次氯酸对人血清白蛋白的氧化修饰影响及与高级氧化蛋白产物的关系

目的 研究次氯酸对人血清白蛋白(HSA)的氧化修饰影响及与高级氧化蛋白产物(AOPPs)之间的关系。 方法 有氧条件下在恒定浓度的HSA(60 mg/ml)内加入不同浓度次氯酸(0、1、5、10、20、30、40、50、60 mmol/L，最终浓度)，观察氧化剂对HSA的修饰作用。凝胶排阻色谱法检验HSA氧化修饰结果，在线光谱扫描(190 nm~400 nm)分析修饰产物的光谱特性。结果 次氯酸可氧化修饰人血清白蛋白，其修饰产物主要为二聚体HSA和六聚体HSA。发现次氯酸对HSA单体和HSA二聚体的氧化修饰为一级反应；对诱导生成的AOPPs为准一级反应；而对诱导生成的HSA六聚体则为二级修饰反应。同时发现白蛋白对AOPPs的主要贡献者是六聚体形式的HSA，光谱分析表明HSA聚集体的最大吸收峰发生红移，提示HSA聚集体是由于蛋白中的酪氨酸残基通过氧化交联方式而聚集形成的。 结论 HSA经次氯酸处理后主要发生了蛋白聚集。而对AOPPs的主要贡献者是六聚体形式的HSA。     

高级氧化蛋白产物的主要成分分析

目的 研究高级氧化蛋白产物(AOPPs)为何种蛋白氧化产物并进行表征。方法 羰基用于评定AOPPs中的氧化蛋白。天然血浆测得其蛋白浓度后，先按定义测定其AOPPs水平。血浆随即经超滤膜超滤、PBS清洗后制得血浆-AOPPs。排阻色谱法用于分析定量单个蛋白中的羰基水平。另用氯仿对血浆进行脱脂。脱脂产生的馏分同样进行羰基水平等的测定。 结果 无论是天然血浆、脱脂血浆或是氯仿脱脂产生的沉淀中，尿毒症患者的AOPPs和总羰基水平始终明显高于正常人。HPLC分析证明血浆白蛋白不仅具有最高的羰基水平，而且也是唯一一种在正常人和患者间差异具有统计学意义的蛋白。脱脂主要去除的是纤维原蛋白和一种未明大分子蛋白，这2种蛋白的氧化程度均较低。 结论 白蛋白是AOPPs的主要构成成分，而其它蛋白占AOPPs的构成比例较小，特别是IgG。     

尿毒症患者高级蛋白氧化产物与血管钙化的关系及其机制探讨

目的 研究CKDⅤ期患者血中高级蛋白氧化产物(AOPP)水平及其与动脉钙化的关系，并探讨AOPP可否诱导动脉平滑肌细胞向成骨细胞分化。 方法 50例CKDⅤ期患者为尿毒症组，10例肾功能正常的胸腺瘤患者作为对照组。测定血AOPP、钙、磷、甲状旁腺激素(iPTH)水平，同时分别取桡动脉和同级别的胸廓内动脉做组织学检查。体外用次氯酸处理的人血清白蛋白(AOPP-HSA)作用于主动脉平滑肌细胞（HASMC），以单纯人血清白蛋白(HSA)培养基和常规培养基作为对照，RT-PCR法检测核结合因子α-1(CBFα-1)及骨桥蛋白(OPN)水平。 结果 CKDⅤ期患者血浆AOPP水平明显高于对照组[(90.22±55.88) μmol/L 比 (35.79±4.31) μmol/L, P < 0.01]。50例桡动脉标本中44例有OPN沉积于中膜（88％），其中24例有明显的钙化(48％)，对照组无一例有OPN沉积及钙化。Pearson相关分析显示血清AOPP水平与桡动脉内膜中层厚度（IMT）(r ＝ 0.691，P ＜ 0.01）及管壁/管腔比值（r ＝ 0.354，P ＜ 0.05）呈正相关。血管钙化程度与AOPP（r ＝ 0.791，P ＜ 0.01）、血清磷（r ＝ 0.602，P ＜ 0.01）、iPTH水平（r ＝ 0.549，P ＜ 0.05）呈正相关。体外试验显示AOPP-HSA可诱导HASMC表达CBFα-1和OPN，而单纯HSA无此效应。 结论 CKDⅤ期患者普遍存在高AOPP血症和血管钙化，血AOPP水平与血管钙化密切相关。这可能与AOPP直接诱导动脉平滑肌细胞向成骨细胞分化有关。     

晚期氧化蛋白产物与骨质疏松症的研究进展

骨质疏松症(osteoporosis,OP)是一种受遗传和环境因素共同影响的代谢性疾病,其主要特点是骨量低下、骨脆性增加、易发生骨折。其发病病因多样,分子机制复杂,已成为影响人们特别是老年人生活质量的流行病之一。晚期氧化蛋白产物是一种新的氧化应激标志物,通过增加细胞活性氧释放、促使炎症因子生成,在促进衰老及老年相关性疾病发生发展中起到重要作用。本文就晚期氧化蛋白产物对骨形成主要细胞和破骨细胞的影响和作用机制,以及治疗骨质疏松症的新型抗氧化药物的研究进展做一综述。     

不同血液净化方式对清除晚期氧化蛋白产物的效果及对心血管预后的影响

目的观察尿毒症患者血清晚期氧化蛋白产物水平,对比不同血液净化方式对其清除效果,探讨其与心血管疾病的关系。方法将60例维持性血液透析患者随机分为单纯血液透析（HD）组、血液透析联合血液透析滤过（HD＋HDF）组和血液透析联合血液灌流（HD＋HP）组,每组20例;另设健康对照及尿毒症未透析组,观察12个月。结果尿毒症未透析组血清晚期氧化蛋白产物明显高于健康对照组（P〈0．01）,透析后进一步升高（P〈0．05）;12个月后,HD＋HDF组及HD＋HP组血清晚期氧化蛋白产物水平及心血管并发症发生率低于HD组（P〈0．05）。结论①尿毒症患者HD后血清晚期氧化蛋白产物水平升高;②HD＋HDF或HD＋HP血液灌流能降低尿毒症患者血清晚期氧化蛋白产物水平,改善维持性血液透析患者心血管预后。     

Halobacillus trueperi SL39 Ectoine诱导生成条件研究

研究了耐盐菌Halobacillus trueperi SL39在NaCl的诱导下，体内合成渗透压补偿溶质Ectoine，并优化Ectoine合成的诱导条件。采用高效液相色谱检测Ectoine合成量，结果表明，耐盐菌Halobacillus trueperi SL39合成Ectoine的最适诱导条件为30℃，初始pH7．0，NaCl浓度2．0mol／L，诱导48h，合成量高达304．8mg／L，胞外释放量为90．11％。     

高效液相色谱法测定太湖水中微囊藻毒素

微囊藻毒素是有害的蓝藻水华释放的有毒代谢物.建立了有效准确的检测方法,对固相萃取-高效液相色谱测定水中痕量藻毒素的部分实验过程进行了优化处理.流动相体积分数:35%乙腈+65%水;体积流量:0.8～1.0 mL/min;紫外检测波长239 nm;进样量10 μL;在该条件下,以HPLC测定MC的检测限值为0.1 mg/L.应用该法分析了2007年太湖蓝藻爆发期间的水样,结果表明方法具有实用性.     

高效液相色谱-电化学法测定尿儿茶酚胺及其甲氧基代谢产物在嗜铬细胞瘤诊断中的作用

目的探讨利用高效液相色谱-电化学法(HPLC-ECD)测尿儿茶酚胺(CA)及其甲氧基代谢产物对嗜铬细胞瘤进行诊断的可行性。方法213例高血压患者中有24例在术前测24h尿NE、E等单项指标增高，由影像定位确诊并经术后病理检查证实为嗜铬细胞瘤为患病组，其余为对照组。结果嗜铬细胞瘤患者的24h尿E、NE、DA、MN及NM明显高于正常对照组，其中变化最明显的是NE与NM；与正常对照组相比，嗜铬细胞瘤患者24h尿NE、NM均明显增加，且其NM增加的倍数明显高于NE，差异有显著性。结论本方法是一种灵敏、准确的测定手段，并可作为从高血压患者中筛选嗜铬细胞瘤的一种方法，值得推广。     

对尿毒症毒素的新认识

过去20年的研究使我们对尿毒症毒素的生化性质和病理生物学作用有了更深入的了解。最初将尿素、肌酐等小分子溶质作为主要尿毒症毒素,对这类小分子代谢产物的毒性作用及其在尿毒症中的意义尽管一直存在异议,但直到目前为止,临床仍将对这类物质的清除效率作为评价透析充分与否的指标。80年代发现,终末期肾脏病(ESRD)患者     

雪旺细胞分泌神经营养蛋白的提纯

目的：寻找出提纯神经营养蛋白的实用而有效的方法。方法：收集ＳＤ乳鼠周围神经的雪旺细胞无血清条件培养液，离心，将上清液超滤浓缩（ＰＭ１０）收集分子量大于１０ＫＤａ浓缩蛋白液，经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤获得三个蛋白峰，经生物活性检测，证明洗脱Ⅱ峰液生物活性最大。将冼脱Ⅱ峰液再经ＰＭ１０超滤膜浓缩收集浓缩蛋白液，分别用ＴＨＫ２４、ＴＴＫ２４微型过滤器去除大于１００ＫＤａ和小于３０ＫＤａ蛋白，过分子筛高效液相色谱柱。结果：得到４个主要蛋白峰，前三峰蛋白分子量均超过１５０ＫＤａ，第四峰分子量为６７ＫＤａ，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和银染色法进一步证实该蛋白分子量为６７ＫＤａ，基本为单一蛋白带。结论：Ｓｅｐｈａｄｅｘ凝胶过滤、多次超滤和分子筛高效液相色谱技术综合应用是纯化雪旺细胞源神经营养蛋白较好的方法。     

Fxclass高通量血液透析器对尿毒症透析患者氧化应激反应影响的临床研究

目的 探讨Fxclass高通量血液透析器对尿毒症透析患者氧化应激反应的影响.方法 将60例血液透析患者按随机数字表法分成3组,每组20例.Fxclass 60高通量组采用Fxclass 60高通量血液透析器治疗;F60HPS高通量血液透析组采用F60HPS高通量血液透析器治疗;F6HPS低通量血液透析器组:采用F6HPS低通量血液透析器治疗;20名健康体检者为正常对照组.所有患者分别在治疗前,治疗第4、8、12周检测血浆晚期氧化蛋白产物、丙二醛水平以及谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化物歧化酶活力,检测治疗前及治疗12周后血清补体C3a及白细胞介素1受体拮抗剂的水平,通过检测结果来分析不同膜材料及超滤系数不同的透析器对维持性血液透析患者氧化应激水平的影响.结果 Fxclass 60高通量组、F60HPS高通量血液透析组、F6HPS低通量血液透析组患者治疗前血丙二醛、晚期氧化蛋白产物、补体C3a、白细胞介素1受体拮抗剂、过氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶水平与正常对照组比较差异有统计学意义(P均＜ 0.01);各组患者血丙二醛、晚期氧化蛋白产物、补体C3a、白细胞介素1受体拮抗剂水平之间呈正相关(r =0.45,P＜ 0.05).与过氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶水平之间呈负相关(r=0.38,P＜0.05).治疗4周后Fxclass 60高通量组、F60HPS高通量血液透析组患者血丙二醛、晚期氧化蛋白产物、过氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶水平与治疗前比较差异有统计学意义(P＜0.01);而F6HPS低通量血液透析组患者血丙二醛、晚期氧化蛋白产物、过氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶水平与治疗前比较差异无统计学意义(P均＞0.05);治疗第8周时,Fx-class 60高通量组、F60HPS高通量血液透析组患者血丙二醛、晚期氧化蛋白产物、过氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶水平与第4周时比较差异有统计学意义(P均＜0.05);而F6HPS低通量血液透析组患者血丙二醛、晚期氧化蛋白产物、过氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶水平与治疗前及治疗第4周时比较差异无统计学意义(P均＞0.05);治疗第8周时,Fxclass 60高通量组和F60HPS高通量血液透析组患者血丙二醛、晚期氧化蛋白产物、过氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶水平比较差异有统计学意义(P均＜0.05);而治疗第12周时,Fxclass 60高通量组患者血丙二醛、晚期氧化蛋白产物、过氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶水平与第8周时比较差异有统计学意义(P均＜0.05);而F60HPS高通量血液透析组患者血丙二醛、晚期氧化蛋白产物、过氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶水平与第8周时比较差异无统计学意义(P＞ 0.05);F6HPS低通量血液透析组患者血丙二醛、晚期氧化蛋白产物、过氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶水平与治疗前及治疗第8周时比较差异无统计学意义(P＞0.05);治疗第12周时,Fxclass 60高通量组和F60HPS高通量血液透析组患者血丙二醛、晚期氧化蛋白产物、过氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶水平组间比较差异有统计学意义(P均＜0.05);治疗第12周时,Fxclass 60高通量组患者血清补体C3a、白细胞介素1受体拮抗剂水平与治疗前比较差异有统计学意义(P均＜0.01); F60HPS高通量血液透析组及F6HPS低通量血液透析组患者血清补体C3a、白细胞介素1受体拮抗剂水平与治疗前比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Fxclass高通量血液透析器可明显降低尿毒症透析患者的氧化应激反应.     

血浆白蛋白中胱氨酸和精氨酸是主要的氧化剂攻击基团

目的 探讨自由基攻击对白蛋白结构的影响。 方法 以正常人为对照组，尿毒症患者为实验组，高级氧化蛋白产物(AOPPs)和羰基为氧化应激指标。先对各组的氧化应激水平进行评价，随后从各组分离、纯化出白蛋白，再对其氨基酸组成进行分析比较。结果 尿毒症患者的AOPPs，及羰基水平约为正常人的2倍(P < 0.01)。同正常人相比，尿毒症患者水解出的17种白蛋白氨基酸组成大部分低10%左右，其中胱氨酸和精氨酸在两组间差异有统计学意义(P < 0.05)。结论 氨基酸的普遍损失是影响血浆蛋白结构和功能的关键因素，其中胱氨酸和精氨酸是自由基攻击的两个主要靶基团。     

Renoprotective effect of Bacopa monnieri via inhibition of advanced glycation end products and oxidative stress in STZ-nicotinamide-induced diabetic nephropathy

Hyperglycemia and oxidative stress are involved in the development of diabetic nephropathy (DN). This study was designed to evaluate the effect of alcohol and hydroalcohol extract of Bacopa monnieri and stigmasterol isolated from B. monnieri in the treatment of DN. Diabetes was induced in male wistar rats by streptozotocin (65?mg/kg i.p.) 15?min after nicotinamide (230?mg/kg, i.p.) administration. After 30 days, the rats were treated with different doses of extracts (100, 200, and 400?mg/kg) and stigmasterol (5 and 10?mg/kg) for 45 days to analyze their nephroprotective effect and produced significant attenuation in the serum glucose level, uric acid, creatinine, and lipid levels. Moreover, there is improvement in the level of superoxide dismutase (SOD), glutathione (GSH), and decrease in lipid peroxidation in terms of TBARS. The formation of AGEs in kidneys was also significantly reduced. These findings suggest that B. monnieri and its isolate (stigmasterol) might inhibit the progression of DN.     

Advanced oxidative protein products are independently associated with endothelial function in peritoneal dialysis patients

Aim:   Oxidative stress (OS) and asymmetric dimethylarginine (ADMA) are accepted as non-classical cardiovascular risk factors in end-stage renal disease patients. To clarify the role of these factors in the atherosclerotic process, we investigated if OS and ADMA are associated with endothelial function (EF) in peritoneal dialysis (PD) patients.
Methods:   Fifty-two non-diabetic PD patients without known atherosclerotic disease as well as 30 age- and sex-matched healthy individuals were included. We measured serum thiobarbituric acid-reactive substances (TBARS), malondialdehyde (MDA), advanced glycation end-product (AGE), pentosidine, advanced oxidation protein products (AOPP), ADMA and EF as described by Celermejer et al. in all subjects.
Results:   TBARS, MDA, AOPP, AGE, pentosidine and ADMA levels were significantly higher in PD patients than in controls ( P  < 0.001). Flow-mediated dilatation (FMD)% and nitrate mediated dilatation (NMD)% in PD patients were lower than in the control group (7.7 ± 4.0% vs 11.70 ± 5.50%, P  < 0.01 and 17.6 ± 8.3% vs 26.4 ± 4.6%, P  < 0.01). Additionally, it was found that AOPP are independently correlated with FMD% and NMD% in PD patients (β = −463, P  < 0.01 and β = −420, P  < 0.05).
Conclusion:   This study shows that PD patients without known atherosclerotic disease can also be characterized by endothelial dysfunction and AOPP levels independently predict endothelial function level in PD patients.     

Increasing the removal of protein‐bound uremic toxins by liposome‐supported hemodialysis

Protein‐bound uremic toxins (PBUTs) accumulate at high plasma levels and cause various deleterious effects in end‐stage renal disease patients because their removal by conventional hemodialysis is severely limited by their low free‐fraction levels in plasma. Here, we assessed the extent to which solute removal can be increased by adding liposomes to the dialysate. The uptake of liposomes by direct incubation in vitro showed an obvious dose‐response relationship for p‐cresyl sulfate (PCS) and indoxyl sulfate (IS) but not for hippuric acid (HA). The percent removal of both PCS and IS but not of HA was gradually increased with the increased concentration of liposomes in a rapid equilibrium dialysis setup. In vitro closed circulation showed that adding liposomes to the dialysate markedly increased the dialysances of PBUTs without greatly altering that of urea and creatinine. In vivo experiments in uremic rats demonstrated that adding liposomes to the dialysate resulted in higher reduction ratios (RRs) and more total solute removal (TSR) for several PBUTs compared to the conventional dialysate, which was approximately similar to the addition of bovine serum albumin to the dialysate. These findings highlight that as an adjunct to conventional hemodialysis, addition of liposomes to the dialysate could significantly improve the removal of protein‐bound uremic solutes without greatly altering the removal of small, water‐soluble solutes.     

终末糖基化产物在尿毒症患者血清中的水平及血管壁和腹膜上的表达

目的 检测终末糖基化产物（ＡＧＥｓ）在尿毒症患者血中的水平及在血管壁和腹膜上的表达及探讨其可能意义。方法 用酶联免疫法（ＥＬＩＳＡ）检测尿毒症患者血中ＡＧＥｓ的水平;用免疫组织化学方法在血液透析患者检测其血管壁上ＡＧＥｓ的表达,及腹膜透析患者腹膜上ＡＧＥｓ和层粘蛋白（ｌａｍｉｎｉｎ）的表达。结果 尿毒症患者血中ＡＧＥｓ水平明显高于肾功能正常者,且各种透析治疗均不能地降低患者体内ＡＧＥｓ水平。ＡＧＥ     

晚期糖基化终末产物与其受体对糖尿病创面氧化应激反应的影响

目的 观察糖尿病患者皮肤和创面中晚期糖基化终末产物(AGE)的蓄积和炎症反应,并结合体外干预实验推测两者之间可能存在的关系. 方法 采集10例2型糖尿病患者(糖尿病组)和12例非糖尿病患者(非糖对照组)的皮肤和创面组织标本,部分于光学显微镜下观察胶原排列、细胞分布(HE染色),AGE及其受体(RAGE)表达(免疫组织化学染色);部分匀浆后采用ELISA法检测丙二醛含量.体外采集、分离健康人外周血中性粒细胞,并分为正常对照组(添加RPMI-1640培养液培养)、低浓度干预组、中浓度干预组和高浓度干预组,3个干预组分别在RPMI-1640培养液中添加AGE修饰的人血清白蛋白,其中AGE的浓度依次为0.315、0.625、1.250 mg/mL;噻唑蓝法检测细胞存活率,荧光探针二氢二氯荧光黄双乙酸钠测定细胞内活性氧水平.对数据进行t检验. 结果 与非糖对照组比较,糖尿病组皮肤组织中胶原萎缩,排列紊乱;创面组织中炎性细胞弥散分布,胶原排列稀疏紊乱.糖尿病组皮肤组织中AGE和RAGE表达均多于非糖对照组;2组创面组织中RAGE呈阳性表达的细胞数量均多于所在组皮肤组织,以糖尿病组更显著,其创面内可见大量RAGE呈阳性表达的炎性细胞.糖尿病组患者皮肤和创面组织中每毫克蛋白丙二醛含量分别为(6 3±1.0)、(7.1±2.4)nmol,均明显高于非糖对照组相应组织[(2.9±1.0)、(3.6±1.4)nmol,t值分别为8.017、4.349,P ＜0.05或P＜0.01].与正常对照组[(34±5)％]比较,低浓度干预组、中浓度干预组、高浓度干预组中性粒细胞存活率均明显上升[(59±8)％、(77±5)％、( 67±6)％,t值分别为7.195、14.890、11.130,P＜0.05或P＜0.01].与正常对照组(0.58±0.06)比较,低浓度干预组、中浓度干预组、高浓度干预组中性粒细胞内活性氧水平均升高(1.67±0.14、2.13±0.17、3 48±0.48,t值分别为20.195、24.905、16.864,P＜0.05或P＜0.01). 结论 异常的氧化应激水平导致糖尿病皮肤具有异常的创伤修复起点,创面愈合过程中AGE-RAGE效应是影响糖尿病创面氧化应激水平的重要因素.