肝炎患者外周血CD4 +CD25+ Treg细胞占CD4+T细胞的(9.5±1.9)％,明显低于慢性丙型肝炎患者的(11.2±2.2)％(t=2.615,P＜0.05).胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)≥4患者的CD4+CD25+ Treg细胞比例为(9.0±1.8)％,明显低于HOMA-IR＜4患者的(10.8±2.3)％(t=2.413,P＜0.05).胰岛素抵抗的慢性丙型肝炎患者CD4+CD25+ Treg细胞和去除Treg的外周血单个核细胞(PBMC)共培养上清液中IFN-y为(4 050±580) pg/mL,明显高于慢性丙型肝炎患者的(2 005±330)pg/mL(t=13.705,P＜0.01).HOMA-IR≥4患者IFN-y为(5 682±986)pg/mL,明显高于HOMA-IR＜4患者的(2 819±660) pg/mL(t=7.630,P＜0.01).结论 随着胰岛素抵抗程度加重,慢性丙型肝炎患者外周血CD4+ CD25+ Treg细胞频率减低,对HCV特异性CD8+T细胞增殖的抑制作用减弱.     

miR-24对氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞炎症损伤的影响

目的 探讨microRNA-24(miR-24)对氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)炎症损伤的影响及潜在分子机制.方法 采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测HUVECs的增殖;Transwell试验检测HUVECs的迁移能力;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-24...