CD4~+T淋巴细胞功能性区分

确定T 细胞由其表面表达CD3来决定,CD3为T 细胞受体复合体中的一恒定成份。带有αβ-T 细胞受体异二聚体的T 细胞可进一步分为表达CD4和CD8抗原的二类。虽然CD4~+T 细胞通常被称为T 辅助细胞,但是这种认识并不全面。第一,CD4的表达几乎绝对地和外来抗原识别有关,抗原以多肽形式结合至MHCⅡ类分子上。而MHCⅡ类分子特异性可能是CD4与MHCⅡ类抗原结合的结果,此时CD4作为T 细胞受体对抗原-MHCⅡ类复合物的活信号成份。其次,CD4~+T 细胞具有多种不同的功能,其中之一是激活抗原特异性B 细胞。另外,确有一些CD4~+T 细胞能抑制B 细胞的活化。克隆化T 细胞系的功能区分克隆化T 细胞可分成二型。其中一型能     

尖锐湿疣患者外周血T淋巴细胞上活化抗原的表达

目的 :探讨尖锐湿疣 (CA)患者外周血CD6 9和HLA DR分子在T淋巴细胞上表达的变化及其意义。方法 :采用免疫荧光三标记流式细胞术检测 30例CA患者外周血T细胞CD6 9和HLA DR抗原的表达 ,并以 31例正常人作为对照。结果 :CA患者外周血CD3 T细胞CD6 9的表达 (6 6 3%± 3 13% )与正常人对照组 (5 12 %± 1 6 4 % )相比 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,CD4 T细胞CD6 9的表达与正常人对照组相比 ,差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,CD8 T细胞表达CD6 9水平 (4 6 1%± 3 0 9% )明显高于对照组 (2 6 7%± 1 31% ,P <0 0 1) ;患者组CD3 T细胞中HLA DR 细胞 (2 1 6 5 %± 8 84 % )比对照组 (13 5 6 %± 5 15 % )显著增高 (P <0 0 0 1)。结论 :CA患者外周血T淋巴细胞的激活以CD8 T细胞为主 ,其免疫激活状态在抗病毒感染中起着重要作用。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞对内皮细胞抗原提呈功能的影响及机制

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)对内皮细胞抗原提呈功能的影响及机制。方法:磁性细胞分离器(MACS)分离CD4+CD25+T细胞及CD4+CD25-T细胞。在ox-LDL作用下,HUVECs与CD4+CD25+T细胞共培养,24小时后收集HUVECs。应用流式细胞术测定HUVECs抗原提呈分子(HLA DR,CD86,CD80)的表达,Cell Counting Kit-8法(CCK-8)测定HU-VECs刺激CD4+CD25-T细胞增殖的能力,Transwell小室实验初步探讨Treg作用于HUVECs的具体机制。结果:与对照组比较,Treg可显著抑制HUVECs抗原提呈分子的表达及刺激T细胞增殖的能力。用Transwell隔离后,与or-LDL刺激组比较,HU-VECs抗原提呈分子表达及其刺激T细胞增殖的能力无明显变化。结论:Treg可显著抑制HUVECs抗原提呈能力,其作用机制可能为下调CD86的表达,且依赖细胞直接接触。     

人参皂苷Rg1与Rh1对树突状细胞表达HLA-DR、CD25、CD44、CD54、CD11c及E-selectin的影响

目的：观察人参皂苷Rg1和Rh1对树突状细胞（Dendritic cell，DC）表面分子CD25、HLA-DR、CD44、ICAM-1、CD11c及E-sclectin表达的影响。方法：用不同浓度的Rg1和Rh1分别加入成熟DC中，刺激一定时间后，用免疫组化法观察，并用图像分析法分析结果。结果：除E-selectin外，Rg1和Rh1均可不同程度地促进HLA—DR、CD25、CD11c、CD44和ICAM-1的表达。结论：Rg1、Rh1可增强DC表面促进T细胞活化的第一、二类信号系统分子的表达，提高其抗原递呈能力，并促进DC—T细胞簇的形成而活化初始T细胞。     

协同刺激分子CD28在结核杆菌抗原体外激活人外周血γδT细胞中的作用

目的 :为了探讨CD2 8协同刺激分子在结核杆菌 (Mtb)低分子多肽抗原体外激活人外周血γδ T细胞中的作用。方法 :采用激发型抗CD2 8单抗模拟第二信号 ,Mtb低分子多肽抗原作为刺激原 ,对纯化的人外周血T细胞进行体外刺激和培养 ;用流式细胞仪检测γδ T细胞上CD2 8分子的表达、γδ T细胞的增殖效应及活化的γδ T细胞上CD6 9分子的表达。结果 :人外周血γδ T细胞中有 5 0 %左右表达CD2 8分子 ;抗CD2 8单抗协同Mtb抗原可刺激γδ T细胞的活化和增殖 ;但抗CD2 8单抗或Mtb抗原单独刺激则无作用。活化的γδ T细胞表面表达CD6 9分子。结论 :Mtb抗原在选择性活化人外周血γδ T细胞时需要第二信号的参与 ;CD2 8在Mtb抗原激活γδ T细胞时可提供协同刺激信号 ;CD6 9可作为γδ T细胞的早期活化标志。     

手术创伤对小儿T淋巴细胞CD69、HLA-DR的影响及意义

手术创伤后患儿细胞免疫功能调节紊乱，传统的观点认为，创伤可致淋巴细胞特别是T细胞的功能受抑，从而使机体的抗感染能力减弱。但另一方面，创伤也可激活T淋巴细胞。本研究采用流式细胞仪技术动态测定42例行体外循环手术的先天性心脏病息儿及11例普胸手术患儿围术期外周血T淋巴细胞表面活化分子CD69、人类白细胞抗原DR位点(HLA-DR)表达率的变化。结果见表1。     

外周血CD3~+CD56~+T细胞在恶性肿瘤患者中的表现及临床意义

目的了解 CD3+ CD5 6 + T细胞与 CD3- CD5 6 + 、CD3+ CD5 6 - 的关系及其在参与恶性肿瘤患者抗肿瘤免疫中的作用。方法采用流式细胞术对 10 0例恶性肿瘤患者 (5 5例实体瘤患者和 45例非实体瘤患者 )及 46例健康对照组外周血中的 CD3+ CD5 6 +、CD3- CD5 6 +、CD3+ CD5 6 - 3类淋巴细胞进行标记分析。结果在实体瘤和非实体瘤患者组中 :CD3+ CD5 6 + T细胞均有高表达 ,2组患者与健康对照组比较均有显著性差异 (P<0 .0 1)。 CD3+ CD5 6 - T细胞在实体瘤组的表达都显著低于非实体瘤组和健康对照组 ,2组间比较均有显著性差异 (P<0 .0 0 1) ;而 CD3- CD5 6 + NK细胞在 2患者组中的表达与健康对照组比较均无显著性差异 (P>0 .0 5 )。结论 CD3+ CD5 6 + T细胞在恶性肿瘤患者外周血中的高表达较 CD3- CD5 6 + NK细胞更明显 ,并且不受恶性肿瘤细胞类型的影响 ,提示高表达的 CD3+ CD5 6 + T细胞是参与抗肿瘤免疫的重要表现     

慢性乙型肝炎患者外周血CD8~+淋巴细胞上CD28抗原的表达

乙型肝炎的肝细胞免疫损伤机制主要是由CD8+淋巴细胞介导的细胞免疫反应。CD8+淋巴细胞清除抗原需要双信号的刺激,即除了抗原递呈细胞(APC)对抗原的识别作为第一信号外,还涉及协同刺激分子的第二信号等因素[1]。APC上的B7分子与其受体即CD8+上的CD28分子结合,是乙肝免疫应答重要的协同刺激途径[2]。本文通过检测慢性乙型肝炎患者外周血CD8+淋巴细胞上CD28的表达水平,探讨慢性乙型肝炎的免疫状态。     

CD3~+CD56~+NKT细胞与Vα24~+iNKT细胞的检测及其表型特点分析

为了比较CD3+CD56+NKT细胞与CD3+TCRVα24+iNKT细胞在外周血淋巴细胞中的相对比例及其表面分子表达的差别,本研究采集了健康人外周全血,用四色荧光抗体染色和流式细胞术检测CD3+CD56+NKT细胞和CD3+TCRVα24+iNKT细胞在淋巴细胞中的比例,及其亚群表型及活化分子CD69的表达情况。检测结果表明,在正常人外周血淋巴细胞中CD3+CD56+NKT细胞所占比例为3.90%±2.89%,以CD8亚群占多数(57.61%±17.35%);而CD3+TCRVα24+iNKT细胞所占比例仅为0.39%±0.19%,且以CD4亚群占多数(56.60%±19.66%)。两种NKT细胞的相对数量之间存在显著正相关(r=0.467,P<0.05),但两类细胞之间极少重叠。CD16和CD161在CD3+CD56+NKT细胞上的表达量显著高于在CD3+TCRVα24+iNKT细胞上的表达量(P均<0.01)。活化分子CD69在两种细胞上的表达量均较低(P>0.05)。本研究结果表明,正常人外周血CD3+CD56+NKT细胞与CD3+TCRVα24+iNKT细胞在相对数量、亚群及表型上存在显著差异,是两种截然不同的NKT细胞。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞活化对CCR4/CCR5膜表达及功能的影响

目的探讨CD3/CD28抗体包被磁珠刺激活化的小鼠CD4+CD25+调节T细胞(Treg)表面趋化因子受体CCR4/CCR5表达及免疫抑制功能变化。方法采用磁性激活细胞分离器(MACS)纯化C57BL/6小鼠脾细胞中的CD4+CD25+T细胞,采用CD3/CD28抗体包被磁珠与鼠重组白细胞介素2刺激0、2、4 d后,流式细胞仪检测CCR4与CCR5的表达,3H-TdR掺入法检测细胞增殖活性。结果活化的CD4+CD25+T细胞CCR4的表达率明显高于CD4+CD25-T细胞对照组,CCR5的表达率明显低于对照组细胞。CD4+CD25+调节T细胞CCR4、CCR5的表达随活化时间延长持续增强,CD4+CD25-T细胞CCR5表达则逐渐减弱、CCR4表达无显著变化。活化的CD4+CD25+T细胞可明显抑制CD4+CD25-T细胞增殖,当比值为1∶1时抑制率达88.4%。结论 CD3/CD28抗体包被磁珠刺激可以增强CD4+CD25+T细胞膜表面CCR4、CCR5表达;活化CD4+CD25+T细胞免疫抑制功能强于新鲜分离的CD4+CD25+T细胞。     

慢性乙型肝炎患者外周血CD4~+CD25~+Treg与CD4~+和CD8~+ T淋巴细胞亚群的相关研究

目的:探讨慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的含量和CD4+CD8+T淋巴细胞亚群分布,两者之间相关性及与HBV的相关性。方法:采用流式细胞术检测50例慢性乙型肝炎患者和20例健康对照者外周血中CD4+CD25high、CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达及CD3/CD4/CD8 T淋巴细胞亚群,荧光定量PCR法检测HBV DNA含量。结果:慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25highTreg明显高于健康对照组(P0.01),且随HBV DNA载量增加,患者外周血中CD4+CD25highTreg细胞的水平逐渐升高。慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞也相应增高,且与CD4+CD25highTreg细胞的变化成正相关(r=0.890,P0.001)。与健康对照组比较,患者组CD4+T细胞百分率及CD4+/CD8+比值均降低,而CD3+T细胞和CD8+T细胞百分率差异无显著性(P0.05)。CD4+CD25highTreg细胞与HBV DNA取对数后成正相关(r=0.782,P0.001),与谷丙转氨酶(ALT)成正相关(r=0.432,P0.005);与CD3+、CD4+、CD8+T细胞水平及CD4+/CD8+比值均无相关性(P0.05)。CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞及CD4+/CD8+比值与HBV DNA载量之间亦无相关性(P0.05)。结论:慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞增高,且与HBV的复制水平及ALT增高具有一致性,而T细胞亚群是否可作为监测CHB患者免疫状态的指标需进一步探讨。     

强直性脊柱炎TH亚群激活及T细胞活化状态研究

目的 :研究强直性脊柱炎 (AS)患者TH1 TH2细胞激活状态及T细胞活化状况 ,探讨其发病机理。方法 :运用流式细胞仪 (CBA)法检测 35例AS患者TH1(INF γ、TNF α、IL 2 )、TH2 (IL 10、IL 5、IL 4 )细胞因子水平以及外周血淋巴细胞CD3 、CD4 、CD8 T细胞、B细胞 (CD19 )、NK细胞 (CD16 5 6 )和CD3 HLA DR 、CD4 HLA DR 、CD8 HLA DR T细胞百分率 ,并与健康对照组比较。结果 :AS患者血浆TNF α水平、IL 2水平均显著低于健康对照组 (P <0 0 1,P <0 0 5 ) ,IL 10水平显著高于健康对照组 (P <0 0 5 )。CD3 、CD3 CD8 T细胞百分率显著低于健康对照。CD8 HLA DR T细胞百分率均显著低于健康对照 (P <0 0 5 ) ,CD4 HLA DR T显著高于健康对照 (P <0 0 5 )。结论 :AS患者血浆低水平的TNF α、IL 2和高水平的IL 10提示其体内存在着TH1 TH2平衡的偏移 ;TH1激活程度低下 ,而TH2激活程度增强 ,细胞因子水平的改变尤以TH1细胞因子TNF α改变特别明显。AS患者在多个层面存在细胞免疫功能紊乱     

用双标记细胞流量检测器测定分裂期CD4~+、CD4~+CD8~+和CD8~+淋巴细胞亚类活化抗原的同时表达

外周血淋巴细胞被有丝分裂原刺激后能同时表达CD4和CD8两种抗原。进一步用克隆的外周淋巴细胞亚群实验发现,CD4~+淋巴细胞亚群能产生CD4~+辅助细胞和CD8~+抑制细胞两种细胞克隆。为了明确活化抗原     

卵巢癌耐药细胞对活化CD4~+T细胞免疫活性的抑制及其机制

目的探讨卵巢癌顺铂耐药肿瘤细胞对活化CD4~+T细胞的抑制作用及其机制,为卵巢癌耐药患者的免疫治疗提供理论依据。方法用中等浓度间歇作用法建立耐顺铂卵巢癌细胞SKOV3/CDDP,MTT法测定细胞耐药指数及交叉耐药性,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率。ELISA检测肿瘤细胞培养上清液中TGF-β1、IL-10的含量。抽取正常人外周血用免疫磁珠分离CD4~+T细胞,用CD3和CD28抗体刺激活化CD4~+T细胞。用含20%肿瘤培养上清液培养,ELISA检测CD4~+T细胞IL-2表达量的变化,Western blot检测CD4~+T细胞内NF-κB、Snail的表达变化及肿瘤细胞中TGF-β1、P-smad2/3的表达变化;将肿瘤细胞与活化的CD4~+T淋巴细胞共培养,计数CD4~+T细胞增殖情况,HE染色观察肿瘤细胞对活化CD4~+T细胞黏附的抑制作用。结果SKOV3/CDDP的耐药指数为32.4,对阿霉素、紫杉醇产生交叉耐药性,在CDDP作用下,SKOV3/CDDP凋亡率明显降低。与SKOV3细胞相比,SKOV3/CDDP细胞培养上清TGF-β1表达量升高,SKOV3/CDDP培养上清能抑制活化的CD4~+T淋巴细胞IL-2的表达,抑制CD4~+T淋巴细胞的增殖及黏附作用;Western blot检测显示CD4~+T细胞内NF-κB、Snail的表达降低;SKOV3/CDDP细胞中TGF-β1和P-smad2/3的表达升高(P0.01)。结论 SKOV3/CDDP耐药细胞TGF-β1/P-smad信号通路激活,细胞分泌TGF-β1增多,对活化CD4~+T淋巴细胞的增殖及黏附起抑制作用,可能是通过抑制CD4~+T细胞内的NF-κB/Snail信号通路实现的。     

HLA-DR抗原在慢性乙型肝炎和肝细胞癌中的表达及其意义

目的　探讨HLA DR抗原在慢性乙型肝炎和肝细胞癌 (HCC)中的表达及其意义。方法采用免疫组化技术对 2 0例正常肝组织、36例慢性乙型肝炎和 44例HCC中HLA DR抗原的表达进行检测。结果　正常肝组织中肝细胞未见HLA DR抗原表达。慢性乙型肝炎肝细胞HLA DR抗原表达阳性率为 2 7.8% ,其中 ,中度和重度肝炎HLA DR抗原阳性率明显高于轻度肝炎 (阳性率分别为 37.5 %和 2 0 % ,χ2 =13.6 ,P <0 .0 1)。HCC中肿瘤细胞HLA DR抗原表达阳性率为 43.2 %。HLA DR抗原表达与癌周淋巴细胞浸润 (χ2 =0 .5 1,P >0 .0 5 )和转移 (χ2 =2 .9,P >0 .0 5 )无关 ,但与癌组织分化程度有关 (χ2 =4.9,P <0 .0 5 )。结论　HLA DR抗原的异常表达在慢性乙型肝炎免疫损伤、免疫保护和HCC发生、发展中起重要作用     

HIV-1感染者淋巴细胞活化与第二受体表达的研究

目的：了解HIV－1感染者体内淋巴细胞的活化情况及表达第二受体CCR5、CXCR4的淋巴细胞活化状态，分析这些指标与疾病严重程度的关系，探讨HIV感染的免疫基础。方法：用三色标记法流式细胞术检测24例HIV－1感染者及13例健康对照的抗凝血标本，分析活化标志物HLA－DR及第二受体CCR5、CXCR4的表达等指标。结果：HIV－1感染者CD8^ T淋巴细胞的HLA－DR表达高于健康对照（P＜0．001）；HIV－1感染者表达CCR5、CXCR4的CD8^ T淋巴细胞活化明显高于健康对照（P＜0．001）；表达CCR5CD4^ 、CD8^ T淋巴细胞与表达CXCR4相比HL－DR表达均明显增高（P＜0．001）；CD4^ 、CD8^ T淋巴细胞的活化状态与CD4百分率的变化明显关系。结论：HIV－1感染者CD8^ T淋巴细胞及表达不同第二受体的CD8^ T淋巴细胞活化程度明显增高，活化程度与疾病进程相关。     

高表达Foxp3的肺癌细胞抑制人CD4~+T细胞免疫活性

目的:研究高表达转录因子Foxp3的肺癌细胞对CD4~+T淋巴细胞的作用。方法:利用脂质体转染法建立稳定高表达Foxp3的NCIH-h Foxp3肺癌细胞株,荧光定量PCR和Western blot检测细胞Foxp3的表达;ELISA法检测NCIHh Foxp3培养上清中IL-8、IL-10表达量的变化;分离并活化CD4~+T淋巴细胞,用含20%NCIH-h Foxp3肿瘤上清的培养基培养,检测CD4~+T淋巴细胞IL-2表达量的变化;将NCIH-h Foxp3与活化的CD4~+T淋巴细胞共培养,MTT评价免疫效应细胞增殖情况;免疫细胞化学法观察NCIH-h Foxp3细胞对活化CD4~+T淋巴细胞黏附作用的抑制。结果:建立高表达Foxp3的NCIHh Foxp3肺癌细胞株,与阴性对照相比,NCIH-h Foxp3细胞培养上清IL-8表达量降低,IL-10表达量升高,NCIH-h Foxp3肿瘤细胞能抑制活化的CD4~+T淋巴细胞IL-2的表达、增殖及浸润。结论:肺癌细胞Foxp3的表达对活化的CD4~+T淋巴细胞有免疫抑制作用,这可能与NCIH-h Foxp3分泌细胞因子IL-8表达量降低,IL-10表达量升高有关。     

新型CD3~+CD20~+T细胞的研究进展

CD20是一种人白细胞分化抗原,表达于除浆细胞外的发育分化各阶段的B细胞表面,被公认为是B细胞的表面标志。最近研究发现,除了B细胞,在机体中存在一群CD3~+T细胞也表达CD20分子,这群细胞与传统的CD3~+T细胞有着相似而又独特的生物学特征,并在风湿性关节炎、多发性硬化及卵巢癌等多个疾病中发挥重要作用。因此,本文就该细胞亚群的最新研究进展作一综述。     

ConA对CD4~+CD25~+调节性T细胞早期活化和功能的影响

目的:观察常用丝裂原ConA对CD4+CD25+调节性T细胞抑制功能的影响与早期活化标志CD69之间的关系。方法:用免疫磁珠分离BALB/c小鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞、CD4+CD25-效应性T细胞,加入不同浓度的ConA,12 h后收集细胞,流式细胞术分析其CD69的表达。CFSE标记CD4+CD25-效应性T细胞,按2∶1比例与CD4+CD25+调节性T细胞共同培养,培养同时加ConA,3 d后流式细胞仪分析ConA对CD4+CD25+调节性T细胞抑制CD4+CD25-效应性T细胞增殖的影响。结果:ConA能剂量依赖性地升高CD4+CD25+调节性T细胞和CD4+CD25-效应性T细胞CD69的表达,对两群细胞CD69的升高表现出了相似的作用;另外,ConA在上述浓度能剂量依赖激活CD4+CD25+调节性T细胞的抑制功能。结论:ConA在体外对CD4+CD25+调节性T细胞活化和功能具有促进作用。ConA能一定程度模拟抗原,因而可用于评价药物对调节性T细胞的活化和功能影响。     

CD28单抗对CD3AK细胞增殖及表型的影响

CD3AK细胞是用小剂量CD3单抗交联CD3分子而活化的T细胞 ,它具有较强的细胞增殖和细胞毒效能。CD2 8分子则是T细胞激活过程中所需的协同刺激分子 ,可提供T细胞活化所需的第二信号。本文利用CD2 8单抗作为CD2 8分子的配体 ,观察了CD2 8信号途径的激活对CD3AK细胞的影响。结果显示CD2 8单抗可增强CD3AK细胞的增殖活性和趋化团聚形成集落的能力 ,并优先引起CD4+T细胞的增殖。