黄芩素在伊立替康抑制结肠癌细胞增殖中的作用研究

目的:研究黄芩素在伊立替康抑制结肠癌细胞增殖中的作用及相关机制。方法:用结肠癌HT-29细胞作为研究对象。以50、100、200 μmol/L黄芩素、5 μmol/L伊立替康分别处理结肠癌HT-29细胞。MTT实验和平板克隆实验检测细胞增殖和克隆形成能力; Western blotting法实验检测Src激酶、Yes相关蛋白(YAP)及大肿瘤抑制因子激酶1(LATS1)磷酸化蛋白表达; 免疫荧光实验检测细胞YAP表达分布。结果:50 μmol/L黄芩素组、100 μmol/L黄芩素组、200 μmol/L黄芩素组均能增加伊立替康对HT-29细胞的增殖和克隆抑制作用。50 μmol/L黄芩素组、100 μmol/L黄芩素组、200 μmol/L黄芩素组均可下调结肠癌HT-29细胞p-Src蛋白表达,上调p-YAP、p-LATS1蛋白表达。200 μmol/L黄芩素组能增加结肠癌HT-29细胞的细胞质YAP分布。结论:黄芩素通过抑制Src-YAP信号通路增强伊立替康对结肠癌细胞的抑制作用。     

常春藤皂苷元与5-氟尿嘧啶或奥沙利铂联用对人结肠癌HT-29细胞增殖的影响

目的观察常春藤皂苷元(HG)与5-氟尿嘧啶(5-FU)或奥沙利铂(Oxa)联用对人结肠癌HT-29细胞增殖的抑制作用及可能作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定HG、5-FU、Oxa单药及联合作用于指数增殖期HT-29细胞的效应;应用中效原理进行统计分析,绘制单药及联合用药对肿瘤细胞生长的影响曲线,确定联合用药时的药物效应-合用指数的关系,判定药物间的相互作用;集落形成实验检测HG、5-FU、Oxa单药及联合用药对集落形成的影响;采用RT-q PCR方法检测HG对5-FU疗效相关基因乳清酸磷酸核糖转移酶(OPRT)、胸苷酸合成酶(TS)mRNA表达及Oxa疗效相关基因切除修复交叉互补基因(ERCC1)和乳腺癌易感基因(BRCA1)mRNA表达的影响。结果随着药物浓度增加,HG、5-FU、Oxa单药或联合用药对HT-29生长的抑制效应也增加,高浓度联合应用效应增强。HG联合5-FU或Oxa作用于HT-29细胞株可产生较好的协同效应,HG、5-FU、Oxa、HG+5-FU、HG+Oxa各组的克隆抑制率分别为39.34%、45.37%、51.01%、70.43%、70.96%,与对照组比较差异有统计学意义(P0.01)。HG作用后TS mRNA下调至0.554,ERCC1 mRNA下调至0.182,BRCA1mRNA下调至0.044,OPRT mRNA上调至1.655,与对照组比较差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论 HG联合5-FU或Oxa用药对人结肠癌HT-29细胞有显著降低细胞增殖能力,增强化疗药物的疗效作用。下调HT-29细胞的TS、ERCC1、BRCA1基因表达水平,上调OPRT基因表达水平,可能是其协同作用机制之一。     

羟基红花黄色素A通过Akt/mTOR-自噬通路抑制结直肠癌细胞增殖迁移和化疗耐药

近年来结直肠癌(colorectal cancer, CRC)的临床治疗已取得很大进展，但化疗耐药仍是降低结直肠癌患者生存率的主要原因之一，因此改善化疗耐药是目前亟待解决的问题。该研究旨在探讨羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)在结直肠癌细胞增殖、迁移及5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil, 5-FU)化疗耐药中的调控作用及相关分子机制。以结直肠癌细胞HCT116和HT-29为研究对象，首先通过MTT实验和克隆形成实验检测分析HSYA对结直肠癌细胞增殖的影响；其次，通过细胞周期实验检测分析HSYA对结直肠癌细胞细胞周期的影响；再者，通过划痕实验、Transwell实验检测分析HSYA对结直肠癌细胞迁移的影响。在此基础上探究分析HSYA对结直肠癌细胞5-FU化疗耐药性的影响及相关分子机制。结果显示，HSYA可显著抑制结直肠癌细胞增殖和迁移，并使CRC细胞周期阻滞于G₀/G₁期；同时，HSYA可显著改善结直肠癌细胞的5-FU化疗耐药性。吖啶橙染色实验与Western blot结果均表明，HSYA与5-...     

氧化苦参碱抑制胰岛素诱导人结肠癌HT-29细胞的增殖及迁移作用

目的:利用胰岛素培养人结肠癌细胞HT-29,体外模拟糖尿病患者体循环中高胰岛素环境,研究氧化苦参碱(OMT)对胰岛素诱导的人结肠癌HT-29细胞增殖和迁移的影响。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法和平板克隆实验检测OMT(2,4,8 mmol·L~(-1))对胰岛素诱导HT-29的增殖作用,倒置显微镜观察该模型下细胞形态的变化;通过划痕修复实验评价OMT对胰岛素诱导的HT-29迁移能力,流式细胞术Annexin V/碘化丙啶(PI)双染实验检测该模型中HT-29细胞周期与凋亡的变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞周期相关蛋白的表达以及细胞迁移相关蛋白的表达。结果:MTT比色法、平板克隆及划痕修复实验均显示,与空白组比较,胰岛素能促进人结肠癌HT-29细胞的增殖和迁移(P 0. 05);选择2,4,8 mmol·L~(-1)OMT处理细胞24 h,与胰岛素组比较,OMT 4,8 mmol·L~(-1)明显抑制其增殖作用(P 0. 05),可诱导HT-29细胞发生G_0/G_1期阻滞(P 0. 05),8 mmol·L~(-1)OMT下调细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)表达(P 0. 05),上调周期负调节蛋白p27水平(P 0. 05);此外,划痕修复实验结果显示,与胰岛素组比较,OMT各浓度组均能抑制胰岛素诱导的细胞迁移作用(P 0. 05),其机制可能与增加黏附蛋白(E-cadherin)(P 0. 05)和降低波形蛋白(Vimentin)(P 0. 05)相关。结论:OMT能抑制胰岛素诱导的人结肠癌HT-29细胞增殖及迁移作用,其作用机制可能与调控细胞周期及迁移相关蛋白有关。     

野黄芩苷通过hedgehog信号通路抑制结肠肿瘤干细胞分化的研究

该文旨在研究野黄芩苷对结肠肿瘤干细胞体外和体内分化的影响,揭示野黄芩苷基于hedgehog信号通路的抑制结肠肿瘤干细胞分化的作用机制。用3D细胞培养法观察野黄芩苷对结肠肿瘤干细胞HT-29CSC体外生长的影响;用软琼脂克隆形成实验研究野黄芩苷对HT-29CSC细胞转化的影响;用胎牛血清诱导干细胞分化实验,研究野黄芩苷对HT-29CSC细胞体外分化的影响;用qRT-PCR法检测野黄芩苷对HT-29CSC细胞中Lgr5,c-Myc,CK20和Nanog mRNA表达的影响;用Western blot法检测野黄芩苷对HT-29CSC细胞中c-Myc,Gli1,Lgr5蛋白表达的影响。通过裸鼠皮下接种HT-29CSC细胞建立肿瘤干细胞体内分化成瘤模型,研究野黄芩苷对裸鼠体质量和HT-29CSC细胞分化成瘤的影响;用qRT-PCR法检测肿瘤组织中CD133,Lgr5,Gli1,Ptch1,c-Myc,Ki-67,CK20,Nanog mRNA表达水平;用Western blot法及免疫组织化学法检测肿瘤组织中c-Myc,Gli1,Lgr5,CD133,Ki-67蛋白表达水平。体外研究表明,野黄芩苷能够抑制HT-29CSC细胞生长、转化与分化,同时显著下调HT-29CSC细胞中Lgr5,c-Myc,CK20,Nanog mRNA水平和c-Myc,Gli1,Lgr5蛋白表达。动物实验表明,野黄芩苷显著抑制裸鼠皮下HT-29CSC细胞分化成瘤,并且下调肿瘤组织中CD133,Lgr5,Gli1,Ptch1,c-Myc,Ki-67,CK20,Nanog mRNA表达和c-Myc,Gli1,Lgr5,CD133,Ki-67蛋白表达。综上所述,野黄芩苷能够抑制结肠肿瘤干细胞的体外和体内分化,其作用机制在于下调hedgehog信号通路活性。     

槲皮素对5-FU诱导的结直肠癌SW480细胞耐药及自噬调控机制研究

目的:探讨槲皮素(Que)调控5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导的结直肠癌SW480细胞耐药及自噬的作用及机制。方法:采用浓度递增诱导法建立5-FU耐药细胞株SW480/5-FU,MTT法设置Que高、中、低剂量组(10、20、40 μmol/L)和对照组。MTT法检测各组细胞的5-FU耐药性,TUNEL染色法检测细胞凋亡,免疫荧光检测细胞自噬活性,Western blot检测细胞p糖蛋白(Pgp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2抗体(ABCG2)、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p62、丝/苏氨酸激酶(AKT)、p-AKT、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和p-mTOR蛋白表达。结果:5-FU抑制SW480/5-FU细胞的半抑制浓度(IC₅₀)明显高于SW480细胞(P<0.05),耐药指数(RI)=13.74。与对照组相比,Que中、高剂量组5-FU抑制SW480/5-FU细胞的IC₅₀明显下降(P<0.05),耐药逆转倍数分别为2.27和4.03。与对照组相比,Que中、高剂量组细胞抑制率、凋亡率和自噬活性明显升高(均P<0.05),蛋白的表达均明显升高(均P<0.05),P-gp、MRP1、ABCG2、p62、p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR蛋白表达明显下降(均P<0.05)。结论:Que可以以剂量依赖性的方式逆转SW480/5-FU细胞的5-FU耐药性,诱导细胞自噬,其作用机制可能与抑制AKT/mTOR的磷酸化有关。     

姜黄素联合氟尿嘧啶对结肠癌细胞增殖凋亡迁移作用

目的:探索姜黄素调控上皮细胞间质转化(EMT)增敏5-FU的抗肿瘤作用。方法:采用姜黄素、5-FU不同给药浓度诱导结肠癌细胞株HCT8的凋亡,MTT法及克隆形成实验检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移能力;Compusyn软件分析姜黄素的增敏效力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;WesternBlot检测E-Cadherin、N-Cadherin、vimentin、cleaved-Caspase3、snail、β-catenin蛋白的表达量。结果:姜黄素能抑制HCT8细胞的增殖;6μmol/L姜黄素显著促进8μmol/L 5-FU对HCT8细胞的生长抑制和凋亡作用,联合药物指数(CI)值=0.7576;联合用药后降低HCT8细胞迁移能力,上调cleaved-Caspase3、E-Cadherin蛋白表达,同时抑制N-Cadherin、snail、β-catenin、vimentin蛋白表达。结论:姜黄素增加5-FU对HCT8细胞的敏感性,其机制可能与抑制EMT、诱导细胞凋亡有关。     

冬虫夏草提取物对结肠癌HT-29细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的:探讨冬虫夏草提取物对结肠癌细胞株HT-29细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:利用不同浓度冬虫夏草提取物(0.5~6.5 mg/m L)作用HT-29细胞24、48和72 h,采用MTT、平板实验、流式细胞检测和WB检测冬虫夏草提取物对HT-29细胞生长增殖作用、细胞集落数的形成、对细胞凋亡率的影响以及对细胞凋亡相关分子Caspase-3蛋白表达的影响。结果:MTT结果表明,提取物能够显著抑制HT-29的生长增殖,呈一定的量时效关系,半数抑制浓度为3.5 mg/m L;流式细胞仪分析表明,冬虫夏草提取物呈浓度依赖性诱导HT-29细胞凋亡,浓度为6.5 mg/m L时,HT-29凋亡率(12.57±0.16)%;Western blotting表明,HT-29细胞与对照组相比,经不同浓度提取物诱导后,Caspase-3表达逐渐增强。结论:冬虫夏草提取物具有抑制HT-29细胞增殖作用,这可能与增加Caspase-3蛋白表达、诱导细胞调亡有关。     

缺氧微环境下仙连解毒方抑制结直肠癌细胞增殖的作用及机制

目的：观察缺氧微环境下仙连解毒方对含溴结构域蛋白4(Brd4)诱导的核转录因子-κB(NF-κB)信号通路激活的影响,探讨其抑制结直肠癌细胞HT-29增殖的作用机制。方法：于缺氧培养箱或常氧培养箱中培养人结直肠癌细胞HT-29,给予仙连解毒方（0.8、1、1.2、1.6、3.2、6.4、12.8 g·L-1）干预细胞48 h,采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活力;采用线粒体膜电位荧光探针（JC-1）检测仙连解毒方（1.25、2.5、5 g·L-1）对细胞线粒体膜电位的影响,采用流式细胞术检测结直肠癌细胞HT-29凋亡情况;细胞克隆形成实验及5-乙炔基-2’-脱氧尿苷（EDU）法检测结直肠癌细胞HT-29细胞增殖能力;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Brd4及其下游蛋白如c-核蛋白类基因（c-Myc）、六亚甲基双乙酰胺诱导蛋白1(HEXIM1)的表达水平,同时检测仙连解毒方对NF-κB信号通路相关蛋白的影响。结果：与空白组比较,仙连解毒方（0.8、1、1.2、1.6、3.2、6.4、12.8 g·L-1）组均能抑制结直肠癌细胞HT-29细胞活力（P<0.05,P&l...     

败酱草抑制大肠癌HCT-8/5-FU细胞耐药的作用研究

目的研究败酱草对大肠癌5-FU耐药细胞株(HCT-8/5-FU)耐药的影响。方法 HCT-8、HCT-8/5-FU细胞经不同浓度5-FU或败酱草干预后,采用倒置显微镜观察细胞密度,MTT法检测细胞活力,阿霉素染色检测和荧光倒置显微镜观察细胞外排功能情况。结果不同浓度的5-FU干预可显著抑制HCT-8生长,对HCT-8/5-FU细胞生长影响较小;败酱草干预显著抑制HCT-8/5-FU细胞的生长和活力,同时具有增加阿霉素在HCT-8/5-FU细胞中蓄积的作用。结论败酱草具有抑制大肠癌5-FU耐药的作用。     

肠复康对人大肠癌HT-29细胞凋亡的影响

目的:研究中药复方肠复康对人大肠癌细胞凋亡的影响及其作用机制.方法:建立人大肠癌HT-29裸鼠移植瘤模型,设立肠复康低、中、高剂量组和空白对照组、5-氟脲嘧啶(5-FU) 甲酰四氢叶酸钙(CF)对照组,各组裸鼠8只,给药8周后处死裸鼠,瘤体称重,末端原位标记TUNEL法检测凋亡指数,并分别行半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Bax、Bcl-2免疫组化染色,图像分析系统定量检测并比较该3种物质表达情况.结果:肠复康各组瘤重小于空白对照组,而凋亡指数均高于空白对照组和5-FU CF组,其中高剂量组显著较高(与空白对照组和5-FU CF组比较,P＜0.01).肠复康各组移植瘤Caspase-3表达及Bax、Bcl-2表达的相对比率(Bax/Bcl-2)均高于空白对照组.结论:肠复康具有诱导人大肠癌HT-29裸鼠移植瘤细胞凋亡的作用,其机制可能与促进移植瘤Caspase-3表达及增大Bax/Bcl-2表达比率有关.     

瑶药消瘤藤体外抗肿瘤活性部位筛选

目的:筛选瑶药消瘤藤中的体外抗肿瘤部位。方法:采用溶剂提取,硅胶柱色谱法对消瘤藤中的总香豆素及总苷类成分进行提取分离,紫外分光光度法测定总香豆素和总苷的含量;CCK8法和克隆形成实验检测对肿瘤细胞的增殖活力的影响、划痕实验及Transwell侵袭小室观察肿瘤细胞迁移、侵袭能力的改变,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Bcl-2、Caspase3和NF-κB的蛋白表达。结果:消瘤藤总香豆素中香豆素含量为65.43%,总苷含量为52.02%。消瘤藤总香豆素部位可呈剂量依赖方式显著提高对人肝癌HepG2细胞、人结肠癌HT-29细胞、人神经胶质瘤U87细胞及人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的抑制率,显著抑制HT-29细胞的克隆、迁移及侵袭能力,显著下调Bcl-2、NF-κB的蛋白表达,上调Caspase3的蛋白表达。结论:总香豆素部位为消瘤藤抗肿瘤的活性部位,能抑制HT-29细胞的增殖、克隆、迁移及侵袭能力,其机制可能与上调Caspase3蛋白表达,下调Bcl-2和NF-κB蛋白表达有关。     

半枝莲醇提物含药血清对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡和周期的影响

目的:研究半枝莲醇提物(EESB,ethanol extract from Scutellaria barbata)含药血清对人结肠癌HT-29细胞株体外诱导其凋亡和周期的变化。方法:体外常规培养人结肠癌HT-29细胞株,制备含药血清,设置空白血清组、含有不同浓度EESB含药血清组、5-FU组,1应用MTT法评价EESB含药血清对HT-29细胞24 h、48 h、72 h的生长抑制率,2Annexin V-PE/7-AAD双染色分析在流式细胞仪上观察EESB含药血清处理HT-29细胞48 h后的细胞凋亡率,3PI法检测细胞周期变化。结果:1与空白组比较,MTT法显示EESB低、中、高剂量含药血清都能抑制HT-29细胞增殖(P0.05),抑制率与作用时间及血清含药浓度相关,72 h时其达到39%。2同空白组比较,低、中、高剂量含药血清处理HT-29细胞48 h后凋亡率显著高于对照组(P0.05),同时低、中、高剂量含药血清处理HT-29细胞48 h后,3与空白组比较,G0/G1期细胞明显较对照组增加(P0.05),提示半枝莲可促进细胞凋亡,并且将细胞生长周期阻滞于G0/G1期,并且S期减少。结论:半枝莲对人结肠癌HT-29细胞有抑制作用,作用机制可能不光与抑制细胞生长有关,还和阻滞细胞生长周期及诱导细胞凋亡有关。     

半枝莲氯仿极性部位提取物调控linc01843逆转大肠癌5-FU耐药研究

目的探讨半枝莲氯仿极性部位提取物(ECSB)调控linc01843逆转大肠癌5-FU耐药的作用机制。方法在5-FU干预HCT-8和HCT-8/5-FU细胞后,通过QPCR法检测linc01843的表达。用lipofectamine 3000将si-linc01843、negative control分别转染到HCT-8和HCT-8/5-FU细胞中去,用5-FU干预转染后的两株细胞,通过MTT法检测5-FU对转染si-linc01843、negative control后的两株细胞生长活力的影响。用ECSB、5-FU、以及ECSB联合5-FU干预HCT-8/5-FU细胞,通过MTT法检测其细胞活力;用5-FU、ECSB联合5-FU干预HCT-8/5-FU细胞,通过QPCR法检测linc01843的表达。结果在5-FU干预下,HCT-8和HCT-8/5-FU细胞中的linc01843表达均显著高于各自对照组(P<0.05)。在5-FU干预下,转染了si-linc01843的HCT-8和HCT-8/5-FU细胞均显著提高了其对5-FU的敏感性(P<0.05)。在HCT-8/5-FU细胞中,ECSB能显著逆转其对5-FU的耐药性(P<0.05),可显著降低HCT-8/5-FU细胞中linc01843的表达(P<0.05)。结论linc01843参与了5-FU耐药的过程,且ECSB逆转大肠癌5-FU耐药的作用机制之一是通过调控linc01843的表达。     

藏药柳茶水提物对胃癌耐药细胞BGC823/5-FU增殖及药物敏感性的影响

研究藏药柳茶水提物(Liu Tea extracts,LTE)对人胃癌氟尿嘧啶耐药细胞株BGC823/5-FU的增殖和药物敏感性的影响。将LTE作用于人胃癌耐药细胞BGC823/5-FU,采用MTT检测其对细胞增殖、化疗药物敏感性的影响以及与5-氟尿嘧啶(5-FU)的联用效应,应用CompuSyn软件计算联合用药指数(combination index,CI);流式细胞术(FCM)检测LTE对BGC823/5-FU细胞凋亡的作用;Western blot检测不同质量浓度(100,200,400 mg·L-1)LTE对5-FU作用下胃癌耐药细胞中P-gp,Bcl-2,Bax及Caspase-3(17KD)蛋白表达的影响。结果显示,LTE能够有效的抑制胃癌耐药细胞株BGC823/5-FU的生长,抑制率与药物浓度及作用时间呈正相关;LTE能够促进细胞发生凋亡,800 mg·L-1的LTE作用细胞24 h后凋亡率可高达46.2%(P0.01)。LTE与5-FU联用后CI1,说明两药具有较好的协同抑制耐药细胞增殖的作用。非细胞毒性剂量LTE可显著降低化疗药物5-FU,CDDP,PTX,ADM对BGC823/5-FU细胞的半数抑制浓度(IC50,P0.05),一定程度上逆转耐药细胞对化疗药物的耐药性,逆转倍数分别为2.35,1.68,1.96,0.52。蛋白检测结果显示,随着柳茶水提物浓度的增加,耐药细胞内Bcl-2表达逐渐下降,Bax和Caspase-3蛋白表达显著升高,差异具有统计学意义(P0.01)。但耐药蛋白P-gp的表达在实验组和对照组细胞中无显著变化。LTE能有效抑制胃癌耐药细胞株BGC823/5-FU的生长,并在一定程度上逆转其化疗耐药。抑制抗凋亡蛋白的表达、激活促凋亡蛋白、诱导耐药细胞发生凋亡可能是其作用的主要机制。     

片仔癀对人结肠癌HT-29细胞Pim-1和Pim-2mRNA表达的影响

目的 探讨片仔癀对人结肠癌HT-29细胞Pim-1和Pim-2 mRNA表达的影响.方法 分别用不同剂量的片仔癀干预体外培养人结肠癌HT-29细胞24 h后,倒置显微镜观察细胞形态变化;MTT法测定不同浓度药物对HT-29细胞增殖的影响:RT-PcR检测药物作用后HT-29细胞Pim-1和Pim-2 mRNA的表达.结...     

白花蛇舌草通过阻滞细胞周期抑制人结肠癌细胞的增殖

目的观察白花蛇舌草对人结肠癌细胞HT-29增殖及周期的影响,并初步探讨其可能的机制。方法分别采用不同浓度白花蛇舌草体外干预结肠癌HT-29细胞,MTT及集落形成实验观察该药对HT-29细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期,RT-PCR检测相关基因mRNA的表达。结果白花蛇舌草对结肠癌细胞HT-29有明显抑制作用,且具有一定的量-效关系;对细胞周期的影响主要是阻滞在G1/S期,S期的比例逐渐下降;RT-PCR结果显示周期相关基因CyclinE、CDK2及P27 mRNA的表达随着给药浓度的增加而降低。结论白花蛇舌草可通过调节结肠癌HT-29细胞周期相关基因的表达,阻滞结肠癌HT-29细胞的周期进程,抑制结肠癌细胞增殖。     

白花蛇舌草对大肠癌耐药细胞microRNAs表达的影响

目的:探讨白花蛇舌草(Hedyotic Diffusa Wilid,HDW)对大肠癌5-FU耐药细胞miRNAs表达的调控作用,进一步揭示其逆转大肠癌多药耐药(Multidrug Resistance,MDR)作用机制。方法:通过体外培养HCT-8/5-FU细胞,经HDW处理,采用MTT检测细胞活力、倒置显微镜观察细胞形态、microRNA(miRNA)表达谱芯片分析、QPCR验证差异miRNA表达、GO及Pathway分析预测差异miRNA调控的信号通路。结果:HDW可显著抑制大肠癌HCT-8/5-FU耐药细胞的活力,降低细胞密度;HDW调控57个miRNA差异表达,其中上调23个,下调34个;QPCR验证HDW上调miR-92b-5p、miR-1247-3p、miR-4800-5p的表达,下调miR-4454、miR-4443、miR-483-5p的表达;信号通路预测显示HDW可调控PI3K/Akt、TGF-β/Smad、MAPK、P53、Wnt、JAK-STAT等多条与细胞耐药、迁移、侵袭、增殖、凋亡有关的信号通路。结论:HDW对大肠癌5-FU耐药细胞HCT-8/5-FU具有显著的抑制作用,通过调控miRNAs表达是其逆转大肠癌耐药的作用机制之一。     

半枝莲提取物对LoVo细胞增殖及侵袭能力的影响

目的探讨半枝莲提取物(SBE)对LoVo细胞增殖及侵袭能力的影响及其可能机制。方法分别用1.1,2.2mg/ml的SBE处理LoVo细胞,以不加SBE的LoVo细胞作对照,同时以5-氟尿嘧啶(5-FU)5μg/ml作为阳性对照组(5-FU组)。MTT法检测处理后72h内细胞增殖能力的变化,细胞克隆形成实验和侵袭实验分别观察细胞克隆形成能力和侵袭能力的变化,Westernblot检测细胞Twist和E-钙粘素蛋白的表达。结果与对照组相比,5-FU组和SBE高剂量组的LoVo细胞增殖能力、克隆形成能力和侵袭能力均明显降低,E-钙粘素表达增加,Twist蛋白表达减少(P0.05)。结论2.2mg/ml的SBE对LoVo细胞增殖和侵袭能力的抑制作用可能与上调E-钙粘素、下调Twist蛋白的表达有关。     

片仔癀调控ABCC1抑制大肠癌HCT-8/5-FU细胞药物外排功能的作用机制研究

目的探讨片仔癀对大肠癌HCT-8/5-FU细胞对药物外排功能的影响,并探讨其机制。方法MTT法检测5-FU对HCT-8/5-FU细胞和HCT-8细胞活力的影响和片仔癀对HCT-8/5-FU细胞活力的影响;倒置显微镜观察片仔癀对HCT-8/5-FU细胞形态的影响;采用罗丹明染色通过流式细胞仪检测片仔癀对其在耐药细胞内蓄积的影响;RT-PCR检测ABC转运蛋白家族重要成员ABCC1的表达。结果 MTT检测结果显示不同浓度的5-FU干预可显著降低HCT-8细胞活力,呈现一定的剂量依赖和时间依赖,而对HCT-8/5-FU细胞活力未见影响。经片仔癀干预后,HCT-8/5-FU细胞活力也受到显著的抑制;形态学观察表明:随着药物浓度的升高,细胞数目逐渐减少,体积缩小,出现悬浮、脱落而死亡;罗丹明蓄积实验显示:片仔癀干预可显著增加其在细胞内的蓄积;RT-PCR实验表明:经片仔癀干预可显著下调HCT-8/5-FU细胞ABCC1在m RNA水平的表达。结论片仔癀可抑制HCT-8/5-FU细胞生长和药物外排功能,通过下调转运蛋白ABCC1的表达是其重要机制之一。