自发性高血压大鼠心肌重构与p38MAPK关系的研究

目的探讨高血压对心脏的影响及可能的分子机制。方法测量不同周龄Wistar-kyoto大鼠(WKY)和自发性高血压大鼠(SHR)血压值及心脏重量,显微镜测微尺观测不同周龄SHR心脏构型,透射电子显微镜观察心肌细胞的改变,免疫组化和Western-blotting方法观察p38MAPK和磷酸化p38MAPK在高血压心脏重构中表达情况。结果 8周龄开始,SHR组血压逐渐升高,并随着周龄的增加而增加(P<0.05),SHR组动脉收缩压明显高于同周龄WKY组(P<0.05)。16、24周龄SHR大鼠的心脏/体重比值明显高于4周龄SHR,同时明显高于同周龄WKY大鼠(P<0.05)。16、24周SHR组左心室壁厚度明显高于4周龄SHR也明显高于16、24周WKY大鼠(P<0.05)。SHR组,磷酸化p38在左心室肌表达随周龄的增加逐渐增加,在SHR24表达明显高于SHR4周龄组(P<0.05)。磷酸化p38在SHR组左心室表达明显高于同周龄WKY大鼠(P<0.05)。结论长期高血压可导致心脏重构,心脏重构改变随周龄增加逐渐加重,p38MAPK信号通路磷酸化可能参与了高血压心脏重构。     

p-MEK1/2与原发性高血压大鼠左心室肥厚关系的研究

目的动态观察p-MEK1/2在原发性高血压大鼠(SHR)左心室表达,进一步探讨MEK1/2-ERK1/2通路在高血压左心室重构中的作用。方法对比观察各周龄SHR大鼠与WKY大鼠血压,心脏/体重比值变化;免疫组织化学方法检测左心室p-MEK1/2的表达。结果整个实验过程中,WKY血压保持在正常水平,SHR16、SHR24组动脉收缩压均明显高于同周龄WKY组(P<0.05);与同周龄WKY相比SHR24组的心脏/体重比值增加明显(P<0.05);SHR24左心室相对壁厚度明显高于SHR8和WKY24大鼠(P<0.05);WKY和SHR大鼠左心室p-MEK1/2蛋白表达量均随着周龄的增加而增加,但SHR16、SHR24明显高于同周龄WKY(P<0.05)。结论 MEK1/2-ERK1/2通路可能有促进高血压左心室心肌肥厚发展的作用。     

P-MEK在高血压大鼠肾小动脉平滑肌细胞中的表达及意义

目的探讨高血压肾细动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)中ERK1/2上游信号磷酸化MEK(p-MEK)的表达状态,为进一步阐明高血压状态下VSMCs功能状态改变的分子机制提供实验依据。方法将4、16、24周龄雄性自发性高血压大鼠(SHR)作为实验组,同周龄雄性Wistar大鼠(WKY)作为对照,各组5只大鼠。弹性纤维染色观察肾小动脉的结构变化,免疫组织化学分析各组动物肾小叶间动脉和入球动脉血管VSMCs中p-MEK的表达。结果 SHR肾小叶间动脉和入球动脉VSMCs增殖不明显,小叶间动脉相对内径随周龄增加逐渐减小。同级别动脉相比,SHR大鼠p-MEK阳性细胞数高于同周龄WKY大鼠。SHR组p-MEK增高的幅度高于同周龄WKY组。结论高血压状态下肾小动脉VSMCs功能状态的改变,可能与胞内MEK磷酸化活化有关。     

肾上腺髓质素对自发性高血压大鼠心脏重构的影响及与ERK1/2活化关系研究

目的:对比研究肾上腺髓质素(Adrenomedullin ADM)对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat SHR)心脏重构的影响及与ERK1/2活化的关系。方法:4周龄雄性SHR随机分为SHR组和SHR-T组,同周龄WKY大鼠作为正常对照。SHR-T组皮下注射ADM(每周5天,1.0nmol/(kg.d)),SHR组皮下注射等体积生理盐水,WKY组不作处理。在第4、8、16和24周龄时间点分别处死动物(每组4只),提取心脏做H.E染色和P-ERK1/2免疫组化染色。结果:SHR组和SHR-T组从8周龄开始血压显著升高,明显高于WKY组(P<0.01),ADM治疗至24周龄时,血压明显低于SHR组;随着大鼠周龄增加,SHR组和SHR-T组大鼠心脏/体重比值逐渐增大。16周龄后,SHR组和SHR-T组的心脏/体重比值大于WKY组(P<0.05),24周龄SHR-T组大鼠的心脏/体重比值小于SHR组(P<0.05);随着大鼠周龄增加,SHR和SHR-T组大鼠相对左心室壁厚度呈增加趋势,24周龄SHR组大鼠相对左心室壁厚度大于同周龄WKY组(P<0.05)。SHR-T组大鼠相对左心室壁厚度在16周龄后增幅放缓,24周龄时小于SHR组(P<0.05);随着大鼠周龄的增加p-ERK1/2在大鼠心肌中的阳性表达逐渐增加,24周龄SHR组大鼠心脏p-ERK1/2的表达率显著高于WKY组(P<0.01),24周龄SHR-T组大鼠心脏p-ERK1/2的表达率显著低于SHR组(P<0.05)。结论:ADM可一定程度减缓自发性高血压大鼠血压的升高和心脏重构,p-ERK1/2的表达量的降低可能参与了ADM发挥其保护作用。     

血小板源生长因子受体介导的细胞信号转导在自发性高血压大鼠主动脉中的变化

目的:研究血小板源生长因子(platelet-der i ved growth factor, PDGF)受体介导的信号转导通路在自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats, SHR)主动脉中的动态变化及其意义.方法:提取大鼠主动脉膜蛋白和胞浆蛋白,用免疫印迹法检测PDGF受体β亚单位,细胞外信号调节激酶(e xtracellular signal-regulated kinase 1/2, ERK 1/ 2)和磷酸化ERK 1/2的变化.结果:4周龄SHR动脉血压无明显变化,12周龄时血压稳定增高. 主动脉PDGF受体β亚单位蛋白的表达在SHR和WKY(Wistar-Kyoto)大鼠都随着年龄的增加而上调,但4周龄和1 2周龄SHR中该受体的表达均明显高于同龄WKY组(分别为28.0%和28.6%, P<0.05);SH R 主动脉中ERK 1/2的含量较同龄WKY组明显增加(P<0.05);12周龄SHR主动脉磷酸化ERK 1/2 的含量亦较同龄WKY组增加28.4%(P<0.05).结论:SHR大鼠主动脉PDG F受体β亚单位和ERK 1/2的上调先于高血压的发生,并在高血压期维持较高水平 ,提示PDGF介导的信号转导系统的活化在自发性高血压的发生和发展中起重要作用.     

细胞外调节激酶的表达及活化在不同年龄自发性高血压大鼠心肌肥厚中的作用

目的:研究不同年龄的自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)心室肌组织中细胞外调节激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERKs)的表达及活化与心肌肥厚的关系.方法:选择Wistar Kyoto(WKY)大鼠作对照,SHR和WKY大鼠按年龄分为5周、8周、14周和24周各4组,以左心室质量与体重的比值反映心肌肥厚的程度;采用Western blot方法测定大鼠左心室心肌组织中基础表达ERK (basal ERK,b-ERK)和磷酸化ERK(phosphorylated-ERK,p-ERK)的水平.结果:①与相同周龄WKY大鼠比较,SHR自8周龄起血压明显升高(P<0.001),14周后心肌肥厚指数明显增加(P<0.01).②各年龄组SHR与相同周龄WKY大鼠b-ERK水平比较均无明显差异(P>0.05). ③5周龄SHR p-ERK水平与同龄WKY大鼠无差异,8到24周SHR大鼠p-ERK水平明显高于同龄WKY大鼠(P<0.01).④心肌肥厚指数与b-ERK量无明显相关性,与p-ERK量呈正相关. 结论:在SHR大鼠心肌肥厚形成中,心肌组织b-ERK没有增加,p-ERK水平增高,ERK活性增加参与高血压心肌肥厚过程.     

SHR,WKY大鼠心,肾及胸主动脉ACE,ACE2表达的差异与高血压的关系

目的观察SHR,WKY大鼠心,肾,胸主动脉及体外培养的VSMCs中的ACE,ACE2表达的差异,探讨ACE与ACE2在自发性高血压大鼠高血压形成的机制。方法选取6个月的雄性自发性高血压大鼠SHR(Spontanous Hypertensive Rat,SHR)及与之配对的正常大鼠WKY。尾袖法测定大鼠血压,断头取血,称量全心与左心重量,计算心体比与左室重指数。免疫组化法检测肾脏ACE,ACE2的表达。放免法测定血浆中AII水平。RT-PCR法比较SHR与WKY大鼠心,肾,胸主动及体外培养VSMC细胞ACE、ACE2 mRNA的表达水平。结果(1)6月龄SHR大鼠血压显著高于WKY(196.42±18.90,116.35±14.48,P<0.05),而WKY大鼠心体比及左室指数明显低于SHR(2.84±0.28,3.79±0.41,P<0.05;2.17±0.18,2.95±0.28,P<0.05),SHR大鼠血浆中AII水平明显增高(1675.35±305.16,694.38±112.56,P<0.05)。(2)肾脏ACE2免疫染色SHR明显低WKY(0.054±0.013,0.205±0.043,P<0.05)。与WKY相比,SHR心,肾,胸主动脉ACE2 mRNA表达水平分别减少49.84%4、0.67%3、6.17%,,而ACEmRNA表达水平分别增加33.66%、29.83%、42.16%。在体外培养的胸主动脉平滑肌细胞(thorax aorta vascularsmooth mulscle cell,TAVSMC)SHR大鼠ACE mRNA表达水平明显高于WKY,ACE2 mRNA的表达水平显著降低。结论(1)ACE与ACE2表达失调可能是高血压形成的重要原因。(2)ACE与ACE2表达差异可能大鼠遗传背景有关。     

安体舒通对自发性高血压大鼠心肌中的血管紧张素转换酶表达的影响

目的 观察自发性高血压大鼠(SHR)与Wistar-Kyoto(WKY)大鼠心肌细胞中血管紧张素转换酶(ACE)mRNA及其蛋白的表达差异,以及安体舒通对SHR心肌细胞中ACE mRNA表达的影响.方法 选取15只16周龄雄性SHR,随机分为对照组(n=7)和安体舒通组(n=8),另取10只同龄的正常血压WKY大鼠作为对照,尾袖法测定血压,药物干预4周后称取左心室质量及体质量,计算左室质量指数;采用RT-PCR法检测SHR对照组、安体舒通组、WKY组大鼠心肌中ACE mRNA的表达水平,Western blot法测定上述3组心肌中ACE蛋白表达水平.结果 (1)SHR对照组血压显著高于WKY组,差异有高度统计学意义(P<0.01);安体舒通可小幅度降低SHR血压,与SHR对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);(2)WKY组的左室质量指数显著低于SHR对照组,差异有高度统计学意义(P<0.01);安体舒通组介于其他两组之间,且与SHR对照组的差异亦有高度统计学意义(P<0.01).(3)SHR对照组心肌细胞ACE mRNA及蛋白表达显著高于WKY组,差异有高度统计学意义(P<0.01);安体舒通组介于其他两组之间,高于WKY组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 安体舒通可降低自发性高血压大鼠心肌中ACE mRNA及其蛋白的表达,可能为其抑制左室肥厚的一种潜在机制.     

二氧化硫对自发性高血压大鼠主动脉平滑肌细胞内质网应激的影响

目的探讨二氧化硫(sulfur dioxide,SO2)对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)主动脉平滑肌细胞内质网应激的调节作用。方法4周龄正常血压WKY(wistar-kyoto rat)大鼠7只作为WKY对照组。4周龄SHR大鼠12只分为SHR(spontaneously hypertensive rat)对照组及SHR+SO2供体(Na2SO3/NaHSO3)组,每组6只。5周后检测大鼠血压,采用高效液相色谱(HPLC)法测定血浆SO2水平,采用免疫组织化学方法检测主动脉平滑肌细胞GRP78和caspase-12的蛋白表达。结果9周时SHR对照组血压明显高于WKY对照组,血浆SO2水平显著低于WKY对照组,主动脉平滑肌细胞GRP78和caspase-12蛋白表达显著增高。与SHR对照组比较,SHR+SO2供体组大鼠血压明显降低,血浆SO2含量升高,主动脉平滑肌细胞GRP78和caspase-12蛋白表达降低。结论SO2可能抑制高血压大鼠主动脉血管平滑肌细胞内质网应激反应的激活。     

不同年龄自发性高血压大鼠心脏AT2R的表达与心肌纤维化

目的 观察不同年龄自发性高血压大鼠(SHR)心脏AT2R的表达水平及心肌胶原含量,探讨AT2R在高血压发生、发展过程中的作用.方法 1月龄组(Sl)、2月龄组(S2)、3月龄组(S3)、6月龄组(S6)和9月龄组(S9)雄性SHR共五组,每组各6只.各组均有相应月龄的Wistar-Kyoto大鼠(WKY)作对照.采用RBP-I型大鼠血压心率测定仪侧量大鼠动脉收缩压(SBP);放免法(RIA)测定血浆血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ);免疫组化染色结合计算机图像分析方法测定心脏AT2R的表达水平,天狼星红胶原染色大鼠的心脏切片.结果 1.SHR SBP随着月龄的增加呈持续上升(P<0.05),SHR的SBP均高于相应配对的WKY组(P<0.05),2.一个月后SHR血浆Ang Ⅱ浓度均高于Sl(P <0.05),一个月后SHR血浆Ang Ⅱ浓度均高于相应配对的WKY组(P<0.05),3.SHR心脏AT2R免疫染色阳性面积比随着月份的增加而降低,SHR心脏AT2 R免疫染色阳性面积比均低于相应配对的WKY组(P＜0.05)4.SHR心肌中的胶原含量随着月龄的增加而增加.结论 SHR心脏AT2R表达水平比WKY低,并随着年龄的增加而降低.SHR心肌中的胶原含量随着月龄的增加而增加,而WKY无类似趋势.     

自发性高血压大鼠视网膜微血管稀少与细胞凋亡

目的：研究自发性高血压大鼠（SHR）视网膜毛细血管细胞凋亡的发生情况,探讨细胞凋亡与高血压视网膜微血管病变之间的关系,为研究高血压视网膜病变发病机制提供形态学依据。方法：10只雄性自发性高血压大鼠（SHR组）和10只雄性正常血压（WKY）大鼠（WKY组）分别在13周龄和18周龄取眼球做视网膜消化铺片,采用核苷酸末端转移酶介导dUTP缺口翻译法（TUNEL法）检测视网膜微血管细胞凋亡变化情况,HE染色及图像分析,动态观察视网膜微血管形态的改变及测定视网膜毛细血管面积及密度的改变。结果：①TUNEL法标记显示SHR各周龄大鼠视网膜微血管均出现阳性反应细胞,且18周龄大鼠阳性细胞与13周龄大鼠比较明显增多;WKY组大鼠视网膜微血管未见TUNEL阳性细胞。②血管铺片HE染色显示SHR组部分毛细血管闭塞,内皮细胞和周细胞丢失,出现无细胞毛细血管,毛细血管密度较WKY组显著降低。结论：在高血压发展过程中,视网膜毛细血管内皮细胞和周细胞均可发生凋亡,同时伴有微血管稀疏,细胞凋亡可能在高血压视网膜病变的过程中扮演重要的角色。     

低氯对雄性自发性高血压大鼠肠系膜动脉血管反应性改变的影响

目的：探讨低氯状态下雄性自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rats,SHR）肠系膜动脉收缩功能的改变及其机制。方法：取11～12周龄的雄性Wistar大鼠（MW组）和雄性SHR（MS组）的肠系膜动脉1～2级分支进行离体血管环实验,分别观察在常氯溶液和低氯溶液状态下,苯肾上腺素（penylephrine,PE）、咖啡因（caffeine,Caf）和高钾溶液对血管环张力的影响。结果：与MW组相比较,MS组的肠系膜动脉环对PE、高钾溶液的收缩反应显著加强,其剂量-反应曲线均明显向左上移位;MS组对Caf的收缩反应也显著加强。细胞外低氯状态可使MS组肠系膜动脉对这些缩血管物质的最大收缩反应进一步增强。结论：氯离子可能参与高血压大鼠血管反应性的改变。     

自发性高血压大鼠肾血管收缩功能改变

观察14周及28周龄自发性高血压大鼠（SHR）及同基因正常血压WKY鼠离体灌注肾装置对去甲肾上腺素（NE）及氯化钡的升压反应，结果表明，SHR肾血砭呈超常收缩，剂量-压力曲线左移，且随周龄增加而明显；对氯化钡的升压反应时间明显延长而对NE反应时间无明显变化，揭示SHR肾血管平滑肌细胞清除氯化钡的能力下降。     

高血压大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞表型转化

目的 探讨高血压大鼠阴茎海绵体平滑肌是否存在表型转化及对勃起功能的影响.方法 16周龄雄性自发性高血压大鼠(SHR)及其同系正常血压大鼠(WKY),测量尾动脉收缩压,颈部皮下注射阿朴吗啡后检测阴茎勃起功能,然后将大鼠分为高血压勃起功能障碍组(HBP&ED)、高血压组(HBP)和正常对照组(Control).免疫组化染色和彩色图文分析系统分析各组大鼠阴茎海绵体中平滑肌细胞碱性调宁蛋白(calponin 1)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的表达,实时荧光定量RT-PCR分析各组大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞calponin 1 mRNA和OPN mRNA的相对表达量.结果 在大鼠阴茎海绵体中calponin 1和calponin 1 mRNA表达情况:HBP&ED组低于HBP组(P=0.021,P=0.006)和control组(P=0.000,P=0.001),HBP组低于control组(P=0.000,P=0.015);OPN和OPN mRNA表达情况:HBP&ED组高于HBP组(P=0.000,P=0.000)及control组(P=0.000,P=0.000),HBP组高于control组(PP=0.013,p=0.000).结论 高血压大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞存在表型由收缩型向合成型转化,这种转化达到一定程度最终可能导致大鼠勃起功能障碍.     

N-ras在自发性高血压和两肾一夹型高血压大鼠肾脏动脉丛表达的比较研究

目的比较观察N-ras在自发性高血压大鼠(SHR)和两肾一夹型高血压大鼠(2K1C)肾脏血管平滑肌细胞中的表达,探讨N-ras与高血压肾脏血管重构的关系及高血压血管重构发生的机制。方法用免疫组织化学和Western blot方法检测16周龄和24周龄SHR大鼠和2K1C大鼠肾脏血管丛平滑肌细胞以及肾小球内皮细胞中N-ras的表达,同周龄正常血压WKY大鼠作为对照。结果 N-ras在SHR组和2K1C组表达高于WKY组(P<0.05)。N-ras在16周龄和24周龄2K1C组各级肾脏血管丛,包括小叶间动脉、弓形动脉、叶间动脉和入球小动脉的血管平滑肌细胞,以及肾小球内皮细胞的表达均高于SHR组(P<0.05)。结论癌基因N-ras的高表达可能参与了高血压大鼠肾脏的血管重构,两肾一夹型高血压大鼠肾脏中的N-ras表达高于自发性高血压大鼠。     

硫化氢对不同周龄自发性高血压大鼠脑基底动脉舒张反应的影响

目的 探讨硫化氢(H2S)对不同周龄自发性高血压大鼠(SHR)离体脑基底动脉舒张反应的影响.方法 选取14、40周龄SHR和正常Wistar京都(WKY)大鼠各6只,测量血压后,急性分离脑基底动脉,应用压力肌动图技术检测不同浓度硫氢化钠(NaHS)对大鼠脑基底动脉直径变化的影响.结果 ① 10、30、100、300、1 000、3 000 mmol/L的NaHS能够浓度依赖地舒张SHR和WKY大鼠脑基底动脉;② 与14周龄的WKY相比,1 000、3 000 mmol/L的NaHS对14周龄 SHR的舒张率更明显,两者间有显著性差异(P<0.05);③ 与40周龄的WKY大鼠相比,1 000、3 000 mol/L的NaHS对40周龄 SHR的舒张率降低,两者间有显著性差异(P<0.05).结论 在高血压初期,脑基底动脉对H2S的敏感性增加,而随着高血压的发展及血管功能的严重损伤,脑基底动脉可能对H2S的敏感性降低.     

VEGF和ERK1/2在不同周龄自发性高血压大鼠肾脏中的表达

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)和细胞外信号调节激酶(ERK1/2)在自发性高血压大鼠(SpontaNeously Hypertensive Rats,SHR)不同周龄组肾脏中的表达,探讨它们在高血压肾病发生发展中的作用。方法选取4个不同周龄组(4、8、16、20周龄)SHR和正常血压大鼠,将肾脏作常规病理和免疫组化染色,观察肾脏的形态学改变并分析VEGF和ERK1/2在肾脏中的表达。结果 SHR从8周龄开始血压升高,随着血压的不断升高,SHR肾小球中VEGF的阳性表达也有所增加,16、20周龄组SHR的表达高于4、8周龄组(P<0.05)。ERK1/2在16、20周龄SHR的肾脏细动脉、小叶间动脉、叶间动脉和弓形动脉中的内皮细胞和血管平滑肌细胞中均有阳性表达,而且阳性细胞数明显多于4周龄SHR(P<0.05)。结论 ERK1/2、VEGF可能参与高血压肾脏病变的发生发展过程。     

An antihypertensive factor in the erythrocytes of essential hypertensive subjects--effects on blood pressure and calcium uptake by vascular tissue in rats.

An extract prepared from the erythrocytes of essential hypertensive subjects was found to significantly lower systolic blood pressure (SBP) in spontaneously (SHR) and renal hypertensive rats (RHR) following a single intravenous or intraperitoneal injection: The maximum SBP reduction was 42.8 mmHg in SHR and 38.3 mmHg in RHR. In contrast, this hypertensive factor (AHF) had little effect on normotensive Wistar Kyoto and Wistar rats. AHF was also found to significantly suppress Ca2+ uptake by vascular smooth muscle in the mesenteric artery and aorta of hypertensive and normotensive rats (P less than 0.05, respectively). Furthermore, AHF prepared from the erythrocytes of normotensive subjects was shown to have a similar effect.     

活血祛痰法对自发性高血压大鼠心肌 线粒体膜的影响

目的 探讨活轿祛痰法自发性高血压大鼠（SHR）心肌线粒体超微结构及其Ca^2 -Mg^2 ATP酶、膜脂持氧化的作用。方法 以正常Wistar大鼠为对照组,将SHR分为14周龄组、28周龄组和中药治疗组,分别在14周28周取材,透射电镜分析线粒体膜形态计量,并测定线粒体膜Ca^2 -Mg^2 ATP酶活性、膜丙二醛含量。结果 SHR各组线粒体比表面小于对照组,心肌线粒体Ca^2 -Mg^2 ATP酶活性均低于正常对照组,而丙二醛含量高于正常对照组,且随着SHR病程延长而呈上升趋;中药治疗能降低该趋。结论 活血祛痰法能阻滞左室肥厚的病理进程。     

高血压大鼠尿和组织中羟脯氨酸的测定

用比色法测定大鼠尿和组织的羟脯氨酸含量。发现羟脯氨酸在24小时尿中排泄量,肾血管狭窄型高血压大鼠明显高于正常对照组(P<0.05);自发性高血压大鼠与正常组无显著性差异(P>0.05)。心肌羟脯氨酸含量,肾血管型比正常对照组高(P<0.05);自发性高血压大鼠低于正常对照组(P<0.05),主动脉中羟脯氨酸的含量,肾血管性高血压组和正常组之间无显著性差异(P>0.05);自发性高血压组比正常组明显低(P<0.01),肾血管性高血压大鼠中,狭窄肾动脉中羟脯氨酸含量高于对侧(P<0.05)。