8-Br-cAMP对THP1细胞中ABCA1及单核细胞趋化因子的影响

 目的 以THP1细胞株为靶点,研究8-Br-cAMP对ABCA1、MCP-1基因mRNA和蛋白质表达及IL-1β蛋白质的影响,阐明ABCA1基因在AS及泡沫细胞形成中新的可能机制.方法 复苏培养THP1细胞株,加入8-Br-cAMP(0.5 mmol/L)刺激3、6、12、24 h,荧光定量RT-PCR和Western蛋白印迹法及ELISA法检测ABCA1、MCP-1及IL-1βmRNA和蛋白表达量;用ABCA1的反义寡核苷酸(100 nmol/L)转染THP1细胞,给予上述8-Br-cAMP的刺激,同样的方法观察上述指标的改变.结果 予8-Br-cAMP刺激后,THP1细胞中ABCA1、MCP-1的mRNA和蛋白质水平及IL-1β蛋白质水平均增高;给予反义寡核苷酸转染后,8-Br-cAMP刺激后3、6 h ABCA1、MCP-1mRNA的表达降低,12、24 h ABCA1、MCP-1及IL-1β蛋白质的表达水平降低.结论 在8-Br-cAMP刺激下,THP1细胞中ABCA1可增加炎症因子表达,参与AS的发生.     

1,25（OH）2D3对人血管平滑肌细胞TLR4基因及炎症因子表达的抑制作用

目的探讨1,25（OH）2D3（1,25-dihydroxyvitamin D3）对人主动脉血管平滑肌细胞（human aortic vascular smooth muscle cell,HA-VSMC）果蝇样受体（Toll like receptor 4,TLR4）基因及其下游炎症因子IL-6、IL-8和MCP-1表达的调节作用。方法不同浓度1,25（OH）2D3干预HA-VSMC后,采用实时荧光定量PCR法检测细胞TLR4、IL-6、IL-8、MCP-1mR-NA的表达水平。结果 1,25（OH）2D3在浓度为1-20nmol/L之间抑制TLR4、IL-6、IL-8、MCP-1mRNA水平的表达且具有明显的剂量依赖关系。在浓度为1nmol/L时1,25（OH）2D3下调TLR4和MCP-1mRNA表达的作用最明显,浓度为10nmol/L时,1,25（OH）2D3下调IL-6mRNA表达的作用最明显,浓度为20nmol/L时,1,25（OH）2D3下调IL-8mRNA表达的作用最明显。TLR4、IL-6、IL-8和MCP-1mRNA表达的最大下调幅度分别为对照组的3.08、2.39、3.19、2.23倍（均P〈0.05）。结论 1,25（OH）2D3通过下调TLR-4信号抑制了人主动脉血管平滑肌细胞的炎症反应。     

睡眠剥夺诱导骨骼肌组织IL-1β异常表达的分子机制研究

目的 探讨睡眠剥夺（SD）对骨骼肌组织炎性因子表达的影响及相关的分子机制。方法 将体重180～200 g的雄性大鼠随机分为对照组和实验组（SD 72 h）。收集各组大鼠骨骼肌组织,利用RT-PCR和Western印迹检测炎性分子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-15、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及炎性反应有关蛋白X-box结合蛋白1(XBP1)、肌醇需求蛋白1α(IRE1α)的表达水平。体外培养小鼠C2C12肌管细胞,分别转染炎性反应相关蛋白的siRNA,利用上述实验方法检测细胞炎性分子和炎性反应相关蛋白的表达水平。结果 SD后骨骼肌组织中IL-1β表达水平升高,炎性反应相关蛋白XBP1和IRE1α表达水平显著增强。体外培养的C2C12肌管细胞中转染XBP1 siRNA和IRE1αsiRNA后,可显著抑制IL-1β的转录诱导表达。结论 SD通过诱导骨骼肌组织IRE1α/XBP1内质网应激反应途径异常活化进而介导炎性因子IL-1β表达水平升高。     

急性肺损伤大鼠TNF-α、IL-1β、IL-1ra mRNA的表达及药物干预

目的观察急性肺损伤(ALI)大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-1受体拮抗剂（IL-1ra）mRNA的动态表达及白介素-10(IL-10)、地塞米松(Dex)对TNF-α、IL-1β、IL-1ra的干预作用。方法气道内滴注内毒素(LPS)10mg／k建立大鼠ALI模型。72只雄性SD大鼠随机分为对照组、损伤组、LPS加IL-10组、LPS加Dex组，每组18只(2、6、24h各6只)。采用RTPCR方法检测肺组织TNF-α、IL-1β及IL-1ra mRNA的表达水平，光镜下观察肺组织病理改变。结果损伤组肺组织TN-α mRNA表达2h达高峰，随后迅速下降；IL-βmRNA表达2h显著升高，6h达高峰，随后迅速下降；IL-1ra mRNA表达6h开始升高，且为峰值，24h仍高于对照组。IL-10及Dex可明显抑制肺组织TNF-α及IL-1βmRNA的表达，但对IL-1ra mRNA表达无明显影响。肺组织病理检查见IL-10组、Dex组的肺损伤较损伤组明显减轻。结论急性肺损伤时，TNF-α及IL-1βmRNA表达明显早于IL-1ra mRNA，提示ALI早期存在炎症介质／抗炎介质失衡。IL-10、Dex可明显抑制TNF-α及IL-1βmRNA的表达，但不影响IL-1ra mRNA的表达，这有利于炎症介质／抗炎介质平衡的重建，减轻大鼠ALI。     

甘草酸对高糖诱导的肾小球系膜细胞炎性因子及纤维化因子的影响

目的 探讨甘草酸(GA)对高糖诱导的肾小球系膜细胞(SV40 MES13)炎性因子及纤维化因子的影响。方法 将培养的小鼠肾小球系膜细胞(SV40 MES13)分为对照(NG)组(5.6 mmol/L葡萄糖)、高糖(HG)组(30 mmol/L葡萄糖)及HG+GA组(30 mmol/L葡萄糖+200μmol/L GA)。采用Western blotting检测各组细胞炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6、IL-8及纤维化因子α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平,免疫荧光检测各组IL-1β、TNF-α、α-SMA在细胞内的荧光表达强度,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组细胞培养上清中IL-1β、TNF-α、IL-6及IL-8的表达水平。结果 Western blotting检测结果显示,与NG组比较,HG组IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8及α-SMA蛋白的表达水平明显升高(P<0.01);与HG组比较,HG+GA组IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8和α-SMA蛋白表达量降低(P<0.05)。细胞免疫荧光结...     

血小板反应蛋白1对肾小管上皮细胞VEGF表达的影响

目的　探讨血小板反应蛋白1(TSP-1)对肾小管上皮细胞(HKCs)表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法　实验 分4组:对照组(C组)用无血清培养基(FSM)培养人HKCs;转化生长因子β1(TGF-β1)组(T组)用含TGF-β120ng/ml的FSM培养 HKCs;反义寡核苷酸组(TA组)在T组基础上加TSP- 1反义寡核苷酸;错义寡核苷酸组(TS组)在T组基础上加TSP -1错义寡核苷 酸。上述各组均培养72h后,用免疫细胞化学及RT-PCR方法检测TSP-1和VEGF及它们的mRNA表达的变化。结果　T组与C 组比较,TSP 1表达显著增高(P<0.01),VEGF表达显著下降(P<0.01);TA组阻断TSP-1表达后,与T组比较VEGF表达显著增 加(P<0.01)。结论　TGF-β1能诱导HKCs表达TSP-1、SP-1对VEGF的表达有抑制作用。     

术后疼痛大鼠切口组织Toll样受体4及其下游细胞因子表达的变化

目的 探讨术后疼痛大鼠切口组织Toll样受体4(TLR4)及其下游细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达的变化. 方法 健康成年雄性SD大鼠74只,体重200～250 g,建立大鼠术后疼痛模型.于术前1d、术后0.5,1,2,6,12h及1,2,3,5,7d测定术侧与非术侧机械缩足反射阈值(PMWT);于术前1d、术后2,8h、1,2,3,5,7d采用荧光定量PCR法检测皮肤切口组织TLR4、IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的表达. 结果 与术前比较,大鼠术侧术后0.5 h～5 dPMWT降低,术后2h术侧切口组织TLR4mRNA表达下调,之后逐渐升高,IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA于术后2,8h、1,2,3,5d表达上调(P＜0.05),非术侧PMWT差异无统计学意义(P＞0.05);术侧PMWT术后6h最低,之后逐渐升高,术侧切口组织TLR4mRNA术后2d表达水平最高,IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA分别于术后2h、1d、3d表达水平最高(P＜0.05).TLR4、IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达水平与术侧PMWT呈负相关(r=-0.501,-0.743,-0.893,-0.657,P＜0.05),IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA与TLR4 mRNA表达水平呈正相关(r =0.764,0.283,0.667,P＜0.05). 结论 术后疼痛大鼠切口组织TLR4及其下游炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达上调,该变化可能参与了术后疼痛的产生和维持.     

油酸-内毒素致伤大鼠肺组织TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-4、IL-10、IL-13的mRNA表达

目的研究油酸加内毒素脂多糖(LPS)序贯性两次致伤大鼠肺组织促炎症细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和抗炎细胞因子IL-4、IL-10、IL-13的mRNA表达时相性,探讨这些细胞因子在全身炎症反应失控和急性肺损伤中可能的作用.方法分别在油酸第1次致伤后1、4、12和24h实施小剂量LPS第2次致伤,采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测两次序贯性致伤大鼠肺组织TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-4、IL-10、IL-13的mRNA表达.结果 TNF-α和IL-1β的mRNA表达高峰在油酸第1次致伤后1h LPS第2次致伤组,而IL-6和IL-4、IL-10、IL-13的mRNA表达峰值则在油酸致伤后4h第2次致伤组;油酸-内毒素两次序贯性致伤后的促炎症细胞因子和抗炎细胞因子的mRNA表达与单油酸致伤比较均显著增强(P《0.05).结论在急性肺损伤中,TNF-α和IL-1β是早期表达的促炎细胞因子,而IL-6在炎症进一步发展中发挥作用;抗炎细胞因子IL-4、IL-10、IL-13高表达亦可能促进炎症的放大而不是起保护作用.     

油酸一内毒素致伤大鼠肺组织TNF-α、IL-1β、1L-6和IL-4、IL-10、1L-13的mRNA表达

目的研究油酸加内毒素脂多糖(LPS)序贯性两次致伤大鼠肺组织促炎症细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和抗炎细胞因子IL-4、IL-10、IL-13的mRNA表达时相性,探讨这些细胞因子在全身炎症反应失控和急性肺损伤中可能的作用.方法分别在油酸第1次致伤后1、4、12和24h实施小剂量LPS第2次致伤,采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测两次序贯性致伤大鼠肺组织TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-4、IL-10、IL-13的mRNA表达.结果 TNF-α和IL-1β的mRNA表达高峰在油酸第1次致伤后1h LPS第2次致伤组,而IL-6和IL-4、IL-10、IL-13的mRNA表达峰值则在油酸致伤后4h第2次致伤组;油酸-内毒素两次序贯性致伤后的促炎症细胞因子和抗炎细胞因子的mRNA表达与单油酸致伤比较均显著增强(P《0.05).结论在急性肺损伤中,TNF-α和IL-1β是早期表达的促炎细胞因子,而IL-6在炎症进一步发展中发挥作用;抗炎细胞因子IL-4、IL-10、IL-13高表达亦可能促进炎症的放大而不是起保护作用.     

细胞间黏附分子-1在颅脑损伤中的表达和炎症介导作用

介绍细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecules-1,ICAM-1)的生化特性和颅脑损伤后介导损伤脑组织炎性反应的作用.另外,许多炎性因子可激活ICAM-1蛋白表达,导致炎症的级联反应.     

天花粉蛋白对IL-1β介导下的人牙周膜细胞MMP-1表达的影响

目的 观察天花粉蛋白(TCS)对白细胞介素-1β(IL-1β)介导下人牙周膜细胞基质金属蛋白酶-1(MMP-1)表达的影响,为进一步研究对抗牙根吸收的可能途径提供实验依据.方法 用IL-1β 10 ng/ml作用于体外培养的人牙周膜细胞(hPDLCs),通过噻唑蓝比色测定法(MTT)及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),观察IL-1β对hPDLCs生长状态及MMP-1表达影响;将TCS 0.05 ng/ml作用于IL-1β介导状态下的hPDLCs,观察hPDLCs生长状态及MMP-1表达的变化.结果 在IL-1β及IL-1β复合TCS作用下,hPDLCs的增殖状况无明显改变(P＞0.05);IL-1β介导下,hPDLCs中MMP-1的mRNA表达呈上升趋势.相对于IL-1β单独作用,IL-1β复合TCS作用下,hPDLCs中MMP-1的mRNA表达下调.结论 IL-1β介导下的hPDLCs 的MMP-1表达增高;TCS有抑制IL-1β介导下的hPDLCs MMP-1表达增高作用.     

束缚应激对心脏PPARα、PPARβ和M—CPT—ImRNA表达的影响

目的观察束缚应激对雄性Wistar大鼠心肌过氧化体增殖物激活型受体α（PPARα）、PPARβ和肌型肉碱棕榈酰转移酶-I（M—CPT—I）mRNA表达的影响。方法健康雄性Wistar大鼠,采用束缚应激模型,实验组大鼠每天给予束缚应激2次,每次3h。按照有无应激和应激时问长短分为正常对照组（C）、束缚1W（R1）、束缚2w（R2）和束缚4W组（R4）。采用逆转录酶多聚酶链反应（RT．PCR）检测各组心肌PPARα、PPARβ和M-CPT-I的mRNA表达水平。结果束缚应激1、2、4W大鼠心肌PPARαmRNA和M—CPT—ImRNA水平较正常对照组明显升高（P〈0．01或P〈0．05）;心肌PPARβmRNA水平较正常对照组变化不明显（P〉0．05）。结论束缚应激上调心肌PPARα和M—CPT—ImRNA表达,对PPARβ无明显影响,PPARot可能促进束缚应激大鼠脂肪酸氧化增加。     

脓毒症时骨骼肌细胞糖皮质激素受体表达与低氧诱导因子关系的研究

目的研究脓毒症时骨骼肌中糖皮质激素受体(GR)表达与低氧诱导因子(HIF-1α)的关系,进一步阐明脓毒症时骨骼肌蛋白高分解代谢的机制。方法 54只Balb/c小鼠随机分为对照组、脓毒症组和治疗组。脓毒症组通过采用腹腔注射脂多糖(10mg/kg)诱导脓毒症(n=24);治疗组(n=24)在伤前2h分别使用糖皮质激素受体拮抗剂(RU38486(10mg/kg)灌胃,余处理同脓毒症组。同时设立对照组(n=6),于伤后24、6、1、2h取材。利用蛋白免疫印迹(western blot)测定肌组织重链肌球蛋白(MHC),半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测GR和HIF-1αmRNA的表达变化。结果在内毒素注射6h后,脓毒症小鼠骨骼肌MHC的含量较对照组显著减少,伤前使用糖皮质激素受体拮抗剂RU38486灌胃,于6h后骨骼肌MHC含量增多,后期均高于脓毒症组。脓毒症小鼠GR与HIF-1αmRNA表达在整个实验过程中显著增加;使用RU38486灌胃后,于伤后6h GR mRNA的表达明显降低(P<0.05),并维持在较低水平,在整个治疗过程中HIF-1α明显降低。相关性分析表明,脓毒症中GR与HIF-1α的表达呈正相关。结论体内GR表达增高是脓毒症大鼠骨骼肌蛋白降解显著增加的原因之一,其作用可能是在基因水平与HIF-1α协同作用,进而导致骨骼肌蛋白分解增强。     

阿托伐他汀通过激活PPARa信号通路抑制老年大鼠心肌IL-1β表达

目的：观察阻断老年大鼠心肌细胞过氧化物酶体增殖物激活型受体a（PPARα）信号通路对白细胞介素-1β（IL-1β）表达水平的影响。方法：将培养的老年大鼠心肌细胞分为空白对照组、溶剂对照组、阿托伐他汀组、PPAR拮抗剂GW6471＋阿托伐他汀组。分别加入细胞培养液、二甲基亚砜（DMSO）、阿托伐他汀、阿托伐他汀＋PPARa拮抗剂GW6471。用RT-PCR和western blot方法检测各组细胞IL-1βmRNA和IL-1β蛋白含量。结果：①与空白对照组相比,溶剂对照组大鼠心肌细胞IL-1βmRNA表达水平和蛋白含量均无显著差异（P〉0．05）;②与空白对照组相比,阿托伐他汀组IL-1βmRNA表达水平和蛋白含量均显著降低（P〈0．01）;③GW647l＋阿托伐他汀组IL-18mRNA表达水平及蛋白含量均显著高于阿托伐他汀组（P〈0．05）,但仍低于空白对照组（P〈0．05）。结论：阿托伐他汀抑制老年大鼠心肌细胞IL-1p表达的作用可能与其激活PPARα信号通路有关。     

白藜芦醇对重症急性胰腺炎大鼠腹腔巨噬细胞功能的影响

目的：探讨腹腔巨噬细胞（PM）在大鼠重症急性胰腺炎（SAP）中的作用,并观察白藜芦醇（Res）对SAP大鼠PM功能的影响。方法：36只大鼠随机分为假手术（SO）组、SAP组和Res组3组。制模后4、12h剖杀大鼠。分离PM并培养24h。RT—PCR法检测PM中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA和白介素-1β（IL-1β）mRNA的表达;酶联免疫吸附法（EUSA）检测细胞培养液及血清中TNF-α和IL-1β的水平。取胰腺组织行HE染色及病理学评分。结果：与SAP组比较,Res组胰腺损伤程度明显减轻;SAP组PM中TNF—mnRNA和IL—1βmRNA的表达、细胞培养液及血清中TNF-α和IL-1β水平均高于SO组（P〈0．001）;与SAP组比较,Res组PM中TNF-αmRNA和1L-1βLRNA的表达、细胞培养液及血清中TNF-α和IL-1β水平明显下降（P〈0．001）,但仍高于SO组（P〈0．05）。结论：PM在SAP发病机制中起非常重要的作用;Res能显著减轻SAP时胰腺组织损伤,其机制与抑制PM功能,从而抑制TNF-α和IL-1β的分泌有关。     

束缚应激后大鼠肝脏PPARβ/δ mRNA和蛋白表达的变化

目的观察束缚应激后大鼠血甘油三脂（TG）、血糖和肝脏过氧化物酶体增殖物激活型受体（PPAR）β/δmRNA和蛋白的变化,初步探讨应激对糖脂代谢的影响及发生机制。方法健康雄性Wistar大鼠,随机分为正常对照组（C）、束缚1 w组（R1）、束缚2 w组（R2）和束缚4 w组（R4）,分别不给予应激及给予束缚应激1、2和4 w。实验结束后取大鼠血清及肝组织,全自动生化仪测定血TG和血糖水平,分别用RT-PCR和Western blot法检测肝脏PPARβ/δ的mRNA和蛋白表达水平。结果 R1、R2、R4组大鼠血清TG分别为（0.97±0.28）、（0.88±0.16）、（0.94±0.23）mmol/L,均明显高于C组的（0.59±0.09 mmol/L（P〈0.01）;血糖分别为（6.25±0.69）、（6.30±1.10）、（6.12±0.85）mmol/L,均明显高于C组的（5.18±0.54）mmol/L）（P〈0.01）。与C组相比,R1、R2、R4组肝脏PPARβ/δmRNA和蛋白表达均降低（P〈0.05或P〈0.01）。结论束缚应激后,大鼠血清TG、血糖水平升高,这种变化可能与肝脏PPARβ/δ表达降低有关。     

突变型DNA聚合酶β碱基切除修复活性的分析

目的分析162位Val→Ala突变型DNA聚合酶β（DNA polymerase β,polβ）碱基切除修复活性的变化,为探讨修复基因DNA聚合酶β突变在肿瘤发生发展中的作用积累实验依据。方法异丙基-β—D-硫代半乳糖苷（IPTG）分别诱导含有野生型和162位Val→Ala突变型DNA聚合酶β表达载体（pQE80L—Wpolβ和pQE80L-Mpolβ）的大肠杆菌DH5α;通过镍柱亲和层析法纯化蛋白,复性后蛋白定量;退火合成含有单碱基缺失的DNA底物,与纯化的野生型和突变型DNA聚合酶β蛋白进行BER修复试验。结果通过诱导、纯化得到38kd野生型和突变型DNA聚合酶β蛋白;在BER实验中。野生型DNA聚合酶β能够在DNA底物的酶切位点处将其完全切开,而突变型DNA聚合酶β仅部分将其切开。结论162位Val→Ala突变型DNA聚合酶β碱基切除修复能力显著减弱,提示肿瘤发生发展与polβ基因修复活性降低密切相关。     

阿托伐他汀对不稳定型心绞痛患者血浆MCP-1、hsCRP水平的影响

目的探讨氟伐他汀对不稳定型心绞痛（UAP）患者血浆单核细胞趋化因子-1（MCP-1）及超敏c反应蛋白（hsCRP）的影响。方法采用酶联免疫吸附法（ELISA）和免疫浊度法检测70例UAP患者服用阿托伐他汀前后血浆MCP-1及hsCRP水平。结果UAP组血浆MCP-1、hsCRP水平为（27．88±6．35）pg／L、（2．35±0．33）ug／L显著高于对照组的（9．92±2．15）pg／L和（1．38±0．30）ug／L（P〈0．05或P〈0．01）,服用阿托伐他汀4周后血浆MCP—1及hsCRP水平明显下降（P〈0．05或P〈0．01）。结论UAP患者血浆MCP-1及hsCRP水平升高与冠脉炎症反应相关,阿托伐他汀可显著降低UAP患者血浆MCP-1及hsCRP水平。改善冠心病患者的预后。     

Wound age estimation by simultaneous detection of 9 cytokines in human dermal wounds with a multiplex bead-based immunoassay: An estimative method using outsourced examinations

Wound age estimation for human dermal wounds was performed based on quantification of interleukin 1β (IL 1β), IL 5, IL 7, IL 12 p70, IL 13, IL 17, granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF), monocyte chemoattractant protein 1 (MCP 1), and macrophage inflammatory protein 1β (MIP 1β). IL 5, IL 12 p 70, IL 13, and IL 17 increased from the early phase, MCP 1 exclusively in the middle phase, and IL 1β, G-CSF, and MIP 1β from the middle phase to the late phase. IL 7 decreased from the early phase. Among the cytokines analyzed in the present study, MCP 1 was the most plentiful cytokine. In addition, an outsourced examination, which could be available to any forensic institute, was performed in two cases for confirmative purposes. Many factors have been proposed as markers for dermal wound age estimation, but the set of cytokines selected for the outsourced examination in the present study wound be useful in daily forensic practice.